Name: Anaplastik Tiroid Kanseri Ortotopik Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Öğrenin, anaplastik tiroid karsinomu için ortotopik fare modeli oluşturmayı. Bu yöntem, insan kanser hücrelerinin tiroid bezine cerrahi yerleştirilmesini içerir ve hastalık ilerlemesinin klinik olarak ilgili çalışılmasını sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Dr teşekkür etmek istiyorum. Cerrahi eğitim onların yardım için Wenjun Li ve Daniel Kreisel (St Louis Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi). RYL Sağlık Hibe R01 DK068057 Ulusal Enstitüleri ve Saint Louis Üniversitesi Rektörlük Araştırma Fonu tarafından desteklenmektedir.

1. Hücre Hazırlanması Notlar:, 2) bir yer Matrigel 1) tam RPMI 1640 kültür ortamı tabanlı tarifi (500 mi) 435 ml RPMI 1640, 50 mi ısı ile deaktive edilmiş FBS, 5 ml esansiyel olmayan amino asitler, sodyum piruvat 5 mi, 5 ml antibiyotik antimikotik içerir 4 ° C hücre hasat öncesinde bir gün. <ol><li> İnsan ATC hücre hattı THJ-11T 8 6 kuyu kültür plakaları yetişen ve% 80-90 birleşik bir kez hasat edilir. </li><li> Oda sıcaklığında 4 dakika boyunca 200 x g&#39;de santrifüj ile topak hücrelere. </li><li> RPMI 1640 medya [2 ml / 6 plaka] medya ve tekrar süspansiyon hücreleri aspire. </li><li> % 0.4 tripan mavi boya, bir hacim eklemek ve TC10 Otomatik Hücre Sayaç kullanılarak hücre yoğunluğu belirlemek için, hücre süspansiyonu, küçük bir hacme al. </li><li> Enjekte 5 x 10 5 hücre / fare kat daha fareler elde etmek için gerekli hücre süspansiyonu hacmi hesaplayın. </li></ol> Not: ad sağlamak için<html> Eğer farelerin çift sayısı (örneğin 5 farelere enjekte eğer 10 farelere enjekte sanki, daha sonra hücre süspansiyonu hazırlamak) enjekte edilir sanki enjeksiyon için hücre süspansiyonu eşit, hücreleri hazırlamak. <ol start="6"><li> 15 ml konik bir tüp içine hücre süspansiyonu gerekli hacmi aktarın. </li><li> Oda sıcaklığında 4 dakika boyunca 200 x g&#39;de santrifüj ile topak hücrelere. </li><li> Tam RPMI 1640 medya medya ve tekrar süspansiyon hücreleri aspire. </li><li> 1.6 ml tüp hücreleri aktarın, matrigel 1 hacim ekleyin ve yavaşça pipetleme ve dışarı ile hafifçe karıştırın. </li></ol> Not: Her fare hücre süspansiyonu / matrigel kokteyl 10 ul alacaksınız. 10 ul enjekte hacmi asılı 5 x 10 5 hücre başarıyla önceki ATC ortotopik çalışmalarda 9-10 kullanılmıştır bu yana, bu raporda bu parametreler kullanılır. <ol start="10"><li> Kullanıma hazır olana kadar buz üzerinde hücre süspansiyonu yerleştirin. </li></ol>Yurt İçi &quot;&gt; 2. Fare Hazırlama <ol><li> % 70 etanol ile tüm yüzeyleri silerek diseksiyon kapsamı ve çevresi, içeren cerrahi bölge, temizleyin. </li><li> Hayvanlar ameliyat sonrası iyileşme olacak ısıtma lambaları / pedleri açın. </li><li> 1 ml, 27G ½ &quot;Tüberkülin şırınga kullanarak 10 g vücut ağırlığı intraperitoneal başına 0.1 ml ketamin / ksilazin (ketamin 9 mg / ml ve ksilizin 1mg/ml oluşan ilaç kokteyli) yönetmek. </li><li> Cerrahi Hazırlık fare: 1) betadin batırılmış gazlı bez, 4 ile yapılan son