Name: Herpes Çalışmaları A Primer Nöron Kültür Sistem Virüs gecikmesi ve Yeniden Simplex (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 22 s
Description: Öğrenin, primer nöron kültür sistemi kullanarak HSV-1 latensi ve reaktivasyonunu nasıl çalışacağınızı. Bu yöntem, üst servikal gangliyon nöronlarının izolasyonu ve viral reaktivasyonun değerlendirilmesini içerir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu yazının geliştirmek için yardımcı onların düşünceli önerileriniz için teşekkür değerlendirenler. Bu çalışma NIH MVC (NS21072, HD23315), ACW (GM61139, S10RR017970) ve IM (AI073898, GM056927) hibe ile desteklenmiştir. MK bir NIH eğitim bursu (5T32 AI007180) tarafından kısmen desteklenmiştir.

<ol><li>Camarena, V., Kobayashi, M., Kim, J. Y., Roehm, P., Perez, R., Gardner, J., Wilson, A. C., Mohr, I., Chao, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+and+duration+of+growth+factor+signaling+through+receptor+tyrosine+kinases+regulates+HSV-1+latency+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+%26+Microbe%22%5BJournal%5D)">Nature and duration of growth factor signaling through receptor tyrosine kinases regulates HSV-1 latency in neurons.</a> Cell Host & Microbe. 8, 320-330 (2010).</li>
<li>Johnson, M. I. Primary cultures of sympathetic ganglia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJohnson%2C+MI+%22Protocols+for+Neural+Cell+Culture%22">Protocols for Neural Cell Culture</a>. Fedoroff, S., Richardson, A. , 3rd Ed, Humana Press, Inc. Totowa, N.J. 71-94 (2001).</li>
<li>Letourneau, P. C. Preparation of substrata for in vitro culture of neurons. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLetourneau%2C+PC+%22Protocols+for+Neural+Cell+Culture%22">Protocols for Neural Cell Culture</a>. Fedoroff, S., Richardson, A. , 3rd Ed, Humana Press, Inc. Totowa, N.J. 245-254 (2001).</li>
<li>Price, J. P., Brewer, G. J. Serum-free media for neural cell cultures. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPrice%2C+JP+%22Protocols+for+Neural+Cell+Culture%22">Protocols for Neural Cell Culture</a>. Fedoroff, S., Richardson, A. , 3rd Ed, Humana Press, Inc. Totowa, N.J. 255-264 (2001).</li>
<li>Flint, S. J., Enquist, L. W., Racaniello, V. R., Skalka, A. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFlint%2C+SJ+%22Principles+of+virology%22">Principles of virology</a>. , 3rd Ed, ASM Press. (2008).</li>
<li>Roizman, B., Pellett, P. E. The family Herpesviridae: A brief introduction. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoizman%2C+B+%22Fields+Virology%22">Fields Virology</a>. Knipe, D. M., Howley, P. M. 2, Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia. 2381-2397 (2001).</li>
<li>Price, R. W., Rubenstein, R., Khan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+infection+of+isolated+autonomic+neurons+in+culture%3A+viral+replication+and+spread+in+a+neuronal+network%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus infection of isolated autonomic neurons in culture: viral replication and spread in a neuronal network.</a> Arch. Virol. 71, 127-140 (1982).</li>
<li>Tomishima, M. J., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+alpha-herpesvirus+protein+necessary+for+axonal+localization+of+viral+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved alpha-herpesvirus protein necessary for axonal localization of viral membrane proteins.</a> J. Cell Biol. 154, 741-752 (2001).</li>
<li>Ch'ng, T. H., Flood, E. A., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+primary+and+transformed+neuronal+cells+for+studying+pseudorabies+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Culturing primary and transformed neuronal cells for studying pseudorabies virus infection.</a> Methods Mol. Biol. 292, 299-316 (2005).</li>
