Name: Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: Öğrenin fare modelinde ALS için klinik test ve davranışsal analiz yöntemlerini. Rotor testi ve asma tel testi ile motor fonksiyon değerlendirmesi yapın. Omurilik preparasyonu tekniklerini keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

LT Üniversitesi Tıp Göttingen Forschungsförderungsprogramm gelen hibe desteği almıştır. PL ve MB Beyin (CMPB), Göttingen Moleküler Fizyoloji için DFG Araştırma Merkezi tarafından desteklendi. Yazarlar, ses ve video düzenleme ile yardım videografisi ve Birgit Liebau yardım için Dr Lars Tatenhorst teşekkür ederim.

Hayvanlar Jackson Laboratory (# 002.726) 1 den satın alınmıştır. Onlar klinik attı ve motor fonksiyon (rotarod testi) ve kas gücü (tel deneyi asılı) bir teste tabi tutulmaktadır. Tüm bu testleri ve hayvanların daha sonra öldürülmesi omurilik hazırlamak amacıyla hayvan deneyleri bir şekilde yürütülmesi için Yerel yönergelere çok yakın uygun olarak yapılmıştır. 1. Klinik Puan Apart vücut ağırlığı fareler için değerlendirme aşağıdaki 4 nokta skorlama sistemi 2 ile motor defisit belirtileri açısından incelenir: 4 puan: Normal (motor disfonksiyon bulgusu) 3 puan: kuyruk tarafından askıya zaman arka bacak titreme belirgindir 2 puan: yürüyüş anormallikleri mevcut 1 puan: en az bir arka bacak sürükleyerek 0 puan: simetrikfelç, kendisinin sağ yeteneksizliği ve maksimum vücut ağırlığının% 20 kaybı, bu durumda, hayvanlarda hemen ötenazi ve deney sona erdirilir 2. Motor Fonksiyon Testleri ve Kas Gücü Tel Hanging Bu test, kas gücü 3, 4 değerlendirmek için kullanılmıştır. Tüm hayvanlar en az bir veya iki gün rotarod testinden sonra bu testi yapın. Her fare 0.8 cm aralıklarla özel yapılmış tel kapak yerleştirilir ve dikkatli tepetaklak olur, bir saman üstünde 60 cm alt kaplı. En az 180 s art arda üç kez eğitim aldıktan sonra düşmeye gecikme ölçülür. Her fare, 180 s maksimum ve en uzun süre kaydedilir için ters kapak üzerinde tutmak için üç deneme verilir. Rotarod Testi 3, 4 öğrenme ölçmek için kullanılmıştır. İyi bir performans sensorimotor koordinasyonu yüksek derecede gerektirir. Makine test hayvan için Distraktif uyaranlara önlemek için sakin ve rahatsız edici olmayan bir ortamda yer almalıdır. Bu beş fareler için bir bilgisayar kontrollü motorlu dönen milli ve beş şerit oluşur. Farelerin Falls altındaki bir plastik levha üzerine basınç ile otomatik olarak tespit edilir. 15 rpm bir hayvan dönen çubuk kalabilecekleri süreyi sabit bir hızda en az 180 s art arda üç kez eğitim ölçülür sonra. Her hayvan düşüyor kaydedilir olmadan üç denemeler ve uzun gecikme uğrar. Motor koordinasyonu açısından önemli farklılıklar çoğunluğu bu süre içinde tespit edilir, çünkü 180 s zaman kesme süresi olarak seçilmiştir. 3. Omurilik Hazırlık <ol class="lalpha"><li> Hayvanlar Yerel yönergelere uygun olarak CO 2 insuflasyon tarafından öldürüldü ve hemen% 4 paraformaldehit çözümü takip PBS çözeltisi ile transkardiyal perfüze edilir. </li><li> Kurban fare spinal kord hazırlamak için, bir farenin arka tarafı açığa çıkarmak için hayvanın bir işlem tablosu üzerine yerleştirilir ve dört ayaklarının tarafında sabitlenir. </li><li> % 70 etanol çözeltisi ile kısa bir yıkama diseksiyon sitesi temizler ve saç kat düzleştirir. </li><li> Sonra cildin orta hat keskin bir