22 Şubat 2013
Bu makalede, orta serebral arterin proksimal bölümlerini görüntülemek için temporal kraniektomi kullanılarak kranyal pencereden sıçan serebral arterlerin görüntülenmesi için bir yöntem açıklanır ( Şekil 1). Bu çok yönlü yöntem serebral arter reaktivitesi ölçmek için ilaç dağıtım çeşitli teknikleri ile kombine edilebilir In vivo.
Bu video protokolünde, endotelin bir indüklenen orta serebral arter tıkanıklığı sırasında orta serebral arteri görselleştirmek için bir kraniyal pencere kullanmayı göstereceğiz. Bu kraniyal pencere hazırlığı için, orta serebral arterin proksimal kısımlarını görüntülemek için temporal c kraniektomi yapılır. Kraniyal pencerenin oluşturulması Beynin kortikal yüzeyindeki yapıların doğrudan görselleştirilmesine izin veren bir yöntemdir.
Bu teknik, sıçan serebrosunun üzerindeki birçok yerde uygulanabilir, ancak en kolay şekilde kolayca erişilebilen frontal veya parietal kemikler üzerinde bir C kraniektomi oluşturularak gerçekleştirilir. En sık bu tekniği endotelyal olanın neden olduğu orta serebral arter tıkanıklığı veya ET ile indüklenen MCAO iskemik inme modeli ile kombinasyon halinde kullandık. Proksimal orta serebral arter veya MCA'ya bitişik beyin parankimine ET bir enjeksiyonundan sonra meydana gelen damar çapındaki değişiklikleri ölçmek için bir kraniyal pencere prosedürü gerçekleştirilir.
Spesifik olarak, sıçan kafatasının yan tarafındaki temporal kemik boyunca bir kraniyal pencere oluşturmak için bir teknik kullanıyoruz. Serebral arterler daha sonra dura bozulmamış veya dura inize edilmiş ve geri çekilmiş olarak görüntülenebilir. En yaygın olarak, görselleştirme sırasında durayı olduğu gibi bırakırız.
ET bir indüklenen MCAO, beyin parankimine vazokonstrikte edici bir peptidin verilmesini içerdiğinden, bu, ilaç iletimi için durayı doğrudan görüntülenen damarlar üzerinde kesi yapma ihtiyacını atlar. Bu videoda, serebral arterleri adım adım görselleştirmek için bir kraniyal pencerenin nasıl oluşturulacağını ve bu yöntemle ilgili yaygın potansiyel tuzakların çoğundan nasıl kaçınılacağını göstereceğiz. Kılavuz kanülün yerleştirilmesinden sonra, referans alındığı gibi, bir inme prosedürü sırasında orta serebral arterin proksimal kısımlarını doğrudan görselleştirmek için bir kraniyal pencere oluşturulabilir, önce makas kullanılarak gösterildiği gibi kafa derisinde bir kesi yapın ve temporalis kasını ortaya çıkarmak için cildi geri çekin.
Elektrokoter kullanarak temporalis kasını ikiye bölün ve ardından temporal kemiğin skuamöz kısmını görselleştirmek için geri çekin. Temporal kemiğin yeterli maruziyetinin elde edilmesi bu prosedür için çok önemlidir. Koterize ederken yörüngeden kaçınmaya dikkat edin.
Görselleştirmeyi iyileştirmek için, ikiye bölünmüş Temporalis kasını geri çekmek için dikiş kullanın. Temporal kemiğin skuamöz kısmına üç ila dört milimetrelik bir kare çizin, yörüngeye doğru ve temporal kemikten yansıdığı için elmacık sürecinin tabanından üstündür. Kemiğin bu kısmını kesmek için bir matkap ucu kullanın.
Beyni delmek mümkün olduğu için çok fazla baskı uygulamaktan kaçınmaya dikkat edin. Cerrahi alanın görselleştirilmesini iyileştirmek ve Kafatasının aşırı ısınmasını önlemek için steril tuzlu su ile sık sık durulama yaptığınızdan emin olun. Gevşek bir köşeden başlayarak, ince sıçan dişi forsepsleri kullanarak temporal kemik parçasını dikkatlice çıkarın ve dura ile ilişkili herhangi bir damarı yırtmamaya dikkat edin.
Burada, endotel enjeksiyonundan önce başlangıçta orta serebral arterin bir dalını görselleştirebilirsiniz. Bir. Endotelyal bir enjeksiyondan birkaç dakika sonra, orta Serebral arter daralmaya başlayacaktır. Sonunda, dalların görselleştirilmesi zorlaşır ve beyin dokusu soluklaşır.
