Name: Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda lazer Doppler akış ölçümü ile endotelin-1 kaynaklı orta serebral arter tıkanıklığı modelini. Bu yöntem, iskemik inme araştırmalarında hızlı ve daha az invaziv cerrahi avantajı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Amerikan Kalp Derneği Büyükşehir Güneydoğu Ortaklık (09GRNT2060421), Amerikan Tıp Derneği, ve Florida Klinik ve Translational Bilim Enstitüsü Üniversitesi bağışları ile desteklenmiştir. Adam Mekke bir NIH / NINDS, NRSA predoctoral fellow (F30 NS-060335) &#39;dir. Robert Regenhardt Hipertansiyon Florida Multidisipliner Eğitim Programı Üniversitesi (T32 HL-083810) den predoctoral burs desteğini aldı.

Bu protokol Florida Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (IACUC) tarafından onaylanmış ve uygun olduğunu &quot;Bakım Rehberi ve Laboratuvar Hayvanlarının Kullanımı&quot; (sekizinci baskı, Ulusal Bilimler Akademisi, 2011) oldu. Malzemeler <ol><li> Hayvanlar: Ameliyat sırasında 250-300 g Sekiz haftalık, erkek, Sprague Dawley sıçan (Charles River Çiftlikler, Wilmington, ABD MA). </li><li> Anestezi <ol class="lalpha"><li> İnhalasyon anestezi sistemi (VetEquip A.Ş., Pleasanton, CA, USA) </li><li> Izofluran anestezi (Baxter İlaç sanayii, Deerfield, IL, ABD) </li></ol></li><li> Stereotaksik sistemi (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Küçük hayvan stereotaksik sistemi </li><li> Sıçanlarda Non-rüptürü kulak çubukları </li><li> Sıçanlar için gaz anestezi kafa tutucu </li></ol></li><li> Sıcaklık ayarı<ol class="lalpha"><li> BAT-12 mikroprob termometre (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD) </li><li> T / POMPA, TP600 Termal battaniye (Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, NY, ABD) </li></ol></li><li> Cerrahi aletler <ol class="lalpha"><li> Bisturi sapı ve 11. bıçak, iris forseps, Graefe forseps, tornavida bulldog klemp Retraktörler, 26 ayar eğimli iğne (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, USA) 10 ul şırınga </li><li> Mikromotor matkap ve stereotaksik tutucu, Quintessential Stereotaksik Enjektör (Stoelting, Wood Dale, IL, ABD) </li><li> 1,0 mm yuvarlak matkap bur, 1,0 mm ters koni matkap frez (Roboz Cerrahi Instrument Co, Inc, Gaithersburg, MD, USA) </li></ol></li><li> Cerrahi Malzemeleri <ol class="lalpha"><li> 2.4 mm şaft uzunluğu, 21-gauge kılavuz kanül [uzun kaide altında 4mm] ve kanül kukla (Plastik biri Roanoke vidalar 0-80 X 3/32 Montaj, VA, USA) </li><li> Jet protez akrilik ve sıvı (Lang Diş Manufacturing Co, Inc, Wheeling, IL, ABD) </li><li> 3,0 naylon sütür (Oasis, Mettawa, IL, ABD) </li><li> Pamuklu çubuklar, Puralube göz merhemi (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA) </li><li> Elektrikli saç kesme makineleri (Oster, Providence, RI, ABD) </li></ol></li><li> Kimyasallar <ol class="lalpha"><li> Endotelin-1 (Amerikan Peptid, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Klorheksidin% 2 (Agrilabs, Joseph, MO, ABD) </li><li> Buprenorfin HCl (Hospira Inc, Lake Forest, IL, ABD) </li></ol></li><li> Görselleştirme Ekipmanları <ol class="lalpha"><li> Cerrahi mikroskop (Seiler Instrument ve Üretim; St Louis, MO, USA) </li><li> Fiber Optik aydınlatıcı (TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Lazer Doppler flowmetre sistemi (ADInstruments, Inc, Colorado Springs, CO, ABD) <ol class="lalpha"><li> Standard Kalem Probu </li><li> Prob tutucu </li><li> Kan Debimetre </li><li> LabChart 7 ile PowerLab 4/30 </li></ol></li><li> Infarkt hacminin ölçümü <ol class="lalpha"><li> Sıçan beyin matriks (Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, PA, USA) </li><li> 2,3,5-Triphenyftetrazoliumchlorid (Sigma-Aldrich Co, St Louis, MO, ABD), PBS içinde% 0.05 ile seyreltildi </li><li> Flatbed tarayıcı (Epson Perfection V30, Epson America, Inc, Long Beach, CA, USA) </li><li> Image J yazılımı (ImageJ 1.42q yazılım, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri, Bethesda, MA, ABD) </li></ol></li></ol> 1. Ön cerrahi Adımlar <ol><li> Ameliyat öncesinde, sıçanlar su ve kemirgen chow ücretsiz erişim ile 00:12 aydınlık / karanlık döngüsü altında yer alır. </li><li> Anestezi arka pençe çimdik çekme artık sıçan kadar bir indüksiyon odasında% 100 O 2 gaz karışımı içinde% 4 izofluran ile indüklenir. </li><li> ASeptik tekniği steril eldiven, steril cerrahi aletler, ve steril cerrahi örtü 11 kullanımı da dahil olmak üzere bu işlem sırasında devam etmelidir. </li><li> Baş tacı elektrikli saç makasları ile traş edilir. </li><li> Sıçan sıcaklık kontrollü bir çalışma yüzeyi (termal battaniye) üzerinde yatan bir emici ped üzerine yüzüstü pozisyonda yerleştirilir. </li><li> Kafa gaz anestetik yüz maskesi yerleştirilmesi ile başlayarak stereotaksik alet içine yerleştirilir. </li><li> Sonraki, kulak çubukları yerleştirilir ve sıkılır. </li><li> Prosedür