Mikrovasküler Fonksiyon ve Tadilat üzerine Arteriolar Ligasyonu etkisini değerlendirmek için mürin Spinotrapezius Modeli

Periferik vasküler hastalık nüfusun yaklaşık% 12 ila 14'ünü etkiler ve özellikle tütün kullanıcıları ve diyabet, obezite, hipertansiyon, ileri evre veya aterosklerozu olan bireyler arasında yaygındır. Bu ameliyatın amacı, üç besleyici arterden birini aynalama spino trapezius kasının coddle yarısına bağlayarak iskelet kası iskemisi için bir model üretmektir. Bu animasyon, bu arterlerin genel yerleşimini gösterir ve iskemiye yanıt olarak amaçlanan ligasyon bölgesini gösterir.

Vasküler doku, fare suşuna bağlı olarak arterio agenezi karakteristiğinde değişikliklere uğrayacaktır. Bu, köprüleme teminatlarının oluşturulmasını veya damar kıvrımlılığının arttırılmasını içerir. Ayrıca, intra vital mikroskopi kullanarak spinal trapez üzerinde fonksiyonel bir vazodilatasyon prosedürünün nasıl gerçekleştirileceğini de göstereceğiz.

Bu, kasın dikkatli bir şekilde açığa çıkarılmasını, uyarıcı elektrotların güç kaynakları ve kontrolörleri ile yerleştirilmesini ve ardından görüntüleme cihazının kurulmasını içerir. Son olarak, kasın nasıl eksize edileceğini göstereceğiz ve immünokimyasal boyama ve görüntüleme için uygun bir fiksasyon sürecini tanımlayacağız. Merhaba, benim adım Shane Pierce Kotler ve Charlottesville'deki Virginia Üniversitesi Biyomedikal Mühendisliği Bölümü'nde doçentim.

Merhaba, ben Kyle Martin. Shane'in laboratuvarında yüksek lisans öğrencisiyim ve spinal trapez ligasyon modelinde performans sergileyeceğim. Laboratuvarımız, özellikle kalp hastalığı, periferik arter hastalığı ve inme gibi iskemik hastalık ortamlarında mikrovasküler büyüme ve yeniden şekillenme üzerine çalışmaktadır.

Arteriyel kan akışının lokalize tıkanıklığının aşağı akış mikrovasküler ağlarda nasıl yapısal adaptasyonlar oluşturduğunu incelemek için bu aynalayıcı spinal trapez ligasyon modelini geliştirdik. Bu modeli, analiz için histolojik kesit gerektirmeyen çok ince bir kasta arter, nörojenez ve anjiyogenez hakkında FFA'ların tüm ağ görünümünü sunması nedeniyle, iyi bilinen ve yaygın olarak kullanılan arka ekstremite iskemi modelini tamamlayıcı olarak görüyoruz. Bu kas çok ince olduğundan ve ligasyon kan akışında tekrarlanabilir bir azalma yarattığından, arteriyel ligasyonun etkilerini tüm mikrovasküler yatak boyunca ve tek hücre düzeyinde çözünürlükle görselleştirebiliriz.

Kyle, spino trapez ligasyon modelini gerçekleştirmek için bizi adım adım prosedürden geçirdikten sonra, Cal Poly'deki işbirlikçilerimiz bize bu modeli fonksiyonel vazodilatasyonu incelemek için nasıl kullandıklarını gösterecekler. Bunu gördüğümüzde, sizi Virginia Üniversitesi'ne geri getireceğiz ve görüntüleme ve boyamadan önce yapılması gereken omurga trapeziusunu toplayacağız. Merhaba, benim adım Trevor Cardinal.

San Luis Obispo, California'daki Cal Poly State Üniversitesi Biyomedikal Mühendisliği Bölümü'nde yardımcı doçentim ve adım Josh Cutz. San Luis Obispo'daki Cal Poly'de biyomedikal mühendisliği alanında yüksek lisans öğrencisiyim. Araştırma laboratuvarımızın birincil ilgi alanı, periferik VA hastalığında ortaya çıkan kronik iskeminin direnç vaskülatürünün fonksiyonel yetenekleri üzerindeki etkisini anlamaktır.

Bu nedenle, spinal trapez besleme arter ligasyonu ameliyatı gerçekleştirildikten sonra, Josh laboratuvarımızda kullanılan fonksiyonel vazodilatasyon prosedürünü gösterecektir. Laboratuvarımızda, arteriyel oklüzyonun vasküler reaktivite ve kan akışı kontrol cihazları üzerindeki etkisini incelemek için fonksiyonel vazodilatasyon prosedürünü kullanıyoruz. Önceden hazırlanmak için 10 düğümlü pozisyon sütürü, bir o kapatma sütürü, bir iğne tutucu, iris makası, standart forseps, yaylı makas ve bükülmüş bir mikro prob içerir.

