Name: Kültüre ve Duvar Gemi Biyoreaktör Döner Uygulamaları 3D Epitel Hücre Modelleri Türetilmiş (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 22 s
Description: Keşfedin dönen biyoreaktör sistemi kullanarak insan epitel hücrelerinden 3D organotipik kültür modelleri oluşturma yöntemini. Bu teknik, in vivo benzeri doku davranışlarını araştırmak için güçlü bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar onun protein analizi için onu teknik uzmanlık ve Andrew Larsen için Brooke Hjelm teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Alternatifleri Araştırma Geliştirme Vakfı (MMHK) Grant ve NIH NIAID Cinsel Yolla Bulaşan Enfeksiyonlar ve Topikal mikrobisitler Kooperatif Araştırma Merkezi IU19 AI062150-01 (MMHK) tarafından kısmen finanse edildi. Biz minnetle rakamlar yeniden kullanım için Üremenin Biyolojisi kabul etmiş sayılırsınız.

<ol><li>Herbst-Kralovetz, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+and+comparison+of+toll-like+receptor+expression+and+responsiveness+in+primary+and+immortalized+human+female+lower+genital+tract+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Reprod.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Quantification and comparison of toll-like receptor expression and responsiveness in primary and immortalized human female lower genital tract epithelia.</a> Am. J. Reprod. Immunol. 59 (3), 212-224 (2008).</li>
<li>Hjelm, B. E., Berta, A. N., Nickerson, C. A., Arntzen, C. J., Herbst-Kralovetz, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+three-dimensional+organotypic+human+vaginal+epithelial+cell+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a three-dimensional organotypic human vaginal epithelial cell model.</a> Biol. Reprod. 82, 617-627 (2009).</li>
<li>Bibliography of Research Publications [Internet]. , Synthecon. Houston, Texas. Available from: 
		