anestezi sırasında% 100 O 2 gaz karışımı içinde izofluran% 2 ile korunur. </li><li> Yağlayıcı oftalmik merhem hem gözlere uygulanır ve göz kapaklarının cerrahi prosedür sırasında göz kuruma önlemek için kapatılır. </li><li> Rektal sıcaklık probu ± 0.5 ° C sıcaklıkta 37 sabit bir hayvansal çekirdek sıcaklığı korumak için eklenir </li><li> Stereotaksik sıkıca tutulan baş ilecihaz, cerrahi alanda% 2 klorheksidin ve tuzlu üç kez dönüşümlü olarak temizlenir. </li></ol> 2. Cerrahi Adımlar <ol><li> Bir neşter kullanılarak, orta hat kesi kulak (üstün ense hattı) arasına gözlerin en kaudal yönleri (nasion) den kalvaryumun örten cilt üzerinde yapılır. </li><li> Deri sonra 3 bulldog kelepçeler ile yanal geri çekilir. </li><li> Bağ dokusu çoklu yapılar açıkça görülebilir, böylece kuru pamuklu kullanarak kafatası kaldırılır. Bunlar bregma, koronal sütür ve sağ lateral kafa sırtı bulunur. Pamuklu bezler cerrahi alanında kan çıkarmak için kullanılır. </li><li> Ameliyat mikroskobu kullanarak, bregma bulunur, ve 1.0 mm boyunca matkap bur bregma de sıfır olana kadar stereotaksik manipulators ayarlanır. </li><li> Matkap frez ardından 1.6 mm ön ve bregma lateral 5,2 mm taşınır. </li><li> Kafatası nüfuz A frez deliği Cann için delinirula yerleştirme (Şekil 1). Fazla enkaz ve kan sürekli pamuklu kullanılarak temizlenir. </li></ol> Bu noktada, bir kılavuz kanül sokulabilir (adım 7) ya da bur delik aracılığıyla bir direkt ET-1, enjeksiyon (16 doğrudan adım devam) gerçekleştirilebilir. <ol start="7"><li> 3 montaj vidaları için Sonraki, bur delikleri 1,0 mm ters koni matkap frez (Şekil 1) kullanarak kafatası parsiyel kalınlıkta ile delinir. Bir delik koronal sütür ve sutur lateral 1-2 mm anterior 1-2 mm her frontal kemikte delinir. Bir delik koronal sütür ve kılavuz kanül frez deliği ipsilateral sutur lateral 2-3 mm posterior 2-3 mm kadar paryetal kemikte delinir. Üç 0-80 x 3/32 montaj vidaları bu bur deliklere yerleştirilir ve kanül tutan çimento için destek sağlayacaktır. Vidalar sadece dura matere zarar vermemeye olarak 2 veya 3 tur kadar gelişmiş olmalıdır. </li&gt; <li> Kılavuz kanül stereotaksik kanül tutucu yerleştirilir ve bregma yer almaktadır. </li><li> Kılavuz kanül bregma de sıfır olana kadar stereotaksik manipülatörleri ayarlanır. Kanül 1.6 mm ön ve bregma lateral 5,2 mm uzaklıkta frez deliği taşınır. </li><li> Son olarak, kılavuz kanül bregma ventral 4.5 mm nihai uç pozisyon ile bur delik içine indirilir. </li><li> Lazer Doppler probu yerleştirilmesi (isteğe bağlı) <ol class="lalpha"><li> LDF kullanarak serebral kan akımını izlemek için, bir prob tutucu diş çimento ile kılavuz kanül takılma öncesinde pozisyon içine yerleştirilebilir. </li><li> Prob tutucu tabanı küçük kama şeklinde sekmesi dışında kaide ile aynı hizada kesilir. </li><li> Prob tutucu sonra kılavuz kanül posterior ve medial odaklı sekmesini (Şekil 1) ile lateral kafa sırt sadece medial yerleştirilir. </li><li> Prob tutucu ve guide kanül diş çimento kullanılarak birbirine yapıştırılmıştır. </li></ol></li><li> Diş çimento sonra yerinde kanül sabitlemek için kullanılır. Çimento her üç vida ile temas halinde olan ve kanül tüm taban çevreler. </li><li> Çimento önce kanül tutucu kaldırılması için tamamen kuru olmalıdır. Bu yaklaşık 5 dakika sürer. </li></ol> Bu adımlardan sonra, cerrahi kesi kapalı olabilir ve kanül kukla kılavuz kanül içine ve vidalı olabilir. Alternatif olarak, ET-1 indüklenmiş MCAO kanül implant ameliyat sonrası iyileşme süresinden sonra sıçan üzerinde gerçekleştirilebilir. Bu yöntem için, 19 ileri yapılmalı ve adımlar 14-18 daha sonraki bir zamanda gerçekleştirilebilir. Aynı ameliyat sırasında kılavuz kanül implant ve ET-1 enjeksiyon işlemini yapmak için bir sonraki adım 14 yapılmalıdır. <ol start="14"><li> Infüzyon şırınga ET-1 ile yüklenir (PBS içinde 80 uM ile seyreltilmiş), ve daha sonra, stereotaksik enjektörü monte edilir. </li><li>İğne ucu kılavuz kanül tarafındaki ucunda sıfır olana kadar stereotaksik manipülatörleri ayarlanır. </li><li> İğne ucu kılavuz kenar kanül ventral 17.2 mm arasında bir konuma kılavuz kanül vasıtasıyla azaltılır. Bir kılavuz kanül kullanılmış ise, iğne ucu bregma de sıfırlanır ve bregma ventral bir pozisyon 8,7 mm bur delik boyunca aşağı iner. </li><li> 80 uM ET1 3 ul dakika başına 1 ul bir oranda demlenir. </li><li> Infüzyon yavaş kaldırılır sonra eksiksiz ve sonra şırınga 3 dakika boyunca yerinde kalır. </li><li> Kesi 3.0 naylon dikiş ve kanül kukla kanül içine vidalanır ile kapatılır. </li><li> Uygun analjezik dozu (0.05-0.1 mg / kg yani buprenorfin) iyileşme döneminde ağrı ve rahatsızlık en aza indirmek için ameliyat sonrası kullanılmalıdır. </li><li> Sıçan cerrahi seti kaldırılır ve yumuşak gıda ve su ücretsiz, kolay erişim, hipotermi önlemek için kuru ve sıcak bir kurtarma alanına yerleştirilir. </li&gt; </ol>

