Name: Embriyonik Chick Retina Ovo Elektroporasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 15 s
Description: Öğrenin, tavuk embriyonik retinasında hedefli retinal enjeksiyon ve in ovo elektroporasyon tekniğini. Bu yöntem, gen ekspresyonu ve morfolojik değişiklikleri incelemek için gelişimsel biyoloji ve nörobilim araştırmacılarına değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz onun HD kamera kullanımı (Cannon Vixia HFS100) Sayın Maaz Enver teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma NIH (EY018738), New Jersey Omurilik Araştırma Komisyonu (08-3074-SCR-E-0 ve 10-3091-SCR-E-0), Busch ve Biyomedikal Araştırma Ödülü hibeler kısmen desteklenmiştir.

,, Daha önceden olarak, minor modifikasyonu ile birlikte,, diğer jove videos 2 ve kağıtlar 3, in açıklanan gibi protokol of, bazı parçalar, gerçekleştirilir uygulanır yılından bu yana, biz, buraya detail in olanlar tartışmak değil edecektir.. 1. Yumurta Taşıma ve İğne Hazırlık <ol><li> Yumurta, yaklaşık 13 ° C&#39;de 1 hafta kadar serin bir şarap muhafaza edilebilir. Sıcaklık çok yüksek ise daha düşük sıcaklık, yüksek mortalite neden olurken, embriyolar anormal geliştirmeye başlayacaktır. Sonra şarap soğutucusu yumurta ve yumurta büyük ucunu dikey kurmak inkübe hazır. 37.5 ° C inkübatör koymadan önce en az 2 saat oda sıcaklığında yumurta tutun. </li><li> Hamburger ve Hamilton aşamada 22 4-5 embriyolardan elde embriyonik 4. günde yaklaşık 96-100 saat yumurta inkübe edin. </li><li> Çekti cam kapiller tüplerin, mikropipet iğne hazırlayın ve mikro altında bir kesme ucu kırmakçapı 0.1 mm ve 20 mm konik hakkında bir ipucu açılış almak için bir cımbız ile kapsamı. İğneler büyük ipuçları ile küçük ipuçları DNA solüsyonu yükleme ve teslim zorluk varken vitellin zarı delerek zorluk var. </li><li> , Bir micromanipulator üzerine monte edilmiş 0.1 ml Hamilton Gaz geçirmez şırınga iğnesi takın. Şırınga, iğne takmak için Masterplex silikon tüp küçük bir parça kullanın. Sıkı herhangi bir bağlantıları olduğundan bu ek mühürlemek için mineral yağ eklemek gerekir. </li><li> 2 ul muhabiri plazmid DNA solüsyonu 3-6 mg / ml ve 0.2 ul bir parça parafilm hızlı yeşil (% 0.025) arasında değişen bir konsantrasyon ile karıştırın. Hızlı yeşil boya enjeksiyon görselleştirmek için yardımcı olacaktır. Daha Yavaşça, sorunun giderilip giderilmediğini, karışım, ile birlikte, iğne yüklenemedi. </li><li> Yumurta, 180 ° hakkında hafifçe döndürün ve birkaç dakika sonra orijinal konumuna geri döndürmek ve elektroporasyon için ayarlamanız için bekleyin iç zarı, vitellin zarı boşaltmak için. </li><li> Forc silin, embriyoya bulaşmasını önlemek için% 70 etanol ile eps ve yumurta kabuğu. </li><li> Yumurta hemen AA boyutu forseps bir çift hava hücresi üzerinde küçük bir delik açın. Yumurta kabuğu kırmak için değil dikkatli olun. Küçük parçalara küçük bir pencere yapmak için bir anda birini çıkarın. Dikkatle,, vitellin membran dokunmadan forcepsi iç zarı çıkarın. </li></ol> 2. Enjeksiyon ve elektroporasyon <ol><li> Göze giren ve gaga yönelerek, kan damarlarının ana paket lateral beyin ya da kalp, pozisyon iğne kontra zarar görmesini önlemek için. </li><li> Delip iğne ani bir hafif basarak vitellin membran, sklera, retina ve vitreus. İğne gözün diğer sonuna kadar deler Eğer herhangi bir büyük kan damarına zarar vermemek yolunda olmalıdır. </li><li> Yavaş yavaş açılma kenarında iğne geri çekin ve gözün dış duvarına neredeyse teğet