Name: Için Multibarrel Elektrodları Üretim ve Piggy-back kullanma In vivo Farmakolojik Çarpıtmalar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Öğrenin piggy-back çoklu elektrot üretimini ve in vivo farmakolojik uygulamaları. Bu yöntemle sinir devrelerini manipüle ederken nöron aktivitesini kaydedebilirsiniz.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Iş R01 DC 011582 (AK) ve RO1 DC011555 (DJT) tarafından desteklenmiştir.

<ol><li> Cam elektrotlar çekin Cam elektrotlar çekin <ol><li> Tek beşik elektrot çekin. Filamanlı kapiller tek beşik camını kullanın ve ölçülen yaklaşık 1-2 mikrometre, 10-12 mm şaft uzunluğu ve yaklaşık 12 MOhm karşılık gelen elektrot direnci (aralık 5-20 MOhms) bir çapa ucu çekin % 0.9 &#39;luk NaCl çözeltisi içinde. Alt elektrot dirençleri daha fazla arka plan aktivitesi ile sonuçlanabilir ve bireysel nöronların üniter aktivite yalıtma dolayısıyla daha zor olurdu. Bu elektrot çekme için, ısıtma rezistanslarının ya da ısıtma bobinleri ya da birlikte bir yatay ya da dikey ya da çekici kullanır. </li><li> Multibarrel elektrot çek. Multibarrel camın çok daha büyük bir çap ve tüm multibarrel etrafında eşit bir ısı dağılımı olan ihtiyacı nedeniyle, daha büyük çaplı bir ısıtma bobini, bir ısıtma filaman, güçlü bir çektirme gereklidir. Bir pipet multibarrel n ile ısıtma filaman merkezinden yerleştirilmiş olması gerekiro ısıtma bobini ile temasa geçiniz. Bunun yanında, 5-namlu pipetler burada açıklanan dikkat ediniz, 3-varil ya da 7-varil pipetler ticari olarak temin alternatiflerdir. Yaklaşık 10 mikrometre toplam çapı, ya da daha az bir pipet cam çekin. Ucu, bir sonraki adımda doğru çapına kırık, bu nedenle uç tam boy uzun ve nispeten ince olması gerekir elektrot ucu genel şekle göre, daha çekme işlemi sırasında daha az kritiktir. İstenilen elektrot ucu şekil için Şekil 1C yılında resme bakın. Çok uzun ve ince elektrot şekiller (Şekil 1A) viraj olacak ve böylece zor doğru için elektrot ucu kırmak için yapacak ise kısa ve küt elektrot şekiller (Şekil 1B), beyin içine ilerletilir doku hasarı önemli miktarda neden olur çap (adım 2). </li></ol></li><li> Elektrot ipuçları Değiştir Elektrot uçları değiştirin. Iki elektrot birbirine yapıştırılmış olabilir önce, Bunlar modifiye edilmesi gerekir. Tek bir elektrot arasında şaft da bitmiş domuz geri elektrot bileşik şaft mümkün olduğu kadar ince olduğundan emin olmak için multibarrel eklenebilir önce bükülmüş gerekmektedir. Buna ek olarak, multibarrel elektrot ucu iyontoforez için düşük direnç sağlamak için kesilmek sahiptir. <ol><li> Yaklaşık 20 derecelik tek bir varil elektrot mili bükün. Mümkün olan en küçük Bunsen beki alev kullanın. Standart laboratuar tedarik şirketlerinin tipik &quot;küçük&quot; Bunsen brülör bu uygulama için çok büyük alev boyutları oluşturabilirsiniz. Bu sorunu küçük ticari Bunsen beki kullanmak ve brülör üstüne bir şırınga (~ 18 gauge) güvenli ve diş çimento kullanarak bağlantı mühür aşmak için. Çalıştırılırken, alev çapı 5 mm ya da daha az, yaklaşık 8 mm uzunluğunda ve yaklaşık görmesi zor olması gerekir. Odada herhangi bir hava hareketi o alev sönecektir, bu yüzden de brülör çalıştırmak için iyi bir fikirdirkapalı bir odada, ya da rüzgar kalkanları kullanın. Yaklaşık 20 derece bükün için alev aracılığıyla tek beşik elektrodu taşıyın. Brülör alevi uzak elektrot ucu yaklaşık 10 milimetre geçiş alanı, cam eritmek için hedefleyin. Ucu aşağı doğru, biz elektrot yaklaşık 45 derecelik düzenlenecek öneririz elektrodun ucunda erime önlemek ve nispeten hızlı bir alev ile elektrot taşımak için. </li><li> Multibarrel elektrot ucu kesiyorum. Elektrot ucu kırarak, en az 10x objektif ve 10x oküler ile mikroskop kullanırken görsel kontrolü sağlamak için. Oküler takılı bir ölçme skalası da meme boyutlarını ölçmek için gerekli olacaktır. Pleksiglas uç mikroskop görüş alanının bir buçuk katı kadar yaklaşık üçte-biri görülebilir bu tür mikroskop ile pleksiglas bir parça ekleyin. Bizim durumumuzda, pleksiglas parçası özel olarak güvence altına alınabilir bir vida ile 25 x 70 mm ve kalın ve ekli 5 mm dirmikroskop aşamasında iplik yapılır. Bu pleksiglas bağımsız slayt taşımak için izin veren bir tasarıma sahip olmak önemlidir. Bir cam slayt üzerine kil modelleme bir yatakta multibarrel elektrot yerleştirin ve mikroskop sahne adlı slayt tutucu içine elektrot içeren slayt eklemek. Mikroskop sahne en xy manipülatörler kullanarak yavaşça pleksiglas parçası karşı elektrot ucu taşımak ve mikroskop Okülerin aracılığıyla ucunun kırılması gözlemlemek. Temizce yaklaşık 25-35 mikrometre kümülatif çapı multibarrel ucu kırmaya çalışın. Düzensiz aralıklarla çok büyük, ya da ipuçları kesti ucu çapı pipetler atın. Biz istenmeyen ucu şekilleri nedeniyle bizim