	 <a target="_blank" href="http://www.synthecon.com/bibliography.html">http://www.synthecon.com/bibliography.html</a> (2012).</li>
<li>Khaoustov, V. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+three-dimensional+assembly+of+human+liver+cells+by+simulated+microgravity%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev.+Biol.+Anim%22%5BJournal%5D)">Induction of three-dimensional assembly of human liver cells by simulated microgravity.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 35, 501-509 (1999).</li>
<li>Papadaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+of+functional+cardiac+muscle%3A+molecular%2C+structural%2C+and+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering of functional cardiac muscle: molecular, structural, and electrophysiological studies.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 280, 168-178 (2001).</li>
<li>Ishikawa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+hepatic+tissue+architectures+from+fetal+liver+cells+obtained+from+a+three-dimensional+culture+with+a+rotating+wall+vessel+bioreactor%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biosci.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of hepatic tissue architectures from fetal liver cells obtained from a three-dimensional culture with a rotating wall vessel bioreactor.</a> J. Biosci. Bioeng. 111, 711-718 (2011).</li>
<li>Carvalho, H. M., Teel, L. D., Goping, G., O'Brien, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+three-dimensional+tissue+culture+model+for+the+study+of+attach+and+efface+lesion+formation+by+enteropathogenic+and+enterohaemorrhagic+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A three-dimensional tissue culture model for the study of attach and efface lesion formation by enteropathogenic and enterohaemorrhagic Escherichia coli.</a> Cell Microbiol. 7, 1771-1781 (2005).</li>
<li>Nickerson, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+tissue+assemblies%3A+novel+models+for+the+study+of+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional tissue assemblies: novel models for the study of Salmonella enterica serovar Typhimurium pathogenesis.</a> Infection and Immunity. 69, 7106-7120 (2001).</li>
<li>Honer zu Bentrup, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organotypic+models+of+human+colonic+epithelium+to+study+the+early+stages+of+enteric+salmonellosis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organotypic models of human colonic epithelium to study the early stages of enteric salmonellosis.</a> Microbes Infect. 8, 1813-1825 (2006).</li>
<li>Carterson, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A549+lung+epithelial+cells+grown+as+three-dimensional+aggregates%3A+alternative+tissue+culture+model+for+Pseudomonas+aeruginosa+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">A549 lung epithelial cells grown as three-dimensional aggregates: alternative tissue culture model for Pseudomonas aeruginosa pathogenesis.</a> Infection and Immunity. 73, 1129-1140 (2005).</li>
<li>Smith, Y. C., Grande, K. K., Rasmussen, S. B., O'Brien, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+three-dimensional+organoid+model+for+evaluation+of+the+interaction+of+uropathogenic+Escherichia+coli+with+terminally+differentiated+human+urothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Novel three-dimensional organoid model for evaluation of the interaction of uropathogenic Escherichia coli with terminally differentiated human urothelial cells.</a> Infection and Immunity. 74, 750-757 (2006).</li>
<li>Sainz, B., TenCate, V., Uprichard, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+Huh7+cell+culture+system+for+the+study+of+Hepatitis+C+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional Huh7 cell culture system for the study of Hepatitis C virus infection.</a> Virol J. 6, 103(2009).</li>
<li>Duray, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+human+tissue+ex+vivo+by+Borrelia+burgdorferi%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Invasion of human tissue ex vivo by Borrelia burgdorferi.</a> J. Infect Dis. 191, 1747-1754 (2005).</li>
<li>Margolis, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphocyte+trafficking+and+HIV+infection+of+human+lymphoid+tissue+in+a+rotating+wall+vessel+bioreactor%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Res.+Hum.+Retroviruses%22%5BJournal%5D)">Lymphocyte trafficking and HIV infection of human lymphoid tissue in a rotating wall vessel bioreactor.</a> AIDS Res. Hum. Retroviruses. 13, 1411-1420 (1997).</li>
<li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+estimating+fifty+percent+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hyg%22%5BJournal%5D)">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> Am. J. Hyg. 27, 493-497 (1938).</li>
<li>Beer, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+preclinical+testing+of+nonoxynol-9+as+potential+anti-human+immunodeficiency+virus+microbicide%3A+a+retrospective+analysis+of+results+from+five+laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vitro preclinical testing of nonoxynol-9 as potential anti-human immunodeficiency virus microbicide: a retrospective analysis of results from five laboratories.</a> Antimicrob Agents Chemother. 50, 713-723 (2006).</li>
<li>Hickey, D. K., Patel, M. V., Fahey, J. V., Wira, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immunity+at+mucosal+surfaces+of+the+female+reproductive+tract%3A+stratification+and+integration+of+immune+protection+against+the+transmission+of+sexually+transmitted+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immunity at mucosal surfaces of the female reproductive tract: stratification and integration of immune protection against the transmission of sexually transmitted infections.</a> J. Reprod. Immunol. 88, 185-194 (2011).</li>
<li>Andersch-Bjorkman, Y., Thomsson, K. A., Holmen Larsson, J. M., Ekerhovd, E., Hansson, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+scale+identification+of+proteins%2C+mucins%2C+and+their+O-glycosylation+in+the+endocervical+mucus+during+the+menstrual+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Large scale identification of proteins, mucins, and their O-glycosylation in the endocervical mucus during the menstrual cycle.</a> Mol. Cell Proteomics. 6, 708-716 (2007).</li>