yerleştirin. </li><li> Insert iğne alt sklera ve retina arasındaki retina uzaya. </li><li> Yan gözün doldurma ve bir çıkıntı oluşturarak retina içeri iterek yeşil çözüm görselleştirmek kadar DNA enjekte edilir. </li><li> Senin iğne yerleştirilmesi doğru değilse, o zaman DNA solüsyonu gözün ortasına kadar dolum vitreus içine yayılan göreceksiniz. Ayrıca, retinaya zarar olmadığını çok sonra DNA solüsyonu gözün geliyor göreceksiniz. </li><li> Yavaşça iğneyi çıkarın ve hemen PBS içinde ıslatıldıktan sonra yumurta içinde paralel elektrotlar yerleştirmek. Amniyotik sıvı, enjekte göz elektrotlar arasında yer alır, böylece bir şekilde inmeye elektrotlar aşağı doğru itin. Elektrotlar yerleştirerek sırasında herhangi bir büyük kan damarı ya da kalp dokunmaktan kaçının. DNA&#39;nın alt retina uzaydan gelen pozitif elektrot doğru retinaya taşınacak, böylece negatif elektrot, enjeksiyon tarafında olmalıdır. Elektro950 ms aralıklarla 50 ms için 15V 5 darbeleri ile retinanın kadardir. </li><li> Dikkatli bir şekilde elektrotlar kaldırmak ve, net seloteyip adet yumurta pencere mühürlemek. </li><li> Etiket ve inkübatör geri koymadan önce enjekte yumurta güncel. Tipik olarak, bütün elektroporasyon işlemini tamamlamak için yaklaşık 3 - 5 dakika sürer. </li><li> GFP, elektroporasyon sonra 8 saat olarak erken görülebilir. Ancak, embriyo Hasattan önce istenen aşamada ulaşıncaya kadar bekler. </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar Bizim çalışmamızda, retinal hücre gelişimi içerdiğini gen ifadesinin düzenlenmesinde çalışmak için çeşitli plazmid yapıları kullanın. Bu videoda pCAG-GFP (transfeksiyon kontrolü) başarılı bir enjeksiyon ve elektroporasyon izlemek için kullanılmıştır. Bununla birlikte, reporter gen (GFP, RFP,, vb.) Ile birlikte herhangi bir plasmid bir bir bir construct, da kullanılan uygulanmaz edebilirsiniz. GFP 8 saat olarak ele sonra erken olarak görülebilir olsactroporation, biz genellikle gün 6 yumurta (E6) ve sonrasında hasat başlatmak. Electroporated retina embriyo çıkarılmış ve gömme ve kesit önce floresan diseksiyon mikroskobu altında incelendi. Tipik olarak olarak, reporter gen ekspresyon,,, bir başarılı bir bir elektroporasyon (Fig 1) sonra,,,, en azından retinaya of, bir çeyreğinde, in görülme tarihi uygulanmaz edebilirsiniz. Transfekte retina dokularında daha fazla hücre morfolojileri net bir görünüm için kesit aracılığıyla incelendi. Kullanılarak immünohistokimyasal hücre tipine özgü belirteçleri (Brn3a, Pax6 vb.) Hücre spesifik GFP izin karakterizasyonu (Şekil 2). <img src="/files/ftp_upload/3792/3792fig1.jpg" align="Figure 1" /> Şekil 1. Başarılı muhabiri plazmid sonuç pozitif GFP elektroporasyon. Tavuk embriyonik retina enjekte edilir ve embriyonik gün 4 electroporated ve embriyonik günlük 6 hasat edildi. 25,% (,, retinanın of en azından At) başarılı bir şekilde (A = Sayfanın başına dön view, Yatak-olarak transfekte edilmiş edildi= Alt görünümü). Ölçeği Bar = 1mm. <img src="/files/ftp_upload/3792/3792fig2.jpg" align="Figure 2" /> Şekil 2. GFP Karakterizasyonu immunhistokimya ile retina hücreleri dile getirdi. E7 aşamada retina dokularında ifade GFP sabit ve kesitler alındı. Bu bölümler daha sonra çeşitli hücre özel işaretleri ile boyandı. Brn3a,, Pax6,,, yatay bir, amacrine ve ganglion hücreleri (Yatak-) belirlemek etmek kullanılan edildi ederken, belirlemek: ganglion hücreleri (A) &#39;kullanıcılar için kullanılan edildi. Ölçek çubuğu = 50 mikron.