<ol><li>Stroke--1989. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+on+stroke+prevention%2C+diagnosis%2C+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke. 20, 1407-1431 (1989).</li>
<li>Lloyd-Jones, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, 480-486 (2009).</li>
<li>Mohr, J. P., Gautier, J. C., Hier, D., Stein, R. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMohr%2C+JP+%22Stroke%3A+pathophysiology%2C+diagnosis%2C+and+management%22">Stroke: pathophysiology, diagnosis, and management</a>. Barnett, H. J. M., Stein, B. M., Mohr, J. P., Yatsu, F. M. , Churchill Livingstone. New York. 377-450 (1986).</li>
<li>Robinson, M. J., Macrae, I. M., Todd, M., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+local+cerebral+blood+flow+to+pathological+levels+by+endothelin-1+applied+to+the+middle+cerebral+artery+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Reduction of local cerebral blood flow to pathological levels by endothelin-1 applied to the middle cerebral artery in the rat.</a> Neurosci. Lett. 118, 269-272 (1990).</li>
<li>Sharkey, J., Ritchie, I. M., Kelly, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+microapplication+of+endothelin-1%3A+a+new+model+of+focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Perivascular microapplication of endothelin-1: a new model of focal cerebral ischaemia in the rat.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 865-871 (1993).</li>
<li>O'Neill, M. J., Clemens, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal cerebral ischemia.</a> Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9 (Unit 9), (2001).</li>
<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia%3A+procedural+pitfalls+and+translational+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Transl.+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems.</a> Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8(2009).</li>
<li>Tomsick, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+thrombolysis+for+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Interv.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke.</a> J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).</li>
<li>Olsen, T. S., Lassen, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+concept+of+middle+cerebral+artery+occlusion+and+cerebral+infarction+in+the+acute+state+based+on+interpreting+severe+hyperemia+as+a+sign+of+embolic+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration.</a> Stroke. 15, 458-468 (1984).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586(2011).</li>
<li>Gonzalez, C. L., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+different+models+of+stroke+on+behaviour+and+brain+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology.</a> Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).</li>
<li>Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+%28MCAO%29+model+for+ischemic+stroke+with+laser+doppler+flowmetry+guidance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice.</a> J. Vis. Exp. (51), e2879(2011).</li>
<li>Sharkey, J., Butcher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+an+experimental+model+of+stroke+produced+by+intracerebral+microinjection+of+endothelin-1+adjacent+to+the+rat+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery.</a> J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).</li>
<li>Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelin-1-induced+reductions+in+cerebral+blood+flow%3A+dose+dependency%2C+time+course%2C+and+neuropathological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).</li>
<li>Fisher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+stroke+therapy+academic+industry+roundtable+preclinical+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations.</a> Stroke. 40, 2244-2250 (2009).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

