Deneysel İnsan Pnömokok Taşıma

Bu prosedürün amacı, deneysel insan pnömokok taşıyıcılığını sağlamaktır. Bu, önce inokülumdaki bakterilerin seyreltilmesi ve miktarının ölçülmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, gönüllü intranazal olarak streptococcus pneumoniae ile aşılanır.

Daha sonra, gönüllü aşılamadan sonraki iki, yedi ve 14. günlerde burun yıkaması yapar. Son olarak, gönüllünün aşılanmış okkusu taşıyıp taşımadığını belirlemek için klasik mikrobiyoloji kullanılır. Sonuç olarak, bu güvenli ve tekrarlanabilir yöntem kullanılarak deneysel insan pnömokok taşıyıcılığı elde edilebilir.

Bu tekniğin mevcut murin taşıma modellerine göre en büyük avantajı, bu tekniğin insan pnömokoklarının doğal konakçısında bir taşıma modeli sunmasıdır. Ayrıca, bu yöntem, korumanın immünolojik bağıntıları nelerdir gibi pnömokok alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Taşıyıcılığın bağışıklama etkisi nedir ve konak baskısının nazofaringeal nişteki patojen üzerindeki etkisi nedir?

Bu tekniğin uygulamaları, yeni pnömokok aşılarının seçilmesi için bir yöntem olarak kullanılmasını içerir. Taşımanın önlenmesini aşı kaynaklı bağışıklığın bir vekili olarak kullanmayı planlıyoruz. Klinik tekniği göstermek için Rahibe Angie Wright ve sorumlu hemşire David Shaw olacak.

Planlanan gönüllü aşılama randevusundan 30 dakika önce, eksi 80 santigrat derece dondurucudan alınan bir aşı stok tüpü aracılığıyla. Daha sonra tho inokulumu bir mikro santrifüjde 17.000 kez üç dakika boyunca döndürün. G, tüp dönerken, bazı kan agar plakalarını 37 santigrat derecelik bir inkübatörde ısıtın.

Daha sonra et suyunu santrifüj aşısından çıkarın ve peleti bir mililitre tuzlu su içinde yıkayın. Santrifüjleme ve yıkama adımını tekrarlayın. İstenen aşı konsantrasyonu için bir seyreltme seti gerçekleştirin ve ardından aşıdaki bakteri miktarını mil ve misra benzeri bir yöntemle ölçün.

Büyüyen koloniler ertesi gün görünür hale gelecektir. Aşıyı, yarı yaslanmış bir pozisyonda rahatça oturması gereken gönüllüye götürün. Daha sonra bir P 200 perpe ve steril filtre uçları kullanın.

100 mikrolitre aşıyı perpe ucuna çekin ve ucu burun boşluğunun hemen içine yerleştirin. Dairesel bir hareketle aşıyı burun mukozasına yavaşça boşaltın. Pipet ucunu çok geriye koymayın, aksi takdirde aşı boğazdan aşağı akar.

Bakterilerin kan dolaşımına girmesini önlemek için diğer naris için aşılamayı tekrarlayın. Pipet ile mukozayı bozmamaya dikkat edin. Daha sonra, bakterilerin mukoza boyunca dağılmasına izin vermek için gönüllünün 10 dakika boyunca yarı yaslanmış pozisyonda kalmasını sağlayın.

Aşıyı gönüllülere uyguladıktan sonra, bakteri miktar tayinini laboratuvarda tekrarlayın. Daha sonra tüpü tarih ve aşı dozu ile etiketleyin ve aşıyı eksi 80 santigrat derecede saklayın. Burun yıkamaya başlamadan önce, gönüllünün başı dikeyden 30 derece geriye eğik olacak şekilde rahatça oturmasını sağlayın.

Daha sonra gönüllünün derin bir nefes almasını ve dilini ağzın çatısına doğru yukarı ve geriye doğru itmesini sağlayın. Bu pozisyona ulaşıldığında gönüllü sinyalini alın. Şimdi burun boşluğunu dört kez 20 mililitre salin ile yıkayın ve bir seferde beş mililitre salini ön burun boşluğuna boşaltın.

Gönüllünün hemen öne eğilmesini ve sıvıyı dışarı atmak için burundan hızla bir folyo kaseye nefes vermesini sağlayın Her beş mililitre tuzlu su yıkamasından sonra. Burun boşluğunu dört adet 20 mililitre ile yıkadıktan sonra, toplanan tüm örnekleri bir santrifüj tüpünde bir araya getirin. Şimdi gönüllü nazal yıkama örneklerini 3, 345 kez G'de 10 dakika

Peletin içine 100 mikrolitre STGG ortamı ekleyin ve iyice karıştırın ve ardından tüpteki toplam hacmi belirleyin. Bir sonraki plaka, yeniden süspanse edilmiş peletin 20 mikrolitrelik bir damlası, gentamisin içeren bir kan agar plakasına damlatın ve tüm plakayı çizin. Burun yıkama aşılama sonrası ise, yeniden askıya alınmış peleti içeren 10 mikrolitre STGG kullanın.

Miles ve Misra yöntemiyle bakteri tayini için, nazal yıkama tüpüne 800 mikrolitre daha STGG ekleyin ve iyice karıştırın. Daha sonra 25 mikrolitre STGG bakteri hücresi solüsyonunu başka bir kan agar plakasına ve 25 mikrolitreyi bir çikolata agar plakasına yerleştirin ve her iki plakanın tamamını çizin. Daha sonra kalan bakterileri eksi 80 santigrat derecede iki kriyo şişesinde dondurun.

37 santigrat derece plakaları gece boyunca% 5 karbondioksit içinde inkübe edin. Ertesi gün, pnömokok ve diğer potansiyel solunum yolu patojenleri için plakaları inceleyin. Nazal yıkamalarla aşılanmış kanlı agar plakalarının okunması zor olabilir.

Bu görüntü, pnömokokların açıkça görülebildiği okunması kolay bir plaka örneğini göstermektedir. Bununla birlikte, bu plaka, her randevuda pnömokokların mevcut olup olmadığını belirlemeyi zorlaştıran birçok kokolonize flora içerir. Gönüllülerden, varsa herhangi bir üst solunum yolu semptomunu tanımlamaları istendi ve taşıyıcılar ile taşıyıcı olmayanlar arasındaki karşılaştırma vurgulandı.

Yakın zamanda pnömokok ile aşılanan 145 kişiden 28'i bu tabloda özetlenen semptomlardan şikayet etti. Bu gönüllülerin sekizi taşıyıcıydı, 20'si değildi. Tüm şikayetler dış güvenlik Komitesi tarafından incelendi ve tam soruşturmaların ardından yapıldı.

Pnömokok hastalığına hiçbir semptom atfedilmedi. En sık görülen semptomlar boğaz ağrısı, burun tıkanıklığı ve grip benzeri hastalıktı. Bu prosedürü denerken, özellikle gönüllülerin güvenliği için yöntemin her adımını kapsayan çok kapsamlı bir güvenlik planına sahip olmak önemlidir.

Bu videoyu izledikten sonra, deneysel insan pnömokok taşıyıcılığının nasıl kurulacağını iyi anlamalı ve bir burun yıkama kullanarak taşıyıcılığı nasıl tespit etmelisiniz.