bisturi ile insize edilir. Cilt her iki taraf için gerilir kesme kolaylaştırmak için. Bacak kasları hazırlanacak olursa, onların deri de insize lazım. </li><li> Cilt insizyonu tamamlandıktan sonra, vücudun alttaki fasyaya maruz cımbız ile kenara çekilir. </li><li> Boyun ve ense ligament kas ca kaldırılması gerekir ve vardırrefully hazırlanır. Derin ve lezyon omuriliğe kesilirken dikkat edin. Omuz kaslarının daha iyi omurga ortaya koymak için çıkarılabilir. </li><li> Sonra paravertebral kas tamamını omurga kaldırılır. </li><li> Omurga çok laminektomileri yapılması gerekir açmak üzere. Bir atlanto oksipital eklem yerinde üst kranial kısmından başlamalıdır. </li><li> Bu üst iki ekstremite fiksasyon kaldırmak ve ilk vertebra laminektomi gerçekleştirmek için daha iyi yapabilmek için boyun yayılmacılık en kolay yoldur. Bunlar maruz servikal spinal kord dokunmadan çekti edilir. </li><li> Daha çok omurun açılı ilk makasla her iki tarafında vertebra kemerler transecting ve sonra dorsal işlemleri üzerinde çekme ile kaldırılır. Vertebra Kalan yan kısımlarında omurilik sonra tümüyle kaldırılmasını kolaylaştırmak için çıkarılmalıdır. </li><li> Lomber spina bir anatomik dönüm noktasıl kordonu da spinal kord mevcuttur kabarma olup. </li><li> Tüm omurilik laminektomi bitirdikten sonra, aynı zamanda tüm ventral kökleri transeksiyonu ve menenjlerin duramater gelen spinal kord serbest olduğundan emin olun. </li><li> Daha sonra servikal spinal kord kranialine kesilmiş ve omurilik kaldırmak başlatın. </li><li> Son olarak omuriliğe de tamamen serbest olması distal kauda-equina kesilir. </li><li> Sonuçta, omurilik gecede postfixating çözüm (örneğin% 4 paraformaldehit) yerleştirilir ve daha fazla işlenebilir. Biz genellikle immünohistolojik analiz hazırlamak için omurilik cryosection. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Omurilik hazırlama tekniği bu video makalenin odak temsil eder. Daha sonra doku kesit ve sonuçta spina ile immünohistolojik analizi için gerekli bir ön koşuldurl kablosu bölümler. Bir sonuç bir örnek olarak, bir wild tip bir fare lumbar spinal kord (wt) ön boynuzu bölge ve bir SOD G93A transgen (Tg) ve bir ayırma işlemlerine tabi tutmak immunohistokimyasal fare gösterilmiştir. Motor nöronlar, bir primer, anti-ChAT antikor ve bir ikincil Cy3 antikoru ile sonradan flüoresan etiketleme ile tespit edilebilir. Buna ek olarak, DAPI (4,6-diamidino-2-fenilindol) ile bir karşı-Nükleer leke (Şekil 1) yapılmıştır. <img src="/files/ftp_upload/3936/3936fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Anti-ChAT antikor (kırmızı) ve wild tip (ağırlık), fare lomber spinal kord ön boynuz (solda) ve bir DAPI (mavi) ile hücresel çekirdekleri karşı leke ile motonöronlar ve İmmuno görselleştirmek Floresan fotomikrografı Bir SOD G93A transgenik (tg) (sağda) 130 gün yaşındayken fare. Ölçek çubuğu: 40 mikron. Ve immünohistokimyasal analiziSOD G93A farelerin bu makalenin ana kapsamında değildir bu transgenik fareler karakterize edildiği orijinal yayın ve diğer referans 1, 5, 6 yönelik tedavi yaklaşımları incelemek daha yeni olanlarla danışın. Tedavi edici etkileri açıkça tanımlanmış immünohistolojik düzeyde ayırt edilir ise kantitatif değerlendirme algoritmaları stereolojik bir yazılım (örneğin 7) tarafından desteklenen uygulanan edilmelidir.