multibarrel elektrotlar yaklaşık% 30 atın. </li></ol></li><li> Piggy-back Elektrot Assemble Piggy-back elektrot birleştirin. <ol><li> Pozisyon elektrotlar. Mikroskop aşamasından adım 2.2 &#39;de kullanılan pleksiglas parçasını çıkarın. Tamamlanmış Güvenlibir cam slayt üzerine kil modelleme içine multibarrel elektrot, hafifçe yukarı doğru işaret ipucu. Yukarı İşaret adım 3.2, iki elektrot yapıştırma için önemli olacaktır. Yukarı işaret İpuçları tutkal yapıştırma elektrot uçları kaçınarak, ucu kaçmak neden. Ölçüye mikromanipülatör (Şekil 2) elektrot tutucu içine bükülmüş tek beşik elektrodu takın. Birinci ve daha sonra mikroskobik kılavuz görsel kılavuz kullanarak, multibarrel elektrot üzerine tek bir namlu elektrot düşürmektedir. Tek bir elektrot yaklaşık 5-10 mikrometre ile multibarrel ucu uç çıkıntı ucu ile birlikte, 5 varil düzenleme ile oluşturulan oluk içine direkt olarak azaltılabilmektedir. Tek bir namlu alçaltılırken, yakından iki elektrot arasında oluşan açı dikkate alınmalıdır. En iyi sonuç ipucu birbirinden işaret etmektedir, ancak daha ziyade tek bir elektrot üzerine düşürmek için çalışır ki içinde, her açıdan önlemek için çok mükemmel bir şekilde paralel veya düz ucu ileÇOK hafif &#39;kama&#39; düzenlemesi oluşturan, ilk multibarrel dokunmadan. Tek bir namlu ucu çok esnek olduğundan, yay içinde yapılmış bir eylem az miktarda bir temiz bir bileşik uç oluşturan uç çoklu namlu elektrot üst yüzeyi ulaştıktan sonra tek bir elektrot biraz daha indirildiği zaman bükülür Birlikte ipuçları tutarak yardımcı olur. Tek bir namlu ve multibarrel elektrot arasındaki açı (a kama çok fazla) çok dik Bununla birlikte, eğer, yay etkisi çok yüksek olması ve elektrot düzenlemesi aşağı doğru bükülür. </li><li> Birlikte Tutkal elektrot milleri. Tutkal birlikte iki elektrot milleri kullanarak siyanoakrilat (yapıştırıcı). Tutkal damla ile düz bir kürdan ve dokunmatik elektrot montaj küçük yüzüne tutkal küçük bir düşüş yerleştirin. Ipuçları en distal pozisyonda başlayın ve yavaşça elektrot uçları doğru elektrot miller boyunca tutkal damla ile kürdan taşıyın. Çok fazla tutkal kullanarak, ya da yapıştırıcı t uygulayarakelektrot uçları için oo yakınında en azından kısmen işlevsiz hale elektrot, tutkallama elektrot açıklıklar neden olur. </li><li> Diş çimento ile eklemini stabilize., Küçük bir tek kullanımlık plastik tabak, diş çimento ve diş akrilik az miktarda karıştırın veya düz bir kürdan kullanarak, tekne tartın. Çimento moldable hale gelene kadar bekleyin ve eklem (Şekil 3 pembe materyal) stabilize iki elektrot arasındaki eklem az miktarda uygulayın. Yaklaşık 15 dakika kurumasını bekleyin. </li><li> Elektrot çıkarın ve saklayın. Dikkatlice mikromanipülatör sahibinden ilk tamamlanmış piggy-back elektrot kaldırmak ve sonra cam slayt ayırmak ve toz geçirmez bir kapta saklayın. </li></ol></li><li> Elektrot Dolgu Çözümleri hazırlayın Elektrot dolgu çözümleri hazırlayın. İyontoforez yüklü moleküllerin gerektirdiğinden, en madde bir asidik ya da bazik bir ortamda (tipik olarak bir ya da çözünmüş olması gerekirsırasıyla ta yaklaşık 3-4 arasında pH, ya da 8-10 arasında bir pH değerine). Sık sık iyontoforez olarak kullanılan kimyasal bir dizi Tablo 1 &#39;de listelenmiştir. Tabloda yer almayan maddeler için, bu molekülü ücret tutmak için bir asidik veya alkali bir ortamda molekül kullanmak daha kolay olabilir ve buna göre çözülür edip, pKa değeri belirler. En iyi sonuçlar için, günlük tüm çözümleri taze karıştırın. </li><li> Dolgu ve Elektrotları hazırlayın Doldurun ve elektrotlar hazırlar. Şırınga filtreleri ile şırınga bağlı 34 gauge iğne - Sadece elektrot kullanmadan önce, karbon fiber 28 kullanılarak, ilgili ilaç ile her bir varil geri doldurun. Tercih edilen ilaçlar, ve dengeleyici bir varil olarak 3M NaCl ile merkez namlu ile 5-varil konfigürasyonu 4 dış varil doldurun. Sıra 3M NaCl ile tek beşik kayıt elektrot doldurun. Böyle hızlı yeşil veya fenol kırmızısı gibi, NaCl bir boya ekleme daha kolay elektrot ucu görmek için yapacaktırbeyin yüzeye elektrot yerleştirme esnasında. Kayıt kurulum elektrot tutucu içine elektrot takın ve uygun cam varil içine tüm kabloları takın. Yalıtım yaklaşık 1 cm ucunda kaldırıldığı izole gümüş tel kullanın. Multibarrel elektrot (4 ilaç varil ve bir dengeleme namlu), artı elektrot kayıt tek bir varil içine takılması gerekir amplifikatör için tel 5 tel olmalıdır. </li><li> İyontoforez Pompa Modüller açın İyontoforez pompa modülleri açın ve tüm varil sınayın. Her pompa modülü elektrot test fonksiyonu elektrod varil fonksiyonel olup olmadığını belirlemenize yardımcı olur. Kullanılmadığı, molekül ücret olarak zıt kutuplu bir tutma gerilimi gerektiğinde varil ilaçların sızıntısını önlemek için. </li></ol>