ET-1 ile indüklenen MCAO düzenli birden sıçan suşları kullanılmıştır deneysel iskemik inme kurulmuş bir modeldir. Bu model 5, 14 kullanırken böyle sıçan suşu, hayvan yaşı, vücut ısısı, anestezi yöntemi ve operatör uzmanlığı gibi birçok değişken, infarkt hacimleri artan değişkenliği yol açabilir. Ancak, bazı araştırmacılar bu modelin avantajları nispeten non-invaziv yaklaşım, ET-1 ile serebral kan akımı doz yanıt, ve bilinçli sıçanlar 14, 15 ET-1 infüzyonu ile tamamen anestezi önlemek için yeteneği...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td><ol><li> Hayvanlar: Ameliyat sırasında 250-300 g Sekiz haftalık, erkek, Sprague Dawley sıçan (Charles River Çiftlikler, Wilmington, ABD MA). </li><li> Anestezi <ol class="lalpha"><li> İnhalasyon anestezi sistemi (VetEquip A.Ş., Pleasanton, CA, USA) </li><li> Izofluran anestezi (Baxter İlaç sanayii, Deerfield, IL, ABD) </li></ol></li><li> Stereotaksik sistemi (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Küçük hayvan stereotaksik sistemi </li><li> Sıçanlarda Non-rüptürü kulak çubukları </li><li> Sıçanlar için gaz anestezi kafa tutucu </li></ol></li><li> Sıcaklık ayarı <ol class="lalpha"><li> BAT-12 mikroprob termometre (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD) </li><li> T / POMPA, TP600 Termal battaniye (Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, NY, ABD) </li></ol></li><li> Cerrahi aletler <ol class="lalpha"><li> Bisturi sapı ve 11. bıçak, iris forseps, Graefe forseps, tornavida bulldog klemp Retraktörler, 26 ayar eğimli iğne (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, USA) 10 ul şırınga </li><li> Mikromotor matkap ve stereotaksik tutucu, Quintessential Stereotaksik Enjektör (Stoelting, Wood Dale, IL, ABD) </li><li> 1,0 mm yuvarlak matkap bur, 1,0 mm ters koni matkap frez (Roboz Cerrahi Instrument Co, Inc, Gaithersburg, MD, USA) </li></ol></li><li> Cerrahi Malzemeleri <ol class="lalpha"><li> 2.4 mm şaft uzunluğu, 21-gauge kılavuz kanül [uzun kaide altında 4mm] ve kanül kukla (Plastik biri, Roanoke, VA, USA) ile vidaları 0-80 X 3/32 Montaj </li><li> Jet protez akrilik ve sıvı (Lang Diş Manufacturing Co, Inc, Wheeling, IL, ABD) </li><li> 3,0 naylon sütür (Oasis, Mettawa, IL, ABD) </li><li> Pamuklu çubuklar, Puralube göz merhemi (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, ABD) </li><li> Elektrikli saç kesme makineleri (Oster, Providence, RI, ABD) </li></ol></li><li> Kimyasallar <ol class="lalpha"><li> Endotelin-1 (Amerikan Peptid, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Klorheksidin% 2 (Agrilabs, Joseph, MO, ABD) </li><li> Buprenorfin HCl (Hospira Inc, Lake Forest, IL, ABD) </li></ol></li><li> Görselleştirme Ekipmanları <ol class="lalpha"><li> Cerrahi mikroskop (Seiler Instrument ve Üretim; St Louis, MO, USA) </li><li> Fiber Optik aydınlatıcı (TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Lazer Doppler flowmetre sistemi (ADInstruments, Inc, Colorado Springs, CO, ABD) <ol class="lalpha"><li> Standart Kalem Probu </li><li> Prob tutucu </li><li> Kan Debimetre </li><li> LabChart 7 ile PowerLab 4/30 </li></ol></li><li> Infarkt hacminin ölçümü <ol class="lalpha"><li> Sıçan beyinmatriks (Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, PA, USA) </li><li> 2,3,5-Triphenyftetrazoliumchlorid (Sigma-Aldrich Co, St Louis, MO, ABD), PBS içinde% 0.05 ile seyreltildi </li><li> Flatbed tarayıcı (Epson Perfection V30, Epson America, Inc, Long Beach, CA, USA) </li><li> Image J yazılımı (ImageJ 1.42q yazılım, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri, Bethesda, MA, ABD) </li></ol></li></ol></td></tr></tbody></table>