<li>Barrila, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+cell+culture+models%3A+Innovative+platforms+for+studying+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Microbiology%22%5BJournal%5D)">3D cell culture models: Innovative platforms for studying host-pathogen interactions.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 791-801 (2010).</li>
<li>Vamvakidou, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+breast+tumoroids%3A+An+in+vitro+assay+for+investigating+cellular+heterogeneity+and+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous breast tumoroids: An in vitro assay for investigating cellular heterogeneity and drug delivery.</a> J. Biomol Screen. 12, 13-20 (2007).</li>
<li>Jin, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+three-dimensional+tissue-engineered+bone+constructs+under+microgravity-simulated+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Establishment of three-dimensional tissue-engineered bone constructs under microgravity-simulated conditions.</a> Artif Organs. 34, 118-125 (2010).</li>
<li>Vertrees, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+three-dimensional+model+of+lung+cancer+using+cultured+transformed+lung+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Development of a three-dimensional model of lung cancer using cultured transformed lung cells.</a> Cancer Biol Ther. 8, 356-365 (2009).</li>
<li>Hwang, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+murine+embryonic+stem+cells%2C+alginate+encapsulation%2C+and+rotary+microgravity+bioreactor+in+bone+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of murine embryonic stem cells, alginate encapsulation, and rotary microgravity bioreactor in bone tissue engineering.</a> Biomaterials. 30, 499-507 (2009).</li>
<li>Pei, M., He, F., Kish, V. L., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+of+functional+cartilage+tissue+using+stem+cells+from+synovial+lining%3A+a+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Orthop+Relat.+Res%22%5BJournal%5D)">Engineering of functional cartilage tissue using stem cells from synovial lining: a preliminary study.</a> Clin. Orthop Relat. Res. 466, 1880-1889 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada sunulan RWV biyoreaktör teknoloji kullanımı daha fizyolojik ilgili organotipik hücre kültürü modeli mevcut hücre kültürü sistemini ilerletmek için yeteneği ile araştırmacılar sağlayabilir. RWV biyoreaktör hücre kültür sistemi sıkı kavşaklar, müsin üretimi, hücre dışı işlemler (yani mikrovilluslar) ve hücresel polarite dahil in vivo benzeri özellikleri de olan 3-D hücresel agregatlar oluşturması için hücreler sağlar düşük kayma mikro sağlar. Burada sunulan veri ve örneklerin çoğunluğu RWV sistemi...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A21131 </td><td> 1:500 titrede el </td></tr><tr><td> FACSDiva </td><td> BD </td><td></td><td> Akış sitometresi </td></tr><tr><td> β-tublin antikoru </td><td> Calbiochem </td><td> 654162 </td><td> 1:5000 dilüsyon el </td></tr><tr><td> Bio-Plex 2000 </td><td> BioRad </td><td> 171-000205 </td><td> v5 yazılım </td></tr><tr><td> Biyoreaktör ve bileşenler </td><td> Synthecon </td><td> RCC-4 </td><td></td></tr><tr><td> Hücre süzgeç </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td> 40μm gözenek boyutu </td></tr><tr><td> Konik tüpü (50 mL) </td><td> Corning </td><td> 5-538-60 </td><td></td></tr><tr><td> Lameller </td><td> VWR </td><td> 48366067 </td><td></td></tr><tr><td> Sitokin boncuk dizisi kitleri </td><td> BioRad </td><td> Özel insan kiti </td><td></td></tr><tr><td> Cytodex boncuk </td><td> Sigma </td><td> C3275 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Gibco </td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> ED-500G </td><td> Etilendiamintetraasetik asit </td></tr><tr><td> Epitel spesifik antikor (ESA) </td><td> Chemicon </td><td> CBL251 </td><td> 01:50 dilusyondaki el </td></tr><tr><td> Fetal bovin serumu (FBS) </td><td> Gibco </td><td> 10438 </td><td> Inaktif Isı </td></tr><tr><td> HARV (Tek) </td><td> Synthecon </td><td> D-405 </td><td></td></tr><tr><td> Hidroklorik asit </td><td> Sigma </td><td> 258148 </td><td> % 37 </td></tr><tr><td> Involukrin antikor </td&gt; <td> Sigma </td><td> Ben 9018 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroskop slaytlar </td><td> VWR </td><td> 16004-368 </td><td></td></tr><tr><td> MTT ayıracı </td><td> MP Biomedicals, LLC </td><td> 194592 </td><td> 3 - (4,5-Dimethylthiazolyl 1-2) -2,5-Difenil Tetrazolium Bromür </td></tr><tr><td> MUC1 antikoru (mikroskopisi) </td><td> Santa Cruz </td><td> Sc-7313 </td><td> 01:50 dilusyondaki el </td></tr><tr><td> MUC1 antikor (akım sitometri) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559774 </td><td> Ayrıca CD227 adı verilen, test başına 20μL kullanın </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimleri </td><td> 15710 </td><td> DPBS% 4 oranında seyreltilmiş </td></tr><tr><td> Petri (küçük) </td><td> BD Falcon </td><td> 353002 </td><td></td></tr><tr><td> Filtre ile Polistiren tüp </td><td> BD Falcon </td><td> 352235 </td><td></td></tr><tr><td&gt; Polistiren olugu </td><td> BD Falcon </td><td> 352058 </td><td></td></tr><tr><td> PR antikor </td><td> DAKO </td><td> M3569 </td><td> 1:100 de el </td></tr><tr><td> Altın Prolong </td><td> Invitrogen </td><td> P36931 </td><td> DAPI ile montaj medya </td></tr><tr><td> RNeasy Mini Kit </td><td> Qiagen </td><td> 74903 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum dodesil sülfat </td><td> Sigma </td><td> 71725 </td><td></td></tr><tr><td> Sterilizasyon çantası </td><td> VWR </td><td> 11213-035 </td><td></td></tr><tr><td> Stopcocks (tek yönlü) </td><td> Medex </td><td> MX5061L </td><td></td></tr><tr><td> Şırınganın (10 mL) </td><td> BD </td><td> 309604 </td><td> Luer kilit ipucu </td></tr><tr><td> Şırınganın (5 mL) </td><td> BD </td><td> 309603 </td><td> Luer kilit ipucu </td></tr><tr><td> Tripan Mavi </td><td> Invitrogen </td><td>T10282 </td><td></td></tr><tr><td> VP5 antikor </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-13525 </td><td> HSV-2 antikoru Clone 6F10; 1:5000 dilüsyon kullanılan </td></tr></tbody></table>

