Name: Plazma Protein Koruma Kan Alma Kitleri Genomik DNA Ayıklama Pratik ve Yeni Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: Öğrenin, P 100 tüplerinden aynı anda plazma ve genomik DNA elde etme yöntemini. Bu yeni teknik, geleneksel yöntemlere göre daha az çaba ile daha kaliteli DNA sağlar ve klinik verimliliği artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Örnek Toplama <ol><li> Uygun bilgilendirilmiş onam bireylerin kan örnekleri toplayın. Her birey için, bir P100 tüp (BD Diagnostics, Franklin Lake, NY, ABD) içine kan 4 ila 5 ml çizin. Karşılaştırma amacıyla, aynı anda bir EDTA tüp kan toplamak. </li><li> BD P100 tüpler 15.8 mi püskürtülerek kurutulmuş K2EDTA ve pıhtılaşmayı önlemek ve plazma proteinleri stabilize proteaz inhibitörleri arasında, bir liyofilize edilmiş özel bir geniş spektrumlu bir kokteyl içerir. Bunlar, aynı zamanda, mekanik bir ayırıcı içerir. Işleme oluşana kadar tam kan toplanmasından sonra, bir gece için 60 dakika için oda sıcaklığında iki tüp tutun. </li><li> Oda sıcaklığında on beş dakika boyunca 2.500 g BD P100 tüpler santrifüj. Mikro santrifüj tüplerine mekanik ayırıcı üzerinde toplanır Plazma aktarın. </li><li> -80, Ayırıcı altında sıkıştırılmış kan içeren, P100 tüpler saklayın ° C DNA dahili başlamak için hazır olana kadarraction. </li></ol> P100 tüp kan (P100_DNA) itibaren 2.1 <ol><li> P100 tüpler -80 saklanır ° C plazma çekimi sonrası. 3-4 ay içinde, 5 dak (Şekil 1A) için bir su banyosu içinde 37 ° &#39;de dondurucu ve çözülme sıkıştırılmış kanı içeren P100 tüpü alır. Ayırıcı oturur kalan plazma çıkarın. Ayırıcı yukarıdaki P100 tüpleri (Şekil 1B) -% 17 sakaroz çözeltisini (yayınlanmamış veri evde test degrade çözelti) 2 ml ekleyin. 2500 g, 20 dakika boyunca oda sıcaklığında Santrifüj tüpleri, bu süreç tüpün üstüne mekanik ayırıcı iter ve buffy coat (Şekil 1C) gibi çözelti üç tabaka elde edilir. El ile sterilize kanca metal ataç (Şekil 1D) kullanarak ayırıcı ayıklayın. </li><li> Her bir tüp (Şekil 1D) gelen mekanik ayırıcı aldıktan sonra çıkarın ve Discard En iyi sukroz tabaka. Steril bir 15 ml konik bir tüp içine buffy coat (BC) katmanı temsil eden orta tabaka, aktarın. 3 ml buffy coat hacmi artırmak için fosfat tampon tuzu (PBS) ekleyin. Üreticinin tavsiye başı olarak Qiagen Puregene Kan Seti reaktifler kullanarak buffy coat DNA ayıklayın, 2.500 g santrifüj hızı (yerine 2.000 g) hariç. </li><li> Kırmızı kan hücreleri (RBC) lyse ve kaldırmak için, buffy coat 3 ml RBC parçalama 9 ml ekleyin. Her bir tüp birkaç kez ters çevirin ve inkübasyon esnasında zaman zaman Çeviren ile 10 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edin. 5 dakika boyunca 2.500 g her karışım aşağı Spin ve süpernatant atın. 15 saniye için hücre parçalama çözeltisi ve vorteks 3 ml Her bir tüp içinde kalan topak Treat. 