Name: DNA Aile karıştırma ile Mühendislik ve Sentetik adeno-ilişkili virüs Evrimi (AAV) Gen Terapisi Vektörler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 21 min 55 s
Description: Öğrenin DNA aile karıştırma ile AAV kapsit kütüphaneleri oluşturmayı ve gen terapisi için gelişmiş viral vektörler seçmeyi. Bu yöntem milyonlarca kimerik varyant üreterek hedef hücrelere özgü enfeksiyon özellikleri geliştirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar minnetle Heidelberg Üniversitesi Mükemmeliyet CellNetworks arasında Küme tarafından yanı sıra Chica ve Heinz Schaller (CHS) vakıf tarafından olağanüstü kendi laboratuvar desteği, ekip üyeleri ve iş kabul ediyorsunuz. DNA aile karıştırma, üç yıl önce bizim ilk yayınlandığından beri çok aktif bir alan haline gelmiştir ve bu nedenle çalışma nedeniyle mekan kısıtlamaları için buraya iktibas edilemedi ilgili yayınların tüm yazarlara özür etti yoluyla Biz moleküler AAV evrim teşekkür ederiz.

<ol><li>Grimm, D., Kay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+virus+evolution+to+vector+revolution%3A+use+of+naturally+occurring+serotypes+of+adeno-associated+virus+%28AAV%29+as+novel+vectors+for+human+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">From virus evolution to vector revolution: use of naturally occurring serotypes of adeno-associated virus (AAV) as novel vectors for human gene therapy.</a> Curr. Gene Ther. 3, 281-304 (2003).</li>
<li>Grimm, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+methods+for+gene+transfer+vectors+based+on+adeno-associated+virus+serotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Production methods for gene transfer vectors based on adeno-associated virus serotypes.</a> Methods. 28, 146-157 (2002).</li>
<li>Grimm, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+gene+therapy+vector+evolution+via+multispecies+interbreeding+and+retargeting+of+adeno-associated+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo gene therapy vector evolution via multispecies interbreeding and retargeting of adeno-associated viruses.</a> J. Virol. 82, 5887-5911 (2008).</li>
<li>Muller, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Random+peptide+libraries+displayed+on+adeno-associated+virus+to+select+for+targeted+gene+therapy+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Random peptide libraries displayed on adeno-associated virus to select for targeted gene therapy vectors.</a> Nat. Biotechnol. 21, 1040-1046 (2003).</li>
<li>Perabo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+selection+of+viral+vectors+with+modified+tropism%3A+the+adeno-associated+virus+display%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">In vitro selection of viral vectors with modified tropism: the adeno-associated virus display.</a> Mol. Ther. 8, 151-157 (2003).</li>
<li>Zolotukhin, S., Potter, M., Hauswirth, W. W., Guy, J., Muzyczka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+%22humanized%22+green+fluorescent+protein+cDNA+adapted+for+high-level+expression+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">A "humanized" green fluorescent protein cDNA adapted for high-level expression in mammalian cells.</a> J. Virol. 70, 4646-4654 (1996).</li>
<li>Wobus, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+against+the+adeno-associated+virus+type+2+%28AAV-2%29+capsid%3A+epitope+mapping+and+identification+of+capsid+domains+involved+in+AAV-2-cell+interaction+and+neutralization+of+AAV-2+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies against the adeno-associated virus type 2 (AAV-2) capsid: epitope mapping and identification of capsid domains involved in AAV-2-cell interaction and neutralization of AAV-2 infection.</a> J. Virol. 74, 9281-9293 (2000).</li>
<li>Grimm, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatality+in+mice+due+to+oversaturation+of+cellular+microRNA%2Fshort+hairpin+RNA+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fatality in mice due to oversaturation of cellular microRNA/short hairpin RNA pathways.</a> Nature. 441, 537-541 (2006).</li>
