Name: Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Öğrenin, kranial pencere tekniğiyle sıçan orta serebral arterini görselleştirmeyi ve endotelin-1 ile indüklenen tıkanıklıkta damar çapı değişikliklerini nicelendirmeyi. Bu yöntem in vivo serebrovasküler reaktivite araştırmaları için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Amerikan Kalp Derneği Büyükşehir Güneydoğu Ortaklık (09GRNT2060421), Amerikan Tıp Derneği, ve Florida Klinik ve Translational Bilim Enstitüsü Üniversitesi bağışları ile desteklenmiştir. Adam Mekke bir NIH / NINDS, NRSA predoctoral fellow (F30 NS-060335) &#39;dir. Robert Regenhardt Hipertansiyon Florida Multidisipliner Eğitim Programı Üniversitesi (T32 HL-083810) den predoctoral burs desteğini aldı.

Bu protokol Florida Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (IACUC) tarafından onaylanmış ve uygun olduğunu &quot;Bakım Rehberi ve Laboratuvar Hayvanlarının Kullanımı&quot; (sekizinci baskı, Ulusal Bilimler Akademisi, 2011) oldu. Malzemeler <ol><li> Hayvanlar: Ameliyat sırasında 250-300 g Sekiz haftalık, erkek, Sprague Dawley sıçan (Charles River Çiftlikler, Wilmington, ABD MA). </li><li> Anestezi <ol class="lalpha"><li> İnhalasyon anestezi sistemi (VetEquip A.Ş., Pleasanton, CA, USA) </li><li> Izofluran anestezi (Baxter İlaç sanayii, Deerfield, IL, ABD) </li></ol></li><li> Stereotaksik sistemi (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Küçük hayvan stereotaksik sistemi </li><li> Sıçanlarda Non-rüptürü kulak çubukları </li><li> Sıçanlar için gaz anestezi kafa tutucu </li></ol></li><li> Sıcaklık ayarı <ol class="lalpha"><li> BAT-12 mikroprob termometre (DünyaHassas Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD) </li><li> T / POMPA, TP600 Termal battaniye (Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, NY, ABD) </li></ol></li><li> Cerrahi aletler <ol class="lalpha"><li> Metzenbaum makas, iris forseps, bulldog klemp Retraktörler, 26 ayar eğimli iğne, Bovie koter kiti (Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, USA) 10 ul şırınga </li><li> Mikromotor matkap (Stoelting, Wood Dale, IL, ABD) </li><li> 0,8 mm yuvarlak matkap frez (Roboz Cerrahi Instrument Co, Inc, Gaithersburg, MD, USA) </li><li> STORZ Bonn kardioraphie Forseps (Bausch ve Lomb, Inc, Rochester, NY, ABD) </li></ol></li><li> Cerrahi Malzemeleri <ol class="lalpha"><li> 3,0 naylon sütür (Oasis, Mettawa, IL, ABD) </li><li> Pamuklu çubuklar, Puralube göz merhemi (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA) </li><li> Cerrahi noktaları ve şeritler (Medtronic Xomed, Inc, Jacksonville, FL, ABD) </li><li> Elektrikli saç kesme makineleri (Oster, Providence, RI, ABD) </li></ol></li&gt; <li> Kimyasallar <ol class="lalpha"><li> Endotelin-1 (Amerikan Peptid, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Klorheksidin% 2 (Agrilabs, Joseph, MO, ABD) </li></ol></li><li> Görselleştirme Ekipmanları <ol class="lalpha"><li> Cerrahi mikroskop (Seiler Instrument ve Üretim; St Louis, MO, USA) </li><li> Sony Handycam HDR-SR12 (Sony, Minato, Tokyo, Japonya) </li><li> Fiber Optik aydınlatıcı (TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Damar çapı ölçümü <ol class="lalpha"><li> VLC media player (Paris, Fransa) </li><li> Image J yazılımı (ImageJ 1.42q yazılım, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri, Bethesda, MA, ABD) </li></ol></li></ol> 1. Ön cerrahi Adımlar <ol><li> Ameliyat öncesinde, sıçanlar su ve kemirgen chow ücretsiz erişim ile 00:12 aydınlık / karanlık döngüsü altında yer alır. </li><li> Anestezi indüksiyon odasında% 100 O 2 gaz karışımı içinde izofluran% 4 ile indüklenir. </li><li> Karga<html> baş n elektrikli saç makasları ile traş edilir. </li><li> Sıçan sıcaklık kontrollü bir çalışma yüzeyi (termal paket) ve baş gaz anestetik yüz maskesi yerleştirilmesi ile başlayarak stereotaksik alet yerleştirilir yatan emici bir ped üzerinde bir yüzüstü konur. </li><li> Sonraki, kulak çubukları yerleştirilir ve sıkılır. </li><li> Prosedür anestezi sırasında% 100 O 2 gaz karışımı içinde izofluran% 2 ile korunur. </li><li> Oftalmoloji yağ merhemi hem gözlere uygulanır ve göz kapaklarının cerrahi prosedür sırasında göz kuruma önlemek için kapatılır. </li><li> Rektal sıcaklık probu ± 0.5 ° C sıcaklıkta 37 sabit bir hayvansal çekirdek sıcaklığı korumak için eklenir </li><li> Stereotaksik cihazı sıkıca tutulan anestezi sıçan baş ile cerrahi alan klorheksidin ve tuzlu üç kez dönüşümlü olarak temizlenir. </li></ol> 2. Ön kranial Pencere Hazırlama ontent &quot;&gt; Önce bir kraniyal pencere oluşturmak için, sıçan diğer gerekli donanım implantasyonu herhangi deneyler için hazırlanmalı ve gerekli cerrahi almalıdır. Bu protokolü için, biz daha önce endotelin-1 (ET-için bir kılavuz kanül implante oylandı 1) indüklenen MCAO başlıklı bir arkadaşı yayında gösterilen &quot;Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli.&quot; 3. Kranial Pencere Oluşturma Bir kılavuz kanül ve deneyler için gerekli olan ekipmanların yerleştirilmesinden sonra, bir kranyal pencere doğrudan bir vuruş prosedürü sırasında orta serebral arterin proksimal kısımları görselleştirmek için oluşturulur. <ol><li> İlk olarak, makas medial başlangıç ​​ve yanal olarak çalışan temporal kas örten cilt kesilirken için kullanılır. </li><li> Temporal kas elektrokoter kullanılarak örtülmüş ve sonra visua ila 3,0 naylon sütür kullanılarak geri çekilir<html> temporal kemiğin skuamöz kısmı lize. </li><li> Bu temporal kemik dışına yansıtır gibi bir yaklaşık 3-4 mm kare yörüngesine kaudal ve elmacık sürecinin temel üstün temporal kemiğin skuamöz kısmı çizilir. </li><li> Bir matkap kademeli olarak temporal kemik serbest kemik anahat parça kesmek için kullanılmaktadır. Bakım bu dura veya serebral kortekse zarar mümkün olduğundan matkap çok fazla baskı uygulamaktan kaçının için alınmalıdır. </li><li> Steril serum fizyolojik ile sık durular cerrahi alanın görselleştirme geliştirmek ve kafatası aşırı ısınmayı önlemek için yapılmaktadır. </li><li> Gevşek bir köşeden başlayarak, temoporal kemik parça özenle dura ile ilişkili herhangi bir gemi gözyaşı değil emin yaparken ince sıçan dişli forseps kullanılarak kaldırılır. </li><li> Dura değişmeden kalır ve enkaz steril serum fizyolojik kullanılarak uzak durulanır. </li></ol> 4. Serebral Arter Konstriksiyon kaydedilmesi gerçek zamanlı, ET-1 ile indüklenen MCAO geçiyor bir sıçan görüntüleri yakalamak için nasıl göstermek için çadır &quot;&gt; Bu protokol için kullanılır. <ol><li> Vazoaktif bileşiklerin uygulamasından önce, bir temel video en az 1 dakika süreyle kaydedilmelidir. Iğne önceki ET-1, enjeksiyon ile beyin parankima içine indirilir fakat edildikten sonra, ET-1 indüklenmiş MCAO için, taban kayıt yapılır. </li><li> Şırınga pompası enjeksiyon için başladı ve 1 saat süre ile ya da arzu edilen son nokta kadar kaydedilir. İğne odak düzlemi bozuklukları önlemek için video kaydı sırasında yerinde bırakılır. </li><li> Sıçan bu prosedürü izleyerek onaylanmış protokole göre derin anestezi ve ötenazi olmalıdır. </li></ol> 5. Görüntü Analizi Gemi çapı görüntülenmiştir MCA herhangi bir kısmı için tespit edilebilir. Bir örnek olarak, ET-1 enjeksiyon öncesi ve sonrası zaman noktalarında damar çapını ölçmek için MCA bir dal kullanır. Stivideo ll kare VLC media player (VideoLAN) kullanarak 1 dakika aralıklarla yakalanır. <ol><li> VLC player yüklü ve açılır. </li><li> Araçları ve daha sonra tercihlerini seçerek ayar altında &quot;All&quot; olarak değiştirildi &quot;Ayarları göster.&quot; </li><li> &quot;Video menüsü&quot; sol kenar çubuğundaki genişletilir ve &quot;çıkış modülleri&quot; sonra genişletilir. &quot;Sahne filtreleri&quot; sahnesi video filtresi menüyü getirmek için seçilir. </li><li> &quot;Sahne&quot; dosya adı öneki için kutunun içine yazılır. </li><li> Bir dizin yolu öneki tanımlanır. Hareketsiz kareleri kaydedilir yerdir. </li><li> Bir kayıt oranının karesi yakalama istenilen oranı esas alınarak seçilir. Bir video saniyede 29 kare, sonra da &quot;1749&quot; (29 kare / sn x 60 sn / dk) yakalandı Eğer hala her 1 dakikada çerçeveye kaydetmek kutusuna girilmelidir. Tüm değişiklikler sonra kaydedilir. </li><li> İstediğiniz video sonra otomatik olarak her 1 dakikada bir kez yine kare kaydetmek için VLC player açıldı. </li><li> Damar çapı daha sonra bu kullanılarak ölçülürgörüntüler. Birincisi, ImageJ yazılım (NIH) açıldı. </li><li> Sonra ölçmek olacağı hala çerçeveleri ImageJ açıldı. </li><li> &quot;Analiz&quot; menüsünü seçerek, &quot;ölçümler set&quot; sonra açılır ve tüm kutuları işaretlemeyin vardır. </li><li> Sonraki, düz bir çizgi aracı seçilir. </li><li> Klavye kısayolu &quot;Ctrl +&quot; gerektiği gibi yakınlaştırmak için kullanılır ve bir çizgi damar çapı ölçmek için geminin yoluna dik yerleştirilir. </li><li> Son olarak, damar uzunluk damar uzunluğu elde etmek için &quot;önlemi&quot; (CTRL + M) sonra &quot;analiz&quot; menü seçimi ile elde edilir. </li><li> Bu işlem, en azından üç kez tekrarlandı ve yine de her bir kare cinsinden ölçülen her bir ölçülü bir kap için ortalaması alınmıştır. </li><li> Çoklu karşılaştırmalar sıçan kullanılarak yapılabilir, böylece her bir zaman noktasında damar çapı baz damar çapı ile normalize edilir. Bunu yapmak için, her bir kabın% taban çapı hesaplamak için x% 100 formülüne akım çapı / taban çapı kullanır. </li></ol>