1 proteini çökelme çözeltisi ilave edildi ve 15 saniye boyunca girdap ile lizat tedavi. </li><li> 5 dakika boyunca 2500 g&#39;de santrifüj ihtiva eden bir taze 15 ml konik bir tüp içine süpernatantı transfer% 100 izopropanol, 3 ml. 3 dakika 2500 g yeni tüpler 10 kez ve santrifüj ters. Süpernatant atılır ve% 70 etanol içinde 1 ml. Konik tüpler DNA pelet çıkarmak ve yıkamak için birkaç kez ters. 1 dakika 2.500 g santrifüj. Pelet, oda sıcaklığında 3 dakika (ters tüp yerleştirmek), kuru ve daha sonra 10 dakika karıştırıldı ve bir ön-etiketli 1.7 mL mikrotüp transfer etmek için 37 ° C&#39;de rehidrasyon solüsyonu, 250 ml ile DNA askıya izin verin. -80 Tüpler Mağaza ° C kullanana kadar. </li></ol> EDTA Ttube Kan (EDTA_DNA) itibaren 2.2 <ol><li> Immunohematology rutin test için tam kan K2 EDTA, 10.8 mg püskürtülerek kaplanır ve -80 ° C de saklanır vaccutainer plastik tüplerde toplanır Tüpler bir mekanik ayrıştırma içermediklerinden, DNA ekstraksiyon mekanik ayırıcı (2.1.1 ve 2.1.2), ilgili adımları içermez. </li><li> Kan depolama, DN 3 ila 4 ay içindeBir yalıçapkını Flex (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABD) ile elde edilir. Bu manyetik parçacık teknolojisine dayanan ve hücre parçalama / DNA bağlanma, birçok yıkama aşamaları ve DNA elüsyon oluşan bir DNA ekstraksiyon otomasyon sistemidir. </li><li> DNA ekstraksiyonu kullanılan kit, Kingfisher&#39;a Flex 24 DNA&#39;nın kan kiti (Qiagen, Almanya) &#39;dir. </li></ol> 3. DNA Miktar ve Kalite Değerlendirmesi Genomik DNA miktar, kalite ve bütünlüğü PicoGreen, spektroskopi ve elektroforez içeren yönteminin bir kombinasyonu ile değerlendirildi. <ol><li> Genomik DNA&#39;nın konsantrasyonu Nanodrop ve PicoGreen ölçümü ile tespit edilir. </li><li> Saflık NanoDrop spektrofotometresi üzerinde 260/280 oranı ölçümü ile tespit edilir. </li><li> Numune (500 ng), DNA bütünlüğü (bozulma) değerlendirmek için% 1 agaroz jel üzerine yüklenir. </li></ol> 4. Genotyping Tahliller ve Kalite Kontrol <ol><li> Beş P100_DNA ve bunların karşılık gelen EDTA_DNA rastgele seçilen özel Immunochip (Immuno DNA analiz BeadChip) kullanarak, daha fazla analiz için seçilmiştir. Immunochip 196.524 polimorfizmleri içeren bir Infinium genotiplendirme çip ve immünogenetik çalışmaları 5 için tasarlanmıştır. </li><li> Her numune için, DNA 200 ng, parçalanmış güçlendirilmiş çöktürülmüş ve uygun hibridizasyon tamponu içinde tekrar süspanse edilir. </li><li> Denatüre numuneler 16 saat arasında, en az 48 ° C &#39;de Immunochips üzerinde melezlendi. </li><li> Hibritlemeden sonra, Immunochips tek-baz uzatma reaksiyonları ve lekeli için işlenir. </li><li> Immunochips sonra Illumina HiScan Boncuk dizi okuyucu ve normalize boncuk yoğunluğu veri Illumina GenomeStudio yazılım yüklenir ve genotipleri dönüştürülür kullanarak görüntülü. Genotipler arasında GenomeStudio autocalling algoritması kullanılarak adlandırılır. Içinde kalite kontrolBir arama oranı &lt;% 95 ile tek nükleotid polimorfizmlerinin dışlama (SNP) volves. </li><li> SNP arama oranı immunochip tahlilinde etkinliğinin bir ölçüsü olarak kullanılır. Bu otomatik bir genotip atama almak için yeterli sinyal yoğunluğu ve kalitesi elde çip (196.524 SNP her çip üzerinde kodlanmış) üzerindeki deneyleri toplam sayısı yüzdesi olarak hesaplanır. Yüksek kaliteli DNA (260 / 1.8 280 oranı veya daha yüksek ve bozulma olmaması) immunochip testi dahil HapMap kontrol DNA olarak en azından aynı arama oranı elde etmesi bekleniyor. Kalite kontrol bir arama oranı &lt;% 95 her bir veri seti ile SNP dışlanması içerir. </li></ol>