rat lazer doppler flowmetri rehberlik ile İskemik İnme için endotelin-1 bağlı orta serebral arter tıkanıklığı modeli

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

İnme 2009 1, 2 ABD&#39;de tahmini 70000000000 $ maliyetlendirme, sakatlık ve dünyada ölüm üçüncü önde gelen nedenidir bir numaralı nedenidir. Serebral iskemi çeşitli modeller inme insanlık durumu taklit etmek için geliştirilmiştir. Bu orta serebral arter (OSA) alanında 3 iskemik hasardan tüm vuruşları sonucu% 80 o kadar ileri sürülmüştür. 1990&#39;ların başlarında, endotelin-1 (ET-1) 4 kranyotomi sonra MCA yüzeyine doğrudan doğruya bitişik uygulayarak ve iskemi indüklemek için kullanılmıştır. Daha sonra, bu model fokal serebral iskemi üretmek için MCA ET-1, bitişik bir stereotaksik enjeksiyon ile 5 modifiye edilmiştir. Bu modelin ana avantajları hızlı yordamı gerçekleştirmek için yeteneği, ET-1 dozunda değiştirerek arter daralmasına kontrol etme yeteneği teslim, beyne kan tedarik yanı sıra kademeli reperfusi ekstrakraniyal damarların işlemek gerek vardıroranları o daha yakından 5-7 insanlarda reperfüzyon taklit eder. Diğer taraftan, ET-1 model bir kranyotomi için ihtiyaç yanı sıra, inme hacim 8 daha yüksek değişkenlik aşağıdaki dezavantajları vardır. Bu değişkenlik ET-1 infüzyonu sırasında serebral iskemi doğrulamak için lazer Doppler flowmetre (LDF) kullanımı ile azaltılabilir. Strok değişkenliği etkileyen faktörler infüzyon ve ET-1 toplu hassas 6. kullanılan içerir. Başka bir önemli husus da reperfüzyon insan felç sık karşılaşılan bir durumdur ki, ET-1 indüklenmiş MCAO için tıkanma süresinin yakından, insan felç birçok hasta tıkanma 9 gün sonraki saatlik bir süre boyunca kısmi reperfüzyon kalmamıştır taklit olmayabilir 10. Bu protokol ayrıntılı sıçanlarda iskemik inme için ET-1 ile indüklenen MCAO modeli anlatacağız. Aynı zamanda işlem boyunca özel hususlar ve potansiyel sakıncaları dikkat çekecek.