<ol><li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li>
<li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li>
<li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li>
<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu küçük değişiklikler 4, 5 ile birçok deneylerin ihtiyaçlarını karşılamak için değiştirilebilir gibi Özetle, bu kraniyal pencere hazırlama tekniği çok yönlüdür. Örneğin, başarılı bir kraniyal pencere (Mekke AP 2009 ve 2011) ile görselleştirilmiş bir serebral arter doğrudan odaklanmak için lazer Doppler flowmetre kullanarak belirli MCA dallarında serebral kan akımı takip ettik. Buna ek olarak, dura kesik ile benzer bir hazırlama vivo vasküler reaktivite banyo içinde bir 3 oluşturm...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> İnhalasyon anestezi sistemi </td><td> VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA </td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td> İzofluran anestezik </td><td> Baxter İlaç sanayii, Deerfield, IL, ABD </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> Küçük hayvan stereotaksik sistemi </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> Sigara rüptürü kulak çubukları, sıçan </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td> Sıçan gaz anestezi kafa tutucu </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 mikroprob termometre </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> BAT-12 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> T / POMPA, Termal Battaniye </td><td> Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, NY, ABD </td><td> T / POMPA, TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaum Makas </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td> Iris forseps </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 15915 </td><td></td></tr><tr><td> Bulldog kelepçe retraktörler </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> Şırınga 10 ul 26-gaugue </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Bovie, yüksek sıcaklık koter kiti </td><td> Dünya Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, ABD </td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td> Sıçan diş 0.12 forseps </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td> Mikromotor matkap </td><td> Stoelting,Wood Dale, IL, ABD </td><td> 51449 </td><td></td></tr><tr><td> 0,8 mm yuvarlak matkap bur </td><td> Roboz Cerrahi Instrument Co, Inc, Gaithersburg, MD, USA </td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td> STORZ Bonn sütür forseps </td><td> Bausch and Lomb, Inc, Rochester, NY, ABD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Naylon Dikiş, büyüklüğü 3.0 </td><td> Oasis, Mettawa, IL, ABD </td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td> Pamuklu çubuklar </td><td> Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA </td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube göz merhemi </td><td> Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA </td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td> Elektrikli saç kesme makineleri </td><td> Oster, Providence, RI, ABD </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> ET-1 PBS içinde 80 μ M konsantrasyonda seyreltildi </td><td> Amerikan Peptid, Sunnyvale, CA, USA </td><td> 88-1-10A </td><td></td></tr><tr><td> Klorheksidin,% 2 </td&gt; <td> Agrilabs, St Joseph, MO, USA </td><td> 1040, Rev 6-06, NAC No: 10580322 </td><td></td></tr><tr><td> Cerrahi mikroskop </td><td> Seiler Instrument ve İmalat, St Louis, MO, USA </td><td> Evrim XR6 </td><td></td></tr><tr><td> Sony Handycam </td><td> Sony, Minato, Tokyo, Japonya </td><td> HDR-SR12 </td><td></td></tr><tr><td> Fiber optik aydınlatma </td><td> TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA </td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLC Media Player </td><td> (Paris, Fransa) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Image J yazılımı </td><td> ABD Sağlık, Bethesda, National Institutes of MA, USA </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

