Name: Gene Teslim Çalışmaları Ortotopik Mesane Kanseri Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-01T22:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Öğrenin, fare mesanelerine kateterizasyon ile MB49 kanser hücreleri enjekte ederek ortotopik mesane kanseri modeli oluşturmayı. Adenovirüs ile gen tedavisi teslimini ve lusiferaz analizi ile gen ifadesini değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Christina Voelkel-Johnson'a CA143505 NIH R21 tarafından desteklenmiştir.

Hayvanları içeren tüm prosedürleri gözden geçirilmiş ve Güney Carolina Tıp Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Protokol ağrısı için USDA kategori D altında kabul edildi. 1.. Hücre İmplantasyonu <ol><li> İki gün yordamı gerçekleştirmeden önce, T-25 şişeler içine 1 x 10 6 MB49 hücreleri plaka. (Arzu edildiği takdirde, ve antibiyotikler),% 10 FBS ile desteklenmiş yüksek glukoz DMEM kullanın. Bir şişe, anestezi uygulandı ve paralel olarak implante edilecek olan, beşe kadar her fare grubu için yeterlidir. </li><li> Prosedürün gününde, steril DMEM taban ortamı (1:02 seyreltme) ile% 0.125 ile% 0.25 &#39;lik steril doku kültürü dereceli tripsin seyreltilerek damlatma tripsin için hazırlar. 1,2 mi, 10 fareden için yeterlidir. Dengelenmeye bir 37 ° C su banyosu içine koyun. </li><li> Bir ısıtma yastığı Prewarm ve i sunmak için kullanılacak anestezi sisteminin nosecones altında konumlandırmaksoflurane. Isıtma pedi üzerine temiz emici bir yastık yerleştirin. </li><li> Anestezi sistemi indüksiyon odasına fareler yerleştirin ve% 3 izofluran ile anestezi neden. Fareler ayak tutam refleks kaybı ile doğrulanır bilincini kaybetmiş olduğunda, nosecones aktarabilirsiniz. Her bir hayvan sırt üstü yatırıldı ve düzgün vücut ısısını korumak için ısıtma pedi üzerine yerleştirilmiş emin olun. </li><li> Anesteziyi korumak için% 2 izofluran konsantrasyonu azaltır. </li><li> Kurumasını önlemek için her iki gözünde oftalmik merhem uygulayın. </li><li> İsteğe bağlı adım: karın saç çıkarın. In vivo bioluminescent görüntüleme yapılacaksa alt karın Saç kaldırılması gerekir. <ol><li> Dış genital temas etmemesine özen, karın kürk meydanında en düşük 1 gibi Veet tüy dökücü krem ​​gibi cömert bir tabaka uygulayın. 3 dakika bekleyin. </li><li> Kuru bir sünger ile bölgeyi ovularak saç çıkarın ve sonra cildi temizlemek için nemli bir sünger kullanın. Gerekirse, bir kez tekrarlayın. </li></ol></li><li> Idrar sondası <ol><li> Böyle KY gibi bir tahriş edici yağlama jeli ile yeni, steril 24 G pediatrik venöz kateter yağlayın. Çıkarın ve iğneyi atın. Kateter çevresinde sıvı sızıntı ortak bir sorun, yani değilse. Daha büyük sondaj kateter (20 G) kullanılabilir, daha sık on fareden bir daha meydana gelir. Bu 8 haftadan daha eski farelerde önemli bir husus olabilir. </li><li> Kateterin hub tutarak, fare arka bacakları yaymak ve üretral meatus maruz senin karşısında elinizin baş ve işaret parmağınızı kullanın. Yavaşça tam olarak eklemek için tezgah ile bir paralel açısını değiştirerek, bir 45 ° açıyla üretra içine kateter yerleştirin. </li><li> Tam yerleştirildikten sonra, bu tezgah paralel tutarak, yavaşça kateter kaldırın ve görsel bunun altında üretra değil vajina, yerleştirilir onaylamak. Doğru girdiyseniz, kateter olmak mümkün olacakvajina üretranın daha kısa olduğundan tam takılmamışsa. </li><li> % 1 izofluran konsantrasyonu azaltır. </li></ol></li><li> Bir P200 pipet için bir ipucu takın ve kateterin dış ucuna emme uygulanması ile mesaneden idrar çıkarın. Kateter göbeğinden kalan idrar çıkarın. Idrar atın ve yerine kateter bırakın. </li><li> Hava kabarcıkları dikkatle kaçınarak kateterin hub&#39;a 80 ul% 0.125 tripsin solüsyonu pipetle. Kateter hub için 1 ml hava doldurulmuş şırınga takın ve yavaş yavaş mesane içine tripsin teslim pistonu 0.1-0.2 ml basınız. </li><li> 15 dakika boyunca yerinde şırınga ve kateter tertibatını bırakın. Tekrar kalan anestezi farelerin herhangi bir (en fazla 4) için 1,8-1,11 adımları. Bekleme süresinde bir