Name: Üç boyutlu heterotipik In Vitro Modelleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Keşfedin üç boyutlu heterotipik kültür yöntemini, over kanseri gelişiminde stromal-epitel hücre etkileşimlerini incelemek için kullanılan bu teknik, erken evre tümör biyolojisini anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu araştırma Tıp Keck School, California, USA Üniversitesi ve University College London, İngiltere yapıldı. KL Sağlık hibe 5 U19 CA148112-02 Ulusal Enstitüsü tarafından finanse edilmektedir. BG Eve Temyiz jinekolojik onkoloji sadaka (İngiltere) bir proje hibe ile finanse edildi. UCLH / UCL&#39;de yürütülen çalışmaların bir kısmı kısmen Sağlık NIHR Biyomedikal Araştırma Merkezi finansman planının Bölümü fon oldu.

<ol><li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li>
<li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Statistics+registrations%3A+registrations+of+cancer+diagnosed+in+2008%22">Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008</a>. , England. (2011).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma%3A+insights+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases%3A+implications+for+biomarker+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232(2008).</li>
<li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer%3A+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li>
<li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length%2FDNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134(2011).</li>
<li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+%28TRAP%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li>
<li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li>
<li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li>
<li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li>
<li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li>
<li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+%28EOC%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li>
<li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases%3A+Biology+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li>
<li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li>
<li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li>
<li>Kurman, R. J., Shih, I. eM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Erken evre epitelyal over kanseri (EOC) biyolojisi tam anlaşılamamıştır. Belki de uzun yıllar bu alanda başlıca engellerden biri doku spesifik hastalığın kökeni ve EOC geliştirme mikroçevresinin rolünün önemi ve anlayış eksikliği olmuştur. Son birkaç yılda, EOC muhtemelen farklı alt tipi için farklı hücresel kökeni ile birden çok farklı histophathological alttiplere ile heterojen bir hastalık olduğu açıktır haline gelmiştir. Örneğin, mevcut veri yüksek dereceli seröz EOCs fallop tüpü salgı epitel hücreleri ve over yüzey...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Satıcı </td><td> Katalog Numarası </td></tr><tr><td> Hücre kültürü için uygun PolyHEMA, </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Moleküler biyoloji notu etanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Hücre kültürü için steril su </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Orta 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Hyclone fetal bovin serumu </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamisin </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amfoterisin B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-rutubet hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> % 0.25 tripsin-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Hücre süzgeç (40 veya 70 mikron) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-fibroblast yüzey protein antikor, klon 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-sitokeratin antikor (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybrene (hexadimethrine bromür) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomeraz PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> Telomer uzunluğu Assay TeloTAGGG </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Reaktifler ve Ekipmanları Bu çalışmada anılacaktır.

Üç boyutlu heterotipik<em&gt; in vitro</emyumurtalık kanseri başlatma ve İlerleme sırasında stromal-epitel etkileşimleri&gt; modelleme

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epitelyal over kanserleri (EOCs) Batı toplumlarında jinekolojik malignite ölüm önde gelen nedenidir. Cerrahi tedaviler ve geliştirilmiş platin bazlı kemoterapi ilerlemelere rağmen, fazla dört yıl 1,2 için EOC sağkalım oranları çok az bir gelişme olmuştur. Sahnelemeye Iken Ben tümörleri 5-yıllık sağkalım oranları&gt;% 85, evre III / IV hastalığı için sağkalım oranları &lt;% 40 vardır. Tümörler daha erken, daha tedavi edilebilir, aşamaları 3-5 tespit edildi Böylece, EOC için mortalite yüksek sıklığında önemli derecede azalma olabilir. Şu anda, erken evre hastalık gelişimi moleküler genetik ve biyolojik temeli tam anlaşılamamıştır. Daha spesifik olarak, küçük bir tümör başlangıcı sırasında mikroçevresinin rolü hakkında bilinir fakat EOCs (örneğin yaş ve parite) için bilinen risk faktörleri mikroçevresindeki EOCs erken oluşumunda önemli bir rol oynadığını düşündürmektedir. Bu nedenle, üç-boyutlu heterotipik modelleri geliştirilmiştirNormal yumurtalık hem de ve erken evre over kanserlerinin. Normal over için, eş-kültürlü, normal over yüzey epitel (kaybetmek) ve kültür bu hücrelerin ömrünü uzatmak için insan telomeraz holoenzyme (hTERT) ve katalitik alt birimi retrovrial transdüksiyon tarafından ölümsüzleştirdi Normal stromal fibroblast (INOF) hücreleri. Over epitel hücre transformasyonu, kaybetmek hücrelerde CMYC onkogen ekspresyonu, yine INOF hücreleri ile birlikte kültüre en erken aşamalarında modellemek için. Bu heterotipik modeller epitel hücrelerinin dönüşümü ve işgali üzerine yaşlanma ve yaşlanma etkilerini araştırmak için kullanıldı. İşte bu üç boyutlu model geliştirme metodolojik adımları açıklamak; Bu metodolojiler, normal yumurtalık ve yumurtalık kanseri dokuların gelişimi özgü değildir ve stromal ve epitelyal hücre etkileşimleri temel nerede diğer doku türleri incelemek için kullanılan olabilir doku bakım ve di yönüolgunun hastalığı gelişme.