fırçalayın) chorhexadine batırılmış gazlı bez kareler, 3 ile cerrahi alan üç kez fırçalayın fare boyun bölgesi (çene çizgisinden sternum ve silah dışarı başına), 2) tıraş ) hafifçe kurumasını gözleri önlemek için göz merhemi uygulanır. </li><li> Fare yeterli sedasyon sağlamak için refleks pedal kontrol edin. </li><li> Diseksiyon kapsamında tek kullanımlık steril alana bariyer üzerinde sırt yatma hayvan yerleştirin ve bez bant ile yerde hayvan sabitleyin. </li><li> Scrubs Eller ve ayaklaringernails sonra steril cerrahi eldiven koymak. </li><li> Steril bir şekilde, açık cerrahi paketi ve aletleri düzenlemek. </li><li> Sadece cerrahi alan maruz bırakarak, hayvan üzerinde steril örtüyü yerleştirin. </li></ol> 3. Tiroid ve Hücre Enjeksiyon için cerrahi Erişim <ol><li> Steril, tek kullanımlık neşter kullanarak, boğazın orta hat boyunca bir 1-to-1.5 cm boyuna kesi yapmak. </li></ol> Not: orta hat sapma trakea erişmek için daha derin kesme zorlaştırmaktadır. Oldukça hassas orta hat kesi birlikte sağ ve sol tükürük bezleri tutan membranöz doku ile alay ve kesmek için izin verir ve büyük arterler nicklemek veya kesilmesinin şansı azaltır. <ol start="2"><li> Trakea çevreleyen kayış kas içine ikinci bir kesi yapmak sonra sağ tiroid bezi ortaya çıkarmak için yan kesik kas sağ tarafında çekin. </li><li> Hemostat bir kas tabakası tutmak için bu noktada kullanılabilirTiroid bezinin kolay erişim (Şekil 1) için parça. </li></ol> Not: prosedürü iki cerrahi personel tarafından gerçekleştirilen, bir hazır enjektabl şırınga yardımcı personeli tarafından cerrah teslim ederken Alternatif olarak, kas tabakası sadece forseps ile geri tutulabilir. <ol start="4"><li> Yavaş yavaş yavaşça iğne kaldırmak için, 31G 5/16 &quot;insülin şırınga kullanarak sağ tiroid bezi içine hücre süspansiyonu 10 ul enjekte. </li></ol> 4. Cerrahi Site ve Fare Kurtarma kapatılması <ol><li> Ya sürekli ya da kesik kesik dikiş stili kullanarak 6.0 dikiş materyali ile dikiş kas tabakası. </li><li> Aynı şekilde dikiş cilt. </li><li> Doğrudan kesi sitesi üzerinden üçlü antibiyotik merhem tabakası uygulayın. </li><li> Sıcak ısıtma yastığı sırt yatma kurtarmak için hayvan izin verin. Hayvan yardım almadan sternum yatma elde edilebilir sonra, bu diğer farenin sırt ile yerleştirilebilir. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Ameliyat sonrası İzleme ve Doku Koleksiyon <ol><li> Cerrahi sonrası bir hafta boyunca her gün kesi ve hayvanın genel sağlık kontrol edin ve ardından haftada bir kontrol edin. Dikişler 14 gün sonra hala bozulmamış ise, bunlar kaldırılır. </li></ol> Not: azalan sağlık (örneğin önemli kilo kaybı, dağınık saç, nefes darlığı) belirtileri gösteren Hayvanlar ötenazi olmalı ve dokuların topladı. <ol start="2"><li> Bir kez fareler ksilizin / ketamin oturaklı için yukarıda tarif olarak yönetmek, önceden belirlenmiş bir ameliyat sonrası zaman noktası ulaşmıştır. </li><li> Intrakardiyak hayvan serpmek ve hasat tiroid / trakea ve ilgi diğer dokuları (burada ayrıntılı olarak açıklanmayan). </li></ol>