kültüre ve duvar gemi biyoreaktör döner uygulamaları 3d epitel hücre modelleri türetilmiş

Culturing and Applications of Rotating Wall Vessel Bioreactor Derived 3D Epithelial Cell Models

Hücreler ve beden deneyim kendi mimari etkileyen çevre koşulları, hücreler arası iletişim, ve genel fonksiyonları doku. In vitro hücre kültür modelleri doğru ilgi doku taklit etmek için, kültürün büyüme ortamı göz önünde kritik bir yönüdür. Yaygın olarak kullanılan geleneksel bir hücre kültüründe düz (2-D) iki boyutlu bir geçirimsiz yüzeyler üzerinde epitel hücreler yayar. Çok konvansiyonel sistemlerin hücre kültürü öğrenilebilir olmasına rağmen, birçok bulgular, potansiyel olarak, fizyolojik olarak ilgili mikro eksikliği bir sonucu olarak, insan klinik denemeler ya da doku eksplantlarında tekrarlanabilir değildir. Burada, yenilikçi döner duvar damar (RWV) çoğaltıldığı teknolojiyi kullanarak, 2-B hücre kültürlerinin kültür durumu sınırları çok aşan bir kültür sistemi tanımlar. Biz ve diğerleri organotipik RWV kaynaklı modeller structur recapitulate göstermiştire, fonksiyon ve benzer insan eksplant dokuları 1-6, dış uyaranlara otantik insan yanıtları. RWV biyoreaktör düşük fizyolojik koşullar altında sıvı kayma epitel hücre büyümesi için izin veren bir süspansiyon kültürü sistemidir. Biyoreaktörler iki farklı formatta, yüksek boy dönen damar (HARV) veya onların havalandırma kaynağına göre farklılık gösteren bir yavaş dönüm yanal damar (STLV) gelir. Epitel hücreleri gözenekli, kolajen-kaplı boncukların microcarrier (Şekil 1A) ile kombinasyon halinde tercih biyoreaktör eklenir. Hücreler biyoreaktör içinde sürekli serbest düşme (Şekil 1B) sırasında bir büyüme iskelesi olarak boncuk kullanıyoruz. Biyoreaktör tarafından sağlanan mikro hücrelerinin çoğu zaman, standart 2-D kültürü koşulları (Şekil 1B) altında gözlenmez vivo benzeri özellikleri gösteren (3-D) üç boyutlu bir agregatlar oluşturması için olanak sağlar. Bu özellikler sıkı kavşaklar, muc dahilin vivo protein lokalizasyonu, ve ek epitel hücre türüne özgü özelliklerini bize üretim, bazal / apikal yönlendirme,. Tamamen farklılaşmış 3-D agrega için epitel hücrelerinin bir tek tabaka gelen ilerleme hücre tipi 1, 7-13 göre değişir. Biyoreaktör gelen Periyodik örnekleme epitel agregat oluşumunu, hücresel farklılaşma işaretleri ve canlılık (Şekil 1D) izlenmesine olanak sağlar. Bir kez hücre farklılaşması ve toplam oluşumu kurulduğunda, hücreler hasat biyoreaktör, ve benzer deneyler 2-D hücreleri üzerinde gerçekleştirilen bir kaç hususlar (Şekil 1E-G) ile 3-D agregalar uygulanabilir edilir. Bu çalışmada, biz nasıl kültür RWV biyoreaktör sisteminde 3-D epitel hücre agrega ve 3-D agrega ile yürütülebilecek bu potansiyeli testleri ve analizleri çeşitli. Ayrıntılı adımlar tarif Bu analizler, bunlarla m / yapısal, bunlarla sınırlı değildirorphological analizi (konfokal, tarama ve transmisyon elektron mikroskobu), sitokin / kemokin sekresyon ve hücre sinyal (sitometrik boncuk dizisi ve Western blot analizi), gen ekspresyon analizi (real-time PCR), ilaç / toksikolojik analiz ve konak-patojen. Bu testlerin kullanımı gibi metabolomik, transkriptomik, proteomik ve diğer dizi tabanlı uygulamalar gibi daha derin ve geniş çalışmalar için temel ayarlayın. Amacımız çeşitli bilimsel çıkarları ile araştırmacılar tarafından kullanılmak üzere, basit bir ve sağlam bir sistem, in vivo doku insan recapitulate organotipik 3-D modeller üretmek için kültür, insan epitel hücrelerinin bir konvansiyonel olmayan yollarla sunmaktır.