Biz kurulması için metodolojiler tarif<em&gt; In vitro</em&gt; Over fibroblastlar ve normal over yüzey ya da yumurtalık kanseri epitel hücrelerinde oluşan heterotipik üç boyutlu modelleri. Biz over kanseri gelişimi sırasında meydana stromal-epitelyal etkileşimleri çalışmak için bu modellerin kullanımını tartışmak.

Üç boyutlu heterotipik<em&gt; In Vitro</emYumurtalık Kanseri Başlatma ve İlerleme sırasında Stromal-Epitel Etkileşimleri&gt; Modelleme

Epiteliyal over kanserleri (EOK'lar), Batı toplumlarında jinekolojik maligniteye bağlı ölümlerin önde gelen nedenidir. Cerrahi yöntemlerdeki ilerlemelere rağmen...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, erken evre yumurtalık kanseri gelişiminin üç boyutlu tipik modellerini oluşturmaktır. İlk olarak, primer, normal yumurtalık epitelyal ve fibroblast dokularından türetilmiş H turt ölümsüzleştirilmiş hücre hatları oluşturun. Ardından, yumurtalıkta mevcut olan in vivo mimariyi ve karmaşık hücre-hücre etkileşimlerini yeniden oluşturmak için epitelyal ve stromal hücre hatlarını üç boyutlu S sferoid modellerinde ko-kültürle; stromal-epitelyal etkileşimlerin moleküler özelliklerini incelemek amacıyla organoid kültürlerini tespit edin, boyayın ve spesifik markörlerin ekspresyonunu analiz edin.Elde edilen sonuçlar, 3D tipik modellerin stromal hücre bölmesindeki değişikliklerin, birlikte kültüre edilen epitelyal hücrelerin fenotipini nasıl etkileyebileceğini göstermektedir. Üç boyutlu tipik modeller; bu hastalığın kökenlerinin araştırılması ve stromal mikroçevrenin tümör başlatma ve gelişimindeki rolünün aydınlatılması gibi, yumurtalık kanseri araştırma alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniklerin uygulamaları, diğer 3D kültür yöntemlerine kıyasla hastalık teşhisi ve tedavisine kadar uzanmaktadır.Bu teknik, daha geniş bir hücre kü

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Burada anlatılan mezotel klirensi tayini floresan ile işaretlenmiş hücreler ve zaman atlamalı video mikroskopi görselleştirmek ve kantitatif yumurtalık kanseri çok hücreli sferoidler ve mezotel hücre tek katmanlarının etkileşimleri ölçmek için yararlanır. Bu test yumurtalık kanseri metastaz erken adımları modeller.

In vitro Mezotelyal Gümrükleme Assay o Yumurtalık Kanseri Metastaz Erken Adımlar modeller

Bu videoda, periton boşluğunun astarının in vitro üç boyutlu bir modelinin geliştirilmesini gösteriyoruz. Bu organotipik kültür, yumurtalık kanseri hücresi adezyonunu, invazyonunu ve proliferasyonunu araştırmaya yardımcı olabilir.