<ol><li>Curtis, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+assembly+of+%22parallel%22+micro-pipettes%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">A method for assembly of "parallel" micro-pipettes.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 24, 587-589 (1968).</li>
<li>Carette, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+of+manufacturing+multi-barrelled+micropipettes+with+projecting+recording+barrel%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">A new method of manufacturing multi-barrelled micropipettes with projecting recording barrel.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 44, 248-250 (1978).</li>
<li>Crossman, A. R., Walker, R. J., Woodruff, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Problems+associated+with+iontophoretic+studies+in+the+caudate+nucleus+and+substantia+nigra%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Problems associated with iontophoretic studies in the caudate nucleus and substantia nigra.</a> Neuropharmacology. 13, 547-552 (1974).</li>
<li>Havey, D. C., Caspary, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+constructing+%22piggy-back%22+multibarrel+microelectrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">A simple technique for constructing "piggy-back" multibarrel microelectrodes.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 48, 249-251 (1980).</li>
<li>Verberne, A. J., Owens, N. C., Jackman, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+reliable+method+for+construction+of+parallel+multibarrel+microelectrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Bull%22%5BJournal%5D)">A simple and reliable method for construction of parallel multibarrel microelectrodes.</a> Brain Res. Bull. 36, 107-108 (1995).</li>
<li>Oliver, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+contribution.+A+simple+rapid+method+for+preparing+parallel+micropipette+electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr.+Clin.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Technical contribution. A simple rapid method for preparing parallel micropipette electrodes.</a> Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 31, 284-286 (1971).</li>
<li>Oswald, J. P., Klug, A., Park, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaural+intensity+difference+processing+in+auditory+midbrain+neurons%3A+effects+of+a+transient+early+inhibitory+input%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Interaural intensity difference processing in auditory midbrain neurons: effects of a transient early inhibitory input.</a> J. Neurosci. 19, 1149-1163 (1999).</li>
<li>Park, T. J., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+shapes+a+topographic+organization+of+response+latency+in+the+mustache+bat%27s+inferior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GABA shapes a topographic organization of response latency in the mustache bat's inferior colliculus.</a> J. Neurosci. 13, 5172-5187 (1993).</li>
<li>Park, T. J., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+shapes+sensitivity+to+interaural+intensity+disparities+in+the+mustache+bat%27s+inferior+colliculus%3A+implications+for+encoding+sound+location%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GABA shapes sensitivity to interaural intensity disparities in the mustache bat's inferior colliculus: implications for encoding sound location.</a> J. Neurosci. 13, 2050-2067 (1993).</li>
<li>Peterson, D. C., Nataraj, K., Wenstrup, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycinergic+inhibition+creates+a+form+of+auditory+spectral+integration+in+nuclei+of+the+lateral+lemniscus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Glycinergic inhibition creates a form of auditory spectral integration in nuclei of the lateral lemniscus.</a> J. Neurophysiol. 102, 1004-1016 (2009).</li>
<li>Ramsey, L. C. B., Sinha, S. R., Hurley, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((5-HT1A+and+5-HT1B+receptors+differentially+modulate+rate+and+timing+of+auditory+responses+in+the+mouse+inferior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">5-HT1A and 5-HT1B receptors differentially modulate rate and timing of auditory responses in the mouse inferior colliculus.</a> Eur. J. Neurosci. 32, 368-379 (2010).</li>
<li>Wenstrup, J. J., Leroy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spectral+Integration+in+the+Inferior+Colliculus%3A+Role+of+Glycinergic+Inhibition+in+Response+Facilitation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spectral Integration in the Inferior Colliculus: Role of Glycinergic Inhibition in Response Facilitation.</a> J. Neurosci. 21, RC124(2001).</li>
<li>Yang, L., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+ipsilaterally+evoked+inhibition+in+the+dorsal+nucleus+of+the+lateral+lemniscus%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Res%22%5BJournal%5D)">Features of ipsilaterally evoked inhibition in the dorsal nucleus of the lateral lemniscus.</a> Hear. Res. 122, 125-141 (1998).</li>
<li>Yang, L., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABA+and+glycine+have+different+effects+on+monaural+response+properties+in+the+dorsal+nucleus+of+the+lateral+lemniscus+of+the+mustache+bat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">GABA and glycine have different effects on monaural response properties in the dorsal nucleus of the lateral lemniscus of the mustache bat.</a> J. Neurophysiol. 71, 2014-2024 (1994).</li>
<li>Yang, L., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+GABAergic+and+glycinergic+inhibition+on+binaural+processing+in+the+dorsal+nucleus+of+the+lateral+lemniscus+of+the+mustache+bat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">The roles of GABAergic and glycinergic inhibition on binaural processing in the dorsal nucleus of the lateral lemniscus of the mustache bat.</a> J. Neurophysiol. 71, 1999-2013 (1994).</li>
<li>Yang, L., Pollak, G. D., Resler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+circuits+sharpen+tuning+curves+and+modify+response+properties+in+the+mustache+bat+inferior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">GABAergic circuits sharpen tuning curves and modify response properties in the mustache bat inferior colliculus.</a> J. Neurophysiol. 68, 1760-1774 (1992).</li>
<li>Faingold, C. L., Gehlbach, G., Caspary, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+GABA+as+an+inhibitory+neurotransmitter+in+inferior+colliculus+neurons%3A+iontophoretic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">On the role of GABA as an inhibitory neurotransmitter in inferior colliculus neurons: iontophoretic studies.</a> Brain Res. 500, 302-312 (1989).</li>
<li>Faingold, C. L., Hoffmann, W. E., Caspary, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+excitant+amino+acids+on+acoustic+responses+of+inferior+colliculus+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of excitant amino acids on acoustic responses of inferior colliculus neurons.</a> Hear. Res. 40, 127-136 (1989).</li>
<li>Hurley, L., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+shifts+first-spike+latencies+of+inferior+colliculus+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Serotonin shifts first-spike latencies of inferior colliculus neurons.</a> J. Neurosci. 25, 7876-7886 (2005).</li>
<li>Hurley, L., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+effects+on+frequency+tuning+of+inferior+colliculus+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Serotonin effects on frequency tuning of inferior colliculus neurons.</a> J. Neurophysiol. 85, 828-842 (2001).</li>
<li>Hurley, L. M., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+differentially+modulates+responses+to+tones+and+frequency-modulated+sweeps+in+the+inferior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Serotonin differentially modulates responses to tones and frequency-modulated sweeps in the inferior colliculus.</a> J. Neurosci. 19, 8071-8082 (1999).</li>
<li>Klug, A., Bauer, E. E., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+components+of+ipsilaterally+evoked+inhibition+in+the+inferior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Multiple components of ipsilaterally evoked inhibition in the inferior colliculus.</a> J. Neurophysiol. 82, 593-610 (1999).</li>
<li>Klug, A., Park, T. J., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycine+and+GABA+influence+binaural+processing+in+the+inferior+colliculus+of+the+mustache+bat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Glycine and GABA influence binaural processing in the inferior colliculus of the mustache bat.</a> J. Neurophysiol. 74, 1701-1713 (1995).</li>