Epitel hücreleri 3-D hücre toplam oluşumu ile sonuçlanarak, fizyolojik koşullar altında büyüyebilir olanak sağlayan bir döner hücre kültürü sistemi tarif edilmektedir. Agregalar ekran üretilen<em&gt; In vivo</em&gt;-Gibi özellikleri, geleneksel kültür modellerinde gözlenen ve bilimsel araştırmalar bir çok için daha doğru bir organotipik model sistem olarak hizmet edemez.

Kültüre ve Duvar Gemi Biyoreaktör Döner Uygulamaları 3D Epitel Hücre Modelleri Türetilmiş

Vücuttaki hücreler ve dokular, mimarilerini, hücreler arası etkileşimlerini ve genel işlevlerini etkileyen çevresel koşullara maruz kalırlar. ...

Bu geleneksel olmayan protokol, insan epitel hücrelerini insan in vivo dokusunu taklit eden organotipik 3D modeller şeklinde kültüre etmek için kolay ve sağlam bir sistem sunmaktadır. İlk olarak, epitel hücreleri bir doku kültürü flaskında konfluen bir monokatman haline gelene kadar kültüre edilip hasat edilir ve ardından STLV biyoreaktöründe mikro taşıyıcı boncuklarla birleştirilir; düşük akışkan kayma kuvvetine sahip sabit bir serbest düşüş ortamı oluşturmak için platform üzerindeki STLV döndürülerek hücrelerin boncuklara tutunması ve büyümesi sağlanır; böylece 96 saat sonra ve yaklaşık olarak takip eden her gün hücresel agregatlar oluşur.Agregat oluşumu sonrası hücresel metabolizmayı karşılamak için SDLV içindeki medyayı yenileyin; agregat oluşumu ve hücresel diferansiyasyon tamamlandıktan sonra, gelişimsel ilerlemeyi izlemek için haftalık olarak ışık mikroskobu ile görüntü örnekleri alın. Agregatları, sonraki deneysel analizler ve assayler için ekim yapın. Nihayetinde bu sistem, çok sayıda bilimsel araştırma için in vivo benzeri organotipik model sistemler oluşturabilir.Bu tekniğin geleneksel hücre kültürü gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, epitelyal hücrelerin farklılaşarak doku benzeri agregatlar şeklinde polarize olması, dolayısıyla morfolojik ve fonksiyonel olarak gerçek insan dokusuna benzer davranışlar sergilemesidir. Bu 3D model sistemi; epitelyal hücre biyolojisi, konak-patojen etkileşimleri ve sisteme dahil edilebilecek hücre tipleri arasındaki karmaşık etkileşimler hakkında daha derinlemesine bilgi sağlar. Dr. Andrea Radkey.Laboratuvarımdaki bir doktora sonrası araştırmacı, yavaş dönen lateral damar biyoreaktörünü detoksifiye etmek için uygulanacak bu prosedürü şimdi gösterecektir. Açık portları luer kapaklarla kapatın. STLV'yi %95 etanol ile doldurun ve 24 saat boyunca dengeye gelmesini bekleyin.Etanolü uzaklaştırın, ardından sterilize edilmiş distile su ile doldurun ve satıcı tarafından sağlanan araçları kullanarak 24 saat boyunca inkübe edin; tüm vidaları gevşetin ve STLV'den merkez tıpası çıkarın. Bunları bir sterilizasyon poşetine yerleştirin ve 110 °C'de 20 dakika boyunca otoklavlayın. STLV'yi yeniden monte edin ve steriliteyi sağlamak için detoksifikasyon işlemini tekrarlayın.Ardından, STLV vidalarını sıkın. Her porta önceden sterilize edilmiş tek yönlü stopkokları takın. Şimdi, 10 mililitrelik ve beş mililitrelik lure lock şırıngaların pistonlarını çıkarın ve pistonları ambalajlarının içinde muhafaza edin.Sterilliği korumak için şırıngaları durdurma musluğuna vidalayın. STLV tamamen dolana ve beş mililitrelik şırınga dolmaya başlayana kadar 10 mililitrelik şırıngaya DPBS ekleyin. Ardından, steril pistonları her bir şırıngaya geri yerleştirin ve şırınga pistonlarını sırayla iterek biyoreaktördeki tüm kalıntı kabarcıkları giderin.Muslukları kapatın ve STLV'yi döner dikey platforma takın. 