<li>Nakai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unrestricted+hepatocyte+transduction+with+adeno-associated+virus+serotype+8+vectors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Unrestricted hepatocyte transduction with adeno-associated virus serotype 8 vectors in mice.</a> J. Virol. 79, 214-224 (2005).</li>
<li>Koerber, J. T., Jang, J. H., Schaffer, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+shuffling+of+adeno-associated+virus+yields+functionally+diverse+viral+progeny%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">DNA shuffling of adeno-associated virus yields functionally diverse viral progeny.</a> Mol. Ther. 16, 1703-1709 (2008).</li>
<li>Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+and+selection+of+shuffled+AAV+genomes%3A+a+new+strategy+for+producing+targeted+biological+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineering and selection of shuffled AAV genomes: a new strategy for producing targeted biological nanoparticles.</a> Mol. Ther. 16, 1252-1260 (2008).</li>
<li>Ward, P., Walsh, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+AAV+Cap+sequences+alter+gene+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Chimeric AAV Cap sequences alter gene transduction.</a> Virology. 386, 237-248 (2009).</li>
<li>Yang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+myocardium+tropic+adeno-associated+virus+%28AAV%29+evolved+by+DNA+shuffling+and+in+vivo+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A myocardium tropic adeno-associated virus (AAV) evolved by DNA shuffling and in vivo selection.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 3946-3951 (2009).</li>
<li>Perabo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combinatorial+engineering+of+a+gene+therapy+vector%3A+directed+evolution+of+adeno-associated+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gene.+Med%22%5BJournal%5D)">Combinatorial engineering of a gene therapy vector: directed evolution of adeno-associated virus.</a> J. Gene. Med. 8, 155-162 (2006).</li>
<li>Maheshri, N., Koerber, J. T., Kaspar, B. K., Schaffer, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+evolution+of+adeno-associated+virus+yields+enhanced+gene+delivery+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Directed evolution of adeno-associated virus yields enhanced gene delivery vectors.</a> Nat. Biotechnol. 24, 198-204 (2006).</li>
<li>Wu, Z., Asokan, A., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus+serotypes%3A+vector+toolkit+for+human+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus serotypes: vector toolkit for human gene therapy.</a> Mol. Ther. 14, 316-327 (2006).</li>
<li>Kwon, I., Schaffer, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designer+gene+delivery+vectors%3A+molecular+engineering+and+evolution+of+adeno-associated+viral+vectors+for+enhanced+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Designer gene delivery vectors: molecular engineering and evolution of adeno-associated viral vectors for enhanced gene transfer.</a> Pharm. Res. 25, 489-499 (2008).</li>
<li>Perabo, L., Huber, A., Marsch, S., Hallek, M., Buning, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+evolution+with+adeno-associated+viral+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Comb.+Chem.+High.+Throughput.+Screen%22%5BJournal%5D)">Artificial evolution with adeno-associated viral libraries.</a> Comb. Chem. High. Throughput. Screen. 11, 118-126 (2008).</li>
<li>McCarty, D. M., Monahan, P. E., Samulski, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-complementary+recombinant+adeno-associated+virus+%28scAAV%29+vectors+promote+efficient+transduction+independently+of+DNA+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Self-complementary recombinant adeno-associated virus (scAAV) vectors promote efficient transduction independently of DNA synthesis.</a> Gene Ther. 8, 1248-1254 (2001).</li>
</ol>

Tüm yazarlar ifşa için bir neden olmadığını beyan ederim.