<li>Moore, M. J., Caspary, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strychnine+blocks+binaural+inhibition+in+lateral+superior+olivary+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Strychnine blocks binaural inhibition in lateral superior olivary neurons.</a> J. Neurosci. 3, 237-242 (1983).</li>
<li>Nataraj, K., Wenstrup, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+inhibition+in+creating+complex+auditory+responses+in+the+inferior+colliculus%3A+facilitated+combination-sensitive+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Roles of inhibition in creating complex auditory responses in the inferior colliculus: facilitated combination-sensitive neurons.</a> J. Neurophysiol. 93, 3294-3312 (2005).</li>
<li>Fukui, I., Burger, R. M., Ohmori, H., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+inhibition+sharpens+the+frequency+tuning+and+enhances+phase+locking+in+chicken+nucleus+magnocellularis+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GABAergic inhibition sharpens the frequency tuning and enhances phase locking in chicken nucleus magnocellularis neurons.</a> J. Neurosci. 30, 12075-12083 (2010).</li>
<li>Burger, R., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+inactivation+of+the+dorsal+nucleus+of+the+lateral+lemniscus+reveals+its+role+in+the+processing+of+multiple+sound+sources+in+the+inferior+colliculus+of+bats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Reversible inactivation of the dorsal nucleus of the lateral lemniscus reveals its role in the processing of multiple sound sources in the inferior colliculus of bats.</a> J. Neurosci. 21, 4830-4843 (2001).</li>
<li>Burger, R. M., Pollak, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+role+of+inhibition+in+shaping+responses+to+sinusoidally+amplitude-modulated+signals+in+the+inferior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Analysis of the role of inhibition in shaping responses to sinusoidally amplitude-modulated signals in the inferior colliculus.</a> J. Neurophysiol. 80, 1686-1701 (1998).</li>
<li>Coleman, W. L., Fischl, M. J., Weimann, S. R., Burger, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GABAergic+and+glycinergic+inhibition+modulate+monaural+auditory+response+properties+in+the+avian+superior+olivary+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">GABAergic and glycinergic inhibition modulate monaural auditory response properties in the avian superior olivary nucleus.</a> J. Neurophysiol. 105, 2405-2420 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Aynı zamanda, deneysel manipülasyon sırasında nöronun yanıtlarının kayıt için izin Biz ise, in vivo olarak, tek bir nöronun mikrodevre manipülasyonu için izin veren bir yöntem açıklanmaktadır. Nöral devreler sinaptik agonistleri ve antagonistleri iontophoretical uygulaması ile manipüle edilmiştir. Basınç tahliye üzerinde İyontoforez temel avantajı, iyontoforez sinir dokusu içine elektrot gelen sıvı, fiziksel hareketi gerektirmez ve bu nedenle uygulanan basınç ve sıvı hacmi ile doku hasarına neden herhangi bir endişe vardır. Bu tekniğin başlıca kısıtlılığı dokusunda mutlak ilaç konsantrasyonu, ve doku etkilenen hacmi hakkında bilgi eksikliğidir. Iyontoforez ile çıkarılır farmakolojik ajanların miktarları çok daha küçük ve basınç püskürtme ile çok daha kesin olarak kontrol edilebilir Bununla beraber, ilaç uygulamasından çok daha hızlı bir iyileşme tipik olarakd daha tamamlandı. Microiontophoresis başarılı bir şekilde sinir sistemi, duyusal ve diğer bir dizi kullanılmakta olan ve çok az veya hiçbir içsel işlem ile beyin bölgelerinde en başarılı bir şekilde uygulanır. Nedeni püskürtülen farmakolojik ajan bazı komşu nörona uygulama sitesinden yaygın ve aynı zamanda komşu nöronun yanıtı özellikleri manipüle olabilir olmasıdır. Tekli ve çoklu varil elektrotların ayrı bir imalat keyfi ve akraba olmayan özelliklere sahip elektrot kombinasyonu sağlar. Birlikte elektrot varil Çekme ve iyontoforez amaçlı kayıt ve bazıları için bazı kullanarak, çok benzer özelliklere sahip elektrot uçları ya tek hücreli kayıt veya ilaç uygulama için çok küçük için çok büyük olurdu böyle elektrot uçları üretecektir. Ayrıca, tek namlu ucu yaklaşık 20 mikrometre ile multibarrel elektrot uçları ötesine sahip büyük bir, kayıtları gürültüyü azaltırd nöronun ateşleme 3 retansiyonu veya ejeksiyon akımlarından olası karıştırıcı akımı etkilerini ortadan kaldırır. Piggy-back multibarrel elektrotlar ilk 4-6 30 yıl önce tarif edilmiştir ve nöral devrelerin 7-18 19-29 incelemek için çok başarılı sonuçlar alınmıştır. Dolayısıyla, per se yöntemi roman ya da benzersiz değil. Ancak, elektrot hazırlanması ve kullanımının belirli ayrıntıları yılda modifiye edilmiştir, ve burada açıklanan talimatları kümesi özellikle kolay ve başarılı olduğu kanıtlanmıştır ve başka literatürde ayrıntılı olarak yayınlanmamıştır. Özellikle, tek bir namlu elektrot ucu bükme, domuz geri elektrot son ucu böylece nispeten ince (Şekil 3) ve olmasına olanak tanır beyin için en az hasar ile derin atom çekirdeklerinden gelen kayıtlar için izin verir; tek bir namlu bölgesinin çıkıntılı çok namlu elektrot elektrot üzerinde hemen hemen tüm Curren kaldırırgenellikle teknik 3 bir dezavantaj olarak sayıldı t etkiler. Yeni detayları gibi piggy-back elektrotlar üretirken tutkallama işlemi sırasında yukarıyı gösterecek ve multibarrel elektrot oluğuna tek beşik dinlenme elektrot ucu yüksek bir başarı oranı sağlayacak sahip olarak burada sunulan. Tekniği nispeten kolaydır ve genellikle birkaç gün içinde bir acemi tarafından hakim olabilir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Öğe adı </td><td> Üretici </td><td> Yorumlamak </td><td> Kedi. # </td></tr><tr><td> Bunsen beki </td><td></td><td> Tarihten itibaren: VWR </td><td> 17928-027 </td></tr><tr><td> İki bileşenli diş çimento: &quot;Soğuk Tedavi&quot; diş malzemesi </td><td> Co-sözlü-ite Diş Mfg Co </td><td> AM Sistemleri, Inc: bulunmakta </td><td> 525000 </td></tr><tr><td> İki bileşenli diş çimento: Protez malzeme çapraz Likit Pasta </td><td> Co-sözlü-ite Diş Mfg Co </td><td> AM Sistemleri, Inc: bulunmakta </td><td> 525000 </td></tr><tr><td> Sıvı tutkal </td><td> Henkel </td><td> Loctite Süper Tutkal: Tarihten itibaren </td><td> 01-06849 </td></tr><tr><td> Mikro-İyontoforez Unver: Neurophore BH-2 </td><td> Harvard Apparatus </td><td> Harvard Apparatus: Tarihten itibaren </td><td> 65-0200 ve 65-0203 </td></tr><tr><td> İzoleli gümüş tel </td><td> AM-Sistemleri </td><td> AM-Sistemleri: Tarihten itibaren </td><td> 785500 </td></tr><tr><td> Yatay çektirme </td><td> Zeitz DMZ-Üniversal Çektirme </td><td> AutoMate Bilimsel: Tarihten itibaren </td><td> NA </td></tr><tr><td> Mikro-manipülatör adet: elektrot tutucu </td><td> TEFE </td><td> Tarihten itibaren: TEFE </td><td> M3301EH </td></tr><tr><td> Mikro-manipülatör adet: doğrusal evre </td><td> Newport 423 Serisi </td><td> Newport: Tarihten itibaren </td><td> 423 </td></tr><tr><td> Mikro-manipülatör adet: dönme sehpasının </td><td> Newport RSP-2 </td><td> : Tarihten itibarenNewport </td><td> RSP-2 </td></tr><tr><td> Mikro-manipülatör adet: z çeviri </td><td> Newport 433 Serisi </td><td> Newport: Tarihten itibaren </td><td> 433 </td></tr><tr><td> Mikro-manipülatör adet: z ve xy eksenine monte açılı ayraç 90 ° </td><td> Newport 360-90 </td><td> Newport: Tarihten itibaren </td><td> 360-90 </td></tr><tr><td> Mikro-manipülatör adet: x çeviri / doğrusal evre </td><td> Newport 423 Serisi </td><td> Newport: Tarihten itibaren </td><td> 423 </td></tr><tr><td> Mikro-manipülatör adet: y çeviri / doğrusal evre </td><td> Newport 423 </td><td> Seri Newport: Tarihten itibaren </td><td> 423 </td></tr><tr><td> Mikroskop </td><td> Leitz Laborlux 11 </td><td></td><td></td></tr><tr&gt; <td> Mikroskop: nesnel </td><td> 10x Leitz Wetzlar, NA 0.25 </td><td></td><td> 519760 </td></tr><tr><td> Mikroskop: eypieces </td><td> Leitz Wetzlar, Periplan 10x/18 </td><td></td><td> 519748 </td></tr><tr><td> Mikroskop: evre </td><td> Leitz Wetzlar </td><td></td><td> 513544 </td></tr><tr><td> Kılcal Multibarrel </td><td> N / A </td><td> AM sistemleri, Inc: bulunmakta </td><td> 612000 </td></tr><tr><td> Sinlge namlu kılcal (GC 150F-10) </td><td> Harvard Apparatus </td><td> Harvard Apparatus: Tarihten itibaren </td><td> 30-0057 </td></tr><tr><td> Dikey çektirme </td><td> Narishige modeli PE-2 </td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td> Mikro-manipülatör (ışık b işaretlemiş Özel yapılmış elemanlarıŞekil 1 &#39;de Lue) </td><td></td></tr><tr><td> çelik levha </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> devirme tabanı </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> elektrod tutucu için eklenti </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td> Tablo 2. Üreticileri ve prosedürü kullanılan tüm ekipman ve malzemeleri madde numaraları. </td><td></td></tr></tbody></table>