1. Post-Op nörolojik değerlendirme Hayvanlarda bilinç kavuşur sonra testler çeşitli denge, kavrama kuvveti, pençe yerleştirerek, postural asimetri ve tırmanma merdiven içeren nörolojik defisitler değerlendirmek için kullanılabilir. Ayçiçeği tohumu görevi motor ve infarkt hacmi 7, 12 arasında anlamlı bir ilişki vardır duyusal fonksiyon brüt değerlendirmesidir. Açılması ve 5 ayçiçeği tohumu tüketen bu görevi sırasında, fareler zamanlanmış. Beş tohumlar boş, kuru, plastik kafesin bir kö...

Serebral iskemi Çeşitli hayvan modellerinde inme insanlık durumu simüle etmek için geliştirilmiştir. Bu protokol sıçanlarda iskemik inme için endotelin-1 (ET-1) bağlı orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli anlatılmaktadır. Buna ek olarak, önemli hususlar, avantajlar, ve bu modelin eksiklikler ele alınmaktadır.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Bu video protokolü, sıçanlarda lazer doppler inflamatuar kılavuzluğunda iskemik inme için endotelyal bir indüklenen orta serebral arter oklüzyon modelini tanımlar. Bu, gösterildiği gibi birkaç yer işaretinin gözlemlenmesi ve endotelyal olanın bir kılavuz kanül kullanılarak veya kullanılmadan bir çapak deliğinden enjekte edilmesiyle elde edilir. İnmenin insan durumunu modellemek için birden fazla serebral iskemi yöntemi geliştirilmiştir.Bir model, kraniyal tümörden sonra orta serebral artere bitişik beyin beynine güçlü bir vazokonstriktör endotelyal veya 81 enjeksiyonunu içerir. ET tek vuruşlu modelin başlıca avantajları, cerrahinin hızlı bir şekilde yapılabilmesi ve intraluminal, filament kaynaklı orta serebral arter tıkanıklığı gibi diğer modellere kıyasla daha az invaziv olmasıdır. Bununla birlikte, ET tek zamanlı modelin, kraniyotomi ihtiyacının yanı sıra vuruş hacminde daha yüksek değişkenlik gibi bazı dezavantajları vardır.Bu video, sıçanlarda iskemik inme için ET tek vuruş modelini adım adım gösterecektir. Ayrıca, bu prosedürün yaygın tuzaklarının yanı sıra birkaç özel hususu da tartışacağız. Öyleyse başlayalım.Anestezi, bir indüksiyon odasında oksijende% 4 ISO flor ile indüklenir ve% 2'de tutulur. Sıçan uyuşturulduktan sonra, saçlar elektrikli saç kesme makineleri ile başın tepesinden çıkarılır. Sıçan daha sonra, başı stereotaktik aparata yerleştirilmiş, sıcaklık kontrollü bir çalışma yüzeyinde yatan bir gazlı bez üzerinde yüzüstü pozisyonda yerleştirilir. Kulak çubukları daha sonra sıkılır ve ayarlanır.Kayganlaştırıcı oftalmik Merhem, göz kurumasını önlemek için her iki göze de uygulanır. Cerrahi İşlem sırasında kafa derisi daha sonra klorheksidin solüsyonu ve steril tuzlu su ile temizlenir. Kalvaryumun üzerindeki deride, gözlerin en rahat yönleri arasından kulakların arasına kadar orta hat kesisi yapılır.Daha sonra cilt yanal olarak geri çekilir. Kuru pamuklu çubuklar, bağ dokusunu yanal olarak hareket ettirmek için kullanılır, bu nedenle burada gösterildiği gibi kemikli yer işaretleri gözlemlenebilir. Matkap daha sonra 1.6 milimetre ön ve 5.2 milimetre yanal göreceli toremaya hareket ettirilir.Daha sonra bu konumda, dura materyale zarar vermeden kafatasına nüfuz etmesi gereken küçük bir frez deliği açılır. Daha sonra, birbirinden ayrılmış üç sığ delik açmak için matkap yaklaşık üç ila dört milimetre uzağa hareket ettirilir. Bu, Üç montaj ankraj vidası için yerleştirme görevi görecek, kılavuz