endotelin-1 bağlı orta serebral arter tıkanıklığı sırasında orta serebral arter görselleştirin bir kranial pencere kullanmak

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Kranyal pencere oluşturulması 1-3 beyin kortikal yüzey üzerinde doğrudan görüntüleme yapılarının sağlayan bir yöntem. Bu teknik, sıçan beyin örten çok noktadan yapılabilir, ancak, en kolay şekilde kolayca ulaşılabilir ya da ön parietal kemik üzerinde bir kraniektomi oluşturarak gerçekleştirilir. En sık, biz proksimal MCA bitişik beyin parankimi içine endotelin-1 enjeksiyonu ile meydana orta serebral arter damar çapı değişiklikleri ölçmek için iskemik inme endotelin-1 orta serebral arter oklüzyon modeli ile birlikte bu tekniği kullanmış 4, 5. Endotelin -1 indüklenen MCAO sırasında MCA proksimalinden görselleştirmek için, biz sıçan kafatası (Şekil 1) lateralinde temporal kemik yoluyla kraniyal pencere oluşturmak için bir teknik kullanır. Serebral arterlerin dura bozulmamış veya dura kazıma ve RETRA ile ya görsellenebilircted. En sık, biz beyin parankimi içine vazokonstriktör peptid teslimini içerir endotelin-1 ile indüklenen MCAO yana görselleştirme sırasında dura olduğu gibi bırakabilirsiniz. Bu ilaç teslim görüntülenmiştir damarları üzerinde doğrudan dura kesilirken ihtiyaç atlar. Bu protokol de bu yöntem ile ilgili potansiyel tuzaklar birçok önlemek için ne gibi, adım adım moda serebral arterlerin görselleştirmek için bir kraniyal pencere oluşturmak nasıl anlatacağız.

Hala çekilen video gösterisi alınan görüntülerin bundan sonra serebral arter çapı değişikliği ET-1 enjeksiyonu kolaylıkla bu kraniyal pencere tekniği (Şekil 2) kullanılarak takdir edilebilir. ET-1 enjeksiyonu birkaç dakika içinde, damar daralması ile başlayacak. Sonunda gemiler görselleştirmek için zor olacaktır ve beyin dokusu soluk olacak. Yaklaşık 20 dakika sonra ET-1 etkileri azalacak ve gemilerin giderek yaklaşık 45 dakika sonra bazal çap dönen, dilate başlayacaktır. Gerçekleşir daha belirgin vazok...