sonraki adıma geçin. İPUCU: Başlangıçta başkası hücreleri (adım 1.12) hazırlamak için yararlı olabilir. </li><li> Implantasyon için MB49 hücreleri hazırlayın. Hücreler, T-2 başına 1 x 10 6 plakalanmıştır5 şişesi 48 saat implantasyon öncesi (1.1 adım). <ol><li> Ortamı çıkarın ve şişeye% 0.25 tripsin 500 ul ekleyin. Hücreler tekrar süspansiyon tam DMEM&#39;de 5 ml ekleyin ayırmak zaman. Saymak için bir 50 ul bir kısım çıkarın ve 5 dakika boyunca 1000 rpm&#39;de santrifüj kalan. Santrifüj adımı esnasında adımları 1.12.2 ve 1.12.3 devam etmektedir. </li><li> Hemasitometre kullanarak hücreleri saymak. Hücre / ml hesaplanır. Daha sonra 4 x 10 6 hücre / ml (50 ul başına 2 x 10 5 hücre) üzere hücre pelleti getirmek için gerekli olan hacmi hesaplamak. </li><li> Santrifüj hücrelerden süpernatant dökün ve (aşama 1.12.2 hesaplanan) 4 x 10 6 hücre / ml &#39;ye hücrelerin süspansiyonu için gerekli olan hacmi kullanılarak DMEM baz ortamında pelletini. Oda sıcaklığında hücrelere tutun. </li></ol></li><li> Mesane tripsin tedavisi için 15 dakikalık bir zaman noktası ulaşıldığında, kateter yerinde bırakarak kateterden hava doldurulmuş şırınga çıkarın. Geçirilen tripsin Normal olacakly kateter yoluyla geri dışarı akar. Yukarıdaki adımda 1.9 olarak P200 pipet ile emme ile mesane kalan tripsin çıkarın ve atın. </li><li> Hemen sondanın merkezi haline MB49 hücre süspansiyonu, 50 ul pipetle. Kateterin göbeğine 1 ml hava ile dolu şırınga takın ve pistonu yavaşça 0.1-0.2 ml basarak mesane hücreleri sağlar. Beş fareler implant dört ek kez bu adım yukarı tekrarlayın. Herhangi kullanılmayan hücreleri atın. </li><li> Yerine kateter şırınga bırakarak, hücreler, 50 dakika için idrar torbasında yaşamak için izin verir. </li><li> Yavaşça üretradan kateter-şınnganın çekilme. Sıfıra izofluran konsantrasyonu döndürün ve her fareye bir santim uzakta ısıtma yastığı kurtarmak için roket ucu konisi veya iki hareket. </li><li> Bir Fare, doğrulma refleksini kazanmış zaman, kendi kafesine geri. </li></ol> 2. (8 Gün Hücreleri İmplantasyonunda sonra) Adenovirüs intravezikal teslim </p&gt; DİKKAT: protokolünün bu bölümü bulaşıcı bir ajan adenovirüs, kullanır ve sıkı BSL2 kurallar altında ele alınmalıdır (http://oma.od.nih.gov/manualchapters/intramural/3035/). Enfeksiyöz ajanlar ile gerçekleştirilen tüm işlemler South Carolina Tıp Üniversitesi Kurumsal Biyogüvenlik Kurulu tarafından kabul edildi. <ol><li> Sekiz gün MB49 hücreleri farelere implante sonra, hematüri için kontrol edin. Emici beyaz bir kâğıt parçası üzerinde bireysel hayvanları Pick up ve yavaşça kağıt üzerine idrarın damla leke için karın üzerine basın. Kırmızıya pembe İdrar hematüri gösterir ve tümörler kurduk bir işaretidir. Tümör alım oranı, en az% 80 olduğu ve mükemmel bir teknik ile% 100 kadar yüksek olabilir. </li><li> Buz üzerinde adenoviral stok çözülme ve steril, oda sıcaklığında PBS içinde 10 9 PFU/50 ul (2 x 10 10 PFU / ml) seyreltin. </li><li> Yukarıdaki adımlar, 1,3-1,6 tarif edildiği gibi fareler anestezi. </li><li> Adımda 1.8 &#39;de tarif edildiği gibi fare sondası ve aşama 1.9 olarak idrar kaldırma </li><li> Idrar kaldırıldıktan sonra hemen kateterin hub&#39;a virüs süspansiyonu 50 ul pipetle. Kateterin göbeğine 1 ml hava ile dolu şırınga takın ve pistonu yavaşça 0.1-0.2 ml basarak mesane virüsü sağlar. </li><li> Yerine kateter şırınga bırakarak, virüs 40 dakika için idrar torbasında yaşamak için izin verir. </li><li> Yavaşça üretradan kateter şırınga geri ve herhangi bir geri kalan virüs etkisiz hale getirmek için% 10 çamaşır suyu solüsyonu içine atın. </li><li> Sıfıra izofluran konsantrasyonu döndürün ve her fareye bir santim uzakta ısıtma yastığı kurtarmak için roket ucu konisi veya iki hareket. </li><li> Bir Fare, doğrulma refleksini kazanmış zaman, kendi kafesine geri. </li><li> Fareler belirtmek için Mark kafesleri adenovirüs ile telkin edilmiştir. Virüs birkaç gün boyunca kafes yatak içine dökülecek ve tüm kafesleri ve yatak olmalıdırele ve uygun dezenfekte. </li></ol>