<li>Wang, F., Tang, W., McGraw, H. M., Bennett, J., Enquist, L. W., Friedman, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+type+1+glycoprotein+E+is+required+for+axonal+localization+of+capsid%2C+tegument%2C+and+membrane+glycoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus type 1 glycoprotein E is required for axonal localization of capsid, tegument, and membrane glycoproteins.</a> J. Virol. 79, 13362-13372 (2005).</li>
<li>Benboudjema, L., Mulvey, M., Gao, Y., Pimplikar, S. W., Mohr, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+the+herpes+simplex+virus+type+1+us11+gene+product+with+the+cellular+kinesin+light-chain-related+protein+PAT1+results+in+the+redistribution+of+both+polypeptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Association of the herpes simplex virus type 1 us11 gene product with the cellular kinesin light-chain-related protein PAT1 results in the redistribution of both polypeptides.</a> J. Virol. 77, 9192-9203 (2003).</li>
<li>Blaho, J., Morton, E. R., Yedowitz, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus%3A+propagation%2C+quantification+and+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus: propagation, quantification and storage.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Chapter 14, Unit 14E.1(2005).</li>
<li>Van Zeijl, M., Fairhurst, J., Jones, T. R., Vernon, S. K., Morin, J., LaRocque, J., Feld, B. L., O'Hara, B. L., Bloom, J. D., Johann, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+class+of+thiourea+compounds+that+inhibit+herpes+simplex+virus+type+1+DNA+cleavage+and+encapsidation%3A+resistance+maps+to+the+UL6+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Novel class of thiourea compounds that inhibit herpes simplex virus type 1 DNA cleavage and encapsidation: resistance maps to the UL6 gene.</a> J. Virol. 74, 9054-9061 (2000).</li>
<li>Newcomb, W. W., Brown, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+herpes+simplex+virus+replication+by+WAY-150138%3A+assembly+of+capsids+depleted+of+the+portal+and+terminase+proteins+involved+in+DNA+encapsidation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of herpes simplex virus replication by WAY-150138: assembly of capsids depleted of the portal and terminase proteins involved in DNA encapsidation.</a> J. Virol. 76, 10084-10088 (2002).</li>
<li>Pesola, J. M., Zhu, J., Knipe, D. M., Coen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+1+immediate-early+and+early+gene+expression+during+reactivation+from+latency+under+conditions+that+prevent+infectious+virus+production%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus 1 immediate-early and early gene expression during reactivation from latency under conditions that prevent infectious virus production.</a> J. Virol. 79, 4516-14525 (2005).</li>
<li>Arthur, J. L., Scarpini, C. G., Connor, V., Lachmann, R. H., Tolkovsky, A. M., Efstathiou, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+type+1+promoter+activity+during+latency+establishment%2C+maintenance+and+reactivation+in+primary+dorsal+root+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus type 1 promoter activity during latency establishment, maintenance and reactivation in primary dorsal root neurons in vitro.</a> J. Virol. 75, 3885-3895 (2001).</li>
<li>Danaher, R. J., Jacob, R. J., Steiner, M. R., Allen, W. R., Hill, J. M., Miller, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+inhibitors+induce+reactivation+of+herpes+simplex+virus+type+1+in+a+latency-associated+transcript-+independent+manner+in+neuronal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurovirol%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase inhibitors induce reactivation of herpes simplex virus type 1 in a latency-associated transcript- independent manner in neuronal cells.</a> J. Neurovirol. 11, 306-317 (2005).</li>
