Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Merhaba, benim adım Lar Turner. Almanya'daki Ingham Üniversitesi Nöroloji Bölümü'nde doktora sonrası araştırmacıyım. Merhaba, benim adım Lin Gunda.

Ben bir tıp öğrencisiyim ve tez çalışmamı bu laboratuvarda yürütüyorum. Bugün size, atrofik lateral sklerozun bir fare modeli olan SODG 93'ün klinik testlerini göstereceğiz. Ayrıca, bir rotor testi olarak adlandırılan motor fonksiyon testini ve immünolojik analiz gerçekleştirmek amacıyla tel tutma testi ile başka bir motor fonksiyon testini uygulamalı olarak göstereceğiz.

a s farelerin fonksiyonel testlerinin ardından, spinal kordun, STIC sinirinin ve gastrok kasının çıkarılmasını içeren gerekli bir prosedür gerçekleştirilir. Bu cerrahi prosedürleri detaylı bir şekilde göstermek ve sonunda bazı örnek immünolojik bulguları sunmak istiyoruz. Peki, şimdi öncelikle klinik testlerle başlayalım.

Bu, klinik sınıflandırma sistemimizde kas titremesi veya parezi gibi herhangi bir klinik semptom göstermeyen, serbestçe hareket eden vahşi tip bir MOE'dir. Bu, dört puan olarak değerlendirilir. Bu ise transgenik bir ALS moe'dir.

Hastalığın erken evresinde, hayvanın sağ arka ekstremitesinde SCORE üç E olarak sınıflandırılan şiddetli bir tremor görülür. Şiddetli yürüyüş anomalileri, bu hayvanın skor iki olarak sınıflandırılmasına neden olur. En az bir arka ekstremitenin sürüklenmesi, klinik skor bir olarak sınıflandırılır. Hanging wire testinde (asma tel testi), kaba kas gücü değerlendirilir. Her bir fare özel yapım bir tel üzerine yerleştirilir ve samanla kaplı altlığın üzerinde dikkatle ters çevrilir.

En az 180 saniye boyunca art arda üç kez eğitim yapıldıktan sonra, düşme gecikme süresi ölçülür. Her fareye, ters çevrilmiş kapağa maksimum 180 saniye boyunca tutunması için üç denemeye kadar hak tanınır ve en uzun süre kaydedilir. Sağ taraftaki beyaz tel tipi fare ile karşılaştırıldığında, soldaki plak transgenik fare oldukça zayıftır ve maksimum süreye ulaşmadan kapaktan düşer.

Rotor çubuğu düzeneği; motor koordinasyon, denge ve motor öğrenme yeteneğini ölçmek için kullanılır. İyi bir performans, yüksek düzeyde duyusal motor koordinasyon gerektirir. Düzenek; bilgisayar kontrollü, motor tahrikli dönen bir milden ve beş fare için beş şeritten oluşur.

Farelerin hataları, alttaki plastik plaka üzerine uygulanan basınçla otomatik olarak tespit edilir. Dakikada 15 tur olan sabit bir hızda, en az 180 saniye boyunca art arda üç kez eğitim yapıldıktan sonra, hayvanın dönen rot üzerinde kalabildiği süre ölçülür. Her hayvan üç denemeye tabi tutulur ve düşmeden geçen en uzun süre kaydedilir.

Sol taraftaki sağlıklı vahşi tip fare, rotor rod üzerinde zorluk çekmeden koşmaktadır. Buna karşılık, sağ taraftaki transgenik a s fare, rotor rod üzerinde kalmakta bile ciddi sorunlar yaşamaktadır ve arkadan izlendiğinde bir süre sonra aşağı kaymaktadır. Sol retre farenin ciddi koşma zorluklarını görüyorsunuz.

Sağlıklı wire tap faresine kıyasla, rotor rod hızına ayak uyduramaz ve HIN ekstremiteleri ile yukarı doğru itiş yapamaz. Omuriliğin immünokimyasal analizini gerçekleştirmek için hayvanların sakrifiye edilmesi gerekmektedir. Hayvan deneylerinin uygun şekilde yürütülmesine yönelik yerel kılavuzlara her zaman kesinlikle uyulması çok önemlidir.

Omurga ve onu çevreleyen dokuların bu oldukça basitleştirilmiş genel görünümünde, temel anatomik yapılar tasvir edilmiştir. Hayvanı ventral tarafı üzerine yerleştireceğiz ve dorsal bölgedeki kasların hazırlığına başlayacağız. Kas dokusu çıkarıldıktan sonra, omuriliği çevreleyen omurgaya erişeceğiz.

Hayvan sakrifiye edilip paraformaldehit içeren bir solüsyonla perfüze edildikten sonra spinal kord çıkarılabilir. Hayvan, farenin sırt kısmını açığa çıkarmak amacıyla bir operasyon masasına yerleştirilir ve tüm ekstremiteler yanlardan sabitlenir. Tüy tabakasını düzleştirmek ve ardından gelecek cilt insizyonunu kolaylaştırmak için hayvan ıslatılır.

Bunun için keskin bir bistüri kullanılır. Deriyi her iki yöne doğru germeye dikkat edin. Kesimi kolaylaştırmak için bacak kası hazırlanmalıdır.

Deri kısımları da insize edilmelidir. Deri insizyonu tamamlandıktan sonra, deri nazikçe kenara çekilir. Cımbız yardımıyla bacak kasları ve siyatik sinir uzaklaştırıldıktan sonra, omuriliğe doğru yaklaşmaya devam edilir ve hayvan yeni bir operasyon masasına yerleştirilir.

Artık kranyum, boyun, kaslar ve spinal kolonu tanımlamak kolaydır. Tüm bu yapılar tanımlandıktan sonra bir sonraki adıma geçmek kolaylaşır. Boyun kaslarının ve nu ligamentin uzaklaştırılması gerekir.

Çok derin kesi yapmamaya ve omurgaya zarar vermemeye dikkat edin. Bir sonraki adımda, omurganın açığa çıkarılması için paravertebral kaslar tamamen temizlenir. Omurga sütununa erişebilmek için çeşitli eksizyonlar yapılması gerekmektedir.

Atlanto-oksipital eklem dahil olmak üzere, omurganın servikal bölgesinden başlıyoruz. Laminektomiyi gerçekleştirmek için, tüm vertebra çıkıntılarını vertebra gövdesinden uzaklaştırabilmek adına vertebral arkı kesmemiz gerekir. Daha önce açıklandığı üzere laminektomi, vertebral arkların kesilmesiyle başlar.

Ardından lamina çekilerek uzaklaştırılabilir. Daha fazla lamina çıkarılması gerektiği için omuriliğe zarar vermemeye tekrar dikkat edin. Açılı makas kullanmak ve her iki taraftaki birkaç vertebral arkı aynı anda kesmek oldukça faydalıdır.

Ardından, vertebral laminaları ve yakın çekimi tamamen çıkarmak için dorsal çıkıntılardan çekin. Makasın, spinal kanalın yan tarafında, en lateral kısma dikkatlice yerleştirilmesi gerektiğini göreceksiniz. Omurganın geri kalan lateral kısımları, spinal kordun daha sonra tamamen çıkarılmasını kolaylaştırmak için kaldırılmalıdır.

Omuriliğin anatomik işaretçileri, servikal ve lomber genişlemeler olarak adlandırılan bölgelerdir. Tüm omurilik ektomilerini tamamladıktan sonra, omuriliğin tüm ventral köklerini kestiğinizden ve onu meningeslerin dura mater tabakasından ayırdığınızdan emin olun. Ardından, servikal omurilik kesilir.

Kraniyal yönde çıkarılma işlemine tekrar başlanır. Bu dokuya zarar vermemek için spinal korda çok dikkatli dokununuz; çünkü bu durum, sonraki immünokimyasal analizlerde ciddi kısıtlamalara neden olabilir. Spinal kordun çıkarılmasına torasik seviyede devam edilir ve lomber kısma doğru ilerlenir.

Bu kez cauda equina'nın yanından tekrar kesilir. Artık onu tamamen serbest bırakabiliyoruz. Burada, omuriliğin RAL kolonundaki orijinal konumunun hemen yanına yerleştirildiğini görüyorsunuz.

Son olarak, örnek bir Paraform Hyde sabitleme çözeltisine yerleştirilir. Omurilik immünohistokimyasal analizi için klasik bir örnek olarak, omurilik ön boynuzundaki motor nöronları tanımlamak amacıyla kolin asetiltransferazı tanıyan bir antikor uygulayabilirsiniz. Burada, sağlıklı vahşi tip bir hayvanda çok sayıda motor nöron görülmektedir.

Buna karşılık, son evredeki transgenik bir ALS hayvanının ön boynuzunda çok daha az sayıda motor nöron görülür. Bu video makaleyi izleyerek, atrofik lateral sklerozun bir fare modeli olan SOD1 G93A'nın temel klinik muayenesini öğrenmiş olmalısınız.

Rotor testi ve asılı tel testi olmak üzere iki motor davranışsal test gösterilmiştir. Bu testler, temel motor fonksiyonları değerlendirmek için iyi bir olanak sunar. Uygulanmaları kolaydır, motor eksikliklerin tespitinde hassastırlar ve zaman açısından verimlidirler.

Bu videonun ana bölümü, omurilik hazırlama tekniğinin bir gösteriminden oluşmaktadır. Bu yöntem elbette diğer tüm fare hastalık modellerine uygulanabilir ve omurilikteki hastalık patolojisinin daha sonraki immünokimyasal analizleri için temel bir adımdır. İzlediğiniz için teşekkür ederiz.

Bu video makalesinin gelecekteki deneyleriniz için faydalı olacağını umuyoruz.