için multibarrel elektrodları Üretim ve piggy-back kullanma<em&gt; in vivo</emsinir cevaplarının&gt; farmakolojik Çarpıtmalar

Manufacturing and Using Piggy-back Multibarrel Electrodes for In vivo Pharmacological Manipulations of Neural Responses

Tek nöronların vivo kayıtlarında bir araştırmacı duyusal uyaranlara yanıt, örneğin nöronların ateşleme özelliklerini incelemek için izin verir. Nöronlar genellikle birbirleri ile entegre çoklu eksitatör ve inhibitör afferent ve / veya efferent girdileri almak ve nöron nihai ölçülen yanıt özellikleri bu girişlerin nöral entegrasyonları ile tahrik edilmektedir. Sinir sistemlerinin bilgi işleme incelemek için, bir nöron veya sinir sistemine çeşitli girdiler anlamak için gerekli olduğunu ve bu girdilerin belirli özellikleri. Belirli bir nöron aldığını belli girdilerin fonksiyonel rolünü değerlendirmek için güçlü ve teknik olarak nispeten basit bir yöntem dinamik ve geri dönebilen bastırmak ya da yok bu girişler, ve bu manipülasyona neden nöronun çıktı değişiklikleri ölçmek için. Bu farmakolojik piggy-back multibarrel elektrikli olan nöron yakın çevresini değiştirerek gerçekleştirilebilirgazeller. Bu elektrotlar tek bir varil kayıt elektrot ve 4 farklı sinaptik agonist veya antagonist kadar taşıyabilen bir multibarrel ilaç elektrot oluşur. Farmakolojik ajanlar zaman kontrollü dağıtım ve sinaptik giriş tersinir yeniden sağlayan, deney sırasında istenilen zaman iontophoretically uygulanabilir. Mikroçevresinin gibi, Farmakolojik manipulasyon nöral devre fonksiyonu hakkında spesifik hipotezleri test etmek için güçlü ve benzersiz yöntemi temsil eder. Gibi Burada piggy-back elektrotlar üretilmektedir nasıl tanımlamak ve nasıl in vivo deneyler sırasında kullanılır. Piggy-back sistemi bir araştırmacı bir multibarrel uyuşturucu elektrot ile herhangi bir keyfi özelliği tek bir varil kayıt elektrot (direnç, ucu boyutu, şekli vb) birleştirmek sağlar. Bu, tüm varil daha fazla veya daha az benzer şekil ve özelliklere sahip standart çok elektrotlar üzerinde önemli bir avantajdır. Multibarrel electrodes ilk 40 yıl önce 1-3 tanıtıldı ve piggy-back türü 1980&#39;lerde 4,5 tanıtıldı kadar tasarım geliştirmeleri 2,3 bir dizi uğramıştır. Burada az zarar nispeten ince elektrot şaftının nedeniyle vivo hayvan hazırlıkları bozulmamış derin beyin penetrasyon için izin piggy-back elektrotlar laboratuvar üretiminde önemli iyileştirmeler bir dizi sunuyoruz. Bundan başka, bu elektrotların düşük ses kayıtları ile karakterize olan ve arzu edilen farmakolojik maddelerin çok etkili bir iyontoforez için düşük dirençli bir ilaç varil sahiptir.