<ol><li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2012%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer.+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2012.</a> CA Cancer. J. Clin. 62 (1), 10-29 (2012).</li>
<li>Seager, C. M., Puzio-Kuter, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravesical+delivery+of+rapamycin+suppresses+tumorigenesis+in+a+mouse+model+of+progressive+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Prev.+Res%22%5BJournal%5D)">Intravesical delivery of rapamycin suppresses tumorigenesis in a mouse model of progressive bladder cancer.</a> Cancer Prev. Res. 2 (12), 1008-1014 (2009).</li>
<li>Chodak, G. W., Shing, Y., Borge, M., Judge, S. M., Klagsbrun, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+heparin+binding+growth+factor+in+mouse+bladder+tumors+and+urine+from+mice+with+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Presence of heparin binding growth factor in mouse bladder tumors and urine from mice with bladder cancer.</a> Cancer Res. 46 (11), 5507-5510 (1986).</li>
<li>De Boer, E. C., Teppema, J. S., Steerenberg, P. A., De Jong, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrovirus+type+C+in+the+mouse+bladder+carcinoma+cell+line+MBT-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Retrovirus type C in the mouse bladder carcinoma cell line MBT-2.</a> J. Urol. 163 (6), 1999-2001 (2000).</li>
<li>Lodillinsky, C., Rodriguez, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+invasive+orthotopic+bladder+cancer+model+with+high+cathepsin+B+activity+resembling+human+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Novel invasive orthotopic bladder cancer model with high cathepsin B activity resembling human bladder cancer.</a> J. Urol. 182 (2), 749-755 (2009).</li>
<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101 (1), 120-124 (2008).</li>
<li>Brocks, C. P., Buttner, H., Bohle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+tumor+implantation+by+intravesical+gemcitabine+in+a+murine+model+of+superficial+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of tumor implantation by intravesical gemcitabine in a murine model of superficial bladder cancer.</a> J. Urol. 174 (3), 1115-1118 (2005).</li>
<li>Wu, Q., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+response+of+orthotopic+bladder+tumors+to+granulocyte+macrophage+colony-stimulating+factor+therapy+using+the+prostate-specific+antigen+gene+as+a+reporter.+Clin%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Monitoring the response of orthotopic bladder tumors to granulocyte macrophage colony-stimulating factor therapy using the prostate-specific antigen gene as a reporter. Clin.</a> Cancer Res. 10 (20), 6977-6984 (2004).</li>
<li>Wu, Q., Mahendran, R., Esuvaranathan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonviral+cytokine+gene+therapy+on+an+orthotopic+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nonviral cytokine gene therapy on an orthotopic bladder cancer model.</a> Clin. Cancer Res. 9 (12), 4522-4528 (2003).</li>
<li>Bonfil, R. D., Russo, D. M., Binda, M. M., Delgado, F. M., Vincenti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Higher+antitumor+activity+of+vinflunine+than+vinorelbine+against+an+orthotopic+murine+model+of+transitional+cell+carcinoma+of+the+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Urol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Higher antitumor activity of vinflunine than vinorelbine against an orthotopic murine model of transitional cell carcinoma of the bladder.</a> Urol. Oncol. 7 (4), 159-166 (2002).</li>
<li>Bohle, A., Jurczok, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+bladder+carcinoma+cell+adhesion+by+oligopeptide+combinations+in+vitro+and+in%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Inhibition of bladder carcinoma cell adhesion by oligopeptide combinations in vitro and in.</a> 167 (1), 357-363 (2002).</li>
<li>Gunther, J. H., Jurczok, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59 (12), 2834-2837 (1999).</li>
<li>Gunther, J. H., Frambach, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+acetylic+salicylic+acid+and+pentoxifylline+on+the+efficacy+of+intravesical+BCG+therapy+in+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Effects of acetylic salicylic acid and pentoxifylline on the efficacy of intravesical BCG therapy in orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> J. Urol. 161 (5), 1702-1706 (1999).</li>
<li>Dobek, G. L., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of murine bladder cancer.</a> J Vis Exp. (48), (2011).</li>
<li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+microenvironment+modification+during+progression+of+murine+orthotopic+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Dev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor and microenvironment modification during progression of murine orthotopic bladder cancer.</a> Clin. Dev. Immunol. 2011, 865684(2011).</li>
<li>Seow, S. W., Cai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+rhamnosus+GG+induces+tumor+regression+in+mice+bearing+orthotopic+bladder+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus rhamnosus GG induces tumor regression in mice bearing orthotopic bladder tumors.</a> Cancer Sci. 101 (3), 751-758 (2009).</li>
