Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Amiyotrofik lateral skleroz (ALS) için bir fare modelinde klinik ve davranışsal incelenmiştir. Beraberindeki immünohistolojik analizi için bir önkoşul olarak omurilik hazırlanmasında detaylı bir şekilde anlatılır.

Merhaba, benim adım Lar Turner. Almanya'daki Ingham Üniversitesi Nöroloji Bölümü'nde doktora sonrası araştırmacıyım. Merhaba, benim adım Lin Gunda.

Tıp öğrencisiyim ve tez çalışmalarımı bu laboratuvarda yapıyorum. Bugün size atrofik lateral sklerozun bir Moss modeli olan SODG 93'ün klinik testini göstereceğiz. Ayrıca, motor fonksiyon testini rotor testi olarak adlandırılan bir test ile ve ek olarak, bir immünolojik analiz yapmak için asılı Tel kavrama ile başka bir motor fonksiyon testi göstereceğiz.

Farelerin fonksiyonel testinden sonra, gerekli bir prosedür omuriliğin, STIC sinirinin ve gastrok kasının çıkarılmasından oluşur. Bu çalışmalarımızda bu cerrahi işlemlerin detaylı bir şekilde gösterilmesi ve sonunda örnek bir immünolojik bulgu sunulması istenmektedir. Tamam, ama şimdi önce klinik testlerle başlayalım.

Bu, klinik sınıflandırma sistemimizde kas titremesi veya Parsis gibi herhangi bir klinik semptom göstermeyen, serbest hareket eden vahşi tip bir MOE'dir. Bu dört puan olurdu. Bu bir transgenik A LS moe'dur.

Erken bir hastalık evresinde, sağ hin ekstremitesinde şiddetli bir titreme sergiler ve bu da onu SKOR üç E olarak sınıflandırır. En az bir arka uzvun sürüklenmesi, Asılı tel testinde klinik skor bir olarak sınıflandırılır, ham kas kaburga kuvveti değerlendirilir. Her fare, CustomMade bir kabloya yerleştirilir ve saman kaplı düğmenin üzerinde dikkatli bir şekilde ters çevrilir.

En az 180 saniyelik art arda üç kez Antrenmandan sonra, düşmelere kadar olan gecikme süresi ölçüldü. Her fareye, ters çevrilmiş kapağı en fazla 180 saniye boyunca tutması için en fazla üç deneme verilir ve en uzun süre kaydedilir Sağ taraftaki beyaz tel tipi fareye kıyasla. Soldaki plak transgenik fare çok zayıftır ve Maksimum'a ulaşmadan önce kapaktan düşer.

Rotor çubuk aparatı, motor koordinasyonu, denge ve motor öğrenme yeteneğini ölçmek için kullanılır. İyi bir performans, yüksek bir duyusal motor koordinasyonu emri gerektirir. Bilgisayar kontrollü, motor tahrikli döner bir iş mili ve beş m için beş şeritten oluşur.

Farelerin arızaları, alt plastik plaka üzerindeki basınçla otomatik olarak tespit edilir. Dakikada 15 tur sabit hızda en az 180 saniyelik art arda üç kez antrenman yaptıktan sonra, bir hayvanın dönen çürüme üzerinde kalabileceği süre ölçülür. Her hayvan üç denemeye tabi tutulur ve düşmeden en uzun gecikme süresi kaydedilir.

Sol taraftaki sağlıklı yabani tip mos, rotor çubuğu üzerinde zorluk çekmeden çalışıyor. Buna karşılık, sağ taraftaki transgenik as mo, rotor kolu üzerinde bile kalmak için ciddi problemler yaşamakta ve arkadan gözlemlenen bir süre sonra kaymaktadır. Sol retre farenin ciddi koşu zorluklarını görüyorsunuz.

Sağlıklı tel musluk faresi ile karşılaştırıldığında, rotor çubuğu hızına ayak uyduramaz ve HIN uzuvları ile yukarı doğru itemez. Omuriliğin immünokimyasal analizini yapmak için hayvanların kurban edilmesi gerekir. Hayvan deneylerinin uygun şekilde yürütülmesi için yerel yönergeleri her zaman sıkı bir şekilde takip etmek çok önemlidir.

Bu bağlamda, vertebral kolon ve çevresindeki dokulara çok basitleştirilmiş bir genel bakışta, ana anatomik yapılar tasvir edilmiştir. Hayvanı ventral tarafına yerleştireceğiz ve kasları sırt torbasından hazırlamaya başlayacağız. Kas dokusu çıkarıldıktan sonra omuriliği saran omur kolonuna erişeceğiz.

Hayvan sakrifiye edildikten ve paraform yüksekliği içeren bir çözelti ile perfüze edildikten sonra, omurilik çıkarılabilir. Hayvan bir ameliyat masasına yerleştirilir ve tüm uzuvlar yanlara sabitlenir ve farenin arka tarafını açığa çıkaracak şekilde emredilir. Hayvan, kıl tabakasını düzleştirmek ve sonraki deri kesisini kolaylaştırmak için ıslatılır.