Cerrahi aletleri hazırladıktan sonra fareyi uyuşturun, burada ekran formülünü ve dozajını kullanıyoruz. Anestezi ile parmağınızla onaylayın, refleks testini sıkıştırın, ardından hayvanın sırtından büyük bir kürk parçası olan elektrikli bir tıraş bıçağı şekli kullanarak koruyucu IGEL uygulayın. Spinal trapez ligasyonu sadece kürek kemiğinin yakınında küçük bir alanın temizlenmesini gerektirse de, birkaç gün içinde gerçekleştirilecek spinal trapez dokusu alımı çok daha büyük bir temizlenmiş yüzey gerektirecektir.

Fazla kürkü aceleyle alın, ardından üreticinin talimatlarına göre tüy dökücü krem uygulayın. Sırtını ıslak bir süngerle yıkayın. Ardından, Betadine odine ile biten üç set alternatif alkollü Betadine mendil uygulayın.

İyi aydınlatma koşulları altında, en iyi insizyon bölgesi, dorsal yağ yastığının transdermal olarak tanımlanmasıyla bulunabilir. Besleyici arter sonunda spinal trapez kası boyunca aniden enine olduğundan, coddle yağ yastığı bordürü bu konumdaki cildi çadır haline getirir ve iris makasını doğrudan yukarıdan hayvanın sırtına dik olarak getirir ve üç ila beş milimetrelik doğrusal bir kesi yapmak için keser. Aydınlatma veya cilt pigmentasyonu transdermal tanımlamaya izin vermiyorsa.

Kesi beş milimetre kürek kemiğinin kemik çıkıntısına yerleştirin, kesiği cilt katmanları boyunca uzatın ve spinal trapezius'u bulmak için gerektiği kadar yanal olarak genişletin. Ligasyon bölgesine erişmek için üstteki fasyayı inceleyin. Bu durumda olduğu gibi bir yüzey damarı hasar görür ve kanarsa, kanama süresinin durmasına izin verin ve gerekirse basınç uygulayın, kurumasını önlemek için tuzlu su ile karıştırın.

Belirtilen arter, spinal trapezin dorsal yönü boyunca uzanır ve daha sonra kas boyunca ve ventral yağ yastığına doğru enine olur. Omurga trapezinin yan kenarını bulun ve neredeyse ters çevrilecek şekilde kaldırarak yansıtın. Bu, ventral yönünü ortaya çıkarır ve arter transversal bölgesi, damarı gizleyen ventral yağ yastıkçığını diseke eder.

Ezilme yaralanmasını önlemek için forseps basıncına dikkat edin. Burada cerrah bağlanacak spina trapezius arterini gösterir. Damar çiftlerinin varlığına dikkat edin, daha kısa etkili adenozin gibi vazodilatör veya daha uzun etkili papin uygulanabilir.

Bu durumda, arter oklarla gösterildiği gibi diğer iki damar arasında yer alır. Biri artere benzer boyuttadır ve kas yansıtılmazsa daha yanal olarak yattığı görülürken, diğeri çok daha büyüktür ve daha hemen uzanır. İki ligasyon bölgesi ai ile işaretlenmiştir.

İlk bağ, ikinciye göre aşağı yönde yerleştirilir. Bu, damarın hala kanla dolu olmasını ve ikinci ligatürün yerleştirilmesi sırasında görünür olmasını sağlar. A, kesilecek bölgeyi gösterir.

Arter ve eşleştirilmiş veninin C ile özetlenen ventral yağ yastığına girdiği B konumuna dikkat edin.Bu, ikinci küçük damarın bir damar olduğunu bilmemizi sağlar. Ayrıca, D tarafından özetlenen omurga sanatı trapezius kasının kendisine dikkat edin.Ekteki metin protokolünde arteri damardan ayırt etmek için birkaç işaretçi verilmiştir. Ama kısaca bizim tercih ettiğimiz yöntem mikro prob ile basınç uygulayarak kan akışını engellemektir.

Damar bir arter ise, akış aşağı yönde yansıyan kas uygulamasına doğru engellenecektir. Buradaki teknik, daha büyük kabı dışlar. Gerekirse, arteri diğer damarlardan ayırmak için 80 derece bükülmüş mikro probu kullanın.

Bu, damarın altındaki bağ dokusunu delerek ve bir boşluğu genişletmek için kısa yanal hareketler yaparak yapılır. Prob kolayca geçirilene kadar, dikiş iğnesi artık arterin altından daha kolay geçirilebilir. Bu durumda, küçük bir damar çentiklendi ve küçük kanamaya neden oldu.