50 milliliter'lik konik bir tüpte sızıntıları izlemek için en az 24 saat boyunca döndürün. 250 milligrams cyto dex microcar boncuklarına 15 milliliters DPBS ekleyin ve soğuduktan sonra otoklavlayın.Epitelyal hücreler için kültür medyası ile üç kez DPBS yıkama işlemini gerçekleştirin. Boncukları yeniden süspand etmek için tüpü çalkalayın. Ardından boncukları 15 milliliters kültür medyasında yeniden süspande edin.Öncelikle 1x10⁷ epitel hücresini doku kültürü flasklarında monolayer olarak kültüre edin. Hücreleri hasat edin, sayılarını belirleyin ve tripan mavisi dışlama boyaması ile hücresel canlılığı saptayın. Hücreleri hazırlanan boncuklara ekleyin.Tüm hücrelerin aktarıldığından emin olmak için konik tüpü durulayın. Ardından, DPBS'yi ve şırıngaları STLV'den çıkarın. Ayrıca, 10 mililitrelik bir serolojik pipet kullanarak merkez porttaki tıpayı çıkarın.Epitel hücre boncuk süspansiyonunu STLV'ye yükleyin. Tüm hücreleri ve boncukları aktarmak için konik tüpü bir kez durulayın. Ardından merkez port tıpasını yerine takın.Ardından, beş mililitrelik ve 10 mililitrelik bir şırınganın pistonlarını çıkarın ve pistonları ambalajlarının içinde muhafaza edin. Steriliteyi korumak için, şırınganın inç girişlerini açık musluklarla kapatın. STLV'yi besiyeri ile doldurun.Pistonları değiştirin ve musluğu kapatın. Şimdi, yeni ekilmiş STLV kültürünü 37 °C sıcaklıktaki bir inkübatörde 30 dakika boyunca rotasyon olmadan dengeleyin. STLV'yi inkübatörden çıkardıktan sonra musluğu açın.Pistonlar yardımıyla tüm kabarcıkları uzaklaştırın ve musluğu kapatın. Ardından, STLV'yi inkübatör içerisinde 20 RPM hızında sürekli rotasyona ayarlayın. 96 ila 120 saat sonra, şırıngaları çıkarıp boncukların ve hücrelerin çökmesine izin vermek için STLV'nin her iki musluğunu açarak medyumu değiştirin.Çökelme gerçekleştikten sonra, besleme protokolünü uygulamak için şırıngaları kullanarak yan porttan medyanın yaklaşık %75'ini boşaltın. Hücresel metabolizmaya bağlı olarak, gerektiğinde medyayı yenilemeye devam edin. Ayrıca, agregatların büyümesini ve canlılığını her beş ila yedi günde bir izleyin.Agregatların parçalanmasını önlemek için, ucundan yaklaşık iki santimetre kesilmiş ve sterilize edilmiş 1000 microliter pipet ucu kullanın. Merkez porttan dikkatlice 200 microliters agregat alın ve iki adet 1.5 milliliter tüpe paylaştırın. Alikotlardan birini hücresel canlılığın izlenmesi için kullanın. Hücreleri boncuklardan ayırdıktan sonra, canlılığı tripan mavisi dışlama yöntemi ile değerlendirin.Hücresel agregatların görüntülenmesi için boyama. İkinci 1.5 mL'lik Agregat alikotuna 0.5 ile 1 mL arası besiyeri ekleyin ve kesilmiş bir 1000 µL pipet ucu kullanarak küçük bir Petri kabına aktarın. Agregatları görüntüleyin.Bazı epitel hücre modelleri için ters ışık mikroskobu kullanırken, agregatlar hasat edilmeden yaklaşık bir