<ol><li>Yi, J., Kim, C., Gelfand, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+intrinsic+proteolytic+activities+moderates+preanalytical+variability+and+instability+of+human+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Proteome+Research%22%5BJournal%5D)">Inhibition of intrinsic proteolytic activities moderates preanalytical variability and instability of human plasma.</a> Journal of Proteome Research. 6, 1768-1781 (2007).</li>
<li>Garg, U. C., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y., Eckfeldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+rapid+method+for+extraction+of+DNA+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Simple and rapid method for extraction of DNA from fresh and cryopreserved clotted human blood.</a> Clinical Chemistry. 42, 647-648 (1996).</li>
<li>Salazar, L. A., Hirata, M. H., Cavalli, S. A., Machado, M. O., Hirata, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedure+for+DNA+isolation+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood+useful+in+clinical+molecular+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Optimized procedure for DNA isolation from fresh and cryopreserved clotted human blood useful in clinical molecular testing.</a> Clinical Chemistry. 44, 1748-1750 (1998).</li>
<li>Xu, R., Ye, P., Luo, L., Wu, H., Dong, J., Deng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+efficient+method+for+DNA+purification+from+samples+of+highly+clotted+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">A simple and efficient method for DNA purification from samples of highly clotted blood.</a> Molecular Biotechnology. 46, 258-264 (2010).</li>
<li>Cortes, A., Brown, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promise+and+pitfalls+of+the+Immunochip%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Promise and pitfalls of the Immunochip.</a> Arthritis Research & Therapy. 13, 101(2011).</li>
<li>Basuni, A. A., Butterworth, L. A., Cooksley, G., Locarnini, S., Carman, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+extraction+method+from+blood+clots+for+studies+requiring+both+host+and+viral+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Viral+Hepatitis%22%5BJournal%5D)">An efficient extraction method from blood clots for studies requiring both host and viral DNA.</a> Journal of Viral Hepatitis. 7, 241-243 (2000).</li>
<li>Kanai, N., Fujii, T., Saito, K., Tokoyama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+simple+method+for+preparation+of+genomic+DNA+from+easily+obtainable+clotted+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Rapid and simple method for preparation of genomic DNA from easily obtainable clotted blood.</a> Journal of Clinical Pathology. 47, 1043-1044 (1994).</li>
<li>Adkins, K. K., Strom, D. A., Jacobson, T. E., Seemann, C. R., O'Brien, D. P., Heath, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utilizing+genomic+DNA+purified+from+clotted+blood+samples+for+single+nucleotide+polymorphism+genotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+%26+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Utilizing genomic DNA purified from clotted blood samples for single nucleotide polymorphism genotyping.</a> Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 126, 266-270 (2002).</li>
<li>Siafakas, N., Burnett, L., Bennetts, B., Proos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonenzymatic+extraction+of+DNA+from+blood+collected+into+serum+separator+tubes%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Nonenzymatic extraction of DNA from blood collected into serum separator tubes.</a> Clinical Chemistry. 41, 1045-1046 (1995).</li>
