Anaplastik Tiroid Kanseri Ortotopik Fare Modeli

Bu prosedürün genel amacı, bir ortotopik ksenogreft fare modeli oluşturmak için insan anaplastik, tiroid karsinomu veya bir TC hücresinin tiroid içine cerrahi olarak yerleştirilmesini göstermektir. Bu, önce bir TC hücresinin kültürlenmesi ve hasat edilmesiyle gerçekleştirilir. Fareyi ameliyata hazırladıktan sonra, tiroidi boyunda art arda iki uzunlamasına kesi ile açığa çıkarın ve A TC hücrelerini yavaşça sağ tiroid bezine enjekte edin.

Son adım, kesilerin dikişlerle kapatılması ve farenin iyileşmesine izin vermektir. Sonuç olarak, rezeke edilmiş dokulardan alınan örneklerin histolojik incelemesi, çeşitli koşullar altında tümör büyümesini ve invazyonunu göstermek için kullanılır. Bu tekniğin deri altı ksenogreft nakli gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, ortotopik transplantasyonun bir TC hücresini biyolojik nişlerine yerleştirmesi ve insanlarda meydana geldiği gibi hastalık ilerlemesini ve patolojisini yakından taklit etmesidir.

Bu yöntem, tiroid kanseri agresifliğinin biyolojik mekanizmalarının belirlenmesi gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu prosedüre, hücreler% 70 ila 80 birleşik çözülme, dört santigrat derecede 0.01 mililitre ana jel olduğunda, hücre hasadından bir gün önce tam RPMI 1640 takviyeli ortam kullanarak altı Kuyu kültür plakasında insan A TC hücre hattı TJ 11 T'yi kültürleyerek başlayın. Hücreler peletlendikten sonra% 80 ila 90 birleştikten sonra tripsin kullanarak hücreleri hasat edin, ortamı aspire edin ve hasat edilen her altı kuyucuklu plaka için hücreleri iki mililitre takviye edilmiş RPMI 1640 Ortamında yeniden süspanse edin.

Daha sonra, hücre süspansiyonunu bire bir %0.4 Triam mavisi boya ile karıştırarak hücre yoğunluğunu belirleyin, bir TC 10 otomatik hücre sayacı kullanarak hücre yoğunluğunu belirleyin. Fare başına 500.000 hücre enjekte etmek için gereken hücre süspansiyonunun hacmini hesaplayın. Planlanan implant sayısının iki katını hesaplayarak implantasyon için yeterli hücrelerin mevcut olduğundan emin olun.

Gerekli hacimde hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Daha sonra oda sıcaklığında dört dakika boyunca 200 Gs'de santrifüjleyin. Daha sonra ortamı aspire edin ve hücreleri tam RPMI 1640 takviyeli ortamda mililitre başına 100 milyon hücrede yeniden süspanse edin.

Ardından, hücreleri 1.6 mililitrelik bir tüpe aktarın. Bir hacim matri jeli ekleyin ve yavaşça içeri ve dışarı pipetleyerek hafifçe karıştırın. Hücre süspansiyonunu ihtiyaç duyulana kadar buzun üzerine yerleştirin.

İlk olarak, tüm yüzeyleri% 70 etanol ile silerek diseksiyon kapsamını ve çevresini içeren cerrahi bölgeyi sterilize edin. Ardından, ısıtma lambalarını açarak ve steril pedleri koyarak kurtarma alanını hazırlayın. Fareyi uyuşturun ve önce farenin boyun bölgesini çene çizgisinden sternumun tepesine ve her bir kola kadar tıraş ederek ameliyata hazırlayın.

Daha sonra, klorheksidin ıslatılmış gau kareleri ve etanolü değiştirerek cerrahi alanı üç kez vidalayın. Sonra Betadine ıslatılmış gazlı bezle son bir kez. Ayrıca gözlerin kurumasını önlemek için nazikçe göz merhemi uygulayın.