<ol><li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2C+Zn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Weydt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+strategies+for+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping strategies for mutant mice.</a> Neuron. 57 (6), 809-818 (2008).</li>
<li>Miana-Mena, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+methods+to+characterize+the+G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph.+Lateral+Scler.+Other+Motor+Neuron+Disord%22%5BJournal%5D)">Optimal methods to characterize the G93A mouse model of ALS.</a> Amyotroph. Lateral Scler. Other Motor Neuron Disord. 6 (1), 55-62 (2005).</li>
<li>Zhong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+therapy+slows+ALS-like+disease+in+mice+by+transcriptionally+inhibiting+SOD1+in+motor+neurons+and+microglia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Activated protein C therapy slows ALS-like disease in mice by transcriptionally inhibiting SOD1 in motor neurons and microglia cells.</a> J. Clin. Invest. 119 (11), 3437-3449 (2009).</li>
<li>Pitzer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte-colony+stimulating+factor+improves+outcome+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Granulocyte-colony stimulating factor improves outcome in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain. 131 (Pt. 12), 3335-3347 (2008).</li>
<li>Gowing, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+proliferating+microglia+does+not+affect+motor+neuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+caused+by+mutant+superoxide+dismutase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ablation of proliferating microglia does not affect motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis caused by mutant superoxide dismutase.</a> J. Neurosci. 28 (41), 10234-10244 (2008).</li>
<li>Scott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Turner, B. J., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenics%2C+toxicity+and+therapeutics+in+rodent+models+of+mutant+SOD1-mediated+familial+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Transgenics, toxicity and therapeutics in rodent models of mutant SOD1-mediated familial ALS.</a> Prog Neurobiol. 85 (1), 94-134 (2008).</li>
<li>Corse, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+testing+of+neuroprotective+neurotrophic+factors+in+a+model+of+chronic+motor+neuron+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Preclinical testing of neuroprotective neurotrophic factors in a model of chronic motor neuron degeneration.</a> Neurobiol Dis. 6 (5), 335-346 (1999).</li>
<li>Knippenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+behavioural+tests+in+a+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Significance of behavioural tests in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Behav Brain Res. 213 (1), 82-87 (2010).</li>
<li>Burgess, R. W., Cox, G. A., Seburn, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+disease+models+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular disease models and analysis.</a> Methods Mol. Biol. 602, 347-393 (2010).</li>
<li>Hayworth, C. R., Gonzalez-Lima, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-symptomatic+detection+of+chronic+motor+deficits+and+genotype+prediction+in+congenic+B6.SOD1%28G93A%29+ALS+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pre-symptomatic detection of chronic motor deficits and genotype prediction in congenic B6.SOD1(G93A) ALS mouse model.</a> Neuroscience. 164 (3), 975-985 (2009).</li>
<li>Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+preclinical+animal+research+in+ALS%2FMND%3A+A+consensus+meeting%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Guidelines for preclinical animal research in ALS/MND: A consensus meeting.</a> Amyotroph Lateral Scler. 11 (1-2), 38-45 (2010).</li>
<li>Boillee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+and+progression+in+inherited+ALS+determined+by+motor+neurons+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia.</a> Science. 5778 (3), 1389-1392 (2006).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