Bu deneyde, glisin reseptör antagonisti striknin hidroklorid iontophoretically uygulanmıştır. Tipik glycinergic inhibisyon Engelleme nöronların ateşleme artar. Şekil 4 yanıtları hayvanın kulakları teslim artan yoğunluk sinüzoidal ses uyaranlara kaydedildi işitsel bir nörondan örnek verileri gösterir. Bir deneme Bu tür nöronun boşaltma hızı vs yoğunluk fonksiyonu olarak ifade edilir. Yüksek sesle sesleri yüksek başak oranları (siyah eğri) sonuçlandı. Bu deney sırasında kullanılan başlangıç ​​iyontoforez akım 15 nA oldu. Mevcut açık ve oran yoğunluğu fonksiyonunda değişiklikler, yeni bir seviyeye (koyu mavi eğri) stabilize ettikten sonra, ejeksiyon akım giderek 30, 45 ölçüde ve 60 nA (turuncu, yeşil ve mavi ışık eğrileri, sırasıyla). Her bir durumda, ses yoğunlukları aynı aralığı boyunca nöronun yanıtları boşalmış olan değişikliklerden sonra kaydedildiyeni çıkarma akımına yanıt olarak rge-kur yoğunluk fonksiyonları stabilize vardı. Geçerli bu seviyeleri artık farklı nöronun yanıtları değiştirebilir çünkü bu örnekte kullanılacak mevcut en uygun fırlatma 45 nA 60 nA oldu. Bu sonuç, 45 mevcut nA de, bu nöronların her glisin reseptörlerine zaten striknin hidroklorür tarafından bloke edildiğini düşündürmektedir. Ejeksiyon akım ve bırakmadan daha striknin herhangi başka bir artış nöronun deşarj oranı düzey işlevi bir başka değişikliğe yol açmamıştır. Protokol tamamlanmasından sonra, püskürtme akım kapatılmış. Başlangıç ​​noktasına geri nöral yanıtların kurtarma yaklaşık 25 dk (kırmızı çizgi) sonra elde edildi. Bu işlem birkaç saniye ile birkaç on dakika arasında, püskürtülen ilaç tipi ve miktarına bağlı olarak, alabilir. <table border="1"><tbody><tr><td> Ilaç </td><td> Konsantrasyon </td><td> çözelti pH&#39;ı </td><td> Çözücü </td><td> Şirket </td><td> Kedi. # </td><td> Tipik Tutma Güncel </td><td> Tipik Ejeksiyon Akımlar </td></tr><tr><td> GABA </td><td> 500 mM </td><td> 3.5-4.0 </td><td> dH 2 O </td><td> Sigma </td><td> A-2129 </td><td> -15 NA </td><td> +100 NA +5 nA </td></tr><tr><td> Glisin </td><td> 100 mM </td><td> 3.5-4.0 </td><td> dH 2 O </td><td> Sigma </td><td> G-7126 </td><td> -15 NA </td><td> +100 NA +5 nA </td></tr><tr><td> Bicuculline metiyodit </td><td> 10 mM </td><td> 3.0 </td><td> DH 2 O 0.165 M NaCl </td><td> Sigma </td><td> B-6889 </td><td> -15 NA </td><td> +5 NA +60 nA </td></tr><tr><td> Striknin hidroklorür </td><td> 10 mM </td><td> 3.0 </td><td> DH 2 O 0.165 M NaCl </td><td> Sigma </td><td> S-8753 </td><td> -15 NA </td><td> +5 NA +80 nA </td></tr><tr><td> L-glutamik asit </td><td> 500 mM </td><td> 8 </td><td> dH 2 O </td><td> Sigma </td><td> G-1251 </td><td> +30 NA </td><td> -10 NA -150 nA </td></tr><tr><td> L-Aspartik Asit </td><td> 500 mM </td><td> 8 </td><td> dH 2 O </td><td> Sigma </td><td> A-8949 </td><td> +30 NA </td><td> -10 NA -150 nA </td></tr><tr><td> Kainik Asit </td><td> 1 mM </td><td> 9.0 </td><td> dH 2 O </td><td> Sigma </td><td> K-0250 </td><td> +30 NA </td><td> -100 NA için-10nA </td></tr></tbody></table> Çözme ve konsantrasyon için pH Tablo 1. Yaygın olarak kullanılan ilaçlar. Tablo iyontoforez birlikte kullanılan en yaygın olarak kullanılan sinaptik agonistleri ve antagonistleri listeler. PH ortamı t kutuplaştırmaya ihtiyacı için hesaplar listelenir<html> Hese ajanlar ve farklı uyuşturucular arasındaki etkinliği değişkenlik için önerilen konsantrasyon hesapları. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4358/4358fig1.jpg" /> Şekil 1. Farklı uç uzunlukları ile Üç multibarrel pipetler A:. Bu 5 varil elektrot ucu çok uzun ve ince çekilmiş. Ucu bükülmüş ve çok yumuşak olduğunu unutmayın. Bu tür uç istenilen çapa kırmak için çok zordur. B: Bu elektrot ucu çok kısa ve küt olduğunu. Derin beyin alanları içine ilerletilir, bu elektrot elektrot sadece birkaç milimetre ucu sonra nispeten kalın olur olmasından dolayı gereksiz yere beyin hasarına neden olur. C: Bir doğru çekti ucu ile bir elektrot bir örnek. Uzun ve ince olurken, ucu hala sağlam ve istenen uç çapına kolayca kırılmış olabilir. Güre 2 &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/4358/4358fig2.jpg &quot;/&gt; Şekil 2. Elektrot manipülatör montaj çizimi. Manipülatör montaj piggy-back elektrotlar monte etmek için, mikroskop ile birlikte kullanılır. Gri renkli işaretlenmiş ürünler piyasada bulunan ürünleri ve Tablo 2&#39;de listelenmiştir. Maviyle işaretli ürünler özel bizim kurumun makine atölyesi de işlendi. 2) isteğe bağlı açı düzeneğin devirme tertibatı, bir devirme aşama;, 3) Şekiller 1/4 inç çelik levha büyüklüğünde 43x26 Newport tarafından sağlanan delik kalıp göre bunun içine delinmiş Newport aşama 423 için delikler ile cm) 1 olduğu üst öteleme sahneye elektrod tutucu bağlar konektörü. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4358/4358fig3.jpg" /> Şekil 3,. Bir örnek piggy-back elektrot Foto. Bir tek varil kayıt el ile birlikte monte A mamul 5 namlulu elektrotectrode. Bir derin beyin kayıtları için izin verilmesi konusunda 7mm uzun şaft unutmayın. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/4358/4358fig4.jpg" /> Şekil 4. Ejeksiyon akımların Titrasyon. Grafiği hayvanın kulakları değişik yoğunlukta tonları ile stimüle ederken tek bir işitsel nörondan Kaydedilen hızı yoğunluk fonksiyonlarını gösterir. Yüksek sesle sesleri yüksek ateş oranları ortaya eğiliminde. Ilaç uygulamasından önce, nöronun oranı-şiddet fonksiyon düşük başak oranları (siyah eğri) gösterdi. Giderek daha yüksek ejeksiyon akımların giderek daha yüksek atış oranları ile sonuçlanan, nöron da giderek daha glisin reseptörleri bloke. Bu nöron mevcut optimum ejeksiyon 45-60 nA oldu. Bu çıkarma akımları ile, tüm nöronun glisin reseptörlerinde tam tıkanma elde edildi. Deneysel protokol tamamlanmasından sonra, iyontoforez sonlandırıldı ve nöron izin verildikurtarabilirsiniz. Iyileşme oranı yoğunluk fonksiyonu ilk ön-ilaç kurtarma işlevi eşleşen zaman tam iyileşme sağlandı. Klug ve ark, 1995 Amerikan Fizyoloji Derneği&#39;nin izni ile, yayınlanmıştır.

Ekstrasellüler sırasında nöral agonistleri ve antagonistleri İyontoforez<em&gt; In vivo</em&gt; Kayıtları bir nöronun mikroçevrede işlemek için güçlü bir yoldur. Bu manipülasyonlar en kolay piggy-back multibarrel elektrotlar aracılığıyla yapılabilir. İşte biz onları üretmek ve işitsel kayıtları sırasında onlara nasıl kullanılacağı açıklanmıştır.

Için Multibarrel Elektrodları Üretim ve Piggy-back kullanma<em&gt; In vivo</emSinir Cevaplarının&gt; Farmakolojik Çarpıtmalar

Tekil nöronlardan alınan in vivo kayıtlar, araştırmacının, örneğin duyusal uyaranlara yanıt olarak nöronların ateşleme özelliklerini incelemesine olanak tanır. ...