<ol><li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22BMC.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li>
<li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li>
<li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn.%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li>
<li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stage+series+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li>
</ol>

Tüm hayvan deneyleri Rutgers Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Tesisler Komitesi tarafından kabul edildi.

Hedefli retina enjeksiyon ve E4 aşamada embriyonik retinanın ovo elektroporasyon özellikle altı büyük retina hücre tipleri tek hücre düzeyinde görselleştirme becerisi ile sonuçlanan retina progenitör hücreleri hedef. HH10 de ovo elektroporasyon (~ E1.5) hedefleme optik vezikül gözü oluşturacak geliştirmek hücreleri transferinde. Ancak, bu hücreler şu anda çok yüksek bir ciro ve bu yöntemin retina hücreleri için spesifik değildir. Bu yüksek hücre devir hızı, sürekli ve kararlı bir ifade engelle...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Döllenmiş patojen free (SPF) beyaz leghorn tavuk yumurtası </td><td> Sunrise Çiftlikleri (Catskill, NY) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Piliç kuluçka </td><td> GQF imalat, Savannah, GA </td><td> Model-1550 </td><td> % 60 nem ve 37.5 ° C olarak ayarlayın. </td></tr><tr><td> Cam kılcal tüpler </td><td> Dünya Precision Instrument Inc. </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0.1 ml&#39;lik şırınga </td><td> Hamilton Co Reno, Nevada </td><td> Gaz geçirmez 1710 </td><td> Alternatif olarak 1ml dir şırınga,, yanı sıra kullanılan uygulanmaz edebilirsiniz </td></tr><tr><td> Masterflex Silikon (peroksit) Boru </td><td> Cole-Parmer </td><td> HV-96.400-13 </td&gt; <td> , Şırınga etmek şekilde, camın iğne takılarak, için, bir küçük bir bir bir bir parça (1 cm) ve Kes&#39;i. </td></tr><tr><td> Cımbız </td><td> Dumont </td><td> AA </td><td></td></tr><tr><td> Mikromanipülatör </td><td> Dünya Precision Instrument Inc. </td><td> M3301-M3 </td><td></td></tr><tr><td> Plazmid DNA </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP Dr. Connie Cepko ödünç </td></tr><tr><td> Fast Green FCF </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F7252 </td><td> PBS ile% 0.025 &#39;bu sulandırınız </td></tr><tr><td> Darbe jeneratörü </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX ECM 830 </td><td> Kare dalga üreteci </td></tr><tr><td> Elektrotlar </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX modeli 514 </td><td> Elektrotlar 3-5 mm aralıklı </td></tr><tr><td> Monokrom Dijital Kamera </td><td> Zeiss, Almanya </td><td> Axiocam MRM </td><td></td></tr><tr><td> Floresanlı Diseksiyon Mikroskop </td><td> Leica Microsystems, Almanya </td><td> Leica MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> Dik Floresan Mikroskop </td><td> Zeiss, Almanya </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

embriyonik chick retina ovo elektroporasyon

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

Tavuk embriyonik retinada yüksek omurgalılarda retina gelişimini incelemek için mükemmel bir araçtır. Çünkü büyük ölçekli ve dış gelişme, rekombinant DNA / RNA teknolojisi kullanarak civciv embriyonik retinanın işlemek için nispeten çok kolaydır. Embriyonik retinaya DNA / RNA yapıları Elektroporasyon retina gelişimi sırasında retina kök / progenitör hücrelerin gen regülasyonu incelemek için büyük bir avantaj var. , Bu tür bir reporter gen assay,,-expression üzerinden, gen,, vb.. (ShRNA.) Aşağı doğru için üstüne vurmayın gen gibi deneyleri of Farklı bir type,,, elektroporasyon tekniktir kullanarak gerçekleştirilir uygulanmaz edebilirsiniz. Bu video hedeflenen retina enjeksiyon gösterir ve embriyonik civciv retinaya embriyonik gün 4 (E4) hakkında Hamburger ve Hamilton evre 22-23, ovo elektroporasyon. Bir belirteç olarak yeşil floresan proteininin (GFP) ifade eden bir plazmid DNA doğrudan teslim edilir; Burada, ovo elektroporasyonu tekniği hızlı ve rahat gösterircivciv embriyonik subretinal alan ve retina kök / progenitör hücrelerin DNA alımını kolaylaştırmak için elektrik dalgaları izledi. E4 retina enjeksiyon ve elektroporasyon yeni bir yöntem, E1.5 2 enjeksiyon ve elektroporasyon geleneksel yöntem ile zor olmuştur geç doğumlu nöronlar 1, dahil olmak üzere tüm retinal hücre türleri, görselleştirme sağlar.