Bu makalede, orta serebral arterin proksimal bölümlerini görüntülemek için temporal kraniektomi kullanılarak kranyal pencereden sıçan serebral arterlerin görüntülenmesi için bir yöntem açıklanır (<strong&gt; Şekil 1</strong&gt;). Bu çok yönlü yöntem serebral arter reaktivitesi ölçmek için ilaç dağıtım çeşitli teknikleri ile kombine edilebilir<em&gt; In vivo</em&gt;.

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Bu video protokolünde, endothelin one ile indüklenen orta serebral arter oklüzyonu sırasında orta serebral arteri görselleştirmek için bir kranyal pencerenin nasıl kullanılacağını göstereceğiz. Bu kranyal pencere hazırlığı için, orta serebral arterin proksimal bölümlerini görüntülemek amacıyla temporal bir kraniyektomi gerçekleştirilir. Kranyal pencere oluşturma, beynin kortikal yüzeyindeki yapıların doğrudan görselleştirilmesine olanak tanıyan bir yöntemdir.Bu teknik, sıçan serebrosunun üzerindeki birçok bölgede uygulanabilir, ancak en kolay şekilde kolayca erişilebilen frontal veya parietal kemikler üzerinde bir C kraniyektomisi oluşturularak gerçekleştirilir. Bu tekniği en sık, endotelyal yöntemle tetiklenen orta serebral arter oklüzyonu veya ET one ile tetiklenen iskemik inme MCAO modeli ile kombinasyon halinde kullandık. Proksimal orta serebral arter veya MCA'ya komşu beyin parenkimine ET one enjeksiyonu sonrası meydana gelen damar çapı değişikliklerini nicelleştirmek için bir kranyal pencere prosedürü uygulanır.Özellikle, sıçan kafatasının lateral kısmındaki temporal kemik üzerinden bir kranial pencere oluşturmak için bir teknik kullanıyoruz. Serebral arterler, dura mater sağlamken veya dura mater insize edilip geri çekilmiş haldeyken görselleştirilebilir. Görselleştirme sırasında genellikle dura materi sağlam bırakıyoruz.ET one ile indüklenen MCAO, beyin parankimine vazokonstriktör bir peptidin verilmesini içerdiğinden, ilaç iletimi için görselleştirilen damarların hemen üzerindeki duranın doğrudan kesilmesine gerek kalmaz. Bu videoda, serebral arterleri görselleştirmek için adım adım nasıl kraniyal pencere oluşturulacağını ve bu yöntemle ilgili yaygın potansiyel hataların çoğundan nasıl kaçınılacağını göstereceğiz. Bahsedildiği üzere, kılavuz kanül yerleştirildikten sonra, bir inme prosedürü sırasında orta serebral arterin proksimal kısımlarını doğrudan görselleştirmek için bir kraniyal pencere oluşturulabilir; öncelikle, gösterildiği gibi makas kullanarak saçlı deride bir insizyon yapın ve temporalis kasını açığa çıkarmak için cildi geri çekin.Temporal kası elektrokoterle ikiye bölün ve ardından temporal kemiğin skuamöz kısmını görüntülemek için geri çekin. Temporal kemiğin yeterli düzeyde açığa çıkarılması bu prosedür için kritik öneme sahiptir. Koterizasyon sırasında orbita zarar vermemeye dikkat edin.Görüntülemeyi iyileştirmek için, ikiye ayrılmış Temporalis kasını geri çekmek amacıyla sütür kullanın. Temporal kemiğin skuamöz kısmına, orbitin yanına ve zigomatik çıkıntının tabanının üstüne, temporal kemikten ayrıldığı noktaya üç ila dört milimetrelik bir kare çizin. Kemiğin bu kısmını kesip çıkarmak için bir matkap ucu kullanın.Beyne girme olasılığı olduğundan, çok fazla basınç uygulamamaya dikkat edin. Cerrahi alanın görünürlüğünü artırmak ve kafatasının aşırı ısınmasını önlemek için steril salin ile sık sık durulama yaptığınızdan emin olun. Gevşek bir köşeden