Bu prosedür, nöral aktivite eş zamanlı olarak kaydedilirken beyindeki mikrodevrelere farmakolojik ajanların ionaporetik olarak uygulanmasını amaçlamaktadır. İlk olarak, tek hücre kayıtları için tek kanallı bir cam elektrot çekin ve ucunu bükün. Ayrıca, çok kanallı bir cam elektrot çekin ve ucunu istenen çapta kırın.İki elektrotun montajına geçin. Nihayetinde, üretilen elektrot, talep edildiğinde nöral mikrodireleri manipüle etmek için farmakolojik ajanların ontik olarak uygulanabildiği hücre dışı in vivo kayıtlar için kullanılır. Merhaba, benim adım Dr. Achim Klu ve laboratuvarımız bugün size piggyback çok kanallı elektrotların nasıl üretileceğini gösterecek.Bu elektrotlar, nöronal agonistlerin ve antagonistlerin bir nöronun mikro çevresine iyonofor yoluyla iletilmesi ve böylece bir nöronun nöral devrelerinin in vivo olarak manipüle edilmesi için kullanılabilir. Merhaba, ben Dr. An Zillow. Dr. Ah him Crow'un laboratuvarında doktora sonrası araştırmacıyım ve bugün prosedürü ben göstereceğim. Tek kanallı bir elektrot için, filamanlı tek kanallı bir cam kapiler kullanın ve ucu yaklaşık 1 ila 2 µm çapında ve 10 ila 12 mm şaft uzunluğunda olacak şekilde çekin.Çekilen elektrotların direncini, bunları üç molar sodyum klorür ile doldurup standart bir O metre ile %0,9'luk salinde test ederek ara ara doğrulayın. Elektrot tuz çözeltisiyle doldurulduğunda, çözelti hızla kurur ve elektrodu kullanılamaz hale getirir. Bu nedenle, yalnızca bu testi gerçekleştirin.Piggyback üretimi için kullanılmayacak olan bazı elektrotları çekin. Tam bir çok gövdeli elektrot oluşturmak için, camı toplam çapı yaklaşık 10 micrometers veya daha az olacak bir pipet ucuna kadar çekin. Doğru şekilde çekilmiş bir uca sahip elektrot, başarının kritik noktasıdır.Ucun uzun ve ince olmasının yanı sıra, hala sert olması ve istenen uç çapına kolayca kırılabilmesi gerekir. Uç, bir sonraki adımda doğru çapta kırılacaktır. Bu nedenle, havuzlama işlemi sırasında kesin uç boyutundan ziyade, uzun ve nispeten ince olması gereken elektrot ucunun genel şekli daha kritiktir.Şimdi, tek kanallı elektrodu yaklaşık 45 derecelik açıyla, ucu aşağıya bakacak şekilde tutun ve alevin içinden nispeten hızlıca geçirin. Alevin, elektrot ucundan yaklaşık 10 mm uzaklıktaki geçiş bölgesinde camı eriterek yaklaşık 20 derecelik bir büküm yapmasını sağlayın. Çok kanallı elektrodu, bir lam üzerindeki modelleme kili yatağına yerleştirin ve ardından mikroskop tablasına yerleştirin.Lam tutucu Mikroskop tablasının XY manipülatörlerini kullanarak, elektrot ucunu yavaşça pleksiglas parçaya doğru hareket ettirin. Ucun kırılmasını mikroskop okülerleri aracılığıyla gözlemleyin. Elektrot düzenek kurulumu burada gösterilmiştir.Çok kanallı elektrot, mikroskop tablası üzerindeki bir lam üzerinde tutulur. Tek kanallı elektrot ise, kullanıcının tek kanallı pipeti çok kanallı pipet üzerine yüksek hassasiyetle indirmesine olanak tanıyan manuel, çok eksenli bir manipülatör tarafından tutulur. Tek kanallı elektrodu, ucu çok kanallı ucun ucundan yaklaşık beş ila 10 mikrometre kadar dışarı çıkacak şekilde, beş kanalın dizilimiyle oluşan çok kanallı elektrodun oluğuna doğrudan indirin.İki elektrodun şaftlarını siyanoakrilat kullanarak birbirine yapıştırın. Uçların en distal konumundan başlayarak, ucunda bir damla yapıştırıcı bulunan bir kürdanı elektrod şaftları boyunca elektrod uçlarına doğru yavaşça hareket ettirin. Yapıştırıcının elektrod uçlarına çok yakın uygulanması uçların tıkanmasına neden olacak ve elektrodu en azından kısmen işlevsiz hale getirecektir.Küçük bir miktar dental siman karıştırın. Kuruması için yaklaşık 15 dakika bekleyin. Ardından, tamamlanmış piggyback elektrodu dikkatlice çıkarın.Önce mikro manipülatör tutucusundan, ardından cam lamdan ayırın. Elektrodu kullanmadan hemen önce, her bir namluyu ilgili ilaçla geri doldurmaya hazır hale getirin. Beş namlulu konfigürasyonun dıştaki dört namlusunu seçilen dört ilaçla, merkez namlusunu ise dengeleme namlusu olarak 3 M sodyum klorür ile doldurun.Ardından, tek gövdeli kayıt elektrodunu üç molar sodyum klorür ile doldurun. Şimdi iyon pheresis pompa modüllerini açın ve tüm gövdeleri test edin. Her bir pompa modülünün elektrot test fonksiyonu, elektrot gövdesinin derin beyin kayıtları için işlevsel olup olmadığını belirlemeye yardımcı olacaktır.Tekli bir kayıt elektroduyla birlikte monte edilmiş tamamlanmış beş kanallı bir elektrot, yaklaşık yedi milimetrelik uzun bir şafta sahiptir. İontoforez ile birlikte genellikle, glisin reseptör antagonistleri gibi ilaçlarla glisin inhibisyonunu bloke eden çeşitli sinaptik agonistler ve antagonistler kullanılır. Trick nine hydrochloride tipik olarak nöronlarda ateşlemeyi artırır.Bu örnek veri, bir işitsel nöronun boşalma hızı ile yoğunluk fonksiyonunu ölçmekte ve hayvanın kulaklarına iletilen, artan yoğunluktaki sinüzoidal ses uyaranlarına verilen yanıtları göstermektedir. Daha yüksek sesler, kesin dokuz uygulaması öncesinde daha yüksek spike hızlarıyla sonuçlanmıştır. Nöronların hız-yoğunluk fonksiyonu düşük spike hızları göstermektedir.15 nano amp seviyesinde başlangıç bir iontoforez akımının uygulanması, ejeksiyon akımında hafif bir artışı stimüle eder. Kademeli olarak yükselen ejeksiyon akımları, nörondaki glisin reseptörlerini giderek daha fazla bloke ederek kademeli olarak daha yüksek ateşleme hızlarına yol açar. 45 nano amp akımda, söz konusu nöronun tüm glisin reseptörleri striktinin hidroklorür tarafından bloke edilmiş görünmektedir.Ejeksiyon akımının daha fazla artırılması ve daha fazla nikotin salınması herhangi bir ek değişikliğe yol açmamıştır. İontoforezin sona ermesinden sonra nöronların boşalma hızı seviye fonksiyonunda, sinirsel yanıtların bazal seviyeye tamamen geri dönmesi yaklaşık 25 dakika sonra gerçekleşir. Bu geri kazanım süreci, ejekte edilen ilacın türüne ve miktarına bağlıdır.Ferre ilacının kayıt alanının çevresine difüzyonla yayılacağını ve komşu nöronlardaki reseptörleri de bloke edebileceğini unutmamak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, düşük gürültülü derin beyin kayıtları elde etmek için kayıt elektrodunu çok kanallı bir ilaç elektroduna nasıl entegre edeceğiniz ve dört farklı farmakolojik ajana kadar zaman kontrollü uygulama yapma yöntemleri hakkında kapsamlı bir bilgiye sahip olmalısınız.