Bu videonun genel amacı hedef retina enjeksiyon nasıl gerçekleştirileceği göstermek için ve<em&gt; Ovo</emHamburger ve embriyonik gün 4 (E4) hakkında Hamilton aşamada 22-23, civciv embriyonik retinaya&gt; DNA / RNA yapıları elektroporasyon. Bu teknik, gen ekspresyonu, gen regülasyonu, ve civciv retina gelişmekte olan morfolojik değişimin incelemek için çok yararlıdır.

Embriyonik Chick Retina Ovo Elektroporasyon

Tavuk embriyonik retinası, yüksek omurgalılarda retinal gelişimi incelemek için mükemmel bir araçtır. Büyük boyutu ve eksternal gelişimi nedeniyle, ...

Merhaba, ben Mohammed Islam. Rutgers Üniversitesi Biyomedikal Mühendisliği Bölümü'nde, Dr. Lee'nin laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim. Bugün size hedeflenmiş retinal enjeksiyon ve in vivo elektroporasyonun nasıl gerçekleştirileceğini göstereceğim.Tavuk embriyosu çalışmasında, inkübasyondan yaklaşık 96 saat sonra olan dördüncü embriyo günü aşamasındaki tavuk embriyonik retinasını kullanacağız. Bu teknik, retinal gelişimin incelenmesi için yeni bir yöntem olarak kabul edilmektedir. Bu yöntem, özellikle retinal progenitör hücreleri hedefleyerek tüm retinal hücre tiplerinin tek hücre düzeyinde görselleştirilmesine olanak tanır.Bu yöntem ayrıca, ilgilenilen bir genin retinanın normal gelişimi veya hastalığına yönelik bir çalışmaya hedeflemiş olduğu fonksiyon kazancı veya kaybı çalışmalarında da uygulanabilir. X, yaklaşık 13 °C'de bir şarap soğutucusunda bir haftaya kadar saklanabilir. Sıcaklık çok yüksek olursa embriyolar anormal gelişmeye başlar, düşük sıcaklık ise yüksek mortaliteye neden olur.İnkübasyona hazır olduğunuzda, yumurtaları şarap soğutucusundan çıkarın ve geniş uçları yukarı bakacak şekilde dikey olarak yerleştirin. Yumurtaları 37.5 °C'lik inkübatöre yerleştirmeden önce en az iki saat boyunca oda sıcaklığında bekletin. Yumurtaları, yaklaşık olarak Embriyo 4. güne denk gelen yaklaşık 96 saat boyunca inkübe edin.Hamburger ve Hamilton evre 22'de embriyolar elde etmek için, havuz cam kılcal tüplerden PP mikropipet iğneleri hazırlayın ve yaklaşık 0,1 µm çapında bir uç açıklığı ve iki milimetrelik bir koniklik elde etmek için ucunu bir disseksiyon mikroskobu altında cımbızla kırın. Daha geniş uçlu iğneler vitellin membranını delmekte zorluk çıkarır; daha küçük uçlar ise DNA solüsyonunu yüklemede ve iletmede zorluk yaratır. İğneyi, bir mikromanipülatöre monte edilmiş Hamilton gastrik şırıngaya takın.İğneyi şırıngaya bağlamak için küçük bir parça master plex silikon tüp kullanın. Bağlantılar sıkı olduğu için mineral yağı eklemeye gerek yoktur. Bu bağlantıyı mühürlemek için, mikrolitre başına üç ila altı mikrogram konsantrasyona sahip iki mikrolitre reporter plazmit DNA çözeltisini ve 0,2 mikrolitre fast green'i bir parça üzerinde karıştırın; çevreye yayılan fast green boyası enjeksiyonun görselleştirilmesine yardımcı olacaktır. Karışımı yavaşça iğneye yükleyerek vitellin membranı iç membrandan ayırın. Yumurtayı nazikçe yaklaşık 180 derece döndürün ve birkaç dakika bekleyin.Ardından orijinal konumuna geri döndürün ve elektroporasyon için ayarlayın. Embriyo enfeksiyonunu önlemek için pensi ve yumurta kabuğunu %70 ethanol ile silin. Bir pens yardımıyla, yumurtanın hava hücresinin hemen üzerine küçük bir delik açın.Yumurta kabuğunu çatlatmamaya dikkat edin. Küçük bir pencere oluşturmak için küçük parçaları tek tek çıkarın. Beyne veya kalbe zarar vermemek için hayati zara dokunmadan, iç membranı Pens ile dikkatlice çıkarın.