<ol><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation%3A+advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li>
<li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li>
<li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li>
<li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li>
<li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li>
<li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+Intervention+with+anti-BRAF+%28V600E%29+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bizim modelde, hayvanlar 4 hafta sonrası enjeksiyon yoluyla kaşeksi ve solunum sıkıntısı ile ilgili tiroid tümör metastazı ve hastalık gösterdi. Diğer birçok ortotopik modellerinde hedef dışına yayılır çevreleyen doku ve enjeksiyon sonrası kaçak bir hücre süspansiyonu enjekte teslimat, enjeksiyon kullanan ile de mümkündür. Bu söyleniyor, bu işlem ile üretilen bir tanınabilir potansiyel bilinmeyen olmayan hastalığı ile ilgili metastaz veya komplikasyonlara kapalı hedef maruz kalma etkisidir. Bu durum, hastalığın araştırılmaktadır, çoğu xenographic nakli ile genel bir husustur. Bununla birlikte, metastaz gelen kasıtsız sonuçları önemli ölçüde rahatça tiroid bezi kaplayan zarın nüfuz iğne ucu, tüm konik sağlanması ve yavaş yavaş hücresel süspansiyon atarak en aza indirilebilir. Sızıntı enjeksiyon sırasında ya da sonrasında gözlenirse, bu hayvanlar çalışma atlanabilir. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Bu hayvanlar tiroid / trakea ve diğer dokuları önce perfüze esastır. Yararları) iki kat, 1 olan kırmızı kan hücreleri) temizlenir ve histolojik örnekleri ve 2 karmakarışık olmaz doku morfolojisi ve bütünlüğü korunur. Ayrıca, rezeke tiroid / trakea bağlı ya bir tümöral kitle ya da anatomik histolojik hazırlanması için gömülü önce tespit edilebilir bir şekilde kesilmelidir içinde entombed olduğunu. Bu önemli ölçüde numune hazırlama süresini azaltır. Bu yazıda ATC hücrelerinin ortotopik enjeksiyonu takiben gelişmiş tiroid tümörün lokal büyüme ve invazyon açıklar. ATC metastaz gibi hematoksilen ve eozin gibi standart histolojik lekeleri, kullanan diğer dokuların histolojik hazırlıkları analiz ederek, ya da immünhistokimya hücre veya patoloji ilgili işaretleri kullanılarak incelenmiştir olabilir. Bu sistem daha g tarafından geliştirilebilircanlı görüntüleme metastaz ve tedavi tedavilerin etkinliğini izlemek için kullanılabilir, böylece enetically floresan gazetecilere tiroid kanser hücrelerini değiştirerek.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 hücre kültürü ortamı</td><td>Mediatech</td><td>10-041-CV</td><td>Kullanılan ortam ve katkı maddeleri hücre hattına bağlıdır</td></tr><tr><td>TC10 Otomatik Hücre Sayacı</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0001</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forseps, Tırtıklı; Hafif Eğri, 4 "</td><td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Neşter, No. 15</td><td>Tüy</td><td>2975#15</td><td></td></tr><tr><td>Olsen Hegar İğne Tutucu - 4 &frac12; » narin tırtıklı</td><td>gSource</td><td>gS 21.5400</td><td></td></tr><tr><td>6-0 naylon siyah monofilament sütür</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>1279B</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma Yastığı, yeniden kullanılabilir, 8" x 12"</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Bez bant, 1" X 10 yds</td><td>Medline</td><td>MIINON260101</td><td>Anestezi uygulanmış fareyi kısıtlamak için</td></tr><tr><td>Fıstık Makası / Düzeltici</td><td>Wahl</td><td>8655</td><td>Cerrahi bölgeden tüyleri almak için</td></tr><tr><td>ChlorHex-Q SCRUB %2</td> <td>Penn Veteriner Tedarik</td><td>VED1222</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Henry Schein Company</td><td>6906727</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum oftalmik merhem</td><td>Dechra Veterinerlik Ürünleri</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>2 x 2 gazlı bez, 12 katlı</td><td>Butler Hayvan Sağlığı Temini</td><td>6936</td><td></td></tr><tr><td>Steril Alan, Bariyer, 18" x 26"</td><td>Busse</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Perdeler (CSR Wrap)</td><td>Kardinal Sağlık</td><td>AT 21 412</td><td></td></tr><tr><td>27G &frac12; " iğne</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>31G 5/16" iğne</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>328438</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin (9 mg / ml) / ksilazin (1 mg / ml) çözeltisi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Üçlü antibiyotik merhem</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