Bu noktada, farenin yeterince sakinleştirildiğinden emin olmak için pedal refleksini kontrol edin. Ardından fare sırtına yaslanmış olanı tek kullanımlık steril bir alan bariyerine yerleştirin. Diseksiyon dürbünü altında, fareyi bez bantla yerine sabitleyin.

Daha sonra, ellerinizi ve tırnaklarınızı iyice ovalayın ve steril bir şekilde steril cerrahi eldivenler giyin, ameliyat paketini açın ve aletleri düzenleyin. Son olarak, farenin üzerine steril bir örtü yerleştirin ve yalnızca cerrahi bölgeyi açıkta bırakın. Steril tek kullanımlık bir neşter kullanarak boğazın orta hattı boyunca bir ila 1,5 santimetre uzunlamasına bir kesi yaparak başlayın.

Orta hattan sapmayın çünkü bu, büyük arterlerin çentiklenme veya kopma olasılığını artıracaktır. Soluk borusunu çevreleyen kayış kaslarına ikinci bir kesi yapın. Daha sonra kesilen kasın sağ tarafını yana doğru çekin ve sağ tiroid bezini açığa çıkarın.

Şırınganın üzerinde bir asistan bulundurun. 31 gauge insülin şırıngası kullanarak sağ tiroid bezine yavaşça enjekte edin. Ardından, kesintili bir dikiş stili kullanarak iğne dikişi, kas tabakasını altı oh naylon monofilament dikiş materyali ile birlikte nazikçe çıkarın.

Son olarak, ameliyat sonrası cildi aynı şekilde birbirine dikin. Doğrudan kesi bölgesine üçlü antibiyotik merhem tabakası uygulayın. Farenin bir lamba altında sırt yaslanmış olarak iyileşmesine izin verin.

Fare, yardım almadan sternal yaslanma elde edebildiğinde, kafesindeki diğer farelerle birlikte geri yerleştirilebilir. Ameliyattan sonraki bir hafta boyunca insizyon bölgesini ve farenin genel sağlığını günlük olarak kontrol edin. Ardından haftada bir kez kontrol edin.

Fare herhangi bir zamanda sağlığın azaldığına dair belirtiler gösterirse, ötenazi yapılmalı ve dokuları toplanmalıdır. Fareler önceden belirlenmiş bir postoperatif zaman noktasına ulaştığında, ketamin ve ksilazin ile anestezi yapın ve hayvanı tampon ile geç perfüze edin, ardından fiksatif uygulayın, ardından dokuları toplayın ve histoloji için işleyin. Enjekte edilmemiş bir kontrol hayvanından alınan tiroid ve trakea burada hematin ve eozin boyama folikülleri ile gösterilmiştir, yakın ancak gevşek bir ilişki gösterir ve esasen yuvarlak morfolojiye sahiptir.

Buna karşılık, 500.000 A TC hücresinin ortotopik enjeksiyonunu alan fareler, enjeksiyondan dört hafta sonra kanser hücrelerinin tiroide önemli ölçüde infiltrasyonunu sergiler. İstilacı hücrelerin doğası, karakteristik iğ şeklindeki hücreleri ve eozinofilik sitoplazmalı ve büyük çekirdekli orta ila dev boyutlu hücreleri gösterir. Tiroidin küçük boyutu ve enjekte edilebilir iletimin kullanılması nedeniyle, tiroidin dışında, ancak tiroidi kapsamayan bir tümör kitlesinin gelişmesi gibi kasıtsız sonuçlar ortaya çıkabilir.

Bunun nedeni, hücreler dışarı atıldığında tiroidden iğne penetrasyonudur Bazen, hem kaba hem de histolojik olarak tümör büyümesi olmayan fareler burada gösterildiği gibi tespit edilir. Saptanabilir tümör gelişiminin olmaması, hücre süspansiyonunun enjeksiyon bölgesinden komşu dokulara ve boşluklara atılmasından kaynaklanır Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik 20 dakika içinde gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, anaplastik tiroid karsinomu için kendi ortotopik modelinizi nasıl oluşturacağınızı iyi anlamış olmalısınız.

Tiroid bezine cerrahi olarak erişerek ve kültürlenmiş bir C hücresi enjekte ederek.