başlayarak, dura ile ilişkili herhangi bir damarı yırtmadığınızdan emin olarak, ince fare dişi pens ile temporal kemik parçasını dikkatlice çıkarın.Burada, endothelial.One enjeksiyonu öncesindeki başlangıç aşamasında orta serebral arterin bir dalını görselleştirebilirsiniz. Endothelial.One enjeksiyonundan dakikalar sonra, orta serebral arter daralmaya başlayacaktır. Nihayetinde, dalların görselleştirilmesi zorlaşacak ve beyin dokusu soluklaşacaktır.Yaklaşık 20 dakika sonra, endotelyal olanın etkileri azalacak ve damarlar kademeli olarak genişlemeye başlayacaktır. Yaklaşık 45 dakika sonra bazal çap değerine geri dönülür. Endotelyal enjeksiyon öncesi ve sonrasındaki farklı zaman noktalarında damar çapını ölçmek için videodan bir dakikalık aralıklarla durağan kareler yakalanır. VLC medya oynatıcıyı kullanarak araçlar, tercihler bölümlerine gidin ve ardından ayarları göster kısmındaki seçeneği tümü olarak değiştirin.Sol kenar çubuğundaki video menüsünü ve ardından çıktı modüllerini genişletin. Dosya adı ön eki için sahne filtresi türü olarak "scene" seçeneğini belirleyin. Ardından bir dizin yolu ekleyin.Ardından, yazılı protokolde açıklandığı şekilde, videonuzun kare hızına göre sabit kare yakalama için kayıt oranını ayarlayın. Son olarak, "save open" (açık kaydet) seçeneğine tıklayın. İstenen video ve VLC oynatıcı, damar çapını ölçmek için her bir dakikada bir sabit kareyi otomatik olarak kaydedecektir.İlk olarak bu görüntüleri kullanarak Image J yazılımını açın, ardından ölçüm yapacağınız sabit kareleri açın. Analiz (Analyze) menüsüne gidip ölçümleri (Set Measurements) ayarlayın ve tüm kutucukların seçimini kaldırın. Düz çizgi aracını (straight line tool) seçin ve gerektiği kadar yakınlaştırın.Damar çapını ölçmek için damar yoluna dik bir çizgi yerleştirin. Analyze (Analiz) sekmesine gidin, ardından damar çapını elde etmek için measure (ölç) seçeneğine tıklayın. Bu işlemi istenen tüm görüntüler için tekrarlayın.Birden fazla sıçan kullanılarak karşılaştırmalar yapılabilmesi için her zaman noktasındaki damar çapı, başlangıç damar çapına göre normalize edilmelidir. Bunu yapmak için burada gösterilen formülü kullanın. Özetle, bu kraniyal pencere hazırlama tekniği, küçük modifikasyonlarla birçok deneyin ihtiyaçlarını karşılayacak şekilde değiştirilebildiği için oldukça çok yönlüdür.Örneğin, kraniyal pencere aracılığıyla görüntülenen bir serebral artere doğrudan odaklanmak için lazer doppler akış görüntülemesi kullanarak belirli MCA dallarındaki serebral kan akışını başarıyla izledik. Ek olarak, dura tabakasının yerinde bırakıldığı benzer bir hazırlık, vazoaktif bileşiklerin topikal uygulamasıyla in vivo bir vasküler reaktivite banyosu oluşturmak için kullanılabilir. Bu tekniğin başarısızlık oranını düşürmek için kraniyal pencere hazırlanırken birkaç faktör dikkate alınmalıdır.Bu faktörlerin çoğu, serebral arterlerin iyi görselleştirilmesini sağlamakla ilgilidir. Örneğin, C kraniyektomisi oluşturulurken, drill yatağının durayı veya üzerindeki kan damarlarını zedelememesi için dikkatli olunmalıdır. Bu, kalıntıları temizlemek ve kafatasını soğutmak için steril salin ile sık sık yıkama yapılarak en iyi şekilde gerçekleştirilir.Bu videonun, kraniyal pencere kullanan deneyler tasarlamanıza yardımcı olacağını ve bu prosedür sırasında karşılaşılabilecek yaygın hatalardan kaçınmanıza destek olacağını umuyoruz.