anaplastik tiroid kanseri ortotopik fare modeli

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Insan tiroid kanserlerinin hayvan modellerinde çeşitli deri altı ksenogreft ve bağışık yetmezliği olan farelere kanser hücrelerinin ortotopik implantasyonu da dahil olmak üzere, kurulmuştur. Cilt altı ksenogreft modelleri klinik öncesi tarama ve yeni tedavi tedavilerin değerlendirilmesi için değerli olmuştur. Deri altı bir modelini kullanarak bir çok avantaj bulunmaktadır: 1), hızlı, 2), yeniden üretilebilir, ve 3) tümör kurulması, büyüme ve terapötik ajanlara yanıt görsel muayene ile izlenebilir. Ancak, önemli kanıtlar 1-3 deri altı ksenogreft modellerinin kısa geliş ışık tutmuştur. Örneğin, deri altı ksenograft modellerinde tedavi edici özellikleri gösteren tıbbi tedaviler genellikle, insan hastalığı üzerinde kayda değer bir etkisi vardır. Xenographic nakli veya enjeksiyon sitenin mikro bu farklılık kalbinde yer alır. Ortotopik tümör xenograft modelleri daha biolo sağlamakHastalığın incelemek için gically ilgili bağlam. Bir dizi hayvan içindeki anatomik kökenli eşdeğer içine hastalıklı hücre veya doku implante avantajları uygun bir tümör-konak etkileşimleri için site, hastalıkla ilgili metastaz geliştirme ve araştırma tedavi ilaçları üzerinde siteye özgü etkisini incelemek için yeteneğini de içerir. Onlar yakın insan hastalığı yeniden nedenle, ortotopik ksenogreft modelleri çok daha fazla klinik değeri liman. Bu nedenlerle, gruplar bir dizi bir araştırma aracı 4-7 olarak ortotopik tiroid kanseri modeli yararlanmaktadır. Burada, biz, son derece invaziv anaplastik tiroid kanseri (ATC), çalışma için bir ortotopik modeli kurar tedavi direnir ve tüm tanısı alan hastalarda neredeyse ölümcül bir yaklaşım açıklar. Kültürlü hücreler, ATC taban membran matrisi içeren bir çözelti içinde bir ayrışmış hücresel süspansiyon olarak hazırlanır. Küçük bir hacim yavaş yavaş inj olansağ tiroid bezine ected. Farelerin genel görünüm ve sağlık minimal postoperatif komplikasyonlar sağlamak ve kanser patolojik penetranslı ölçmek için izlenir. Fareler 4 hafta sonra kurban edilir ve doku histolojik analiz için toplanır. Hayvanlar hastalığın daha ileri ilerleme incelemek için daha sonra-noktalarında alınabilir. Bizim ATC patoloji anlayış ve etkinliği için 2) ekran mevcut ve gelecekteki terapötik ajanlar ATC mücadelede daha 1): Bu ortotopik fare modeli üretimi iki amacı gerçekleştirir bir platform kurar.