<li>Everson, R. B., Mass, M. J., Gallagher, J. E., Musser, C., Dalzell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+of+DNA+from+cryopreserved+clotted+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Extraction of DNA from cryopreserved clotted human blood.</a> BioTechniques. 15, 18-20 (1993).</li>
<li>Se Fum Wong, S., Kuei, J. J., Prasad, N., Agonafer, E., Mendoza, G. A., Pemberton, T. J., Patel, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+DNA+isolation+from+clotted+blood+extricated+rapidly+from+serum+separator+tubes%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">A simple method for DNA isolation from clotted blood extricated rapidly from serum separator tubes.</a> Clin. Chem. 53, 522-524 (2007).</li>
<li>Garg, U. C., Hanson, N. Q., Tsai, M. Y., Eckfeldt, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+rapid+method+for+extraction+of+DNA+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Simple and rapid method for extraction of DNA from fresh and cryopreserved clotted human blood.</a> Clin. Chem. 42, 647-648 (1996).</li>
<li>Salazar, L. A., Hirata, M. H., Cavalli, S. A., Machado, M. O., Hirata, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+procedure+for+DNA+isolation+from+fresh+and+cryopreserved+clotted+human+blood+useful+in+clinical+molecular+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Optimized procedure for DNA isolation from fresh and cryopreserved clotted human blood useful in clinical molecular testing.</a> Clin. Chem. 44, 1748-1750 (1998).</li>
<li>Matheson, L. A., Duong, T. T., Rosenberg, A. M., Yeung, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+sample+collection+and+storage+methods+for+multicenter+immunologic+research+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Assessment of sample collection and storage methods for multicenter immunologic research in children.</a> Journal of Immunological Methods. 339, 82-89 (2008).</li>
<li>Xu, R., Ye, P., Luo, L., Wu, H., Dong, J., Deng, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+efficient+method+for+DNA+purification+from+samples+of+highly+clotted+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A simple and efficient method for DNA purification from samples of highly clotted blood.</a> Mol. Biotechnol. 46, 258-264 (2010).</li>
<li>Polychronakos, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+points+in+mapping+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Fine points in mapping autoimmunity.</a> Nature. 43, 1173-1174 (2011).</li>
<li>Cooper, J. D., Simmonds, M. J., Walker, N. M., Burren, O., Brand, O. J., Guo, H., Wallace, C., Stevens, H., Coleman, G., Franklyn, J. A., Todd, J. A., Gough, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seven+newly+identified+loci+for+autoimmune+thyroid+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Seven newly identified loci for autoimmune thyroid disease.</a> Human Molecular Genetics. , (2012).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Birçok insan hastalıkları genetik nedenleri ve insan hastalığın genetik temeli keşfetmek giderek artan kaliteli DNA gerektirir. Genetik çalışmalar kullanılan DNA&#39;nın en yaygın kaynağı tam kan antikoagüle edilir. En klinik laboratuvarlar fenotipik sonuç soruşturma bir ilk adım olarak, biyokimyasal serolojik ve viral test gerçekleştirmek için, kan genellikle plazma tüp toplanır. Plazma toplama sonra, sıkıştırılmış kan genellikle atılır. Bu nedenle, DNA genetik çalışmalar veya test yapmak için gerektiğinde, ek bir kan ...

