Name: Bir Kök Hücre tabanlı Gen Terapisi Tümör Modeli olarak BLT Insanlaşmış Fare Kullanma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Keşfedin, insanlaşmış fare modellerinde kök hücre tabanlı gen terapisi ile tümör immünolojisini incelemeyi. Bu yöntem, mühendislik CD8 T hücrelerinin tümör reddini canlı PET görüntüleme ile izlemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz onların teknik yardım Alvin Welch ve Larry Pang teşekkür etmek istiyorum. CIRM Yeni Fakülte Ödülü RN2-00902-1; Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) ödülü P50 CA086306, Rejeneratif Tıp California Institute (CIRM) hibeler RC1-00149-1 ve RS1-00203-1 tarafından kısmen finanse edildi , Translasyonel Tıp Caltech-UCLA Ortak Merkezi, AIDS Araştırma için UCLA Merkezi&#39;nde (CFAR) NIH / NIAID AI028697, UCLA AIDS Enstitüsü, CIRM Araçlar ve Teknoloji Ödülü RT1-01126, ve UC Multicampus Araştırma Programı ve California Girişimleri Antiviral İlaç Keşif Merkezi (sayı MRPI-143226).

<ol><li>McCune, J. M., Namikawa, R., Kaneshima, H., Shultz, L. D., Lieberman, M., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+SCID-hu+mouse%3A+murine+model+for+the+analysis+of+human+hematolymphoid+differentiation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The SCID-hu mouse: murine model for the analysis of human hematolymphoid differentiation and function.</a> Science. 241 (4873), 1632-1639 (1988).</li>
<li>Bristol, G. C., Gao, L. Y., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+maintenance+of+SCID-hu+mice+for+HIV+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Preparation and maintenance of SCID-hu mice for HIV research.</a> Methods. 12 (4), 343-347 (1997).</li>
<li>Mosier, D. E., Gulizia, R. J., Baird, S. M., Wilson, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+a+functional+human+immune+system+to+mice+with+severe+combined+immunodeficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transfer of a functional human immune system to mice with severe combined immunodeficiency.</a> Nature. 335 (6187), 256-259 (1988).</li>
<li>Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Nat.+Med%22">Nat. Med</a>. Melkus, M. W., Estes, J. D., Padgett-Thomas, A., Gatlin, J., Denton, P. W., Othieno, F. A., Wege, A. K., Haase, A. T., Garcia, J. V. 12 (11), 1316-1322 (2006).</li>
<li>Denton, P. W., Estes, J. D., Sun, Z., Othieno, F. A., Wei, B. L., Wege, A. K., Powell, D. A., Payne, D., Haase, A. T., Garcia, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiretroviral+pre-exposure+prophylaxis+prevents+vaginal+transmission+of+HIV-1+in+humanized+BLT+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Antiretroviral pre-exposure prophylaxis prevents vaginal transmission of HIV-1 in humanized BLT mice.</a> PLoS Med. 5 (1), e16(2008).</li>
<li>Sun, Z., Denton, P. W., Estes, J. D., Othieno, F. A., Wei, B. L., Wege, A. K., Melkus, M. W., Padgett-Thomas, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrarectal+transmission%2C+systemic+infection%2C+and+CD4%2B+T+cell+depletion+in+humanized+mice+infected+with+HIV-1%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Intrarectal transmission, systemic infection, and CD4+ T cell depletion in humanized mice infected with HIV-1.</a> J. Exp. Med. 204 (4), 705-714 (2007).</li>
<li>Shimizu, S., Hong, P., Arumugam, B., Pokomo, L., Boyer, J., Koizumi, N., Kittipongdaja, P., Chen, A., Bristol, G., Galic, Z., Zack, J. A., Yang, O., Chen, I. S., Lee, B., An, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+short+hairpin+RNA+potently+down-regulates+CCR5+expression+in+systemic+lymphoid+organs+in+the+hu-BLT+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model.</a> Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).</li>
<li>V, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+HIV+Latency+in+Humanized+BLT+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Generation of HIV Latency in Humanized BLT Mice.</a> J. Virol. 86 (1), 630-634 (2012).</li>
<li>Vatakis, D. N., Koya, R. C., Nixon, C. C., Wei, L., Kim, S. G., Avancena, P., Bristol, G., Baltimore, D., Kohn, D. B., Ribas, A., Radu, C. G., Galic, Z., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antitumor+activity+from+antigen-specific+CD8+T+cells+generated+in+vivo+from+genetically+engineered+human+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Antitumor activity from antigen-specific CD8 T cells generated in vivo from genetically engineered human hematopoietic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108 (51), 1408-1416 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