Periton Boşluğu Astarında Yumurtalık Kanseri Metastazının Modellenmesi: Periton Astarının İn Vitro 3D Modelini Oluşturmak İçin Bir Yöntem

Burada, kanser hücresi davranışının çok hücreli etkileşimlerini ve hücre dışı matrise bağlı modülasyonunu araştırmak için yararlı olan üç boyutlu ko-kültür için bir protokol sunuyoruz. Bu deneysel modelde, kanser hücreleri, insan kanseriyle ilişkili fibroblastlarla gömülü kollajen jelleri üzerinde kültürlenir.

Tümör-stromal Etkileşim için üç boyutlu Co-kültür Modeli

Burada, yumurtalık kanseri hücresi adezyonunu, invazyonunu ve proliferasyonunu araştırmak için bir araç olarak, birincil insan mezotelyal hücreleri ve hücre dışı matris ile katmanlanmış fibroblastlardan oluşan periton boşluğunun astarının üç boyutlu bir in vitro modelini oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

İnsan periton boşluğuna bir Organotipik Kültür Yumurtalık Kanseri Yaygınlaştırılması Erken Adımlar Modelleme

Oksijen ve besin sağlamak için bir perfüzyon biyoreaktör sistemi kullanılarak kültürlenebilen 3D meme kanseri vekilleri oluşturmak için bir yöntem gösteriyoruz. Büyümeyi takiben, vekiller sabitlenir ve ilgilenilen parametrelerin değerlendirilmesi için parafine işlenir. Böyle bir parametrenin, hücre yoğunluğunun değerlendirilmesi açıklanmaktadır.

Hazırlama ve Analizler<em&gt; İn Vitro</em&gt; Üç Boyutlu Meme Kanseri Suretler

fizyolojik olarak ilgili model yumurtalık tümör progresyonunu incelemek için, çok hücreli küreler simüle sıvı akışı altında microdevice kültürlenmiştir. Bu dinamik 3D modeli yumurtalık kanseri metastazı meydana hücresel ve mekanik bileşenleri ile intraperitoneal ortamı benzetilmiştir.

Dinamik 3D Periton microdevice Modelleme Yumurtalık Kanseri Multisellüler Sfero Davranış

Yumurtalık kanseri kök hücreleri (OKSK) kanserin başlamasından, nüksetmesinden, terapötik direncinden ve metastazından sorumludur. OCSC vasküler nişinin, OKSC'lerin kendi kendini yenilemesini teşvik ettiği ve kemorezistansa yol açtığı düşünülmektedir. Bu protokol, in vitro olarak tekrarlanabilir bir OCSC vasküler niş model oluşturmak için temel sağlar.

Üç Boyutlu Eş-Kültür Sistemi Kullanılarak Yumurtalık Kanseri Kök Benzeri Hücrelerin Anjiyogenetik Özelliklerinin Değerlendirilmesi, NICO-1

Bu protokol, kanser hücresi-omentum etkileşiminin üç boyutlu (3D) ex vivo modelinin kurulmasını açıklar. Model, yağ nişi içindeki pro-tümör mekanizmalarını aydınlatmak ve yeni tedavileri test etmek için bir platform sağlar.

İnsan Omentumu Kullanılarak Over Kanseri Periton Metastazının Ex Vivo Modeli

Kanser metastazını incelemek için heteroselüler karışmayı yakalayan 3D kanser modellerine kritik bir ihtiyaç vardır. Çalışmamız, invazyon ve hücresel mekansal dağılımları incelemek için kullanılabilecek iskele ve iskelesiz bir ortamda heteromultisellüler stromal-epitel oluşumunu sunmaktadır.

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Bu protokol, in vitro ve in vivo olarak yüksek dereceli seröz yumurtalık karsinomu (HGSOC) fare modellerinin geliştirilmesini detaylandırır. Murin fallop tüpü organoidlerinin türetilmesinden, insan HGSOC genetiğini özetlemek için genetik modifikasyonlarından ve in vivo tümörlerin gelişimi için sinjeneik farelerin yumurtalık bursasına sokulmasından.

Yüksek Dereceli Seröz Over Karsinomu Modellemesi için Fallop Tüpü Epitel Hücrelerinden Fare Kaynaklı Organoid Hatların Geliştirilmesi

Keşfedin üç boyutlu heterotipik kültür yöntemini, over kanseri gelişiminde stromal-epitel hücre etkileşimlerini incelemek için kullanılan bu teknik, erken evre tümör biyolojisini anlamaya yardımcı olur.

Üç boyutlu heterotipik

Daha fazla video keşfet