<table><tbody><tr><td>BD P100 tüpleri</td><td>BD Diagnostics</td><td>366448</td><td></td></tr><tr><td>EDTA tüpleri</td><td>BD Diagnostics</td><td>367863</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>Ataş</td><td>Ofis ürünü</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 ml tüp</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>Kırmızı kan hücreleri (RBC)</td><td>Qiagen</td><td>158389 (kit)</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>BioSprint 96 DNA Kan Kiti (48)</td><td>Qiagen</td><td>940054</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml mikrotüpler</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>Human Immuno DNA Analysis BeadChip Kiti</td><td>Illumina</td><td>WG-352-1001</td><td></td></tr><tr><td>Bead array okuyucu</td><td>Illumina</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>GenomeStudio Yazılımı</td><td>Illumina</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

plazma protein koruma kan alma kitleri genomik dna ayıklama pratik ve yeni bir yöntem

A Practical and Novel Method to Extract Genomic DNA from Blood Collection Kits for Plasma Protein Preservation

Laboratuvar testleri, kanın hücresel veya sıvı kısımlar üzerinde yapılabilir. Farklı kan toplama tüpleri kullanımı analiz edilebilir, kan (tam kan, plazma veya serum) kısmını belirler. Insan hastalıkların genetik temeli eğitim dahil Laboratuvarları genomik / genetik analiz için DNA kaynağı olarak EDTA içeren vacutainer toplanan antikoagüle tam kan güveniyor. En klinik laboratuvarlar fenotipik sonuç soruşturma bir ilk adım olarak biyokimyasal, serolojik ve viral test gerçekleştirmek için, antikoagüle kan da heparin içeren tüp (plazma tüp) toplanır. DNA ve plazma genomik ve proteomik her iki veri aynı anda ve paralel analizler için gerekli olan bu nedenle zaman, EDTA ve heparin tüpleri hem de kan toplamak için gelenektir. Kan tek bir tüp içerisinde toplanır ve plazma DNA ve hem de bir kaynağı olarak hizmet olabilir, bu yöntem, mevcut meth bir gelişme olarak düşünülebilirods. Plazma çıkarma sonra sıkıştırılmış kan kullanımı, böylece işlenmiş kan örnekleri miktarını en aza indirmek ve her bir hastanın gerekli olan örnek sayısını azaltarak, genomik DNA için alternatif bir kaynak oluşturmaktadır. Bu sonuçta zaman ve kaynak tasarrufu olur. Plazma proteinlerine korunması için BD P100 kan toplama sistemi insan kanından daha iyi protein biyolojik keşif ve proteomik deney sağlayan, kan protein içeriği stabilize etmek, önceki plazma veya serum toplama tüpleri 1 üzerinde geliştirilmiş bir yöntem olarak yaratılmıştır. BD P100 tüpler 15.8 püskürtülerek kurutulmuş K2EDTA ml ve pıhtılaşmayı önlemek ve plazma proteinleri stabilize proteaz inhibitörleri arasında, bir liyofilize edilmiş özel bir geniş spektrumlu bir kokteyl içerir. Ayrıca, uygulanan santrifüj işlemi sonrasında serum ve hücre topakları arasında fiziksel bir engel, mekanik ayırıcı, içerir. Birkaç yöntem pıhtılaşmış kan sa DNA elde etmek için icat edilmiştirmples eski plazma tüpler 2-4 toplandı. Bu yöntemleri Zorluklar özellikle tüpler (jel ayırıcı) içinde ayırıcı türü ile ilişkili ve pıhtılaşmış kan kurtarma zorluk, parçalanan veya pıhtı dağıtma rahatsızlık, ve ayırma jel ile pıhtı çıkarma tıkanıklığı dahil edildi. Biz yeni BD P100 tüplerde alınan kan genomik DNA ayıklar ve temizler ilk yöntem mevcut. Biz P100 tüplerinden EDTA tüpleri edilene DNA örneği kalitesini karşılaştırın. Yaklaşımımız basit ve etkilidir. ) Kan toplama, 2 mekanik ayırıcı ile sakaroz bir arada kullanarak mekanik ayırıcı çıkarılması ve 1) bir plazma BD P100 (BD Diagnostics, Sparks, MD, ABD) kullanımı tüp: Aşağıdaki gibi dört ana adımdan oluşur steril ataç metal kanca, 3) beyaz hücreleri ve 4 içeren buffy coat tabakasının ayrılması) gelen genomik DNA izolasyonudüzenli bir ticari DNA ekstraksiyon kiti ya da benzer bir standart protokolü kullanarak buffy coat.

DNA kalite değerlendirme ve konsantrasyon ölçüm P100_DNAs bir verim EDTA_DNAs (Tablo 1 ve 2) göre daha düşüktü. Onun 260/280 oranı değeri temsil DNA saflık P100_DNA ve EDTA_DNA örnek seti (Tablo 1 ve 2) her ikisi için de benzer. DNA kalitesi örneğin her resim grubu bazı bozulma EDTA_DNA örneklerde görüldüğü halde, olarak (Şekil 2) ışık yayma ile gösterilen içinde oldukça düzenlidir. Bozulmanın daha belirtileri ...

Bu plazma / seroloji alınan tam kandan genomik DNA&#39;nın izole edilmesi için yeni bir yöntem tarif edilmektedir. Plazma toplama sonra, sıkıştırılmış kan genellikle atılır. Bizim yeni bir yöntem mevcut yöntemlere göre önemli bir gelişme gösteren ve ek kan almadan, DNA ve tek bir koleksiyon edinilebilir plazma yapar.