Yaklaşık 20 dakika sonra, endotelyal olanın etkileri azalacak ve damarlar yavaş yavaş genişlemeye başlayacaktır. Yaklaşık 45 dakika sonra başlangıç çapına dönüş Damar çapını ölçmek için Endotelyal bir enjeksiyondan önce ve sonra farklı zaman noktalarında, videodan hareketsiz kareler bir dakikalık aralıklarla yakalanır. VLC Media Player'ı kullanma VLC Media Player'ı kullanarak Araçlar, tercihler'e gidin ve ardından ayarları göster altındaki ayarı tümü olarak değiştirin.
Sol taraftaki çubukta video menüsünü genişletin ve çıkış modüllerini genişletin. Dosya adı öneki için sahne filtre türü sahneyi seçin. Ardından bir dizin yolu ekleyin.
Ardından, yazılı protokolde açıklandığı gibi videonuzun kare hızına göre hareketsiz kare yakalama için kayıt oranını ayarlayın. Son olarak, kaydet aç'ı tıklayın. İstenen video ve VLC oynatıcı, damar çapını ölçmek için her bir dakikada bir hareketsiz kareleri otomatik olarak kaydedecektir.
Önce bu görüntüleri kullanarak Image J yazılımını açın, ardından ölçeceğiniz hareketsiz kareleri açın. Analize gidin, ölçümleri ayarlayın ve tüm kutuların işaretini kaldırın. Düz çizgi aracını seçin, gerektiği gibi yakınlaştırın.
Gemi çapını ölçmek için damar yoluna dik bir çizgi yerleştirin. Analize gidin, ardından damar çapını elde etmek için ölç'e tıklayın. İstenen tüm görüntüler için bunu tekrarlayın.
Her bir zaman noktasındaki damar çapı, birden fazla sıçan kullanılarak karşılaştırmalar yapılabilmesi için başlangıç damar çapına normalleştirilmelidir. Bunu yapmak için burada gösterilen formülü kullanın. Özetle, bu kafatası penceresi hazırlama tekniği, küçük değişikliklerle birçok deneyin ihtiyaçlarını karşılayacak şekilde değiştirilebildiği için çok yönlüdür.
Örneğin, bir kraniyal pencereden görselleştirilen bir serebral artere doğrudan odaklanmak için lazer doppler akış görüntülerini kullanarak belirli MCA dallarında serebral kan akışını başarıyla izledik. Ek olarak, dura büyüklüğünde benzer bir preparat, in vivo vasküler reaktivite banyosu oluşturmak için vazoaktif bileşiklerin topikal uygulamasıyla kullanılabilir. Bu tekniğin başarısızlık oranını azaltmak için bir kraniyal pencere hazırlanırken çeşitli faktörler göz önünde bulundurulmalıdır.
Bu faktörlerin çoğu, serebral arterlerin iyi bir şekilde görselleştirilmesi ile ilgilidir. Örneğin, C kraniektomi oluşturulurken, üzerindeki dura veya kan damarlarının matkap yatağı ile bozulmaması için dikkatli olunmalıdır. Bu en iyi, kalıntıları temizlemek ve kafatasını soğutmak için steril tuzlu su ile sık sık yıkayarak gerçekleştirilir.
Bu videonun, bir kraniyal pencere kullanan deneyler tasarlamanıza yardımcı olacağını ve bu prosedür sırasında ortaya çıkabilecek yaygın tuzaklardan kaçınmanıza yardımcı olacağını umuyoruz.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Bu makale, temporal kraniektomi kullanılarak kraniyal pencere aracılığıyla sıçan serebral arterlerinin görselleştirilmesi yöntemini açıklamaktadır. Bu teknik, orta serebral arterin proksimal kısımlarının gözlemlenmesine olanak tanır ve serebral arter reaktivitesini in vivo değerlendirmek için ilaç iletim yöntemleriyle kombine edilebilir.
Serebral arter dinamiklerinin doğrudan görselleştirilmesi, in vivo vazokonstriktif yanıtları nicelleştirerek inme hedef doğrulamasında mekanistik risk azaltma sağlar. Bu yaklaşım, vasküler reaktivitenin ve bileşiklerin serebral hemodinamik üzerindeki etkilerinin preklinik değerlendirmesini destekleyerek nörovasküler ilaç keşfinde git/gitme kararlarına bilgi sağlar. Endotelin-1 ile indüklenen MCAO modelleriyle entegrasyon, iskemik yolları hedefleyen tedaviler için öngörü güvenini artırır.
Kranyal pencere tekniği, bileşik geliştirme aşamasından önce mekanistik anlayışa ışık tutan gerçek zamanlı vasküler reaktivite verileri sağlayarak, hedef doğrulamayı ve öncü bileşik tanımlamasını desteklemek amacıyla erken keşif süreçlerinde konumlandırılır.