<li>Mangsbo, S. M., Ninalga, C., Essand, M., Loskog, A., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CpG+therapy+is+superior+to+BCG+in+an+orthotopic+bladder+cancer+model+and+generates+CD4%2B+T-cell+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunother%22%5BJournal%5D)">CpG therapy is superior to BCG in an orthotopic bladder cancer model and generates CD4+ T-cell immunity.</a> J. Immunother. 31 (1), 34-42 (2008).</li>
<li>Loskog, A. S., Fransson, M. E., Totterman, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AdCD40L+gene+therapy+counteracts+T+regulatory+cells+and+cures+aggressive+tumors+in+an+orthotopic+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">AdCD40L gene therapy counteracts T regulatory cells and cures aggressive tumors in an orthotopic bladder cancer model.</a> Clin. Cancer Res. 11 (24 Pt 1), 8816-8821 (2005).</li>
<li>Loskog, A., Ninalga, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+MB49+mouse+bladder+cancer+model+for+adenoviral+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Optimization of the MB49 mouse bladder cancer model for adenoviral gene therapy.</a> Lab Anim. 39 (4), 384-393 (2005).</li>
<li>Bockholt, N. A., Knudson, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-Interleukin-10R1+Monoclonal+Antibody+Enhances+Bacillus+Calmette-Guerin+Induced+T-Helper+Type+1+Immune+Responses+and+Antitumor+Immunity+in+a+Mouse+Orthotopic+Model+of+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Anti-Interleukin-10R1 Monoclonal Antibody Enhances Bacillus Calmette-Guerin Induced T-Helper Type 1 Immune Responses and Antitumor Immunity in a Mouse Orthotopic Model of Bladder Cancer.</a> J. Urol. 187 (6), 2228-2235 (2012).</li>
<li>Watanabe, F. T., Chade, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Curcumin%2C+but+not+Prima-1%2C+decreased+tumor+cell+proliferation+in+the+syngeneic+murine+orthotopic+bladder+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics%22%5BJournal%5D)">Curcumin, but not Prima-1, decreased tumor cell proliferation in the syngeneic murine orthotopic bladder tumor model.</a> Clinics. 66 (12), 2121-2124 (2011).</li>
<li>Chade, D. C., Andrade, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathological+characterization+of+a+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Braz.+J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Histopathological characterization of a syngeneic orthotopic murine bladder cancer model.</a> Int. Braz. J. Urol. 34 (2), 220-226 (2008).</li>
<li>Luo, Y., Chen, X., O'Donnell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+prostate+specific+antigen+to+measure+bladder+tumor+growth+in+a+mouse+orthotopic+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Use of prostate specific antigen to measure bladder tumor growth in a mouse orthotopic model.</a> J. Urol. 172, 2414-2420 (2004).</li>
<li>Zhang, Z., Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+therapeutic+potential+of+SA-sCD40L+in+the+orthotopic+model+of+superficial+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oncol%22%5BJournal%5D)">The therapeutic potential of SA-sCD40L in the orthotopic model of superficial bladder cancer.</a> Acta Oncol. 50 (7), 1111-1118 (2011).</li>
<li>Kohno, S., Luo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+type+1+mutant+HF10+oncolytic+viral+therapy+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus type 1 mutant HF10 oncolytic viral therapy for bladder cancer.</a> Urology. 66 (5), 1116-1121 (2005).</li>
<li>Kikuchi, E., Menendez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+gene+delivery+for+bladder+cancers+by+intravesically+administered+replication-competent+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Highly efficient gene delivery for bladder cancers by intravesically administered replication-competent retroviral vectors.</a> Clin. Cancer Res. 13 (15 Pt 1), 4511-4518 (2007).</li>
<li>Siemens, D. R., Austin, J. C., See, W. A., Tartaglia, J., Ratliff, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+gene+transfer+efficiency+by+viral+vectors+to+murine+bladder+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of gene transfer efficiency by viral vectors to murine bladder epithelium.</a> J. Urol. 165 (2), 667-671 (2001).</li>
<li>Siemens, D. R., Crist, S., Austin, J. C., Tartaglia, J., Ratliff, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+viral+vectors%3A+gene+transfer+efficiency+and+tissue+specificity+in+a+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Urol%22%5BJournal%5D)">Comparison of viral vectors: gene transfer efficiency and tissue specificity in a bladder cancer model.</a> J. Urol. 170 (3), 979-984 (2003).</li>
<li>Black, P. C., Shetty, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validating+bladder+cancer+xenograft+bioluminescence+with+magnetic+resonance+imaging%3A+the+significance+of+hypoxia+and+necrosis%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Validating bladder cancer xenograft bioluminescence with magnetic resonance imaging: the significance of hypoxia and necrosis.</a> BJU Int. 106 (11), 1799-1804 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu protokol açıklanan birincil metodoloji hücrelerin damlatılması veya mesane epiteline yerel teslimat için tasarlanmış herhangi bir ajan için geniş uygulamalara sahip fare mesane kateterizasyonu, olduğunu. Yukarıda özetlenen spesifik protokol kısa süreli çalışmalarda (~ 10 gün) için optimize edilmiştir. Daha yüksek bir hücre sayısı nedeniyle tümör yükü için daha hızlı tümör büyümesi ve olasılıkla hayvanların kaybına neden çünkü hücrelerin implante doğru sayısı, kritik öneme sahiptir. Damlatma için 200,000 MB49 hücreler...