4 hafta sonra ATC hücreleri enjekte farenin 20 bir toplam 19 invaziv tiroid tümörleri tespit edildi. Şekil 2A&#39;da gösterilen örnekte, ekli koşullar altında yetiştirilen 5X10 5 ATC hücre ortotopik enjeksiyon alan farenin, 4 hafta sonrası enjeksiyon içine tiroid kanseri hücrelerinin önemli infiltrasyonu gösterirler. Eozinofilik sitoplazma ve büyük çekirdeklere sahip karakteristik bir spindled hücreleri ve orta-boyutlu dev hücreler ile işgal ATC hücrelerin yapısı hematoksilin ve eozin (H &amp; E) boyama ile doğrulandı. Karşılaştırma için, enjeksiyon yapılmamış kontrol hayvan tiroid ve trakea, Şekil 2B&#39;de gösterilmiştir. Uninjected hayvan köklerinin yakın, ama gevşek, dernek görüntülemek ve aslında bir yuvarlak morfoloji var. Enjektabl teslim tiroid ve kullanım küçük boyutu nedeniyle, istenmeyen sonuçlar ortaya çıkabilir. Şekil 3A göstermektedirEn yaygın olarak gözlemlenen, bunun dışında, bir tümör kitlesi gelişmedir, ancak, tiroid kapsayan değildir. Hücreleri sınırdışı zaman bu ile ve tiroid ötesinde iğne penetrasyon olasılığı daha kaynaklanmaktadır. Şekil 3B&#39;de gösterildiği gibi, zaman zaman, tümör büyümesi ile kendini gösteren fareler, her iki ağır ve histolojik olarak tespit edilir. Tespit tümör gelişme olmaması komşu doku ve boşluklar içine enjeksiyon yeri ve yayılması gelen hücre süspansiyonu sınırdışı neden olabilir. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="Şekil 1"/> Şekil 1. Tiroid açığa. Etiketler trakea yan sağ ve sol tiroid bezleri gösterir. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="Şekil 2,"/> Şekil 2. Tümör büyümesinin ve histolojik incelemesiBaşarılı tiroid enjeksiyon sonrası vasion. Doku örnekleri koronal düzlemi boyunca kesitler alındı. eozinofilik sitoplazmalı ve HE büyük çekirdekleri (ile karakteristik iğsi hücreli ve orta-dev boyutlu hücreleri ile önemli tümör büyümesi sergileyen fare 200X alınan A) Görüntü H &amp; E) leke Tu tümör hücreleri tiroid istila hangi birincil lezyon gösterir B) Trakea ve kontrol hayvan tiroid (100X alınan görüntü) Tu, Tümörler,... S, düz kas, Tr, trakea, Thy, tiroid bezi. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="Şekil 3"/> Şekil 3,. Ortotopik enjeksiyon kasıtsız sonuçları. Doku örnekleri koronal düzlemi boyunca kesitler alındı. A) Periferik tümör büyümesi thyroi belirgin bir büyüme iled (siyah ok, 100X alınan görüntü). B) brüt üzerine tümör tespit eksikliği (gösterilmemiştir) veya histolojik inceleme (50X alınan görüntü). Thy, tiroid bezi.

Anaplastik tiroid kanseri ortotopik fare modeli Üretimi burada açıklanmıştır. Bu teknik böylece hastalığın ilerlemesi hem de ekran yenilikçi tedavi yaklaşımları incelemek için daha klinik ortam yaratan, bağışık yetmezliği olan farelerin tiroid, insan anaplastik tiroid kanser hücrelerinin cerrahi yerleştirme kullanır.