In vivo PET görüntüleme ile birleştiğinde modifiye BLT humanize fare modelinde kronik insan hastalıkları incelemek için güçlü araçlardır. Bu sistem blt fare modeli ve HIV araştırma için sınırlı kapsamı dışındadır gelişmeler alır. Buna ek olarak, bunların klinik ortamda ulaşmadan önce çeşitli gen tedavi protokolleri gibi teşhis yöntemleri incelemek hangi bir büyük bir sistemdir. Fareler karşı primatlar kullanarak düşük maliyet ile birleştiğinde ikincisi bu bir çok yararlı bir model sağlar. <p class=...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td></td><td> A1049101 </td><td></td></tr><tr><td> Iscove sitesi </td><td></td><td> 12440061 </td><td></td></tr><tr><td> Fötal Buzağı Serumu </td><td></td><td> 16000085 </td><td></td></tr><tr><td> Kollajenaz tip IV </td><td> Sigma Aldrich </td><td> C5138 </td><td></td></tr><tr><td> Hyaluronidaz </td><td></td><td> H3506 </td><td></td></tr><tr><td> DNAse I </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10104159001 &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> Piptazo (Zosyn) </td><td> Pfizer </td><td></td><td> <a href="http://labeling.pfizer.com/showlabeling.aspx?id=416" target="_blank">Piperasilin / tazobaktam kombinasyonu</a> </td></tr><tr><td> Ficoll (Ficoll-Paque Plus) </td><td> GE Healthcare Yaşam Bilimleri </td><td> 17-1440-02 </td><td></td></tr><tr><td> MACS Tampon </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> Bak yorum </td><td> MACS tamponu: PBS,% 0.5 fetal bovin serumu ve 2 mM sitrat dekstroz formül-A ile desteklenmiş </td></tr><tr><td> CD34 microbead Kiti </td><td></td><td> 130-046-702 </td><td></td></tr><tr><td> LS Sütunlar </td><td></td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> Retronectin </td><td> Takara </td><td> T100A </td><td></td></tr><tr><td&gt; Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354263 </td><td></td></tr><tr><td> Isofluorane </td><td> Baxter </td><td></td><td> <a href="http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html" target="_blank">http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html</a> </td></tr><tr><td> Carprofen (Rimadyl) </td><td> Pfizer Hayvan Sağlığı </td><td></td><td> <a href="https://www.rimadyl.com/default.aspx" target="_blank">https://www.rimadyl.com/default.aspx</a> </td></tr></tbody></table>

bir kök hücre tabanlı gen terapisi tümör modeli olarak blt insanlaşmış fare kullanma

Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Fare gibi küçük hayvan modellerinde yaygın insan hastalığı araştırmak için ve yeni tedavi yaklaşımları geliştirmek için kullanılmıştır. Bilgi zenginliği bu çalışmalarda elde rağmen, fare bağışıklık yanı sıra insan immün yetmezlik virüsü (HIV) enfeksiyonu gibi viral hastalıkların türlerin özgüllüğü benzersiz özellikleri insanlaşmış fare modellerinin gelişmesine yol açmıştır. Önceki modellere C. B 17 SCID / SCID farelerde ve adlandırdığı insan fetal timus ve fetal karaciğer transplantasyonu kullanımı dahil senin / liv (SCID-hu) 1, 2 ya da insan periferik kan lökositleri evlatlık transferi (SCID-huPBL ) 3. Her iki model de ağırlıklı olarak HIV enfeksiyonu çalışma için kullanılmıştır. Bu modellerin her ikisi de temel sınırlamalar biri onları HIV hastalığı araştırmak için daha önemli fizyolojik modeli yapmak için çevre, insan bağışıklık hücrelerinin kararlı sulandırma eksikliği oldu. Bu amaçla, BLT uğultuanized fare modeli geliştirilmiştir. BLT kemik iliği / karaciğer / timus anlamına gelir. Bu modelde, 6 ila 8 hafta eski NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ (NSG), bağışıklığı baskılanmış farelerde ikinci bir insan hematopoetik kök hücre nakli 4 tarafından takip edilmesi sadece SCID-hu fare modelinde olduğu gibi senin / liv İmplantı alacak. Bu sistemin avantajı, çevre, insan bağışıklık sisteminin tam sulandırılması olduğunu. Bu model, HIV enfeksiyonu ve gecikme 5-8 incelemek için kullanılır olmuştur. Biz genetik hHSC 7, 9 otolog transduced enjeksiyonu takiben thy / liv implant oluşturmak için insan hematopoietik kök hücreleri (hHSC) modifiye kullanımı olan bu modelin değiştirilmiş bir versiyonunu yarattı. Bu yaklaşım, genetiği değiştirilmiş soy nesil sonuçlanır. Daha da önemlisi, bir melanom spesifik T hücre reseptörü eksprese eden fonksiyonel sitotoksik T hücreleri (CTL) oluşmasına neden incelemek için bu sistem uyarlanmış. Bu modelini kullanarak tümör regresyonu (9) belirlemek için canlı pozitron emisyon tomografi (PET) görüntüleme kullanarak bizim transgenik KVK işlevselliğini değerlendirmek başardık. Bu protokolün amacı bu transgenik farelerin üreten ve canlı PET kullanılarak in vivo etkinliği değerlendiren sürecini açıklamaktır. Biz insan doku ve lentiviral vektörler kullanın bu yana bir not olarak, tesislerimizde özel önlemler (BSL-2 +) ile Biyogüvenlik Seviyesi 2 (BSL-2) için CDC NIH yönergelere uygun. Buna ek olarak, NSG farelerde ciddi nedenle bağışıklığı baskılanmış, onların barınma ve bakım en yüksek sağlık standartlarına (uymalıdır <a href="http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html" target="_blank">http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html</a> ).