Mesane kanseri 2012 1. beklenen yaklaşık 75,000 yeni vaka ve 15.000 ölüm ile ürogenital sistemin en sık görülen ikinci kanser türüdür. Nüks oranlarının yüksek mesane kanseri tedavisinde pahalı kanserlerin biri yapar ömür boyu takip gerektirir. Kas tabakası işgal etmiştir Mesane kanseri lenf sistemi yoluyla karaciğer, akciğer veya kemik metastaz yapabilir. 5 yıl sonra sadece% 20-40 hayatta gelişmiş tümörler sonuçları multimodal tedavi. Bu nedenle, yüzeyel mesane kanseri nüks ve ilerlemesini azaltılması gibi gelişmiş hastalığı olan hastalarda tedavi sonuçlarını iyileştirmeye yönelik etkili tedavi stratejilerine acilen ihtiyaç vardır. Yeni tedavilerin geliştirilmesi ilk in vitro değerlendirme sonrasında etkinliğini değerlendirmek için klinik öncesi modelleri gerektirmektedir. Tümör mikro ölçüde preclinic ihtiyacını vurgular ki, kanser gelişimi ve yanıt etkileyebilirtümörler ortaya edildiği veya buna al modelleri kökenli organda kurulabilir. Bir yaklaşım, tümörler, kendiliğinden ortaya çıkan ya da bir organa özgü bir şekilde indüklenebilir transgenik model geliştirilmesidir. Transjenik bir mesane kanseri modelinde mükemmel bir protokol son 2 yayınlanmıştır. Transgenik modellerin dezavantajı tümörler yavaş ve istenenden daha az tekdüzelik ile geliştirme eğiliminde olmasıdır. Buna ek olarak, bir üreme koloni korumanın maliyeti göz önünde bulundurulmalıdır. Transgenik model için alternatif bir ticari olarak temin edilebilir, farelerde tümör kurulması için kısa zaman dilimlerinde yararı vardır tümör hücrelerinin implantasyonu ortotopik vardır. Bazı insan mesane kanseri hücre çizgileri orthotopically yetiştirilebilir da (başarılı UM-UC-3 kullanmış), bu bağışıklığı yeterli farelerde tümörler oluşturmak için arzu edilebilir. Orthotopically büyümesi iki kemirgen mesane kanseri hücre çizgileri, MBT-2 ve MB49 3 bulunmaktadır. MBT-2 hücreleri çoğaltılıyor ile kontamine olduğundanC retrovirüsü 4 yazın, biz çalışmalar için MB49 hücreleri seçtiniz. Bu MB49 hücreleri, erkek fare izole edilmiş ve ortotopik implantasyonları dişi farelerde yapılan anatomik nedenlerle vardır edildi olduğunu not etmek önemlidir. Bu Y kromozomunun belirteçleri tarafından nakledilen hücrelerin kolay tanımlanması yararı vardır, ancak toplumsal cinsiyet uyumsuzluğu immünolojik çalışmalar için bir dezavantaj olabilir. Mesane epitel mikroorganizmaların enfeksiyonu için bir bariyer olarak işlev gören bir glikozaminoglikan (GAG) tabakası ile kaplı olduğu. Bu bariyer, bu zorluk (Tablo 1) üstesinden gelmek için geliştirilmiştir tümör hücreleri ve çeşitli yöntemler implantasyonu engelleyebilir. Elektrokoter GAG tabaka 5-13 ve bir protokol gösteren elektro-son Jüpiter 14 yayınlanmıştır bozmak için fiziksel bir araç olarak yaygın bir şekilde kullanılmaktadır. Ancak, elektrokoter birim mevcut olmamalı, kimyasal G yok etmek anlamına gelirÖrneğin gümüş nitrat ya da poli-L-lisin gibi AG tabakası, aynı zamanda 15-24 de kullanılabilir. Tümörler, bir gümüş nitrat küçük bir hacme mesane kısa maruz kalma ile etkili kurulan (5-10 ul, 0,15-1,0 M, ~ 10 saniye) ya da poli-L-lisin ile uzun temas (0.1 mg / ml 100 ul 20 dakika boyunca) (Tablo 1). Burada MB49 hücre implantasyonu kolaylaştırmak için tripsin kullanan bir yöntem tarif eder. Mesane kanseri için tedavi yaklaşımları geliştirmek amacıyla, gen terapisi önemli dikkat çekmiştir. Görüş Klinik açıdan, mesane kanseri, kolay organın erişilebilirliği ve yerel olarak yük sunmak için yeteneği, gen terapisi için ideal bir hedeftir. Mesane kanseri, gen terapisi için araştırılmıştır Viral vektörler bir onkolitik herpes simpleks virüsü 25, retrovirüs 26, canarypox virüsü 27, vaccinia virüsü, AAV ve adenoviru içerir28 s. Bizim protokolünün ikinci bölümünde, tümör hücrelerinin damlatılmasını hemen hemen aynıdır viral gönderim için bir yöntem tarif eder. Laboratuarımızda ilgi bir lusiferaz transgenini ifade adenoviral bir vektör ile biyolüminesensin yoluyla değerlendirmek gen teslimi için yeni yaklaşımların geliştirilmesi olduğunu. Bununla birlikte, mesane metodoloji kateterizasyon çeşitli maddelerin verilmesi için kullanılan ve bu nedenle geniş bir uygulama alanına sahip olabilir.