kanülde çimento tutma için destek sağlayacak üç montaj vidasını kısmen vidalayın.Paslanmaz çelik 21 gauge kılavuz. Kanül daha sonra bgma'nın 4,5 milimetre altındaki frez deliğine yerleştirilir. Bir lazer Doppler fotometri prob tutucusu daha sonra kılavuz kanülün hemen arkasına ve lateral kafatasının medialine yerleştirilir.Ridge Dental çimentosu kanülü ve prob tutucuyu yerinde sabitlemek için kullanılır. Çimentoyu üç vidayla da temas edecek şekilde şekillendirmek önemlidir, Deriden kaçınarak. Stereotaktik Kol ataşmanı daha sonra çimento tamamen kuruduktan sonra çıkarılır.Orta serebral arter kan akışını kaydetmek için. Daha sonra prob tutucusuna bir lazer doppler enflamatuar prob yerleştirilir. 26 gauge Hamilton şırınga, taze 80 mikromolar endotelyal şırınga ile doldurulur ve otomatik bir enjeksiyon pompasına yüklenir.Stereo atakları kullanarak, Hamilton şırınga iğnesi, kılavuz kanülün kenarına değene kadar indirilir. İğne daha sonra kılavuz kanül ve üç mikrolitre endotel aracılığıyla ventral olarak 17.2 milimetre indirilir. Biri, lazer doppler fotometrisi kullanılarak dakikada bir mikrolitre oranında enjekte edilir.Kan akışının taban çizgisine göre %50'den fazla azaldığını görebilirsiniz. Zamanla birkaç dakika sonra, kademeli olarak temel değere doğru geri döner. Enjeksiyon tamamlandıktan birkaç dakika sonra, iğne kılavuz kanülden nazikçe çekilir.Son olarak yara dikişle kapatılır ve kanül kapatılır. İnme Açığının derecesini değerlendirmek için farklı nörolojik muayeneler yapılabilir. Bu, ayçiçeği çekirdeği yeme görevine bir örnektir.Sıçanlar, hem beş tohum tüketmeleri için geçen süre hem de geride kalan kabuk parçalarının sayısı açısından değerlendirilir. Daha fazla inme açığı olan sıçanlar tohumları daha yavaş tüketecek ve geride daha fazla kabuk parçası bırakacaktır. Nörolojik muayenelere ek olarak, enfarktüs hacmi, ekrandaki adreste bulunabilen ayrı bir video protokolünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi TTC boyama kullanılarak da değerlendirilebilir.ET ile indüklenen orta serebral arter tıkanıklığı, murin türlerinde düzenli olarak kullanılan bir iskemik inme modelidir. Bu yöntem, insan insanlarındakini daha yakından taklit eden ani reperfüzyonun aksine, verilen ve kademeli olarak verilen ET dozunu değiştirerek arter daralmasının kontrolüne izin verir. Reperfüzyon insan inmesinde sık görülen bir olay olmasına rağmen, ET ile indüklenen orta serebral arter tıkanıklığı için reperfüzyon, çoğu hastanın en azından kısmi reperfüzyona sahip olduğu insan inmesini yakından taklit etmeyebilir, ancak oklüzyonu takip eden saatler ila günler boyunca devam edebilir.ET tek vuruş yönteminin bir diğer dezavantajı, sıçan suşu, yaş ağırlığı ve operatör uzmanlığı gibi birçok değişkenin tutarsızlığa ve enfarktüs hacimlerine yol açabilmesidir. Bununla birlikte, bu değişkenlik, ET bir infüzyon sırasında serebral iskemiyi doğrulamak için lazer doppler akış ağacının kullanılmasıyla azaltılabilir. Son olarak, ET ile indüklenen orta serebral arter tıkanıklığı sırasındaki hızlı daralma ve kademeli reperfüzyon, subaraknoid kanamayı takiben görülen vazospazmı yakından taklit edebilir.Bu nedenle, bu model vazospazm olayları sırasında ortaya çıkan iskemiyi incelemek için de yararlı bir araç olabilir. Umarız bu videoyu faydalı bulmuşsunuzdur ve deneylerinizde iyi şanslar.