SOD1 (G93A) genetik fare modelinde insan Amyotrofik lateral skleroz 8 karşılaştırılabilir ilerleyici motor nöron kaybı, hastalığın klinik seyrini incelemek için değerli bir hayvan modelidir. Farklı tedavi paradigmalarının çeşitli bu modelin içinde değerlendirilerek daha sonra insan klinik çalışmalarda 8-10 test için bir temel temsil edilmiştir. Bu farelerde deneysel bir tedavi çalışmasında önemli farklılıklar tespit edebilmek için, en az 24 çöp eşleştirilmiş cinsiyet dengeli aynı genetik kökenli fa...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Üretici </td><td> Sipariş Bilgileri </td></tr><tr><td> Davranışsal test </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fareler için Rota-Rod </td><td> Ugo Basile, Comerio, İtalya </td><td> # 47600 </td></tr><tr><td> Tel cihazı Hanging </td><td> Ismarlama </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> Omurilik Hazırlık </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ameliyat Masası Çalışma lambası Koruyucu eldivenler </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tarafına açılı &quot;Iris&quot; Makas, </td><td> Güzel Bilim Araçlar, Heidelberg, Almanya </td><td> 14063-09 </td></tr><tr><td> Cohan-Vannas Bahar Makas, düz </td><td> Güzel Bilim Araçlar, Heidelberg, Almanya </td><td> 15000-10 </td&gt; </tr><tr><td> Mikro forseps </td><td> Hammacher, Solingen, Almanya </td><td> HWC 111-10 </td></tr><tr><td> Neşter &quot;präzisa plus&quot; </td><td> Dahlhausen, Köln, Almanya </td><td> 11.000.00.510, ŞEKİL 10 </td></tr></tbody></table>

amyotrofik lateral skleroz için fare modeli (als) klinik test ve omurilik kaldırma

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Amyotrofik lateral skleroz (ALS) motonöronlar ilerleyici dejenerasyon ile sonuçlanan ölümcül bir nörodejeneratif hastalıktır. Başlangıçlı Tepe sporadik hastalık ve ailesel hastalık için 50 yıl 60 yıl civarındadır. Ilerici seyri nedeniyle, hastaların% 50 semptom başlangıcından itibaren 30 ay içinde ölür. Bu hastalığın tedavisi için yeni bir seçenek değerlendirmek üzere, ALS genetik fare modelleri gibi SOD1 (G93A) mutasyonu olarak SOD geni insan ailevi mutasyonlar, esas oluşturulan edilmiştir. Modelinde değerlendirilmesi gerekir en önemli husus, genel sağkalım, klinik seyir ve motor fonksiyon vardır. Burada, klinik değerlendirme göstermek, iki davranışsal motor testleri ile iletim göstermek ve tüm parametreler için kantitatif skorlama sistemleri sağlamaktadır. ALS fare modelinin kapsamlı bir analizi genellikle spinal kord bir immunohistokimyasal inceleme gerektirdiğinden, biz bunu uygulayarak ayrıntılı olarak hazırlanması göstermekrsal laminektomi yöntemi. Örnek histolojik bulgular gösterilmiştir. ALS fare modeli üzerinde çalışmalar tasvir muayene yöntemlerinin kapsamlı bir uygulama araştırmacının güvenilir sonra insan klinik araştırmalar için bir temel sağlayabilir gelecekteki tedavi seçenekleri test sağlayacaktır.

Amiyotrofik lateral skleroz (ALS) için bir fare modelinde klinik ve davranışsal incelenmiştir. Beraberindeki immünohistolojik analizi için bir önkoşul olarak omurilik hazırlanmasında detaylı bir şekilde anlatılır.

Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Amyotrofik lateral skleroz (ALS), motonöronların progresif dejenerasyonu ile sonuçlanan fatal bir nörodejeneratif bozukluktur. Başlangıç sıklığının zirvesi 60 civarındadır...

Merhaba, benim adım Lar Turner. Almanya'daki Ingham Üniversitesi Nöroloji Bölümü'nde doktora sonrası araştırmacıyım. Merhaba, benim adım Lin Gunda.Tıp fakültesi öğrencisiyim ve tez çalışmamı bu laboratuvarda yürütüyorum. Bugün size atrofik lateral sklerozun bir fare modeli olan SODG 93'ün klinik testlerini göstereceğiz. Ayrıca, motor fonksiyon testini sözde rotor testiyle ve ek olarak, immünolojik analiz gerçekleştirmek amacıyla asılı tel kavrama ile bir başka motor fonksiyon testini göstereceğiz.a s farelerin fonksiyonel testleri tamamlandıktan sonra, gerekli bir prosedür spinal kordun, STIC sinirinin ve gastroc kasının çıkarılmasını içerir. Bu cerrahi prosedürleri ayrıntılı olarak göstermek ve sonunda bazı örnek immünolojik bulguları sunmak istiyoruz. Tamam, ancak şimdi önce klinik testlerle başlayalım.Bu, klinik sınıflandırma sistemimizde kas titremesi veya parezi gibi herhangi bir klinik belirti göstermeyen, serbestçe hareket eden vahşi tip bir MOE'dir. Bu, skor dört olurdu. Bu ise transgenik bir ALS moe'dir.Hastalığın erken evresinde, hayvanın sağ arka ekstremitesinde SCORE üç E olarak sınıflandırılan şiddetli bir tremor görülür. Şiddetli yürüyüş anomalileri, bu hayvanın skor iki olarak sınıflandırılmasına neden olur. En az bir arka ekstremitenin sürüklenmesi, klinik skor bir olarak sınıflandırılır. Asılı tel testinde, kaba kas gücü değerlendirilir. Her fare özel yapım bir tel üzerine yerleştirilir ve saman kaplı butonun üzerinde dikkatlice ters çevrilir.En az 180 saniyelik üç ardışık eğitimden sonra, düşme süresi ölçülür. Her fareye, ters çevrilmiş kapağa maksimum 180 saniye boyunca tutunması için üç denemeye kadar hak verilir ve en uzun süre kaydedilir. Sağ taraftaki beyaz tel tipi fare ile karşılaştırıldığında, soldaki plak transgenik fare oldukça zayıftır ve maksimum süreye ulaşmadan kapaktan düşer.Rotor rod düzeneği; motor koordinasyon, denge ve motor öğrenme yeteneğini ölçmek için kullanılır. İyi bir performans, yüksek düzeyde duyusal motor koordinasyon gerektirir. Düzenek, bilgisayar kontrollü, motor tahrikli dönen bir milden ve beş fare için beş kulvardan oluşur.Farelerin hataları, alt plastik plaka üzerindeki basınca göre otomatik olarak tespit edilir. Dakikada 15 tur sabit hızda, en az 180 saniye boyunca üç kez üst üste eğitim yapıldıktan sonra, hayvanın dönen rot üzerinde kalabildiği süre ölçülür. Her hayvan üç denemeye tabi tutulur ve düşmeden geçirilen en uzun süre kaydedilir.Sol taraftaki sağlıklı vahşi tip fare, rotor rod üzerinde zorluk çekmeden koşmaktadır. Buna karşılık, sağ taraftaki transgenik a s fare, rotor rod üzerinde kalmakta dahi ciddi sorunlar yaşamaktadır ve arkadan izlendiğinde bir süre sonra üzerinden kaymaktadır. Sol retre farenin ciddi koşma güçlüklerini görüyorsunuz.Sağlıklı wire tap faresine kıyasla, rotor rod hızına ayak uyduramamakta ve HIN ekstremiteleriyle yukarı doğru itiş yapamamaktadır. Omuriliğin immünokimyasal analizini gerçekleştirmek için hayvanların sakrifiye edilmesi gerekmektedir. Hayvan deneylerinin uygun şekilde yürütülmesine yönelik yerel kılavuzlara her zaman kesinlikle uyulması çok önemlidir.Bu bağlamda, omurganın ve onu çevreleyen dokuların bu oldukça basitleştirilmiş genel görünümünde, ana anatomik yapılar tasvir edilmiştir. Hayvanı ventral tarafı üzerine yerleştireceğiz ve dorsal bölgedeki kasların hazırlığına başlayacağız. Kas dokusu uzaklaştırıldıktan sonra, omuriliği çevreleyen omurgaya erişeceğiz.Hayvan sakrifiye edilip paraformaldehit içeren bir çözeltiyle perfüze edildikten sonra omurilik çıkarılabilir. Hayvan bir operasyon masasına yerleştirilir ve farenin sırt kısmını açığa çıkarmak için tüm ekstremiteler yanlardan sabitlenir. Tüy tabakasını düzleştirmek ve ardından gelecek cilt insizyonunu kolaylaştırmak için hayvan ıslatılır.Bunun için keskin bir skalpel kullanılır. Deriyi her iki yöne doğru germeye dikkat edin. Kesme işlemini kolaylaştırmak için bacak kası hazırlanmalıdır.Derilerinin de insize edilmesi gerekir. Deri insizyonu tamamlandıktan sonra, deri nazikçe kenara çekilir. Bir cımbız yardımıyla bacak kasları ve siyatik sinir uzaklaştırıldıktan sonra, spinal korda yaklaşmaya devam edilir ve hayvan yeni bir operasyon masasına yerleştirilir.Artık kranium boyun, kaslar ve omurga kolayca tanımlanabilir. Tüm bu yapılar tanımlandıktan sonra, bir sonraki adıma geçmek kolaydır. Boyun kaslarının ve nu ligamanının uzaklaştırılması gerekir.Omurga sütununa zarar vermemek için çok derin kesik atmamaya dikkat edin. Bir sonraki adımda, omurga sütununu açığa çıkarmak için paravertebral kaslar tamamen temizlenir. Omurga sütununa erişebilmek için birkaç eksizyon yapılması gerekir.Atlanto-oksipital eklem dahil olmak üzere omurganın servikal bölgesinden başlıyoruz. Laminektomi gerçekleştirmek için, tüm vertebral çıkıntıları vertebral gövdeden çıkarabilmek amacıyla vertebral arkı kesmemiz gerekir. Daha önce açıklandığı üzere laminektomi, vertebral arkların kesilmesiyle başlar.Ardından lamina çekilip uzaklaştırılabilir. Birçok daha fazla lamina çıkarılması gerektiği için omuriliğe zarar vermemeye tekrar dikkat edin. Açılı makaslar kullanmak ve her iki taraftaki birkaç vertebral arkı aynı anda kesmek oldukça faydalıdır.Ardından, vertebral laminaları tamamen çıkarmak için dorsal çıkıntılardan çekin ve yakın çekime bakın. Makasın, spinal kanalın yan tarafında en lateral bölgeden dikkatlice yerleştirilmesi gerektiğini göreceksiniz. Spinal kordun daha sonra tamamen çıkarılmasını kolaylaştırmak için omurganın geri kalan lateral kısımları çıkarılmalıdır.Omuriliğin anatomik nirengi noktaları, servikal ve lumbar genişlemeler olarak adlandırılan bölgelerdir. Tüm omurilik eksizyonlarını tamamladıktan sonra, omuriliğin tüm ventral köklerini kestiğinizden ve onu meningeslerin dura materinden ayırdığınızdan emin olun. Ardından, servikal omurilik kesilir.Kranyal bölgeden başlanarak çıkarma işlemi yeniden gerçekleştirilir. Bu dokuya zarar vermemek için omuriliğe çok dikkatli dokunun, çünkü bu durum sonraki immünokimyasal analizler için ciddi kısıtlamalara yol açabilir. Omuriliğin çıkarılmasına torasik seviyede devam edilir ve lomber bölgeye doğru ilerlenir.Bu kez korda equina'nın yan tarafı boyunca tekrar kesilir. Artık onu tamamen serbest bırakabiliyoruz. Burada, spinal kordun RAL kolonundaki orijinal konumunun hemen yanına yerleştirildiğini görüyorsunuz.Son aşamada, örnek bir Paraform Hyde tespit çözeltisine yerleştirilir. Omurilik immünohistokimyasal analizleri için klasik bir örnek olarak, omurilik anterior boynuzundaki motor nöronları tanımlamak amacıyla kolin asetil transferazı tanıyan bir antikor uygulayabilirsiniz. Burada, sağlıklı bir yabani tip hayvandaki çok sayıda motor nöronu görüyorsunuz.Buna karşılık, son evredeki transgenik a LS hayvanının ön boynuzda çok daha az sayıda motor nöronu olduğu görülmektedir. Bu video makaleyi izleyerek, atrofik lateral sklerozun bir fare modeli olan SODG 93'ün temel klinik muayenesini öğrenmiş olmalısınız.Rotor testi ve asılı tel testi olmak üzere iki motor davranış testi gösterilmiştir. Bu testler, temel motor fonksiyonları değerlendirmek için iyi bir imkan sunar. Uygulanmaları kolaydır, motor defisitlerin tespitinde hassastırlar ve zaman açısından verimlidirler.Bu videonun ana bölümü, spinal kord hazırlama tekniğinin gösteriminden oluşmaktadır. Bu yöntem elbette diğer tüm fare hastalık modellerine uygulanabilir ve spinal korddaki hastalık patolojisinin daha sonra yapılacak immünokimyasal analizleri için temel bir adımdır. İzlediğiniz için teşekkürler.Bu video makalesinin gelecekteki deneyleriniz için yardımcı olacağını umuyoruz.

clinical-testing-spinal-cord-removal-mouse-model-for-amyotrophic

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Sinir habercisi nakli, korunması ve / veya spinal kord yaralanması (SCI) ve motor nöron bozukluğu, amiyotrofik lateraller skleroz (ALS) kaybettim / işlevsiz servikal frenik motor nöronların yerini gelecek vaat eden bir strateji. Biz, ALS ve SKY kemirgen modellerinde servikal omurilik ventral boynuz hücre teslimat için bir protokol sağlar.

Amyotrophic Lateral Sclerosis ve Travmatik Spinal Kord Yaralanması Servikal Ventral Horn Hedefleme intraspinal Hücre Transplantasyonu

Kaynak:Pourshafie, N., et al. Kemirgenlerde nöromüsküler hastalıkları tedavi etmek için rekombinant adeno ile ilişkili virüs serotip 9 kullanılarak mikroRNA'nın sistemik dağıtımı. J. Vis. Uzm. (2018).Bu videoda, spinal ve bulbar kas atrofisi veya SBMA'dan etkilenen bir fare, terapötik mikroRNA'yı kodlayan bir plazmid taşıyan rekombinant AAV (Adeno ilişkili vektörler) vektörlerinin kuyruk veni enjeksiyonuna tabi tutulur. Vektör, mutant AR (Androjen reseptörü)-mRNA'ya (haberci ribonükleik asit)...

Spinal ve Bulbar Kas Atrofisi Fare Modelinde Rekombinant Adeno İlişkili Vektörlerin Enjekte Edilmesi

Bu video protokolü, amyotrofik lateral sklerozun transgenik fare modelindeki nöromüsküler eksiklikleri değerlendirmek için hassas, güvenilir ve hızlı bir yöntemi tanımlar.

ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

Bu makalede, yenidoğan faresinde tekrarlanabilir omurilik kompresyon yaralanması (SCI) oluşturmak için bir yöntem açıklanmaktadır. Model, spontan fonksiyonel iyileşmenin altında yatan adaptif plastisite mekanizmalarını incelemek için avantajlı bir platform sağlar.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Burada, β-amiloidoz ve tauopatinin transgenik fare modellerinde bilişsel ve fonksiyonel motor davranışlarda in vivo etkinlik gösteren bileşiklerin taranması için kullanılabilen aşamalı, davranışsal tarama yaklaşımı anlatılmaktadır. Bu yöntemler, bileşikleri kısa süreli ve hafızadaki işlerde etkinlik açısından taramak için optimize edilmiştir.

Amiloid-β ve Tau Nöropatolojisinin Transgenik Fare Modellerinde Spontan Dalgalanmanın Değerlendirilmesi, Yeni Nesne Tanıma ve Limb Klapması

Sinir iletim ölçümü ateş fare modelleri değerlendirmek için yararlı bir araçtır ama sık sık öyle yalnızca hindlimbs siyatik sinir uyarmak için geçerlidir. Burada, bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) vivo brakiyal pleksus tarafından innervated fare forelimb kaslarda ölçmek için bir teknik açıklayın.

Vivo Bileşik kas aksiyon potansiyeli Motor nöron hastalığı, fare modellerinde ön ayakları üzerinden elektrofizyolojik ölçümü

Bu protokol, fare modelinde stabil traneksiyon tipi omurilik yaralanmasıinin indüksiyonu için hassas bir laminektominin nasıl oluşturulacak larını, omurilik yaralanması araştırmaları için en az ikincil hasarın nasıl yaratılabildiğini açıklamaktadır.

Farelerde Tam Traneksiyon Tipi Spinal Kord Yaralanması İndüksiyonu

Burada sunulan, fareler için değişen derecelerde omurilik yaralanması kontüzyon modellerini doğru bir şekilde üretebilen yeni bir otomatik omurilik yaralanması kontüzyon cihazıdır.

Farelerde Kontüsif Omurilik Yaralanması Modeli için Otomatik Çarpma Tertibatı

Mevcut protokol, tümör hücrelerinin intervertebral boşluğa enjekte edilmesiyle tekrarlanabilir bir murin spinal kord gliomu modelinin geliştirilmesini tanımlamakta ve araştırma ve terapötik geliştirme için daha etkili ve daha az invaziv bir yaklaşım sunmaktadır.

Tümör Hücrelerinin Farelerin Omuriliğine Cerrahi Nakli

Poliglutamin spinoserebellar ataksiler, CAG genişlemelerinin agregasyona yatkın proteinler üretmesiyle oluşur. Bu protokol, vektör üretimi, stereotaksik teslimat ve inklüzyonlar ile nöronal belirteç kaybının analizini tanımlar; böylece nörodejeneratif hastalıklar için mekanizmaları araştırmak ve hedefe yönelik tedavileri değerlendirmek için kontrollü bir platform sağlar.

Poliglutamin spinoserebellar ataksiyaların preklinik modeli olarak lentiviral indüksiyonlu striatal patoloji

Bu makale, yetişkin farelerde CNS hedefli tedaviler için intratekal teslimat yöntemlerini detaylandırır; protokol hassasiyetine odaklanır ve tekrar enjeksiyonu mümkün kılar. Makale, antisens oligonukleotidlerin SOD1-ALS model farelerinde mutant SOD1 ekspresyonunu azalttığı bir doğrulama çalışmasından elde edilen bulguları içeriyor ve bu yaklaşımın nörodejeneratif hastalıklar üzerine preklinik araştırmalarda faydasını desteklemektedir.

İnsan SOD1-G93A ALS farelerinde hassas CNS hedefleme ve öngörücü etkinlik için SOD1-ASO'ların bel intratekal enjeksiyonu

Öğrenin fare modelinde ALS için klinik test ve davranışsal analiz yöntemlerini. Rotor testi ve asma tel testi ile motor fonksiyon değerlendirmesi yapın. Omurilik preparasyonu tekniklerini keşfedin.

Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Daha fazla video keşfet