Anaplastik Tiroid Kanseri Ortotopik Fare Modeli

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

Bu prosedürün genel amacı, bir ortotopik ksenogreft fare modeli oluşturmak için insan anaplastik, tiroid karsinomu veya bir TC hücresinin tiroid içine cerrahi olarak yerleştirilmesini göstermektir. Bu, önce bir TC hücresinin kültürlenmesi ve hasat edilmesiyle gerçekleştirilir. Fareyi ameliyata hazırladıktan sonra, tiroidi boyunda art arda iki uzunlamasına kesi ile açığa çıkarın ve A TC hücrelerini yavaşça sağ tiroid bezine enjekte edin.Son adım, kesilerin dikişlerle kapatılması ve farenin iyileşmesine izin vermektir. Sonuç olarak, rezeke edilmiş dokulardan alınan örneklerin histolojik incelemesi, çeşitli koşullar altında tümör büyümesini ve invazyonunu göstermek için kullanılır. Bu tekniğin deri altı ksenogreft nakli gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, ortotopik transplantasyonun bir TC hücresini biyolojik nişlerine yerleştirmesi ve insanlarda meydana geldiği gibi hastalık ilerlemesini ve patolojisini yakından taklit etmesidir.Bu yöntem, tiroid kanseri agresifliğinin biyolojik mekanizmalarının belirlenmesi gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu prosedüre, hücreler% 70 ila 80 birleşik çözülme, dört santigrat derecede 0.01 mililitre ana jel olduğunda, hücre hasadından bir gün önce tam RPMI 1640 takviyeli ortam kullanarak altı Kuyu kültür plakasında insan A TC hücre hattı TJ 11 T'yi kültürleyerek başlayın. Hücreler peletlendikten sonra% 80 ila 90 birleştikten sonra tripsin kullanarak hücreleri hasat edin, ortamı aspire edin ve hasat edilen her altı kuyucuklu plaka için hücreleri iki mililitre takviye edilmiş RPMI 1640 Ortamında yeniden süspanse edin.Daha sonra, hücre süspansiyonunu bire bir %0.4 Triam mavisi boya ile karıştırarak hücre yoğunluğunu belirleyin, bir TC 10 otomatik hücre sayacı kullanarak hücre yoğunluğunu belirleyin. Fare başına 500.000 hücre enjekte etmek için gereken hücre süspansiyonunun hacmini hesaplayın. Planlanan implant sayısının iki katını hesaplayarak implantasyon için yeterli hücrelerin mevcut olduğundan emin olun.Gerekli hacimde hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Daha sonra oda sıcaklığında dört dakika boyunca 200 Gs'de santrifüjleyin. Daha sonra ortamı aspire edin ve hücreleri tam RPMI 1640 takviyeli ortamda mililitre başına 100 milyon hücrede yeniden süspanse edin.Ardından, hücreleri 1.6 mililitrelik bir tüpe aktarın. Bir hacim matri jeli ekleyin ve yavaşça içeri ve dışarı pipetleyerek hafifçe karıştırın. Hücre süspansiyonunu ihtiyaç duyulana kadar buzun üzerine yerleştirin.İlk olarak, tüm yüzeyleri% 70 etanol ile silerek diseksiyon kapsamını ve çevresini içeren cerrahi bölgeyi sterilize edin. Ardından, ısıtma lambalarını açarak ve steril pedleri koyarak kurtarma alanını hazırlayın. Fareyi uyuşturun ve önce farenin boyun bölgesini çene çizgisinden sternumun tepesine ve her bir kola kadar tıraş ederek ameliyata hazırlayın.Daha sonra, klorheksidin ıslatılmış gau kareleri ve etanolü değiştirerek cerrahi alanı üç kez vidalayın. Sonra Betadine ıslatılmış gazlı bezle son bir kez. Ayrıca gözlerin kurumasını önlemek için nazikçe göz merhemi uygulayın.Bu noktada, farenin yeterince sakinleştirildiğinden emin olmak için pedal refleksini kontrol