Transplantasyon işlemin bir akış şeması Şekil 1A &#39;de gösterilmiştir. Senin / liv implantın bir resmi Şekil 1B &#39;de gösterilmiştir. Timik doku normal olarak geliştirir ve insan CD4 ve CD8 T hücrelerinin bir fizyolojik bir dağılıma sahiptir. Sulandırıldıktan sonra, hayvanlar CD4, CD8, T hücreleri ve diğer immün hücre soyları, normal dağılım ile bir insan bağışıklık sistemi taşırlar. Tümör büyüklüğü ve canlı doku arasındaki fark Şekil 2 ...

Hümanize fareler kullanılarak tümör spesifik T hücrelerin oluşturulması ve karakterizasyonu burada tanımlanmıştır. İnsan timik doku ve genetiği değiştirilmiş insan hematopoietik kök hücrelerin bağışıklığı baskılanmış farelere nakledilmektedir. Anti-tümör bağışıklık yanıtı in vivo incelenmesi için izin veren bir mühendislik insan bağışıklık sisteminin sulandırma ile sonuçlanır.

Bir Kök Hücre tabanlı Gen Terapisi Tümör Modeli olarak BLT Insanlaşmış Fare Kullanma

Fareler gibi küçük hayvan modelleri, insan hastalıklarını incelemek ve yeni terapötik müdahaleler geliştirmek için yaygın olarak kullanılmıştır. Mevcut zenginliğe rağmen...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, mühendislik ürünü bir insan bağışıklık sistemi taşıyan fareler üretmektir. Bu işlem, öncelikle farenin cerrahiye hazırlanması ve ardından ikinci adımda trokarın bir timus parçasıyla doldurulmasıyla gerçekleştirilir. Matrigel, CD 34 negatif ve CD 34 pozitif transduksiyon yapılmış hücrelerle karıştırılır ve ardından bu karışım trokara eklenir.Sıradaki adımda, matrigel konstrüktleri böbrek kapsülü altına nakledilir. Nihayetinde, genetik olarak mühendisliği yapılmış CD8 T hücreleri tarafından hedef tümörlerin reddi, canlı PET görüntüleme ve fiziksel tümör ölçümleri ile izlenebilir. Bu tekniğin, tam nöron modelleri gibi mevcut diğer yöntemlere göre temel avantajı, bu yöntemin genetik olarak modifiye edilmiş insan kök hücre gelişiminin insan timusunda incelenmesine ve türetilen soyların ardından in vivo etkinlik testlerinin yapılmasına olanak tanımasıdır; prosedür laboratuvarlarımızdan üç teknisyen, Gregory Bristol, Bernard Levin ve Sean Kim tarafından gerçekleştirilecektir.Bu şematik diyagramda, mart-1 spesifik T hücreleri taşıyan kimerik farelerin üretimi için bu çalışmalarda kullanılan modifiye BLT modeli özetlenmiştir. Timus implantı, otolog fetal karac

using-blt-humanized-mouse-as-stem-cell-based-gene-therapy-tumor

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, işlevsel bir insan bağışıklık sistemine ve stabil bir aşılanmış insan benzeri bağırsak mikrobiyomuna sahip çift insanlaştırılmış kemik BLT (kemik iliği, karaciğer ve timus) faresi oluşturma yöntemini gösterir.

Çift İnsanlaştırılmış BLT (Kemik İliği, Karaciğer, Timus) Fare Modeli Oluşturma

Bu protokol, HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre tabanlı tasarlanmış bağışıklığa sahip insanlaştırılmış bir kemik iliği/karaciğer/timus fare modeli oluşturma yöntemlerini açıklar.