İğneyi, okla gösterildiği üzere gözle etkileşime giren ana damar demetinin karşı tarafına, gagaya doğru bakacak şekilde konumlandırın. Vital membran, sklera retina ve vitreus humoru üzerinden delin. İğnenin ani bir itişiyle, eğer iğne gözün diğer ucundan çıkarsa, herhangi bir ana toplardamara zarar vermediği sürece sorun olmayacaktır.Açıklığın kenarındaki iğneyi yavaşça geri çekin ve neredeyse göz küresinin dış duvarına teğet olacak şekilde yerleştirin. İğneyi Sclera ile retina arasındaki subretinal boşluğa yerleştirin. Göz küresinin yan tarafını dolduran ve bir şişkinlik oluşturarak retinayı içeri doğru iten yeşil çözeltiyi görene kadar DNA'yı enjekte edin.Burada, bir şişkinlik oluşumuyla birlikte başarılı bir enjeksiyonun başka bir iyi örneği yer almaktadır ve bu durum şu diyagramda gösterilmiştir. Eğer iğne yerleşiminiz doğru değilse, DNA solüsyonunun göz küresinin orta kısmını doldurarak vitreus hümör içerisinde yayıldığını göreceksiniz. Ayrıca, retinaya çok fazla zarar verirseniz, DNA solüsyonunun göz küresinden dışarı çıktığını göreceksiniz.İğneyi yavaşça çıkarın ve elektrotları hemen yumurta içine paralel şekilde yerleştirin. PBS içinde bekletmenin ardından, enjekte edilen göz elektrotların arasında kalacak şekilde elektrotları amniyotik sıvıya batırana kadar aşağı itin. Elektrotları yerleştirirken herhangi bir ana kan damarına veya kalbe temas etmemeye dikkat edin.DNA'nın subretinal alandan retina içine, pozitif elektroda doğru taşınabilmesi için negatif elektrotlar enjeksiyon bölgesinde olmalıdır. Retinaya 950 milisaniyelik aralıklarla, 50 milisaniye süresince 15 voltluk beş puls uygulayarak elektroliz yapın. Elektrotları dikkatlice çıkarın ve yumurta penceresini şeffaf koli bant parçalarıyla kapatın; enjekte edilen yumurtayı inkübatöre geri koymadan önce etiketleyin ve tarihini yazın.Genellikle, elektrooperasyonun tüm sürecinin tamamlanması yaklaşık üç ila beş dakika sürer. GFP ekspresyonu, elektrooperasyondan sekiz saat kadar erken bir sürede görülebilir. Bununla birlikte, yumurtayı hasat etmeden önce embriyonun istenen duruma gelmesini bekleyebilirsiniz.Umarım bu video kendi deneyinizi gerçekleştirmeniz için yardımcı olmuştur. İzlediğiniz için teşekkür ederiz.

in-ovo-electroporation-in-embryonic-chick-retina

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Ovo elektroporasyon Civciv kuş embriyonun genetik manipülasyon sağlayan bir tekniktir. Bu tekniğin yaygın uygulamalar genlerin fonksiyonel analiz ve olası artırıcı unsurları içerir. Bu video HH 10 civciv embriyosunda nöral tüp elektroporasyon göstermektedir. Enjeksiyon tekniği ve uygun yumurta taşıma tartışılmıştır.