endothelin-1-induced-middle-cerebral-artery-occlusion-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Sıçan iskemik beyin hasarı Cerrahi indüksiyon inme araştırma için yaygın olarak kullanılan bir model. Burada orta serebral arter oklüzyonu ile fokal serebral iskemi indüksiyon göstermektedir. Histolojik boyama ve manyetik rezonans görüntüleme ile enfarkt Görselleştirme de gösterilir.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Intraluminal orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli deneysel iskemik inme modelleri arasında en sık kullanılan model. Burada Lazer Doppler flowmetre kılavuzu ile ayrıntılı olarak tüm model ve onun temsilcisi sonuçları gösterecektir.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Bu makalede, orta serebral arterin proksimal bölümlerini görüntülemek için temporal kraniektomi kullanılarak kranyal pencereden sıçan serebral arterlerin görüntülenmesi için bir yöntem açıklanır...

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Serebral perfüzyon izleme iskemik inme modelleri doğruluğunu geliştirmek için gösterilmiştir. Teknik zorluklar sıklıkla serebrovasküler araştırma için bu önemli aracının kullanımını sınırlamak. Bu videoda, optimize edilmiş bir sistem sıçanlarda intraluminal orta serebral arter oklüzyonu sırasında tek veya çoklu-site hemodinamik izleme elde etmek gösterilmiştir.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

Burada, basit dikişler ve bir kelepçe kullanarak geçici bilateral ortak karotis arter tıkanma ile retina iskemisinin bir fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, kardiyovasküler anormalliklerin neden olduğu retina iskemisinin patolojik mekanizmalarını anlamak için yararlı olabilir.

Geçici Bilateral Ortak Karotid Arter Tıkanması sonucu İndüklenen İskemik Retina Yaralanmasının Murine Modeli

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Mevcut protokol, serebral damarların anatomik yapısını hasara neden olmadan koruyan bir orta serebral arter oklüzyonu/reperfüzyonu sıçan modelini tanımlar.

Serebral damarların anatomik yapısına zarar vermeden orta serebral arter tıkanıklığı/reperfüzyonunun bir sıçan modeli

Bu protokol, araştırmacıların modifiye Longa eksternal karotis arter yöntemini kullanarak fareler üzerinde orta serebral arter oklüzyon prosedürünü gerçekleştirmeleri için adım adım bir kılavuz sunar. Bu makalede sunulan modifikasyonlar orta serebral arter oklüzyonunun doğruluğunu arttırmayı ve tam reperfüzyonu sağlamayı amaçlamaktadır.

Longa Orta Serebral Arter Oklüzyon Yönteminin Tam Reperfüzyon için Optimizasyonu

Burada, geçici MCA oklüzyonu sırasında kan akışını değerlendirmek için lazer Doppler probunun, sıçanlar ve fareler için uygun bir periorbital konum olan orta serebral arterin (MCA) distal bölgesi üzerine kafatasına yerleştirilmesini içeren minimal invaziv bir cerrahi prosedür gösterilmektedir.

Kemirgen Modellerinde Orta Serebral Arter Oklüzyonu Öncesi Serebral Kan Akışının İzlenmesi için Bir Lazer Doppler Probunun Periorbital Yerleştirilmesi

Bu protokol, ortak karotis arter yoluyla orta serebral arter oklüzyonu reperfüzyonu için hazırlık sürecini tanımlar.

Orta Serebral Arter Oklüzyonu Reperfüzyonu için Modifiye Bir Model Hazırlığı

Öğrenin, sıçanlarda lazer Doppler akış ölçümü ile endotelin-1 kaynaklı orta serebral arter tıkanıklığı modelini. Bu yöntem, iskemik inme araştırmalarında hızlı ve daha az invaziv cerrahi avantajı sunar.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Daha fazla video keşfet