edin. Ardından fare sırtına yaslanmış olanı tek kullanımlık steril bir alan bariyerine yerleştirin. Diseksiyon dürbünü altında, fareyi bez bantla yerine sabitleyin.Daha sonra, ellerinizi ve tırnaklarınızı iyice ovalayın ve steril bir şekilde steril cerrahi eldivenler giyin, ameliyat paketini açın ve aletleri düzenleyin. Son olarak, farenin üzerine steril bir örtü yerleştirin ve yalnızca cerrahi bölgeyi açıkta bırakın. Steril tek kullanımlık bir neşter kullanarak boğazın orta hattı boyunca bir ila 1,5 santimetre uzunlamasına bir kesi yaparak başlayın.Orta hattan sapmayın çünkü bu, büyük arterlerin çentiklenme veya kopma olasılığını artıracaktır. Soluk borusunu çevreleyen kayış kaslarına ikinci bir kesi yapın. Daha sonra kesilen kasın sağ tarafını yana doğru çekin ve sağ tiroid bezini açığa çıkarın.Şırınganın üzerinde bir asistan bulundurun. 31 gauge insülin şırıngası kullanarak sağ tiroid bezine yavaşça enjekte edin. Ardından, kesintili bir dikiş stili kullanarak iğne dikişi, kas tabakasını altı oh naylon monofilament dikiş materyali ile birlikte nazikçe çıkarın.Son olarak, ameliyat sonrası cildi aynı şekilde birbirine dikin. Doğrudan kesi bölgesine üçlü antibiyotik merhem tabakası uygulayın. Farenin bir lamba altında sırt yaslanmış olarak iyileşmesine izin verin.Fare, yardım almadan sternal yaslanma elde edebildiğinde, kafesindeki diğer farelerle birlikte geri yerleştirilebilir. Ameliyattan sonraki bir hafta boyunca insizyon bölgesini ve farenin genel sağlığını günlük olarak kontrol edin. Ardından haftada bir kez kontrol edin.Fare herhangi bir zamanda sağlığın azaldığına dair belirtiler gösterirse, ötenazi yapılmalı ve dokuları toplanmalıdır. Fareler önceden belirlenmiş bir postoperatif zaman noktasına ulaştığında, ketamin ve ksilazin ile anestezi yapın ve hayvanı tampon ile geç perfüze edin, ardından fiksatif uygulayın, ardından dokuları toplayın ve histoloji için işleyin. Enjekte edilmemiş bir kontrol hayvanından alınan tiroid ve trakea burada hematin ve eozin boyama folikülleri ile gösterilmiştir, yakın ancak gevşek bir ilişki gösterir ve esasen yuvarlak morfolojiye sahiptir.Buna karşılık, 500.000 A TC hücresinin ortotopik enjeksiyonunu alan fareler, enjeksiyondan dört hafta sonra kanser hücrelerinin tiroide önemli ölçüde infiltrasyonunu sergiler. İstilacı hücrelerin doğası, karakteristik iğ şeklindeki hücreleri ve eozinofilik sitoplazmalı ve büyük çekirdekli orta ila dev boyutlu hücreleri gösterir. Tiroidin küçük boyutu ve enjekte edilebilir iletimin kullanılması nedeniyle, tiroidin dışında, ancak tiroidi kapsamayan bir tümör kitlesinin gelişmesi gibi kasıtsız sonuçlar ortaya çıkabilir.Bunun nedeni, hücreler dışarı atıldığında tiroidden iğne penetrasyonudur Bazen, hem kaba hem de histolojik olarak tümör büyümesi olmayan fareler burada gösterildiği gibi tespit edilir. Saptanabilir tümör gelişiminin olmaması, hücre süspansiyonunun enjeksiyon bölgesinden komşu dokulara ve boşluklara atılmasından kaynaklanır Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik 20 dakika içinde gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, anaplastik tiroid karsinomu için kendi ortotopik modelinizi nasıl oluşturacağınızı iyi anlamış olmalısınız.Tiroid bezine cerrahi olarak erişerek ve kültürlenmiş bir C hücresi enjekte ederek.