HH Sahne 10 Tavuk Embriyolar Ovo Electroporations

Burada fare retina ganglion hücrelerinin (RGCs) gen ekspresyonu işlemek için iki teknik...

Fare Retina Ganglion Hücreleri Gen İfadesi utero ve ex vivo Elektroporasyon

Kazanç ya da fonksiyon çalışmalar kaybı ya da yerine bir amaç için fare retina hücreleri içine plazmid DNA eklenmesi için bir...

Gelişmekte olan Fare Retina in vivo Elektroporasyon olarak

Intravitreal antisens morpholinos enjekte ve retina içine electroporating koşullu yetişkin zebrafish retinanın bir hedef protein ifade demonte bir yöntem açıklanmıştır. Ortaya çıkan protein yenileyici veya sağlam retina proteinin rolünü test edilmesine imkan sağlayan birkaç gün, nakavt edilir.

Morpholinos in vivo Elektroporasyon Yetişkin Zebra balığı Retina

Işlevi ve orta beyin dopaminerjik nöron gelişimi sırasında genlerin düzenlenmesi değerlendirmek için, içeren bir yöntem...

Dopaminerjik Nöron Geliştirme Gen Fonksiyonunun Çalışılması için Chick orta beyin içinde ovo Elektroporasyon yılında

Embriyonik civciv retinal hücre kültürleri fotoreseptör biyoloji çalışma için değerli araçlar oluşturmaktadır. Biz kültür öncesinde retina plazmid elektroporasyon ovo ex dayalı etkin gen transferi tekniğini geliştirdi. Bu teknik önemli ölçüde bu sistem için uygun genetik manipülasyon yaparak, mevcut protokoller üzerinde transfeksiyon verimliliği artırır.

Primer Hücre Kültürü Araştırmaları Chick retina Verimli Gen Transferi: Bir Eski-ovo Elektroporasyon Yaklaşımı

Bu protokol, teşrih deneysel işlemek ve tavuk embriyo kültür bütün retinal eksplantlar için bir yöntem tarif eder. Yüksek başarı oranı, etkinlik ve tekrarlanabilirlik elektroporasyon ve / veya reaktif maddelerin, örneğin, enzimatik inhibitörleri için plasmidlerin etkilerini test etmek için gerekli olduğunda eksplant kültürleri yararlıdır.

Elektroporasyon ve Kimyasal Reaktif tedaviler için Tavuk Embriyolar gelen bütün Retina Eksplantlarındaki

Biz floresan etiketlemeyi yüzeysel geçirme yöntemleri tarif Hücre çoğalmasıyla tarafından ve geçiş görselleştirmek için bir düz-mount kültür etiketli hücre hareketinin hızlandırılmış görüntüleme için hücre gelişmekte olan piliç optik tectum davranış .

Görselleştirme teğet hücre göç gelişmekte olan piliç optik Tectum içinde

İn ovo elektroporasyon ve Tol2 transpozon sistemini kullanarak yapay mikro-RNA dizilerinin civciv embriyolarına sokulmasını ve genomik entegrasyonunu içeren yeni bir fonksiyon kaybı yaklaşımı geliştirdik. Bu teknik, geliştirme sırasında gen fonksiyonu çalışmaları için sağlam ve kararlı bir gen yıkım metodolojisi sağlar.

Yapay mikroRNA'ların Tol2 Transpozon Aracılı Transgenik Ekspresyonu Kullanılarak Embriyonik Civciv Retinasında Fonksiyon Kaybı Yaklaşımı

Civciv, çeşitli çalışmalar için uygun maliyetli, erişilebilir ve yaygın olarak bulunan bir model organizmadır. Burada, kuş iç kulağı gelişimi ve yenilenmesinin altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak için bir dizi protokol detaylandırılmıştır.

Ovo ve Ex Ovo'da Kuş İç Kulak Gelişimini İnceleme Yöntemleri

Öğrenin, tavuk embriyonik retinasında hedefli retinal enjeksiyon ve in ovo elektroporasyon tekniğini. Bu yöntem, gen ekspresyonu ve morfolojik değişiklikleri incelemek için gelişimsel biyoloji ve nörobilim araştırmacılarına değerli bir araç sunar.

Embriyonik Chick Retina Ovo Elektroporasyon

Daha fazla video keşfet