Insanlaşmış Fare Modelinde HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre Tabanlı Engineered Bağışıklık

Burada, olgunlaşmamış ve genişletilebilir insan hepatik kök hücrelerinin transplantasyonunu takiben Alb-toksin reseptörü aracılı hücre nakavt (TRECK)/SCID farelerinde üretilen yeni bir insanlaştırılmış fare karaciğeri modeli sunuyoruz.

İnsan Karaciğer Kök Hücreler kullanma Insanlaşmış Fare Karaciğer Üretimi

Kök hücreler tümör tropizminden ötürü beyin tümörlerini tedavi etmek için terapötik taşıyıcıları umut vericidir. Non-invaziv intranazal kök hücre iletimi kan beyin bariyerini atlar ve klinik çeviri için güçlü bir potansiyel gösterir. Bu makale, glioma fare modelinde intranazal kök hücre sunumunun temel ilkelerini özetlemektedir.

Bir Fare Modelinde Tedavi Edici Kök Hücrelerin Glioblastomaya İntranazal Dağıtımı

Biz fonksiyonel bir insan bağışıklık sistemi ve istikrarlı bir engrafted insan benzeri bağırsak mikrobiyomu özelliği çift insanlaşmış BLT-fareler üretmek için yeni bir yöntem açıklar. Bu protokol mikropsuz fareler veya gnotobiyotik tesisler için gerek kalmadan takip edilebilir.

A Double Humanized BLT-fareler Modeli Kararlı Bir İnsan-Benzeri Gut Mikrobiyom ve İnsan Bağışıklık Sistemi featuring

Bu protokol, immüno-onkoloji çalışmaları için insan bağışıklık sistemi (HIS) farelerinin neslini özetlemektedir. Bu modelde implante edilen insan tümörleri üzerinde insan immünoterapötiklerini test etmek için bu modelin kullanımındaki talimatlar ve hususlar, insan bağışıklık sisteminin tümöre tepkisini karakterize etmeye vurgu yapılarak sunulmuştur.

İnsan Tümörleri Taşıyan İnsanlaştırılmış Bir Fare Modelinde Kanser İmmünoterapötiklerinin Test Edilmesi

Klinik öncesi testler için yaygın hasta mutasyonları tarafından yönlendirilen immün yetmez, otokton bir tümör modelinin kullanılması, immünoterapötik testler için kritik öneme sahiptir. Bu protokol, yaygın hasta mutasyonlarını temsil eden plazmit DNA'nın elektroporasyona dayalı dağıtımını kullanarak beyin tümörü fare modelleri oluşturmak için bir yöntemi açıklar, böylece doğru, tekrarlanabilir ve tutarlı bir fare modeli sağlar.

Hasta Mutasyon İmzalarını Temsil Eden Plazmid DNA'nın Elektroporasyona Dayalı İletimi Kullanılarak Beyin Tümörlerinin İn Vivo Modellenmesi

Bu protokolün amacı, araştırmacılara intrakraniyal implantasyonlar için son derece tekrarlanabilir bir teknik sunmaktır.

Farelerde glioblastoma hasta kaynaklı ksenograft hücre hatlarının stereotaktik intrakranial implantasyonu

Üretimi için hızlı, basit ve maliyet-etkin bir protokol, CMV, İlan EBV enfeksiyonları yakalanma riski altında allojeneik hematopoietik kök hücre nakli (HSCT) alıcıları infüzyon için donör kaynaklı multivirus spesifik CTL (rCTL). Bu üretim sürecine GMP uyumlu ve T-hücre immünoterapi uzmanlaşmış merkezlerde ötesinde daha geniş bir şekilde uygulanmasını sağlamak olmalıdır.

Multivirus-spesifik T hücrelerinin üretilmesi Allojenik Hematopoetik Kök Hücre Nakli sonra Viral Enfeksiyonlar önleme / tedavi etmek için

Enfeksiyon süreci boyunca, önemli bir adım patojenlerin konak hücrelerine yapışma. Çoğu durumda bu yapışma adım akan sıvı tarafından üretilen mekanik stres varlığında oluşur. Biz kayma gerilmesi bakteriyel yapışma çalışmada önemli bir parametre olarak tanıtan bir tekniktir açıklar.

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

Keşfedin, insanlaşmış fare modellerinde kök hücre tabanlı gen terapisi ile tümör immünolojisini incelemeyi. Bu yöntem, mühendislik CD8 T hücrelerinin tümör reddini canlı PET görüntüleme ile izlemenizi sağlar.

Bir Kök Hücre tabanlı Gen Terapisi Tümör Modeli olarak BLT Insanlaşmış Fare Kullanma

Daha fazla video keşfet