utilizing-cranial-window-to-visualize-middle-cerebral-artery-during

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Sıçan iskemik beyin hasarı Cerrahi indüksiyon inme araştırma için yaygın olarak kullanılan bir model. Burada orta serebral arter oklüzyonu ile fokal serebral iskemi indüksiyon göstermektedir. Histolojik boyama ve manyetik rezonans görüntüleme ile enfarkt Görselleştirme de gösterilir.

Endovasküler Dikiş Rat Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fokal Serebral İskemi Model

Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Bu video, iskemik inmeyi modellemek için yaşlı sıçanlarda ortak karotis arter veya CCA ligasyonu ile kalıcı distal orta serebral arter oklüzyonu veya MCAO gerçekleştirme prosedürünü göstermektedir. Bu, beyne giden kan akışını engelleyerek nöronal ölüme yol açar ve inme mekanizmalarını ve potansiyel tedavileri incelemek için bir model oluşturur.

Bir sıçan modelinde orta serebral ve ortak karotis arter tıkanıklığı yoluyla iskemiyi indüklemek

Serebral iskemi Çeşitli hayvan modellerinde inme insanlık durumu simüle etmek için geliştirilmiştir. Bu protokol sıçanlarda iskemik inme için endotelin-1 (ET-1) bağlı orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli anlatılmaktadır. Buna ek olarak, önemli hususlar, avantajlar, ve bu modelin eksiklikler ele alınmaktadır.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Serebral perfüzyon izleme iskemik inme modelleri doğruluğunu geliştirmek için gösterilmiştir. Teknik zorluklar sıklıkla serebrovasküler araştırma için bu önemli aracının kullanımını sınırlamak. Bu videoda, optimize edilmiş bir sistem sıçanlarda intraluminal orta serebral arter oklüzyonu sırasında tek veya çoklu-site hemodinamik izleme elde etmek gösterilmiştir.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

Biz bir kemirgen büyük bir beyin damar daimi tıkanıklığı için son derece tekrarlanabilir yöntem açıklanmaktadır. Bu teknik çok az çevresel zarar, en az kan kaybı, uzun süreli sağkalım oranının yüksek ve insan klinik nüfusu ile orantılı tutarlı infarkt hacmi ile gerçekleştirilebilir.

Kalıcı Serebral Gemi Tıkanıklığı<em&gt; Ile</em&gt; Çift Ligature ve transeksiyonu

inme patofizyolojisini anlamak için, güvenilir modeller kullanmak önemlidir. Farelerde en sık kullanılan inme modellerinden birini anlatacağız Bu yazıda, orta serebral arter tıkanıklığı (MCAO) modeli olarak adlandırılan reperfüzyon ile (ayrıca lümen içi filament veya sütür modeli olarak adlandırılır).

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

distal orta serebral arter dalı (MCAO) Cerrahi tıkanması, deneysel inme araştırmalarında sıkça kullanılan bir modeldir. Bu el yazması farelerde boyuna intravital mikroskopi için bir fırsat sunuyor yanal kafatası pencere takılması, birlikte kalıcı MCAO temel tekniğini açıklar.

Yanal Kronik Kranial Pencere Hazırlık sağlar İn Vivo Farelerde Distal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı takiben Gözlem

Bu protokol, orta büyüklükte bir enfarktüse ve mükemmel bir hayatta kalma oranına sahip benzersiz bir fare vuruşu modeli gösterir. Bu model, klinik öncesi inme araştırmacılarının iskemi süresini uzatmasına, yaşlı fareleri kullanmasına ve uzun vadeli fonksiyonel sonuçları değerlendirmesine olanak tanır.

Yaşlı Farelerde İnme Sonuçlarını İncelemek için Modifiye Transkraniyal Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Bu protokol, orta serebral arterin intraluminal oklüzyonu yoluyla farelerde geçici fokal serebral iskemi modelini açıklar. Ek olarak, manyetik rezonans görüntüleme ve davranış testleri kullanılarak sonuç değerlendirme örnekleri gösterilmiştir.

İnmenin Geçici Orta Serebral Arter Oklüzyon Modeli

Bu çalışmanın amacı, motor ve mekansal hafıza eksikliklerinin deneysel çalışmalarında uygulanmak üzere sıçanlarda kalıcı, seçici orta beyin arter tıkanması uygulanan kraniektomi uygulanacak tekrarlanabilir bir yöntem oluşturmaktır.

Sıçanlarda Orta Beyin Arterinin Seçici ve Kalıcı Tıkanması: Motor ve Mekansal Hafıza Eksikliklerini İnceleme Deneysel Yaklaşımı

Öğrenin, kranial pencere tekniğiyle sıçan orta serebral arterini görselleştirmeyi ve endotelin-1 ile indüklenen tıkanıklıkta damar çapı değişikliklerini nicelendirmeyi. Bu yöntem in vivo serebrovasküler reaktivite araştırmaları için değerlidir.

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Daha fazla video keşfet