<li>Terry-Allison, T., Smith, C. A., DeLuca, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relaxed+repression+of+herpes+simplex+virus+type+1+genomes+in+murine+trigenminal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Relaxed repression of herpes simplex virus type 1 genomes in murine trigenminal neurons.</a> J. Virol. 71, 12394-12405 (2007).</li>
<li>Harris, R. A., Preston, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+latency+in+vitro+by+the+herpes+virus+type+1+mutant+in1918%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Establishment of latency in vitro by the herpes virus type 1 mutant in1918.</a> J. Gen. Virol. 72, 907-913 (1991).</li>
<li>Wagner, E. K., Bloom, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+investigation+of+herpes+simplex+virus+latency%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Experimental investigation of herpes simplex virus latency.</a> Clin. Microbiol. Rev. 10, 419-443 (1997).</li>
<li>Strelow, L. I., Laycock, K. A., Jun, P. Y., Rader, K. A., Brady, R. H., Miller, J. K., Pepose, J. S., Leib, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+structural+and+functional+comparison+of+the+latency-associated+transcript+promoters+of+herpes+simplex+virus+type+1+strains+KOS+and+McKrae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">A structural and functional comparison of the latency-associated transcript promoters of herpes simplex virus type 1 strains KOS and McKrae.</a> J. Gen Virol. 75, 2475-2480 (1994).</li>
<li>Stroop, W. G., Banks, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+type+1+strain+KOS-63+does+not+cause+acute+or+recurrent+ocular+disease+and+does+not+reactivate+ganglionic+latency+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus type 1 strain KOS-63 does not cause acute or recurrent ocular disease and does not reactivate ganglionic latency in vivo.</a> Acta Neuropathol. 87, 14-22 (1994).</li>
<li>Sawtell, N. M., Poon, D. K., Tansky, C. S., Thompson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+latent+herpes+simplex+virus+type+1+genome+copy+number+in+individual+neurons+is+virus+strain+specific+and+correlates+with+reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">The latent herpes simplex virus type 1 genome copy number in individual neurons is virus strain specific and correlates with reactivation.</a> J. Virol. 72, 5343-5350 (1998).</li>
<li>Thompson, R. L., Cook, M. L., Devi-Rao, G., Wagner, E. K., Stevens, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+molecular+analysis+of+the+avirulent+wild-type+herpes+simplex+virus+type+1+strain+KOS%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Functional and molecular analysis of the avirulent wild-type herpes simplex virus type 1 strain KOS.</a> J. Virol. 58, 203-211 (1986).</li>
<li>Wilcox, C. L., Smith, R. L., Freed, C. R., Johnson, E. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+growth+factor-dependence+of+herpes+simplex+virus+latency+in+peripheral+sympathetic+and+sensory+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Nerve growth factor-dependence of herpes simplex virus latency in peripheral sympathetic and sensory neurons in vitro.</a> J. Neurosci. 10, 1268-1275 (1990).</li>
<li>Roehm, P. C., Camarena, V., Gardner, J. B., Wilson, A. C., Mohr, I., Chao, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultured+vestibular+ganglion+neurons+demonstrate+latent+herpes+simplex+type+I+reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Cultured vestibular ganglion neurons demonstrate latent herpes simplex type I reactivation.</a> Laryngoscope. 121, 2268-2275 (2011).</li>