Burada, DNA aile karıştırma yoluyla ve hücrelerin ya da hayvanlarda evrim için gerekli deneysel adımlar ve AAV kapsid mühendisliği için yönergeleri hazırladık var. Özünde, bu protokoller biz ilk 3, 2008 yılında AAV alanı içinde bildirilen prosedürler standart versiyonları vardır. Başkaları tarafından çalışmaları takip bir telaş birçok değişiklik, örneğin, 10-13 bildirdin iken, bugünkü versiyonları yukarı ölçeklendirme ve herhangi ihtiyaçlarına uyum mükellef olurken tekrarlanabilir sonuçlar...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Invitrogen </td><td> 18068-015 </td></tr><tr><td> Polietilenimin (PEI) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 408727 </td></tr><tr><td> Kısıtlama enzimleri </td><td> NEB </td><td> Çeşitli </td></tr><tr><td> T4 DNA ligaz </td><td> NEB </td><td> M0202T </td></tr><tr><td> Jel ekstraksiyon kiti </td><td> Qiagen </td><td> 28704 </td></tr><tr><td> Phusion II polimeraz Kiti </td><td> Finnzymes (NEB) </td><td> F-540S </td></tr><tr><td> Hotstar Hifi polimeraz Kiti </td><td> Qiagen </td><td> 202602 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Finnzymes (NEB) </td><td> F-540S (kit parçası) </td></tr><tr><td> EDTA (25 mM) </td><td> Invitrogen </td><td> 18068-015 (kit parçası) </td></tr><tr><td> Tris </td><td> Roth </td><td> 4855.2 </td></tr><tr><td> Ampisilin sodyum tuzu </td><td> Roth </td><td> K029.2 </td></tr><tr><td> dNTP (10 mM, 100 ul) </td><td> Invitrogen </td><td> 18427013 </td></tr><tr><td> Iodixanol (OptiPrep) </td><td> Eksen-kalkan </td><td> 1114739 </td></tr><tr><td> PHENOLRED </td><td> Merck </td><td> 107241 </td></tr><tr><td> Plazmid mega hazırlık seti </td><td> Qiagen </td><td> 12181 </td></tr><tr><td> Ultrasantrifüjdeki </td><td> Beckman-Coulter </td><td> Optima L90K </td></tr><tr><td> Hızlı-Seal santrifüj tüplerine </td><td> Beckman-Coulter </td><td> 342414 </td></tr><tr><td> Elektroporasyon ünitesi </td><td> Bio-Rad </td><td> GenePulserXcell </td></tr><tr><td> Termal cycler </td><td> Eppendorf </td><td> Vapo Koru </td></tr><tr><td> Isıtma bloğu </td><td> BIOER </td><td> MB-102 </td></tr><tr><td> Floresans mikroskobu </td><td> Olympus </td><td> IX81 </td></tr><tr><td> FACS analizörü </td><td> Beckman-Coulter </td><td> Cytomics FC500 MLP </td></tr><tr><td> MegaX DH10B T1R hücreleri </td><td> Invitrogen </td><td> C640003 </td></tr><tr><td> Benzonase </td><td> Merck </td><td> 101695 </td></tr><tr><td> Adenovirüs-5 </td><td> ATCC </td><td> VR-5 </td></tr><tr><td> plazmid pBluescript KS II (+) </td><td> Stratagene </td><td> 212207 </td></tr><tr><td> cap5F (koyu sarı, cap5 özel dizilerde Pac I site): GACTCTTAATTAACAGGT ATGTCTTTTGTTGATCACCCTCC </td><td> IDTDNA </td><td> Özel astar </td></tr><tr><td> cap5R (yeşil, kalın cap5 özel dizilerde Asc I site): GTGAGGGCGCGCC TTAAAGGGGTCGGGTAAGGTATC </td><td> IDTDNA </td><td> Özel astar </td></tr></tbody></table>

dna aile karıştırma ile mühendislik ve sentetik adeno-ilişkili virüs evrimi (aav) gen terapisi vektörler

Engineering and Evolution of Synthetic Adeno-Associated Virus (AAV) Gene Therapy Vectors via DNA Family Shuffling