<table><tbody><tr><td> Reaktifin adı </td><td>Şirket</td><td>Katalog numarası</td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> 6-8 haftalık dişi fareler </td><td>Jackson Laboratories</td><td>Suş Adı: C57BL/6J Stok Numarası: 000664</td><td> </td></tr><tr><td> Tripsin* </td><td>MediaTech</td><td>MT25-053-CI</td><td> Fisher </td></tr><tr><td> DMEM* </td><td>MediaTech</td><td>MT10-017-CV</td><td> Fisher </td></tr><tr><td> FBS </td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td> Isıyla etkisizleştirilmiş </td></tr><tr><td> T25 şişeleri* </td><td>Corning Costar</td><td>Corning No.:3056 Fisher: 07-200-63</td><td> Fisher </td></tr><tr><td> MB49 hücreleri aracılığıyla elde edilmiştir </td><td>N/A</td><td>N/A</td><td> Dr. Boehle'den alınmıştır (bkz. referans11) </td></tr><tr><td> Puralube Veteriner Merhemi* </td><td>Pharmaderm</td><td>Henry Schein Company No.:036090-6050059 Fisher: NC9676869</td><td> Fisher </td></tr><tr><td> Tüy dökücü krem aracılığıyla elde edilmiştir: Veet </td><td>yerel eczane</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Yağlayıcı: K-Y Jelly </td><td>yerel eczane</td><td></td><td> </td></tr><tr><td> Kateterler* </td><td>Exel International</td><td>Exel International No.:26751; Fisher: 14-841-21</td><td> Fisher </td></tr><tr><td> Isoflurane </td><td>Terrell</td><td>NDC 66794-011-25</td><td> Hastane eczanesinden elde edilmiştir </td></tr><tr><td> 1 ml kayma uçlu TB şırıngaları </td><td>Becton Dickinson</td><td>BD309659 Fisher:14-823-434</td><td> </td></tr><tr><td> D-Luciferin </td><td>Altın Biyoteknolojisi</td><td>L-123-1</td><td> </td></tr><tr><td> Ad-CMV-Luc </td><td>VectorBiolabs</td><td>1000; in vivo kullanımı için büyük ölçekli amplifikasyon ve CsCl saflaştırması talep edin< <</td><td>p>> BSL2 muhafazası gerektiren enfeksiyöz ajan </td></tr><tr><td> Steady-Glo&nbsp; Lusiferaz Test Sistemi </td><td>Promega</td><td>E2510 (10 ml), E2520 (100 ml) veya E2550 (10 x 100 ml)</td><td> </td></tr><tr><td colspan="4">*birden fazla satıcıdan temin edilebilir</td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENT</td></tr><tr><td> Anestezi sistemi </td><td>E-Z Sistemleri, Euthanex Corporation</td><td>Anestezi sistemi: EZ7000 5 portlu fare solunum cihazı: EZ109</td><td> Fisher </td></tr><tr><td> Xenogen IVIS 200 </td><td>Caliper Life Sciences</td> aracılığıyla elde edilmiştir<td>http://www.caliperls.com/products/preclinical-imaging/ivis-imaging-system-200-series.htm</td><td> </td></tr><tr><td> FLUOstar Optima </td><td>BMG Labtech</td><td>http://www.bmglabtech.com/products/microplate-reader/instruments.cfm?product_id=2</td><td> </td></tr></tbody></table>