an-orthotopic-mouse-model-of-anaplastic-thyroid-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Çekum üzerine bir kanser hücre süspansiyonu çekal duvar subkutan tümörün bir parçasının veya transplantasyon içine enjeksiyon: İki teknikleri bu modeli kurmak için kullanılan olabilir. Bu model, kolorektal kanseri doğal bir ilerleme eğitim ve kolorektal kansere karşı yeni tedavi ajanları test için yararlıdır.

Kolorektal Kanser Ortotopik Fare Modeli

Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo</emTümör Bağışıklık Yanıtları> Tümör Görüntüleme ve İzleme

Video, bir fare modelinde meme kanseri ortotopik aşılama tekniğini göstermektedir. Bu teknik, deri altı veya cerrahi olmayan enjeksiyona kıyasla tümör boyutu ve şeklinde daha az değişkenlik ile yüksek bir tümör oluşumu oranı üretir.

Ortotopik Enjeksiyon: Dokuya Özgü Kanser Hücrelerinin Yetişkin Bir Fareye İmplante Edilmesi

Bu videoda, tiroid kanseri hücrelerinin fare modellerinin tiroid bezine ortotopik olarak aşılanması prosedürü açıklanmaktadır, bu da daha sonra karsinogenezi değerlendirmek ve potansiyel tedavi stratejilerini keşfetmek için değerli bir platform görevi görebilir.

Tiroid Kanseri Hücrelerinin Murin Tiroidine Ortotopik Aşılanması: Ortotopik Tiroid Kanseri Fare Modeli Oluşturma Prosedürü

Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Prostat kanseri, Amerika Birleşik Devletleri'nde kansere bağlı ölümlerin en sık ikinci nedenidir. Ortotopik bir kanser modeli, prostat kanserinin biyolojisini anlamak ve terapötik rejimlerin etkinliğini değerlendirmek için yararlı bir yaklaşım sağlar. Bu protokol, ortotopik bir prostat kanseri fare modeli oluşturmak için gerekli ayrıntılı adımları açıklar.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

Klinik bağlamda lokalize pankreas kanseri olan hastalar pankreastektomi ve ardından adjuvan tedavi görecektir. Burada bildirilen bu protokol, pankreas kanserinin ortotopik implantasyonu ve ardından distal pankreasektomi ve splenektomi yoluyla çıplak farelerde bu klinik senaryoyu modellemek için güvenli ve etkili bir yöntem oluşturmayı amaçlamaktadır.

Pankreas Kanserinin Ortotopik Rezeksiyonlu Fare Modeli

Burada, spontan genetiği değiştirilmiş fare modelleri ile murin ATC tümörleri elde etmek için standart bir boru hattı sunuyoruz. Ayrıca, primer ve metastaz yapmış lezyonlar hakkında tümör dinamikleri ve patolojik bilgiler sunulmuştur. Bu model, araştırmacıların tümörigenezi anlamalarına ve ilaç keşiflerini kolaylaştırmalarına yardımcı olacaktır.

Anaplastik Tiroid Kanserinin Spontan Murin Modeli

NOD faresinde spontan otoimmün tiroidit olduğu gibi, Hashimoto tiroiditinin çeşitli hayvan modelleri oluşturulmuştur. H-2h4 fareler, HT indüksiyonu için basit ve güvenilir bir modeldir. Bu makalede SAT murin modelinin daha iyi anlaşılması için bu yaklaşım anlatılmakta ve patolojik süreç değerlendirilmektedir.

Bir Fare Spontan Otoimmün Tiroidit Modelinin Oluşturulması

Bu protokol, fare tiroid bezinin tamamını görselleştirmek ve anaplastik tiroid karsinomunun büyümesini izlemek için yüksek frekanslı ultrasonografiyi tanımlamaktadır.

Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Ortotopik ATC Tümörlerinin Analizi için Yüksek Çözünürlüklü Ultrasonografi

Bu protokol, anaplastik tiroid karsinomu (ATC) ve baş boyun skuamöz hücreli karsinomunun (HNSCC) hasta kaynaklı ksenogreft (PDX) modelini oluşturmakta ve karakterize etmektedir, çünkü PDX modelleri translasyonel onkoloji alanında hızla standart hale gelmektedir.

Anaplastik Tiroid Karsinomu ve Baş-Boyun Skuamöz Hücreli Karsinomun Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması ve Karakterizasyonu

Öğrenin, anaplastik tiroid karsinomu için ortotopik fare modeli oluşturmayı. Bu yöntem, insan kanser hücrelerinin tiroid bezine cerrahi yerleştirilmesini içerir ve hastalık ilerlemesinin klinik olarak ilgili çalışılmasını sağlar.

Anaplastik Tiroid Kanseri Ortotopik Fare Modeli

Daha fazla video keşfet