hafta önce, kültür havalandırmasını artırmak amacıyla agregatların tek kullanımlık bir kaba aktarılması gereklidir. Analiz için, şırıngaları STLV'den çıkarın ve yan porttan medyanın yaklaşık %50'sini boşaltın. Merkez tıpaları çıkarın ve tüm içeriği merkezi porttan 50 mililitrelik konik bir tüpe dikkatlice boşaltın.STLV'yi beş mililitre besiyeri ile iki kez durulayın ve durulama sıvılarını toplanan agregatlar ile birleştirin. Ardından, agregatları 50 mililitrelik konik tüpten Harv'a aktarın. Bir hafta sonra, olası analiz formatları, deneyler ve analizler için agregatları dikkatlice toplayın; diferansiye insan epitelyal agregatları STLV biyoreaktör sisteminde büyütülmüştür.SEM ve TEM görüntüleri, STLV'de 39 gün boyunca büyütülen insan vajina hücrelerinden elde edilmiştir. 3D agregatların dokulara benzer ultrastrüktürel özellikler, mikro kıvrımlar, invajinasyonlar, hücre içi salgı vezikülleri ve apikal yüzeydeki mikrovillüsler sergilediğine dikkat ediniz; 3D vajina hücrelerinin konfokal immünofloresan mikroskopi görüntüleri, müsin ile epitel hücrelerine ve terminal diferansiyasyona özgü belirteçlerin ekspresyonunu göstermektedir. Fizyolojik olarak ilgili fenotipler, aynı zamanda bileşiklerin toksisitesini değerlendirmek için mükemmel bir platform görevi görmektedir.Hücre canlılığını, metabolizmasını veya proliferasyonunu ölçmek için yaygın olarak kullanılan bir yöntem olan MTT testi, çeşitli kimyasalların ve bileşiklerin toksisitesini ölçmek için kullanılabilir. Alternatif olarak, test bileşikleri ile yapılan işlem sonrası toksisite, trypan blue dışlama yöntemi ile ölçülebilir. Bu örnekte, NONOXINOL nine uygulaması sonrası vajinal agregatlar, servikal X eksplan modellerine benzer bir toksisite yanıtı göstermiş, ancak monokatmanlara kıyasla farklı bir profil sergilemiştir.3D agregatlar fonksiyonel olarak yanıt verebilirler; örneğin, toll benzeri reseptörler tarafından tanınan mikroplardan türetilen moleküllerle stimülasyon yapıldığında tepki verirler. Agregatlar yanıt vererek IL six proteini ve progesteron reseptörünün transkript ekspresyonu dahil olmak üzere pro-inflamatuar sitokinler salgılar. Vajinal hücrelerde hormon stimülasyonuna yanıt veren bir reseptör de gözlemlenebilir.3B agregatlar sadece patojen ve hormon moleküllerine yanıt verme kapasitesine sahip olmakla kalmaz, aynı zamanda fonksiyonel olarak tip iki herpes simpleks virüsü enfeksiyonunu da destekleyebilirler. HSV iki ile enfekte edilmiş 3B vajinal agregatların konfokal mikroskopi görüntüsü enfeksiyonu kanıtlamaktadır. Agregatlar içindeki bireysel hücrelerin fiziksel ve fonksiyonel özellikleri akış sitometrisi ile de nicelendirilebilir; örneğin, bireysel vajinal hücrelerde MUC1 yüzey ekspresyonunu ölçmek için bir akış sitometrisi analizi uygulanabilir.3D vajinal agregatlar, gelişimlerini tamamladıktan sonra yüzeylerinde, monoton tabakalara kıyasla daha düşük bir yüzdeyle muck one eksprese ettiler. Bu teknik, doku biyolojisi ve bulaşıcı hastalıklar alanındaki araştırmacıların yapıyı ve uyarılara verilen fizyolojik yanıtları incelemesine olanak sağlamıştır. Bu organotipik modelleri kullanarak, insan biyolojisini daha iyi taklit edebiliyoruz.