manufacturing-using-piggy-back-multibarrel-electrodes-for-vivo

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Elektrot İmalat ve İmplantasyon Aplysia californica Bozulmamış, Serbestçe Behaving Hayvanlar Çok kanallı Sinir ve Kas Kayıtlar

Davranışın nöral substratlarını anlamak, beyin devresi topluluğu kaydını gerektirir. Genetik izlenebilirliği nedeniyle, fare devre diseksiyonu ve hastalık taklidi için bir model sunar. Burada, farede derin beyin yapısını hedeflemek için uygun olan minyatür probların tasarlanması ve üretilmesi için bir yöntem açıklanmaktadır.

Farelerde Elektrofizyolojik Recordings Tasarım ve Ultralight Ağırlık Fabrikasyon, Ayarlanabilir Çoklu elektrot Probları

Beyin dokusundaki iyon konsantrasyonlarının ölçümü için iki tip iyon seçici mikroelektrotun (çift namlulu ve eş merkezli) üretimini, kalibrasyonunu ve özelliklerini gösteriyoruz. Bunlar daha sonra uyarıcı aktivitenin hem hücre dışı potasyum hem de sodyum konsantrasyonlarını değiştirdiğini göstermek için fare hipokampal dilim hazırlığında kullanılır.

Beyin Dokusu Ölçme Ekstraselüler Ion Sinyalleri için Çift namlulu ve Konsantrik Mikroelektronlar

Uyanık farelerde hücre dışı nöral aktiviteyi aynı anda kaydetmek ve kayıt bölgelerinin yakınında birden fazla nöroaktif madde salmak için elektrotların yapımı için yöntemler sunuyoruz. Bu teknik, ilgilenilen nörona varsayılan yerel sinaptik girdilerin ayrıntılı analizine izin verir.

Uyanık Farelerde Nöroaktif Maddelerin Microiontophoretic Uygulaması ile birlikte Nöronal Faaliyet dışı Kaydı

Bu çalışmada domuz yavruları. vivo nörotransmitter etkinliğini izlemek için elektrot enzim tabanlı dizi (MEA) teknoloji romanı kullanımı araştırıyor Hipotez o Glutamat bozukluk anestezik nörotoksisite mekanizmasına katkıda olduğunu. Burada, MEA teknoloji anestezi kaynaklı nörotoksisite mekanizması çalışmaya uyum için bir protokol mevcut.

Elektrot dizi teknoloji adaptasyon anestezi kaynaklı nörotoksisite sağlam Piglet beyinde incelenmesi için

Kafes elektronik sonda sorunsuz bir şekilde entegre ve beyin içinde kayıt istikrarlı, uzun vadeli, tek-nöron düzeyi sağlar. Vivo deneyler, kafes elektronik, iğneler, stereotaksik enjeksiyon, giriş/çıkış arabirim, kayıt deneyler ve histoloji kafes içeren doku yükleme imalatı içeren için kafes elektronik bu protokolü kullanır sondalar.

Stabil Kronik kemirgen Elektrofizyoloji için şırınga enjekte edilebilir Mesh elektronik

Nano-mimarinin intrakortikal mikroelektrot cihazlarına aşındırmalarının inflamatuar yanıtı azaltabileceğini ve elektrofizyolojik kayıtları iyileştirme potansiyeline sahip olduğunu gösterdik. Burada açıklanan yöntemler, nano-mimarileri işlevsel olmayan ve fonksiyonel tek saplı silikon intrakortikal mikroelektrotların yüzeyine aşındırmak için bir yaklaşımı ortaya çıkarmaktadır.

Etch Nano mimarilerine mikroelektrotlara odaklanmış iyon ışını Litografisi

Bu protokol, birden fazla beyin bölgesinden fare(Mus musculus)ve gelincikte(Mustela putorius furo) kronik ve akut in vivo elektrofizyolojik kayıtlar için karbon fiber mikroelektrod dizileri oluşturmak için bir prosedür açıklanmaktadır. Mikroelekrod dizisi implantasyonuna ham karbon fiberlerin satın alınmasını takiben atılan her adım, mikroelekrod dizisi yapımına vurgu yaparak ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Kronik ve Akut In Vivo Kayıtlar için Karbon Fiber Mikroelekrod Dizilerinin yapımı ve uygulanması

Burada, bir minipig modelinde yumuşak subdural elektrot dizilerinin uzun süreli performans ve güvenlik değerlendirmesi için cerrahi yöntem ve araçları, postoperatif manyetik rezonans görüntülemeyi, işitsel korteksin elektrofizyolojisini, implantın elektrokimyasal özelliklerini ve postmortem immünokimyayı açıklayan bir yöntem sunuyoruz.

Minipiglerde Subdural Yumuşak Elektrokortikografi (ECoG) Dizisi İmplantasyonu ve Uzun Süreli Kortikal Kayıt

Amacımız, epimisyal elektromiyografi elektrotlarının üretimi ve test edilmesi hakkında güncellenmiş, takip etmesi kolay bir kılavuz sağlamaktı. Bu amaçla, malzeme tedariki için talimatlar ve üretim ve test sürecinin ayrıntılı bir incelemesini sağlıyoruz.

Düşük Maliyetli Bir Epimisyal Elektromiyografi Elektrodunun Geliştirilmesi: Üretim ve Test için Basitleştirilmiş Bir İş Akışı

Öğrenin piggy-back çoklu elektrot üretimini ve in vivo farmakolojik uygulamaları. Bu yöntemle sinir devrelerini manipüle ederken nöron aktivitesini kaydedebilirsiniz.

Için Multibarrel Elektrodları Üretim ve Piggy-back kullanma

Daha fazla video keşfet