Bunun için keskin bir neşter kullanılır. Cildi her iki tarafa da germeye dikkat edin. Bacak kasının kesilmesini kolaylaştırmak için hazırlanmalıdır.

Derilerinin de kesilmesi gerekir. Cilt kesisi tamamlandıktan sonra nazikçe kenara çekilir. Bacak kaslarını ve siyatik siniri çıkardıktan sonra bir cımbızla omuriliğe yaklaşmaya devam ediyoruz ve hayvanı yeni bir ameliyat masasına yerleştiriyoruz.

Artık kafatası boynunu, kaslarını ve omurgasını tanımlamak kolaydır. Tüm bu yapıları tanımladıktan sonra bir sonraki adıma geçmek kolaydır. Boyun kasları ve nu ligament çıkarılmalıdır.

Çok derine inmemeye ve vertebral kolonu yönlendirmemeye dikkat edin. Bir sonraki adımda, omur kolonu ortaya çıkarmak için paravertebral kaslar tamamen çıkarılır. Omurgaya erişmek için birkaç ektomi yapılması gerekir.

Atlantik oksipital eklem de dahil olmak üzere vertebral kolonun servikal kısmından başlıyoruz. Laminektomiyi gerçekleştirmek için, tüm omur süreçlerini omur gövdesinden çıkarabilmek için omur kemerini kesmemiz gerekir. Daha önce açıklandığı gibi, laminektomi vertebral arkların kesilmesi ile başlar.

Sonra laina çekilebilir. Yine, omuriliği lezyona uğratmamaya dikkat edin, çünkü daha fazla ral çıkarılması gerekir. Açılı makas kullanmak ve aynı anda her iki taraftan birkaç omur kemeri yerleştirmek oldukça yararlıdır.

Ardından, vertebral laminayı ve yakın çekimi tamamen çıkarmak için dorsal işlemleri çekin. Makas çiftinin omurilik kanalının yan tarafına en yanal olarak dikkatlice yerleştirilmesi gerektiğini görüyorsunuz. Omuriliğin daha sonra tamamen çıkarılmasını kolaylaştırmak için vertebral kolonun kalan lateral kısımlarının çıkarılması gerekir.

Omuriliğin anatomik bir dönüm noktası, servikal ve lomber esencia olarak adlandırılır. Tüm omuriliğin ektomilerini bitirdikten sonra, omuriliğin tüm ventral köklerini de kestiğinizden ve meninkslerin durgunluğundan serbest bıraktığınızdan emin olun. Daha sonra, servikal omurilik kesilir.

Kraniyal olarak çıkarılmasına tekrar başlanır. Bu dokuya zarar vermemek için omuriliğe çok dikkatli bir şekilde dokunun, çünkü bu daha sonraki immünokimyasal analizler için ciddi sınırlamalara neden olabilir. Omuriliğin çıkarılması işlemi torasik seviyede devam ettirilir ve bel kısmına kadar devam edilir.

Sonunda tekrar kesildi, bu sefer kordon equina'nın yanında. Şimdi onu tamamen serbest bırakabiliyoruz. Burada, RAL sütunundaki orijinal konumunun hemen yanına yerleştirilmiş omuriliği görüyorsunuz.

Son olarak, bir Paraform Hyde sabitleme sonrası Çözeltisine yerleştirilir. Omurilik immünohistokimyasal analizi için klasik bir örnek olarak, omurilik ön boynuzundaki motor nöronları tanımlamak için kolin, asetil transferazı tanıyan bir antikor uygulayabilirsiniz. Burada sağlıklı, vahşi tip bir hayvanda çok sayıda motor nöron görüyorsunuz.

Buna karşılık, son aşamadaki transgenik bir LS hayvanı, Ön boynuzda çok daha az sayıda motor nöron sergiler. Bu video makalesini izlerken, SODG 93'ün temel klinik muayenesini öğrenmiş olmalısınız. Atrofik lateral sklerozun bir fare modeli.

Rotor testi ve asılı tel testi olmak üzere iki motor davranış testi gösterilmiştir. Temel motor fonksiyonu değerlendirmek için iyi bir olanak sağlarlar. Performansları kolaydır, motor açığın tespitinde hassastırlar ve zaman açısından verimlidirler.

Bu videonun ana kısmı, omuriliğin hazırlanma tekniğinin bir gösteriminden oluşmaktadır. Bu elbette diğer herhangi bir fare hastalığı modeline uygulanabilir ve omurilikteki hastalık patolojisinin daha sonraki immünokimyasal analizi için önemli bir adımdır. İzlediğiniz için teşekkürler.

Bu video makalesinin gelecekteki deneyleriniz için yardımcı olacağını umuyoruz.