Adeno-ilişkili virüs (AAV) vektörler nedeniyle yararlı özellikleri 1 benzersiz bir kombinasyonu terapötik insan gen transferi için en güçlü ve gelecek vaat eden bazı araçlar temsil eder. Bu altta yatan wild tip virüsler ve yüksek titresi, yüksek saflıkta ve klinik dereceli rekombinant vektörler 2 üretimi için son derece gelişmiş metodolojileri apathogenicity içerir. Diğer virüsler üzerinde AAV sisteminin bir diğer özel avantajı doğal olarak tüm kolayca ortak bir protokol 1,2 kullanarak vektör olarak tasarlanmış olabilir ama temel özellikleri bakımından farklıdır serotipleri ortaya çıkan bir zenginlik mevcudiyetidir. Ayrıca, kendi de dahil olmak üzere gruba bir dizi son zamanlarda da birden fazla giriş serotiplerin varlıkları, ya da izole bir tek özelliklerini geliştirmek birleştirmek sentetik vektörlerin oluşturulması için şablon olarak bu doğal virüsler kullanma stratejileri geliştirdiler. Ilgili teknolojileri bu hedeflere ulaşmak için are ya DNA aile karılma 3, kısmi benzerliklerin (tipik olarak en AAV serotip için&gt;% 80) veya 4,5 peptid ekran, genellikle yedi amino asitlerin yani ekleme içine dayanarak yeniden montaj ile değişik AAV kapsid genlerin yani parçalanma istenen bir hücre türüne peptid ideal aracılık yeniden hedefleyen viral kapsid bir maruz döngü. Maksimum başarı için her iki yöntem protokolleri yaklaşık bir milyon farklı kapsid varyantların kütüphaneler verim kadar boyutlandırıldıktan sayede Yüksek verimli bir şekilde uygulanır. Her klon, daha sonra birçok ebeveyn virüs benzersiz bir kombinasyonu (DNA karılma yaklaşım) oluşan veya aynı viral omurga (peptid ekran yaklaşım) kendine has bir peptid içerir. Sonraki son adım en veya seçim sürecinin ideal tüm gereklerini yerine getirerek bireysel capsids için zenginleştirmek için hedef hücreler üzerindeki böyle bir kütüphane seçimi iteratif olduğunu. Tercihen tarak ikincisiBöyle anti-AAV antikorları ile reaksiyona tüm capsids örneği ortadan kaldırılması için negatif seçimi ile ilgi belirli bir hücre tipi, üzerinde büyüme gibi ines pozitif basınç,. Bu kombinasyon seçimi kalan sentetik capsids muhtemelen herhangi bir doğal AAV izole bulunan olmazdı şekilde verilen uygulama ihtiyaçlarını eşleşen şansını artırır. Burada, teorik ve iki teknolojinin deneysel daha zorlu olarak DNA aile karıştırma yöntemi odaklanın. Biz açıklamak ve göstermek karıştırılır AAV kütüphanelerinin oluşturulması ve seçim (Şekil 1) için gerekli tüm adımları ve sonra bir ihtiyacı moleküler AAV evrimi ile başarılı olmak için farkında olmak bu protokollerin tuzaklar ve eleştirel yönlerini tartışmak.

Biz, moleküler DNA aile karıştırma yoluyla sentetik Adeno ilişkili viral (AAV) gen tedavisi vektörleri mühendisi ve gelişmeye temel tekniği göstermek. Ayrıca, biz seçimi ve kültür veya farelerde hedef hücreler üzerinde gelişmiş özellikleri ile bireysel kimerik capsids analizi için genel kurallar ve temsili örnekler sunuyor.

DNA Aile karıştırma ile Mühendislik ve Sentetik adeno-ilişkili virüs Evrimi (AAV) Gen Terapisi Vektörler

Adeno-ilişkili viral (AAV) vektörler, sahip oldukları benzersiz... nedeniyle, terapötik insan gen transferi için en güçlü ve gelecek vadeden araçlardan bazılarını temsil etmektedir.

Aşağıdaki deneyin genel amacı, istenen özelliğe sahip partiküllerin seçilebileceği, yüksek çeşitlilikte bir sentetik adeno ilişkili viral kapsid kütüphanesi oluşturmaktır. Bu işlem; önce, daha sonra iki PCR reaksiyonu aracılığıyla kimerik diziler halinde yeniden birleştirilmelerini sağlamak amacıyla, kontrolle gerçekleştirilen DNAse I sindirimi ile aav kapsid genlerinin fragmanlara ayrılması, klonlanması ve seçilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım olarak, elde edilen PCR ürünü, en az 1 milyon farklı aav kapsid geni içeren bir plazmit kütüphanesi oluşturmak için replikasyon yeteneğine sahip bir aav konstrüktüne geri klonlanır.Ardından, hedef hücrelerde veya hayvanlarda seçilebilen kimerik bir virüs kütüphanesi üretmek amacıyla, bu plazmit kütüphanesi bir adenoviral yardımcı plazmit ile birlikte 2 9 3 T hücrelerine transfekte edilir. Sonuçlar, kültürlenmiş hücrelerde veya yetişkin farelerde artırılmış veya daha spesifik reporter gen ekspresyonuna dayalı yeni sentetik A A V vektörlerinin başarılı moleküler mühendisliğini ve evrimini göstermektedir. Bu tekniğin peptid display gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, DNA family shuffling yönteminin; hücre bağlanması ve hücre içi ta

engineering-evolution-synthetic-adeno-associated-virus-aav-gene

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada, biz üretmek için verimli ve tekrarlanabilir bir strateji, titresi ve adeno ilişkili virüs vektörlerin kalite kontrol toplu işlemleri açıklanmaktadır. Bir vektör hazırlık ile yüksek-titresi elde etmek kullanýcýnýn (≥1 x 1013 vektör genleri/mL) ve yüksek saflıkta, vitro veya vivo içinde kullanıma hazır.

Üretim, arıtma ve kalite kontrol için virüs tabanlı vektörel çizimler Adeno ilişkili

Burada, hücre yığınlarında yetişen yapışan HEK 293 hücrelerini ve benzeşim kromatografisi saflaştırmayı kullanarak araştırma sınıfı AAV vektörlerinin büyük ölçekli üretimi için ayrıntılı bir prosedür sunuyoruz. Bu protokol sürekli olarak &gt;1 x 1013 vektör genomları /mL verir ve büyük hayvan çalışmaları için uygun vektör miktarları sağlar.

Büyük Hayvan Modellerinde Preklinik Çalışmalar İçin Hücre Yığınlarında Adeno İlişkili Virüs Vektörlerinin Üretimi

AAV peptit görüntüleme kütüphanesi üretimi ve yeni nesil AAV'lerin oluşturulması için yeni özelliklere sahip adayların barkodlaması yoluyla daha sonra doğrulanması.

Yeni Nesil Gen Terapisi Vektörlerinin Mühendislik, Barkodlama ve Adeno-İlişkili Virüs (AAV) Kapsid Varyantlarının Taranması Yoluyla İzolasyonu

Burada, gen tedavisi vektörlerinin klinik gelişimini desteklemek için damlacık dijital polimeraz zincir reaksiyonu ile insan gözyaşlarında adeno ilişkili viral vektörlerin uyumlu tespitinde iyi laboratuvar uygulamalarının geliştirilmesi ve doğrulanması için bir protokol sunuyoruz.

Gözyaşlarının Biyodökülme Çalışmalarında Adeno-İlişkili Viral Vektörlerin Tespiti için Doğrulanabilir Bir Damlacık Dijital Polimeraz Zincir Reaksiyonu Testi

Rekombinant adeno-ilişkili virüs (rAAV), klinik ve preklinik gen iletimi için yaygın olarak kullanılmaktadır. rAAV'ler için yeterince takdir edilmeyen bir kullanım, kültürlenmiş hücrelerin saflaştırmaya gerek kalmadan sağlam bir şekilde aktarılmasıdır. rAAV'ye yeni başlayan araştırmacılar için, transgen kaset klonlama, ham vektör üretimi ve hücre kültürü transdüksiyonu için bir protokol sunuyoruz.

Saflaştırılmamış Rekombinant Adeno İlişkili Viral Vektörler Kullanılarak Kültürlenmiş Hücrelerde Transgen Ekspresyonu

Adeno ilişkili virüs, süspansiyon hücre kültüründe üretilir ve çift iyodiksanol yoğunluk gradyan santrifüjlemesi ile saflaştırılır. Toplam virüs verimini artırmak, virüs çökelme riskini azaltmak ve nihai virüs ürününü daha da konsantre etmek için adımlar dahil edilmiştir. Beklenen nihai titreler 1012 viral partikül/mL'ye ulaşır ve klinik öncesi in vivo kullanım için uygundur.

İn Vivo Uygulamalar için İodiksanol Yoğunluk Gradyan Santrifüjü ile Adeno İlişkili Virüsün Süspansiyon Kültürü Üretimi ve Saflaştırılması

Bu el yazması, optimize edilmiş bir heparin bazlı afinite kromatografisi yöntemi kullanılarak adeno ile ilişkili viral vektörlerin üretilmesi ve saflaştırılması için ayrıntılı bir protokolü açıklamaktadır. Ultrasantrifüjleme ihtiyacını ortadan kaldıran basit, ölçeklenebilir ve uygun maliyetli bir yaklaşım sunar. Elde edilen vektörler, klinik öncesi çalışmalarda değerlerini kanıtlayan yüksek saflık ve biyolojik aktivite sergiler.

Adeno ile İlişkili Viral Vektörlerin Tek Adımlı ve Yarı Otomatik Heparin Afinite Kromatografisi Protokolü ile İzolasyonu

Adeno-ilişkili virüs (AAV) vektör genom kopyalarının kesin miktar tayini kritiktir, ancak standart bir protokol henüz oluşturulmamıştır. Bu protokol, saflaştırılmış AAV numunelerinin hazırlanması ve viral genom titresinin güvenilir bir şekilde ölçülmesi için dijital damlacık polimeraz zincir reaksiyonunun (dd_PCR) yürütülmesi için doğrulanmış bir yöntemi tanımlar.

Dijital Damlacık Polimeraz Zincir Reaksiyonu ile Saflaştırılmış Vektör Örneklerinde Adeno İlişkili Viral Genomların Miktar Tayini

Bu protokol, gen tedavisi için mezenkimal kök hücre (MSC) türevli ekstraselülük vezikül biyomimetiklerinin üretilmesi ve saflaştırılması için bir yöntem tanıtmayı amaçlamaktadır. Nanovezikül, MSC'den türetilen lipid çift katmanlarla sınırlıdır ve lümende ilgi çekici geni taşıyan rekombinant AAV'leri kapsüller. Bu nanovezikül, in vivo gen taşıması için gelişmiş bir vektör sunar.

Gen Taşımayı Artırmak İçin Mezenkimal Kök Hücre Zarı Zarflı Nanoveziküllerin Geliştirilmesi

Plazmid DNA influenza A virüsleri Kurtarma grip araştırmacılar grip virüsünün biyoloji çeşitli yönlerini incelemek amacıyla rekombinant virüsler üretmek için, ve potansiyel vektörler veya aşı olarak kullanılmak üzere izin veren bir temel ve temel deneysel bir tekniktir.

Plazmid DNA Rekombinant Grip Virüsü Üretimi

Öğrenin DNA aile karıştırma ile AAV kapsit kütüphaneleri oluşturmayı ve gen terapisi için gelişmiş viral vektörler seçmeyi. Bu yöntem milyonlarca kimerik varyant üreterek hedef hücrelere özgü enfeksiyon özellikleri geliştirmeyi sağlar.

DNA Aile karıştırma ile Mühendislik ve Sentetik adeno-ilişkili virüs Evrimi (AAV) Gen Terapisi Vektörler

Daha fazla video keşfet