gene teslim Çalışmaları ortotopik mesane kanseri modeli

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Mesane kanseri ürogenital sistem ve nüks ve ilerleme ihtiyaç vardır azaltabilir yeni terapötik yaklaşımların en sık görülen ikinci kanser türüdür. Tümör mikro önemli ölçüde tümör gelişimini ve tedavi yanıtı etkileyebilir. Bu kaynaklandıkları organda tümör hücrelerinin büyümesini bu nedenle sık sık istenmektedir. Bu protokol MB49 kemirgen hücreleri, mesane karsinomu kateterizasyon ile torbasına damlatılır edildiği, mesane kanseri ortotopik bir model tanımlar. Bu modelde başarılı tümör hücre implantasyonu, fiziksel ya da kimyasal yollarla gerçekleştirilebilir koruyucu glikozaminoglikan tabakası, bozulması gerektirir. Protokolde mesane önce hücre damlatma için tripsin ile muamele edilmektedir. Mesane kateterizasyonu da tümörler oluştuğunda kez terapötik sunmak için de kullanılabilir. Bu protokol, bir lusiferaz raportör geni ifade eden bir adenoviral konstruktun teslimat açıklanmaktadır. O süreur protokol kısa süreli çalışmalar için optimize edilmiş ve gen teslimat odaklanmaktadır olmuştur, fare mesane kateterizasyonu metodoloji geniş uygulamaları vardır.

Hematüri 200,000 MB49 hücrelerinin implantasyonundan sonra 8 gün içinde hemen hemen bütün farelerde gözlenmiştir. Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, 34.7 ± 3.3 mg, iki katına göre, mesane ağırlık (aralık 31-37 mg, n = 4) nontumor 87.5 ± 19.2 mg taşıyan farelerin (aralık 77-120 mg, n = 10)&#39; in farelerde bu MB49 hücreleri ile implante edilmiştir. Gen teslimat açısından, biz farelere 24 saat görüntüleme viral instillasyonun 48 saat (Şekil 2) sonra daha güçlü bir sinyal verir sonra bulu...

Kaynaklı organ içine kanser hücrelerinin implantasyonu yeni tedaviler değerlendirmek için yararlı bir ön-klinik modeli olarak hizmet edebilir. MB49 mesane karsinom hücreleri intravezikal Damla damla akıtma sonrası mesane içinde yetiştirilebilir. Bu protokol, tümör implantasyonu ve adenoviral teslimat amacıyla fare mesane kateterizasyon gösterir.

Gene Teslim Çalışmaları Ortotopik Mesane Kanseri Modeli

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Bu prosedürün genel amacı, mesane kanseri tedavilerini test etmek için kullanılabilecek tümörlerin fare mesanelerinde tutarlı ve hızlı bir şekilde üretilmesidir. Bu işlem, öncelikle kateterizasyon kullanılarak fare mesanelerine kanser hücrelerinin verilmesiyle gerçekleştirilir. Sekiz gün sonra, lusiferaz raporlaştırıcı gen eksprese eden bir adenovirüs vermek için kateterizasyon işlemi tekrarlanır.Ardından 24 saat sonra, viral gen ekspresyonu bir lusiferaz testi kullanılarak ölçülür. Optimal gen ekspresyonunun hangi koşullar altında sağlanabileceğini gösteren sonuçlar elde edilir. Kateterizasyon ve uygulama adımlarının öğrenilmesinin zor olması ve mesaneye zarar verme veya uygulanan materyalin sızmasına neden olma potansiyeli nedeniyle, bu tekniğin görsel olarak gösterimi kritik öneme sahiptir.Hücre implantasyonunu gerçekleştirmeden iki gün önce, işlem gününde 10% FBS ile desteklenmiş yüksek glukozlu DMEM içerisinde 1 × 10⁶ MB 49 hücresini T 25 flasklara ekleyin. Steril 0.25% doku kültürü sınıfı tripsini, DMEM baz ortamı kullanarak seyrelterek instalasyon için tripsini hazırlayın. Çözeltiyi dengelemek için 37 °C'lik bir su banyosuna yerleştirin; bir ısıtma pedini önceden ısıtın ve i