Bu damar, iskemik bölgeden en az etkiye sahip olması gereken kadar uzakta yer alır. Prosedürde, tek bir cerrahın düğümünü bağlayın ve bir sonraki dikişi hazırlayın. Yine, önceden yapılmış boşluktan geçmek ve başka bir cerrahın düğümünü önceki bağın birkaç milimetre yukarısına bağlamak.

Kasın yansıdığını ve akış yönünün beklenenin tersi olabileceğini unutmayın. Her iki bağ da yerleştirildikten sonra, tıkalı bir kırmızı kan hücresi kolonunun kanıtını arayın. Akış durdurulmadıysa, başka bir ligatür gereklidir.

Aksi takdirde, herhangi bir kanama meydana gelirse, bu durumda ligasyonun başarılı olduğunu ve arteriyel kanama görülmediğini not edin. Alternatif bir yöntem, aşağı yönde tek bir bağ ve transeksiyon kullanır. Bu yöntemin ne zaman tercih edileceği konusunda ekteki literatüre bakın.

Kası orijinal yönüne geri getirin, yer değiştirmiş yağ dokusunu ve fasyayı yeniden konumlandırın ve adot emilemeyen sütür ile kapatın. Son olarak, fareyi gözlem altında ısıtılmış bir kurtarma kafesine yerleştirin ve spino trapezius intra vital mikroskobu için analjezik yapın. Fare önce bir indüksiyon odasında flor ile uyuşturulur ve daha sonra bir burun konisi aracılığıyla sürekli flor akışına bağlanır.

Rektal sıcaklık probunu yerleştirin ve termo kontrol cihazını önceden hazırlanmak için 35 derece C'ye ayarlayın aletler arasında iris makası, standart forseps, yaylı makas ve nemli bir PBS çubuğu bulunur. İris makası ve standart patent forseps kullanarak spinal trapezin burun ucunda bir cilt kesisi yapın. İnsizyon kraniyalini yağ yastığına uzatın, bir at nalı insizyonu oluşturun ve kurumayı önlemek için cilt flebini plastik sargı ile örtün, köreltme, görünürlüğü en üst düzeye çıkarmak için deri altı bağ dokusunu ince forseps ile inceleyin.

Uyarıcı elektrotları yerleştirin, akım alanının boyutunu en aza indirmek için mümkün olduğunca yakın tutun, bunları omurganın hemen yanında açıkta kalan kasın körük ucuna yerleştirin. Kil kullanarak çapalayın. 200 mikrosaniye süreli, iki miliamper genlikli kare dalgalara ayarlanmış ve bir hertz'de iletilen bir güç laboratuvarı veri toplama sistemi, uyaran, izolatör ve laboratuvar şeması yazılımı kullanarak elektrot yerleşimini doğrulamak için bir test stimülasyonu gerçekleştirin.

Açıkta kalan kası tekrar streç filmle örtün. Kurumayı önlemek için, her kap çapının dengelenmesi için 30 dakika bekleyin ve ardından görüntünüzü veya videonuzu çekin. Vaskülatür mimarisini görüntülemek için intravital mikroskobu spinal trapez kasının üzerine yerleştirin.

Daldırma merceği kullanıyorsanız, görünen en büyük damar olan ana arterin üzerinden başlayarak objektif ile plastik sargı arasına bir damla PBS yerleştirin. İlgilenilen gemiyi bulmak için XY düzlemindeki sahneyi manipüle edin. Kası, önceki süre ve genliğin kare dalgaları ile uyarın, ancak stimülasyondan hemen sonra sekiz hertz'de ve 90 saniye boyunca verilir.

Gemiyi görüntüleyin ve dinlenme çapına dönene kadar her dakika bunu yapmaya devam edin. Veri analizi, video kaliperleri ile gerçek zamanlı olarak veya görüntü analiz yazılımı ile çevrimdışı olarak gerçekleştirilebilir. İlk insizyondan karşı kas kullanılarak görüntülemeye kadar prosedürü tekrarlayın.

Bittiğinde. Spina trapezius doku hasadı için standart A CUC protokolünü izleyerek fareye ötenazi yapın. İris makasına, standart forsepslere ve yaylı makaslara ihtiyacımız olacak.

Fareyi daha önce belirtildiği gibi uyuşturun. Farenin kürek kemiğine birkaç milimetre kraniyal kesi yaparak başlayın. Kesi ucunu yanal olarak genişletin ve ardından her iki tarafı da kaplayın.