culturing-applications-rotating-wall-vessel-bioreactor-derived-3d

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Ağırlıklı olarak tek tabaka kültürler - sık sık farklılaştırılmış birincil hücreler, nispeten kısa bir ömrü vardı ve kültürü içinde de farklılaşmış dezavantaj muzdarip geçmişte birçok in vitro kültür sistemleri. Bunun bir sonucu olarak, organ-spesifik fonksiyonları en hızlı kaybedildi. Böylece, bu hücrelerin in vitro için daha iyi koşullar çoğalmak için, değişiklikler ve uyarlamalar geleneksel monolayer kültürlere edilmiştir.

Röportaj: Kök Hücre Araştırma ve Yüzey-Modifiye 3D-Yapı iskeleleri Biyoreaktörler

Geleneksel iki boyutlu hücre kültür teknikleri genellikle farklılaşma belirteçleri, sitokinler ve büyüme faktörleri açısından değişmiş özellikleri. Extravillous trofoblast hücre hattı ile burada gösterildiği gibi dönen hücre kültür sistemi Üç boyutlu hücre kültürü (RCC), bu faktörlerin çoğunun ifade yeniden kurar.

İnsan Hücre Kültürü Döner Hücre Kültür Sistemleri: Bir Model Olarak İnsan trofoblast Hücreleri

Kültürdeki hücrelerin işlevsel davranışı, 3 boyutlu bir kültür ortamında 16-21 benzeri in vivo olarak daha fazla kültür iyileştirilebilir. Bu el yazması, in vivo benzeri memeli doku kültürü için bir içi boş fiber biyoreaktör sisteminin kurulum ve çalışması açıklanmaktadır.

için içi boş fiber Biyoreaktörler<em&gt; İn Vivo</em&gt; Benzeri Memeli Doku Kültürü

Bir üç boyutlu (3-D) bir ortamda büyüyen hücreler 2-B ortamları (örneğin, şişeler ya da bulaşıklar için) hücre ekimi üzerinde belirgin bir iyileşme göstermektedir. Burada dönen duvar-damar (RWV) Biyoreaktörlerde tarafından sağlanan mikrogravite altında kültüre insan bağırsak mukozasının bir çok hücreli 3-D Organotipik modelinin gelişimini betimler.

İnsan bağırsak mukozasının bir Multisellüler Üç boyutlu Organotipik Modelinin Geliştirilmesi yerçekimi Yetiştirilen

Bu yazıda, üç boyutlu (3D) tek tip diziler ekstraselüler matriks çevrili tanımlanan geometri epitel doku mühendisi yumuşak litografi tabanlı teknik anlatılmaktadır. Bu yöntem, hücre tipleri ve deneysel bağlamlarda çeşitli için uygun olan ve aynı çoğaltır yüksek verimli tarama sağlar.

Ekstraselüler Matrix içinde Gömülü Mühendislik Üç boyutlu Epitel Dokular

Protokol bir küresel perfusable vasküler ağlarda mühendisi açıklar. Küresel'ın çevresindeki microenvironment angiogenez teşvik ve küresel bir mikrosıvısal cihazın mikro bağlanmak için planlanmaktadır. Yöntemi uzun zamandır beklenen tekniktir üç boyutlu kültürlerde küresel perfüzyon sağlar.

Perfusable vasküler ağ özellikli bir doku içinde bir mikrosıvısal aygıt

Bu protokolün amacı, ilaç tarama çalışmaları için kullanılabilecek 3D meme endotelyal ortak kültür modellerini hızla oluşturmak için önceden oluşturulmuş endotel ağlarına çok hücreli sferoidler olarak meme epitel hücrelerini doğrudan biyobaskılamaktır.

3D Çok Hücreli Meme Sferoidlerinin Endotel Ağlarına Doğrudan Biyobaskı

Bu protokol, mikrogravitedeki ameloblast benzeri hücrelerin kültürü ve 3D büyümesi için, uzun ve polarize şekillerini ve emayeye özgü protein ekspresyonunu korumak için bir yöntem sunar. Periodontal mühendislik yapıları kültürü ve mikro yerçekiminde akciğer organları için kültür koşulları da tanımlanmıştır.

Mikro Yerçekiminde Diş ve Solunum Hücre ve Organlarının Yayılımı

Bu yazıda, yeni tasarlanmış bir 3D baskılı ek, bir ko-kültür modeli olarak sunulmuş ve endotel hücreleri ile keratinositler arasındaki parakrin hücreler arası iletişimin incelenmesiyle doğrulanmıştır.

Basit 2D ve 3D hücre kültürlerini mümkün kılmak için tasarlanmış yenilikçi bir 3D baskılı ek parça

Burada, nanofibröz membran bazlı iki katmanlı sistemde fibroblastlarla kültürlenen epitel hücrelerinin membrana nasıl stabil bir şekilde yapışabileceğini ve zar üzerinde büyüyebileceğini gösteriyoruz.

Nanolifli membranlar kullanılarak epitel hücrelerinin üç boyutlu bir kokültür modülünün kurulması

Keşfedin dönen biyoreaktör sistemi kullanarak insan epitel hücrelerinden 3D organotipik kültür modelleri oluşturma yöntemini. Bu teknik, in vivo benzeri doku davranışlarını araştırmak için güçlü bir platform sunar.

Kültüre ve Duvar Gemi Biyoreaktör Döner Uygulamaları 3D Epitel Hücre Modelleri Türetilmiş

Daha fazla video keşfet