an-orthotopic-bladder-cancer-model-for-gene-delivery-studies

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kateterizasyon, yerel koterizasyon ve yanık sitelerine karsinom hücreleri sonraki yapışma ile minimal invaziv bir moda dişi farelerde mesane tümörleri kurulur.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

Ultrason ve bioluminescent görüntüleme ile intravezikal teslim Sarna ve izleme tümör büyümesinin antitümör etkileri değerlendirmek için ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmak.

Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi

Bu videoda, organ ortamının gelişmekte olan tümörler üzerindeki rolünü incelemek için kültürlenmiş mesane tümörü organoidlerinin murin mesanesine ortotopik transplantasyonunu açıklıyoruz.

Mesane Tümörü Organoid Modeli: Mesane Organoidlerinin Alıcı Murin Mesanesine Ortotopik Transplantasyonu İçin Bir Yöntem

Bu videoda, kanser hücrelerini bir fare modelinin mesanesine iletmenin intravezikal prosedürünü açıklıyoruz. Bu prosedür, terapötik stratejiler geliştirmek için kullanılabilecek bir ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Ortotopik Mesane Tümörünün Fare Modelinde Modellenmesi: Kanser Hücrelerinin Murin Mesanesine İntravezikal Uygulanması İçin Bir Prosedür

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Bu protokol, dişi C57BL / 6J fareler, tümör büyümesi izlenmesinde sıçangil ortotopik mesane tümörlerinin üretimini tarif eder.

Bir Fare Ortotopik Mesane Tümör Modeli ve Tümör Tespit Sistemi

Biz'DNA plazmid dır fare mesane vivo içinde İdrar Kateterizasyon ve elektroporasyon ürotelyal hücre içine bir roman yöntemi açıklanmaktadır. Kesesi hastalıkları otokton fare modelleri oluşturmak için hızlı ve kolay bir yol sunar.

Plazmid DNA teslimat için fare mesane Urothelium elektroporasyon tarafından roman yöntemi

Bu protokol, yüksek dereceli ürosityal Hücre Karsinomu hücrelerinin intra-vesically instilling veya intra-rektal enjekte kolorektal kanser hücreleri olmayan obez diyabetik/şiddetli kombine tarafından hasta türeyen ortootopik xenograft modellerinin oluşturulması açıklanmaktadır immüneksikliği (NOD/SCıD) primer tümör büyümesi için fareler ve lenf nodu stromal hücrelerin etkisi altında spontan metastaz, hangi insan metastatik hastalıkların ilerlemesini taklit.

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Bu protokol, kanserojen kaynaklı murin mesane kanserinden elde edilen mesane tümörü organoidlerinin üç boyutlu in vitro kültürünü oluşturmak için ayrıntılı deneysel adımlar sağlar. Paslanma, genetik mühendislik ve tümör organoidlerinin ortotopik transplantasyonlarını içeren kültür yöntemleri tanımlanmıştır.

Fare Mesane Tümörü Organoidlerinin Kültürü, Manipülasyonu ve Ortotopik Transplantasyonu

Bu protokol, ilgilenilen genlerde delesyon barındıran fare ürotelyal organoidlerinin üretilmesi ve karakterizasyonu sürecini açıklar. Yöntemler arasında fare ürotelyal hücrelerinin toplanması, bir CMV promotörü ile Cre ekspresyonunu yönlendiren adenovirüs ile ex vivo transdüksiyon ve in vitro ve in vivo karakterizasyon bulunmaktadır.

Eski Vivo Fare Ürotelyal Hücrelerinde Adenovirüs-Cre Aracılı Gen Delesyonlarının Organoid Modeli

Öğrenin, fare mesanelerine kateterizasyon ile MB49 kanser hücreleri enjekte ederek ortotopik mesane kanseri modeli oluşturmayı. Adenovirüs ile gen tedavisi teslimini ve lusiferaz analizi ile gen ifadesini değerlendirin.

Gene Teslim Çalışmaları Ortotopik Mesane Kanseri Modeli

Daha fazla video keşfet