Amaç, insizyon yapıldıktan sonra T üçten L dörde kadar uzanan spinal trapezius kasını ortaya çıkarmaktır. Cilt, bağ dokusunun nazikçe çekilmesi veya dikkatli bir şekilde kesilmesi, yerinde tutulması, kurumasını önlemek ve doku işlemeye yardımcı olmak için tuzlu su ile süper kaynaştırılması ile arkadan ayrılabilir. Dorsal yağ dokusunu çıkarmak ve spinal trapez kasını ortaya çıkarmak için künt diseksiyon kullanın.

Benzer şekilde, ventral yağ dokusunu çıkarın. Kasın yansımasından sonra, hayvanın sağ tarafındaki omurga t trapezius burada tanımlanır. Ardından, üstteki fasyayı mümkün olduğunca çıkarın.

Prosedürün bu kısmı sıkıcı olabilir, ancak mikroskopi sırasında artefaktları önlemek için önemlidir. Bağ dokusu çıkarıldıktan sonra, önce yan kenarı kabaca sırta paralel olarak keserek ve bir kraniyalden kıvrılma yönünde hareket ettirerek dokuyu gösterildiği gibi eksize edin. Daha sonra en kraniyal genişlik boyunca enine kesin ve son olarak kontralateral kası toplamak için omurgaya en yakın medial sınır boyunca kesin.

Aynı prosedürü izleyin. Önce dorsal yağ dokusunu, ardından ventral yağ dokusunu çıkarın ve son olarak kesim sırasında üstteki fasyayı çıkarın. Enstrümanları daha az baskın olan ele geçirmeyi daha kolay bulabilirsiniz.

Eksize edilen doku, hayvan ötenazi yapıldıktan sonra burada belirtilen prosedürü takiben sabitlenebilir ve yıkanabilir. Geliştirilmiş bir A CUC protokolüne göre. Alternatif bir perfüzyon fiksasyon prosedürü hakkında ayrıntılar için ekteki literatüre bakın.

Burada yansıyan spini trapezius kasının etiketli bir diyagramını gösteriyoruz. Besleme arterini açığa çıkardıktan sonra, harfler daha önce olduğu gibi bölgeleri gösterir. Her hayvanın kendine özgü bir anatomisi olduğunu unutmayın.

Bu özel fare, diğer iki damarın yakınlığı nedeniyle bu prosedür için oldukça zor olarak kabul edilir. Burada daha tipik bir hayvan gösterilmektedir. Belirtilen arterin hemen üzerindeki para veninden nispeten büyük bir şekilde ayrılmasına ve üçüncü bir damarın olmamasına dikkat edin.

Burada, düz kas alfa aktini için boyanmış, bağlanmış sağ taraflı spinal trapezius kasının konfokal mikroskop montajını görüyoruz. İskemik koşullar altında, ligasyon bölgesinin akış aşağısında belirtilen bölgede yeniden şekillenme olmuştur. Bu değişiklikler, burada arter yolu uzunluğunun çekirdek mesafesi oranı olarak kıvrımlılığı ölçmek için kullandığımız görüntü analiz yazılımı ile ölçülebilir.

Burada gösterilen bazı örnek veriler, kontralateral kontrole kıyasla artmış damar kıvrımlılığı için istatistiksel olarak anlamlı bir sonuç göstermektedir. Ayrıca, çevrimdışı bir karanlık alan mikroskobunda MicroVision tıbbi yazılımı bir VA kullanarak damar reaktivitesinin fonksiyonel ölçümlerini de gösteriyoruz. Video damar çapları stimülasyondan önce ve stimülasyondan sonra ölçülür ve daha sonra yüzde değişim olarak birbirleriyle karşılaştırılır.

Burada gösterilen örnek veriler, stimülasyondan sonra terminal arterler için artan damar çapı için istatistiksel olarak anlamlı bir sonucu göstermektedir. Merhaba, ben Alexander Ell ve bu videoyu düzenleyen Pierce Scholer laboratuvarında lisans öğrencisiyim. Birlikte, aynalama spin trapezius kasında iskelet kası iskemisi için nasıl bir model oluşturulacağını gösterdik.

Daha sonra vasküler reaktiviteyi ölçmek ve kan akışı kontrolü için uygun fonksiyonel bir vazodilatasyon prosedürü gösterdik. Son olarak, immünokimyasal boyama ve görüntüleme için uygun fiksasyona hazırlanmak için kasın nasıl eksize edileceğini gösterdik. San Luis Obispo'daki ve burada Charlottesville'deki işbirlikçilerim adına, izlediğiniz için teşekkür etmek ve araştırma çabalarınızda hoşça kal ve iyi şanslar diliyorum.