Plazma Protein Koruma Kan Alma Kitleri Genomik DNA Ayıklama Pratik ve Yeni Bir Yöntem

Laboratuvar testleri, kanın hücresel veya sıvı kısımları üzerinde yapılabilir. Farklı kan toplama tüplerinin kullanımı, ... kısmının belirlenmesini sağlar.

Bu video, P 100 tüpleri olarak adlandırılan yeni BDP 100 plazma proteini koruma sisteminden genomik DNA ekstrakte etmek için pratik ve yeni bir yöntemi açıklayacaktır. Serum veya plazma tüplerinden ekstraksiyon geçmişte oldukça yaygın bir prosedür olmuştur, ancak bu yeni P 100 tüpünün burada sunulan ekstraksiyon yöntemiyle kombinasyonu, çok daha az çabayla daha kaliteli DNA elde etmek için yeni ve daha kolay bir yaklaşım sunmaktadır. P 100 tüpünün iç kısmı potasyum EDTA ve proteaz inhibitörleri ile kaplanmıştır.Bu işlem pıhtılaşmayı önler ve plazma proteinlerini stabilize eder. Santrifüj sonrası test için plazma elde etmek amacıyla kan bu tüplere toplanır. P 100 tüpündeki kan; yoğunluklarına göre üstte plazma, altta eritrositler ve beyaz kan hücreleri şeklinde katmanlara ayrılacaktır.Bu iki tabaka arasındaki Buffy coat. Plazmanın geri kazanımı genellikle bu tüplerin temel kullanım amacıdır. Antikor ve protein seviyeleri gibi çeşitli ölçümler bu plazma kullanılarak yapılır.Buffy coat genellikle atılır ancak bu videoda gösterileceği üzere; sekanslama, genotipleme, biyobelirteç tanımlama ve benzeri birçok analiz için yeterli DNA içermektedir. P one hundreds; kap, tüp ve separatör olma

a-practical-novel-method-to-extract-genomic-dna-from-blood-collection

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

MicroRNA'lar (miRNA'lar), gen ekspresyonunu düzenleyen dokuya özgü, küçük, kodlamayan RNA'lardır ve akciğer kanserinin erken teşhisi için ideal adayları temsil edebilir. Öne çıkan protokolde, erken akciğer kanseri taraması için hasta kan örneklerinden mikroRNA'yı izole edeceğiz.

miRNA Ekstraksiyonu: Plazma Örneğinden miRNA'yı Çıkarmak İçin Bir Yöntem

Bu videoda, organik ekstraksiyon kullanılarak kolorektal kanser hastalarının plazma örneklerinden dolaşımdaki mikroRNA'nın ekstraksiyonu ve ardından cam elyaf kolon zenginleştirme işlemi açıklanmaktadır. miRNA'lar serum ve plazma gibi biyolojik sıvılarda stabildir, bu da onları kanser teşhisi, prognozu ve tedavi kararı verme ve izleme için ideal dolaşımdaki biyobelirteçler haline getirir. Bu yöntem, hastalarda klinik sonuçları tahmin edebilen yeni dolaşımdaki biyobelirteçlerin tanımlanmasına...

Dolaşımdaki miRNA Ekstraksiyonu: Organik Ekstraksiyon ve Küçük RNA Zenginleştirme Yoluyla Plazma Örneklerinden miRNA'yı İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Bu videoda, insan plazma örneğinden dolaşımdaki hücresiz DNA veya cfDNA'yı izole etmek için silika bazlı bir membran prosedürü açıklanmaktadır. cfDNA, kanser teşhisi ve değerlendirmesi için umut verici bir biyobelirteçtir.

Dolaşımdaki Hücresiz DNA'nın (cfDNA) İzolasyonu: Kanser Hastalarının Kan Plazmasından cfDNA'yı Çıkarmak için Silika Bazlı Bir Membran Prosedürü

Bu video, silika ile kaplanmış küçük manyetik boncuklar olan manyetik cam parçacıkları (MGP'ler) kullanılarak tam insan kanından nükleik asit ekstraksiyonu için bir tekniği göstermektedir. Kan hücrelerinin bir lizis tamponu kullanılarak parçalanması üzerine, salınan nükleik asitler silika kaplı MGP'lerin yüzeyine bağlanır ve molekülleri numuneden çıkarır.