<li>Kuhn, M. A., Nayak, S., Camarena, V., Gardner, J., Wilson, A., Mohr, I., Chao, M. V., Roehm, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+culture+model+of+facial+palsy+resulting+from+reactivation+of+latent+herpes+simplex+virus+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Otology+%26+Neurotology%22%5BJournal%5D)">A cell culture model of facial palsy resulting from reactivation of latent herpes simplex virus type 1.</a> Otology & Neurotology. , Forthcoming (2012).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu primer nöron kültürü ve enfeksiyon sistemi HSV-1 gecikme ve reaktivasyonu altında yatan moleküler mekanizmaları keşfetmek için basit ve etkili bir yöntem sağlar. Sistem sadakatle özetlediği insan enfeksiyonları hem de hem canlı hayvan modellerinde belirlenen gecikme kabul özellikleridir. Virüs SCG kültürlerinde gizli olduğunda, bulaşıcı parçacıklar ve viral litik gen ürünleri tespit edilemez. Latent enfekte nöron tespit sadece viral gen ürünü çekirdeklerin içinde birikir kodlamayan LAT transkript var...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> # Kataloğa </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> 70μm naylon filtre (hücre süzgecinden) </td><td> BD Biosciences </td><td> 352350 </td><td></td></tr><tr><td> 1x Hank Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS - / -) </td><td> Invitrogen </td><td> 14175 </td><td> w / o CaCI2 ve MgCl2 </td></tr><tr><td> 1x Minimum Essential Medya (MEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 11095-080 </td><td></td></tr><tr><td> 5-Fluoro-2&#39;-deoksipsödoüridin </td><td> Sigma </td><td> F0503 </td><td> -20 ° C&#39;de mağaza, 1x MEM 20 mM stok hazırlamak </td></tr><tr><td> 96-düz sıra alt TC plakaları </td><td> Corning </td><td> 3599 </td><td></td></tr><tr><td> Asiklovir </td><td> &lt;em&gt; Calbiochem </td><td> 114798 </td><td> -20 ° C&#39;de mağaza; DMSO içinde 31 mM stok hazırlamak </td></tr><tr><td> Aphidicolin </td><td> Calbiochem </td><td> 178273 </td><td> -20 ° C&#39;de mağaza; DMSO içinde 10 mM stok hazırlamak </td></tr><tr><td> B-27 Ek </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-44 </td><td></td></tr><tr><td> Kollajenaz </td><td> Sigma </td><td> C2674 </td><td> -20 ° C&#39;de mağaza; - / - HBSS 10 mg / ml stok hazırlamak </td></tr><tr><td> D-(+)-glikoz </td><td> Sigma </td><td> G6152 </td><td> H 2 O% 40 hisse senedi hazırlamak; filtre 4 de sterilize &amp; saklamak ° C </td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-081 </td><td></td></tr><tr><td> Laminin </td><td> Sigma </td><td> L2020 </td><td> Hızlı dondurma 20 ul; H2O 1 mg / ml stok hazırlamak-80 at aliquats &amp; mağaza ° C; seyreltilir 2 mcg / ml çalışma kons. Steril H 2 O </td></tr><tr><td> Leibovit&#39;z L-15 ortam </td><td> Invitrogen </td><td> 11415 </td><td></td></tr><tr><td> Sinir Büyüme Faktörü </td><td> Harlan Laboratuvarları </td><td> BT.5017 </td><td> - / - HBSS içinde 50 mcg / ml stok hazırlamak; -80 ° C de mağaza </td></tr><tr><td> Neurobasal orta </td><td> Invitrogen </td><td> 12348 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphonoacetic asit (PAA) </td><td> Sigma </td><td> P6909 </td><td> -20 ° C&#39;de deposu; H2O içinde 75 mg / ml stok hazırlanması </td></tr><tr><td> Poli-D-lizin hidrobromür </td><td> Sigma </td><td> P0899 </td><td> -20 ° C&#39;de deposu; H2O içinde 20 mg / ml stok hazırlanması </td></tr><tr><td> Rat-tail kollajen </td><td> Millipore </td><td> 08-115 </td><td>Konsantrasyon kaynağı sürü ile değişir; 4 de mağaza ° C ve seyreltik için 0.66 mg / ml çalışma kons. Steril H 2 O </td></tr><tr><td> Trichostatin A </td><td> Sigma </td><td> T8552 </td><td> -20 ° C&#39;de mağaza; DMSO 1 mM stok hazırlamak </td></tr><tr><td> Tripsin% 2.5 </td><td> Invitrogen </td><td> 15090-04 </td><td></td></tr></tbody></table>

herpes Çalışmaları a primer nöron kültür sistem virüs gecikmesi ve yeniden simplex

A Primary Neuron Culture System for the Study of Herpes Simplex Virus Latency and Reactivation

Herpes simpleks tip 1 (HSV-1) periferik nöronlarda bir ömür boyu gizli bir enfeksiyon oluşturur simpleks virüsü. Bu gizli rezervuar iletimi sağlamak ve klinik hastalığı katkıda tekrarlayan reaktivasyon olayların kaynağıdır. Şu antiviral gizli rezervuar etkisi yoktur ve hiçbir aşılar vardır. Litik replikasyon moleküler ayrıntıları iyi karakterize iken, nöronlarda gecikme kontrol mekanizmaları zor kalır. Gecikme Bizim bugünkü anlayış viral gen gereksinimleri ve immün yanıtın rolü tanımlamak için vazgeçilmez olan küçük hayvan modelleri kullanılarak in vivo çalışmalar türetilmiştir. Bununla birlikte, canlı hayvanlarda bağışıklık veya non-nöronal destek hücreleri tarafından aracılık enfeksiyon daha genel sonuçlarından virüsü-nöron ilişkiyi spesifik etkileri ayırt etmek imkansızdır. Buna ek olarak, hayvan deney ev sahibi manipüle edilmesi için, masraflı zaman alıcı ve seçenekler açısından sınırlıdırsüreçleri. Bu sınırlamaları aşmak için, bir nöron sadece sistem umutsuzca gecikme ve reaktivasyonu in vivo özellikleri üretir ama homojenlik ve erişilebilirlik açısından doku kültürü faydalar sunduğunu gereklidir. Burada uyan HSV-1 gecikme ve reaktivasyonu okumaya sıçan üstün servikal gangliya (SCG) (Şekil 1) kültürlerinde birincil sempatik nöronlar kullanan bir in vitro model sunmak en değil, istenen tüm kriterleri eğer. Non-nöronal hücrelerin ortadan kaldırarak sonra, yakın homojen TrkA + nöron kültürleri litik çoğaltma bastırmak için asiklovir varlığı (ACV) HSV-1 ile enfekte olmaktadır. Aşağıdaki ZMA kaldırılması, sadakatle gecikme kabul işaretlerinden verimli kurulan sergilemek üretken olmayan HSV-1 enfeksiyonları. Özellikle, litik mRNA, protein ve bulaşıcı virüsün bile seçimi yokluğunda, farkedilmezler.Örneklerini, ancak gecikme ile ilişkili transkript (LAT) ekspresiyon nöronal çekirdeklerinde devam. Viral genomu nöron başına ortalama 25 kopya sayısında korunur ve verimli PI3-Kinaz / Akt sinyal veya sinir büyüme faktörü 1 basit çekilmesi ile müdahale ederek çoğaltmak için bağlı olabilir. Viral proteini litik Us11 füzyonlu bir rekombinant HSV-1 kodlama EGFP kolaylıkla ölçülür kaynaklanan replikasyon aktive için işlevsel, gerçek zamanlı işaretleyici sağlar. Kimyasal işlemler ek olarak, bu tür lentiviral vektörler aracılığıyla RNA-etkileşim veya gen aktarımının gibi genetik metodolojiler başarılı bir şekilde çok zordur, imkansız olmasa, hayvanlarda olan mekanik çalışmalar izin sistemine uygulanabilir. Özetle, SCG tabanlı HSV-1 gecikme / reaktivasyon sistemi nöronlarda HSV1 gecikme ve reaktivasyonu olan çözüm bu yeni tedavilerin geliştirilmesi taze bakış açısı sunabilir viroloji köklü bir bulmaca kontrol eden moleküler mekanizmalar çözülmeye güçlü, gerekli bir araç sağlar hedef tdiye herpesvirus rezervuar gizli.

Protokol herpes virüs tip 1 (HSV-1) gecikme ve reaktivasyonu simpleks incelemek için etkin ve tekrarlanabilir model sistemi anlatılmaktadır. Assay homojen sempatik sinir kültürler kullanmaktadır ve RNA etkileşimi ve rekombinant proteinlerin ifadesi de dahil olmak üzere çeşitli araçlar kullanılarak virüs nöron etkileşimlerin moleküler Diseksiyon için olanak sağlar.

Herpes Çalışmaları A Primer Nöron Kültür Sistem Virüs gecikmesi ve Yeniden Simplex

Herpes simplex virüs tip-1 (HSV-1), periferik nöronlarda yaşam boyu süren latent bir enfeksiyon oluşturur. Bu latent rezervuar, tekrarlayan ... kaynaklıdır.

Bu deneyin amacı, primer nöron hücre kültürü sisteminin herpes simplex virüsü latansı ve reaktivasyonunu incelemek için nasıl kullanılabileceğini göstermektir. Bu işlem, öncelikle RA embriyolarından superior servikal ganglion nöronlarının izole edilmesi ve nöron dışı hücrelerin eliminasyonundan sonra disosiye edilen ganglionlardan izole edilen nöronların kültüre edilmesiyle gerçekleştirilir. Latent bir HSV enfeksiyonu, litik replikasyon inhibitörü varlığında nöronları enfekte etmek için bir EGFP virüsü kullanılarak oluşturulur.Bir sonraki adım, latent enfekte kültürlerin reaktivasyonunu indüklemektir. Son olarak, reaktivasyon verimliliği EGFP ekspresyonunun zaman içindeki seyri izlenerek değerlendirilir. Nihayetinde, kimyasal inhibitörler, RNA interferansı ve gen iletimi kullanımı aracılığıyla farklı nöronal sinyal yolaklarının herpes simpleks virüsü latansını ve reaktivasyonunu nasıl regüle ettiğini gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, herpes simplex virüsü latansını konak nöronunda düzenleyen etkileşimlerin moleküler düzeyde ayrıntılı olarak incelenmesine olanak tanımasıdır. Bu yöntem, herpes simplex virüsü latansı alanındaki "laten

a-primary-neuron-culture-system-for-study-herpes-simplex-virus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Synaptically bağlı nöronların izleme için bir yöntem tarif edilmektedir. Biz bir ilgi hücre popülasyonu tanımlı genetik hücre tiplerinden sinaptik girdi alıp almadığını soruşturma yönündeki bir hücrenin TVA özgüllüğü kullanın.

Genetiği Tanımlı Nöral Devre arasında Tracing Viral

Herpetik kornea hastalığı çalışmaların çoğu birincil enfeksiyon modeli kullanın. Ancak, HSV-1 ile birincil infeksiyon genellikle insan hastalığına yol açmaz. Burada daha yakından insan hastalığı taklit herpetik kornea hastalığı, tekrarlayan modeli açıklamak.

Farelerde Tekrarlayan Herpetik Stromal Keratit, İnsan HSK Eğitim İçin Bir Model

Source: Nguyen, H., et al. Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates the propagation and harvesting of oncolytic herpes simplex virus in mammalian cell cultures, highlighting viral entry, replication, and the recovery of virus-loaded cells. It further shows methods for preserving infected cells for downstream processing.

Propagation and Harvesting of Oncolytic Herpes Simplex Virus in Mammalian Cells

Kaynak: Dembowski, J. A., Deluca, N. A. Purification of Viral DNA for the Identification of Associated Viral and Cellular Proteins. J. Vis. Exp. (2017)Bu video, durağan fazdaki memeli hücrelerin HSV-1 (Herpes Simplex Virus-1) ile enfekte edilmesini ve ardından konakçı ile viral replikasyon mekanizmaları kullanılarak viral genomun replikasyonunu göstermektedir. Replikasyon halindeki genomları işaretlemek için yeni sentezlenen viral DNA'ya sentetik bir nukleozid analoğu dahil edilir; bu genomlar...

Replike HSV-1 Genomlarının Bir Nükleozid Analogu ile İşaretlenmesi

Alphaherpes virüs enfeksiyonlarının Canlı hücre görüntüleme yönelik ulaşım ve hücreler arası yayılma dinamik olayların analizi sağlar. Burada, birincil nöronların enfeksiyon sırasında viral meclislerinin görselleştirme kolaylaştırmak için floresan füzyon proteinleri ifade rekombinant viral suşlar kullanmak yöntemleri sunuyoruz.

Alphaherpes Virüs İleriye Taşıma ve Değişken Canlı Hücre Görüntüleme

Bu hayvan modellerinin doku bölümleri içinde kalıcı bir DNA virüsü genomunun saptanması için in situ hibridizasyon protokolünde bir floresan kurulmuştur. Bu protokol, viral genomun codetection, kendi RNA ürünleri ve tek bir hücre içinde viral veya hücresel proteinleri tarafından enfeksiyon süreci üzerinde çalışırken sağlar.

Floresan Nöronal Dokularda Kalıcı DNA Virüs Genomu ve Transkriptlerinin Algılama In situ Melezleme immün ile birlikte

Deri, insan patojeni herpes simpleks virüsü tip 1'in (HSV-1) hedef dokularından biridir. HSV-1'in dokuya invazyon yolunu araştırmak için, cildin en dış tabakasını temsil eden murin epidermal tabakalarının ex vivo bir enfeksiyon modeli oluşturduk.

Herpes Simplex virüs tip 1 ile murin Epidermis Ex ​​vivo enfeksiyon

Nörobiyoloji ve nörovirolojide, insan nöronlarında in vivo olarak meydana gelenler için translasyonel bir model olarak hizmet eden güvenilir, tekrarlanabilir bir in vitro sisteme sahip olmak kritik öneme sahiptir. Bu protokol, SH-SY5Y insan nöroblastom hücrelerinin in vitro uygulamalarda kullanılmak üzere canlı nöronlara nasıl kültürleneceğini ve ayırt edileceğini açıklar.

SH-SY5Y İnsan Nöroblastom Hücre Hattı Farklılaşma

Bu raporda, organotypic ve fare kaynaklı dorsal kök gangliyon Disosiye birincil kültürler avantajları ile nöron gliyal etkileşim, nöroplastisite ilişkili mekanizmaları geniş bir araştırmaya vurgulanır, neuroinflammation ve viral enfeksiyon yanıt.

Yetişkin fare DRG Explant ve nöroplastisite ve Viral enfeksiyon da dahil olmak üzere çevre hakaret yanıtlar araştırmak için hücre modelleri ayrışmış

HIV verimli yeniden etkinleştirme işlev değerlendirmesi ve gizli proviruses boşluk için yüksek aktarım protokolü açıklanan ve müdahaleler HIV transkripsiyon üzerinde etkisini test ve yapıştırma uygulanır. Soldan sağa dayalı transkripsiyon ajanlara geri ve yapıştırma gecikme etkisi temsilcisi sonuçları sağlanır.

Vitro değerlendirme HIV transkripsiyon ve yapıştırma ajanları geri gecikme süresi yüksek işlem hacmi

Bu protokol, BAC16'dan türetilmiş viryonları kullanarak Kaposi sarkomu ile ilişkili herpes virüsünün de novo litik enfeksiyonunu modellemek için bir in vitro sistemi tanımlar. Yöntem, erken viral replikasyon ve yayılımının araştırılmasını sağlar. Enfeksiyöz virüs üretimi, GFP tabanlı enfeksiyöz birim testleri ve kapsüllenmiş viral genomların gerçek zamanlı PCR'si ile ölçülür.

Hücresiz Kaposi Sarkomu ile İlişkili Herpes Virüsü ile De Novo Litik Enfeksiyonun Kurulması ve Miktarının Belirlenmesi

Öğrenin, primer nöron kültür sistemi kullanarak HSV-1 latensi ve reaktivasyonunu nasıl çalışacağınızı. Bu yöntem, üst servikal gangliyon nöronlarının izolasyonu ve viral reaktivasyonun değerlendirilmesini içerir.

Herpes Çalışmaları A Primer Nöron Kültür Sistem Virüs gecikmesi ve Yeniden Simplex

Daha fazla video keşfet