Kandan Manyetik Cam Parçacık Aracılı Nükleik Asit Ekstraksiyonu için Bir Teknik

TruTip bir gözenekli, monolitik bağlayıcı bir matris bir pipet sokulur sayede basit bir nükleik asit çıkarma teknolojidir. Sonuç olarak, örnek hazırlama biçimi pek çok sıvı taşıma araçları ile uyumlu ve yüksek verimli klinik uygulama ve örnek tipleri için birçok orta için kullanılabilir.

Ortak Liquid Handling Robotlar TruTip Teknoloji kullanarak Klinik Örneklerden DNA ve RNA yüksek verimlilik, Otomatik Ekstraksiyon

Burada nicel PCR ile tespit tam kan HIV proviral DNA için basit ve hızlı bir kağıt bazlı DNA ekstraksiyon yöntemini tarif etmektedir. Bu protokol için diğer genetik işaretleyiciler saptanması veya alternatif yükseltme yöntemleri kullanılarak kullanılmak için uzatılabilir.

Nükleik Asitlerin süzülmesi İzolasyonu: basit ve hızlı DNA izolasyonu,

Bu el yazması kopya numarası varyasyon analizi serum veya plazma DNA gerçek zamanlı PCR yaklaşımı kullanarak gerçekleştirilen açıklar. Bu yöntem için tahmin kastrasyon dayanıklı prostat kanseri hastalarda ilaç direnci uygundur, ama aynı zamanda diğer hastalıklar için bilgilendirici olabilir.

Serum ve plazma kopya sayı algılama gerçek zamanlı PCR kullanarak

Bu protokol, çevirisel biyobelirteç analizi için kullanılabilecek klinik çalışma alanında yüksek kaliteli PBMC ve plazma biyosampllerinin klinik olarak uygulanabilir hazırlanmasını detaylandırır.

Biyobelirteç Analizi için Klinik Çalışma Alanlarında Tek Bir Kan Çekiminden Periferik Kan Mononükleer Hücre Peletleri ve Plazma Hazırlanması

Bu yazıda kan toplama, plazma ve buffy kat ayırma, cfDNA ve germline DNA ekstraksiyonu, cfDNA veya germline DNA'nın nicelleştirilmesi ve cfDNA parça zenginleştirme analizi dahil olmak üzere invaziv olmayan sıvı biyopsi tekniği için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Kanser Hastalarının Kan Plazma Örneklerinde Hücresiz DNA Tespiti

Sıvı biyopsi, onkoloji translasyonel çalışmalarına yaklaşımımızda devrim yarattı ve örnek toplama, kalite ve depolama, başarılı klinik uygulaması için çok önemli adımlardı. Burada, çoğu translasyonel araştırma laboratuvarında uygulanabilecek aşağı akış dolaşımsız DNA uygulamaları için standartlaştırılmış ve doğrulanmış bir protokolü açıklıyoruz.

Aşağı Akış Dolaşımsız DNA Uygulamaları için Standartlaştırılmış Bir Sıvı Biyopsi Preanalitik Protokolü

Bu protokol, aşağı akış analizleri ve akış sitometrisi ve RNA dizilimi gibi iş akışları için uygun periferik kan mononükleer hücrelerinin toplanması, saklanması ve çözülmesi için erişilebilir bir kılavuz sunar. Plazma ve buffy coat koleksiyonları da sergilenmektedir.

Tam Kandan Yüksek Derecede Canlı İnsan Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinin İzolasyonu ve Dondurularak Saklanması: Yeni Başlayanlar İçin Bir Kılavuz

Öğrenin, P 100 tüplerinden aynı anda plazma ve genomik DNA elde etme yöntemini. Bu yeni teknik, geleneksel yöntemlere göre daha az çaba ile daha kaliteli DNA sağlar ve klinik verimliliği artırır.

Plazma Protein Koruma Kan Alma Kitleri Genomik DNA Ayıklama Pratik ve Yeni Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet