Name: Mikrovasküler Fonksiyon ve Tadilat üzerine Arteriolar Ligasyonu etkisini değerlendirmek için mürin Spinotrapezius Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 43 s
Description: Keşfedin mürin spinotrapezius kasında arter ligasyonu modelini; iskemik hastalıklarda mikrovasküler ağların yeniden yapılanmasını ve fonksiyonel vazodilatasyon mekanizmalarını intravital mikroskopi ile incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz onun parçaları &quot;Havaalanı Lounge&quot;, &quot;Duvar&quot; ve &quot;Akşam Melodram (görünüş sırasına göre) dahil olmak üzere, ilgili video onun Creative Commons lisanslı müzik kullanımı için Kevin Macleod kabul ediyorum.&quot; Biz de ameliyat video ile onların yardım için Ndubisi Okeke ve Frederick Torstrick kabul etmek istiyorum.

1. Spinotrapezius Yem Arter Ligasyonu Cerrahisi <ol><li> Intraperitoneal enjeksiyonu ile fare uyuştur. , 0.5 ml şırınga içinde, formüle: 100 mg / ml 0.06 ml ketamin 20.0 mg / ml, 0.03 ml Xylazine 0.4 mg / ml, 0.01 ml Atropin % 0.9 Saline 0.30 ml. Doz: 0.01 ml * gram vücut ağırlığı başına, ip </li></ol> Fare zorlanma ve stok üzerine * Doz değişken indüksiyon bir saat içinde bu kadar fare kurtarma olduğunu buna göre ayarlayın. <ol start="2"><li> Kornea kuruma önlemek için standart oftalmik merhem uygulayın. </li><li> Tüy dökücü krem ​​kısa uygulaması takip kırpma makası kullanarak arka saç çıkarın. </li><li> Klorheksidin veya povidon-iyot ile cerrahi alanında dezenfekte edin. Povidon-iyot ile biten etanol üç kez Alternatif povidon-iyot,. </li><li> Isıtıcı ped ve steril örtü ile, önceden hazırlanmış cerrahi çalışma yüzeyi fare aktarınyerde. </li><li> Tenting ile doku iris makas ve standart desen forseps (örneğin FST, 11271-30) kullanarak ve paralel kesme kürek kemikli öne kaudal yaklaşık 5 mm dorsal deri yoluyla doğrusal bir kesi (3-5 mm) oluşturma omurga. Hedef kesi yeri deri pigmentasyonu veriyorsa dorsal yağ yastığı transdermal görselleştirme tarafından tespit edilebilir; yağ pedinin kaudal sınırında kesti. Gerektiği gibi kesi genişletin ve yay makas kullanılarak sekonder deri katmanları aracılığıyla genişletmek. <ol><li> Anatomik notu - spinotrapezius kas dorsal yatıyor ve omurganın her iki tarafında L3 T4 uzanır. Ön sınırından yaklaşık omuz bıçak yanal olarak uzanır. Kası en posterior sınır anterior sınırına medial yatıyor ve omurga ile aynı hizada koyabilir böylece kaudal yönde tapers. İki yağ yastıkları spinotrapezius doğrudan dorsal ve ventral döşeme de dikkat etmek önemlidirkranial yarısına doğru kas. </li><li> Insizyon nedeniyle iltihap sham ligasyon ameliyatı spinotrapezius vaskülatürün biçimlenme hiçbir değişiklik gösterdiği gibi, vasküler remodeling cevabı üzerinde herhangi bir etkiye sahip olduğu gösterilmiştir. İki mekansal faktörlerin bu sonuca katkıda bulunmaktadır. İlk olarak kesik kas vasküler response tipik olarak incelenmiştir ilgi bölgesi gelen kafatası yönde 5 mm ile uzaklaştırılır. Buna ek olarak, dorsal deri üzerinde kesi spinotrapezius kas kafatası üçüncü tepesinde yer alan bir ventral yağ ped ile damar ligasyon yer ayrılır. </li></ol></li><li> Kas kuruma önlemek için ısıtılmış Ringer solüsyonu ile kesi sulayın. Böyle papaverin gibi vazodilatörlerin Uygulama ligasyonu için hedef arter görselleştirmek yardımcı olacaktır. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında yatan musc (kaldırmasını değil ama) teşrih künt ve ayırmak için dorsal beyaz yağ yastığı forseps kullanıngirer ve onun yan kenarında spinotrapezius yapraklar gibi damarsal görselleştirmek amacıyla ular doku. </li><li> Bir ya da iki ikili damarları ile birlikte, kas yanal kenarına kendi yolu üzerinde spinotrapezius ventral bir yağ yastığı içinden geçen hedef arter, Yerleştirme. Bu arter yansıtan ve kas içinde arter yol izlemek için kas değiştirilmesi ile teyit edilebilir kas, kuyruk yarım önemli bir kısmını besler. Ligasyon için hedef konumu arter ventral yağ yastığı çıkma ve kas girme segmentinde olduğunu ve bu bölgede oldukça erişilebilir. Arter damar çift yavaşça bu bölgedeki yağ ventral ped ayrılması gerekebilir. Spinotrapezius transvers dorsal ve ventral yağ yastıkları ya o gemiler de dahil olmak üzere, birden fazla arter-ven çiftleri beslenmektedir unutmayın. Bu gemilerin bozmaya dikkat edin. <ol><li> Çoklu göstergeler arter ayırt etmek için kullanılabilirvenden. En iyi yöntemlerden biri yavaşça mikroprob ile kan akışını engelleyebilir ve kas uzak yukarı taşımak için; tıkanıklık serbest bırakılıncaya kadar ak arter devam etmeyecektir. Ven duvarlarının arterler eksikliği bağ dokusu bir beyazımsı kılıf içerdiğinden Renkli da kullanılabilir. Damarlar genellikle büyük boyutta olduğu gibi Ayrıca, bir vazodilatör uygulamasından önce çapı düşünebilirsiniz. </li></ol></li><li> Arter ile eşleştirilmiş damar yakın olarak, tipik olarak, arter arkasında mikroprob geçen, ve doğal olarak daha geniş bir boşluk sağlamak için ucunu kullanarak, bir mikroprob ve yaklaşık olarak 5 mm kademeli bir izole etmek için 5. forseps ile diseksiyon kullanmak arter ve ven arasındaki yarık. Bu dikiş dişli olacak hangi aracılığıyla boşluğudur. </li><li> 10-0 tek iplik dikiş ve iğne tutucu bir yer cerrahın düğüm kullanarak disseke segmentinin proksimal sonuna doğru yem arter (~ 70 mikron çapında) etrafında bir ligasyon kullanma. Plaarter kesisi izin vermek için ligatür arasında yeterli ayırma işlemi ile parçalanmış arter kademeli bir mafsaldan uzak ucuna doğru ce ek bir ligasyon. <ol><li> Spinotrapezius besleme arter ile ilişkili küçük ölçekte; femoral arter gibi daha büyük bir kap ligasyonu ile karşılaştırıldığında, artan cerrahi zorluk yol açar. Deneyimsiz cerrahlar özellikle avulsiyonu, yanlışlıkla kanama ve diğer cerrahi komplikasyon oranları yüksek olacaktır. Özellikle kaygı belirlenmesi ve akış sadece kesim öncesi engellemiştir sonra renksiz arter kesme güçlüktür. Cerrah arter hem de ligatür 2 arasında kolayca gözlemlenebilir ayırma ile kesilmiş bir onay transeksiyonu için burada yerini görsel bir kılavuz olduğu gibi bu nedenlerden dolayı, 2 ligatür yerleştirilmesi prosedür alışık için tavsiye edilir. Ancak, daha deneyimli bir cerrah sürece onlar açıkça mümkün olduğu gibi, tek bir bağ yeterli bulabilirbelirlemek ve bağ ve arter aşağı kesti. Bu tekniğin istemeden keskin ligasyonu sütür ile yakındaki bir gemi nicklemek riskini azaltır iken, bu arterlerde kesmiş olduğu teyit artan güçlüğü gibi sakıncaları olmadan değildir. </li></ol></li><li> Kan akımının azalmasına (tıkalı RBC sütun) ligasyon sitenin mansap (kas doğru yani) gözlemleyerek ligasyon doğrulayın. </li><li> Kullanılması kesme makasları iki bitişik harfler arasında bağlanan arter transect. Sadece tek bir bağ yerleştirilmiş olur (11a) aşağı doğrultuda son derece dikkatli bir kesti. </li><li> Düz film yüklü İlaç (1 mm) deneysel işlemin bir parçası olarak (kaudal) aşağı konabilir. </li><li> Özgün yönüne yerinden fasya ve adipoz doku konumlandırın. </li><li> 8-0 rezorbe olmayanlar sütürler kullanılarak cilt insizyonu kapatın. Sonra gözlem altında hazırlanmış bir ısıtmalı kurtarma kafesteki fare yerleştirin ve ap yönetmekBöyle bupivakain, 0,02-0,05 ml% 0.25 lokal infiltrasyon olarak analjezik de temin. </li></ol> 2. In situ Spinotrapezius intravital Mikroskopi, <ol><li> % 3-4 izofluran 3-4 L&#39;lik bir akış hızı-dk -1% 100 oksijen, buharlaşmış olan bir indüksiyon odasında fare anestetize. <ol><li> Enjekte edilebilir anestetiklerin ile daha az kardiyovasküler depresyon olduğundan, uçucu madde anestezi kullanılması, fonksiyonel ölçümleri için tercih edilir. Örneğin sodyum pentobarbital olarak mevcut değildir, uzun etkili enjektabl anestezikler, uçucu madde anestezi hayvan konumlandırılmış edildikten sonra tekrar enjeksiyonları önlemek için tercih edilir ise. </li></ol></li><li> Bir kez anestezi, sürekli bakım konsantrasyonları (genelde ~% 2) ve 0.5-1 L · dk -1 akış hızında bir anestezi maskesi (aka burun konisi) aracılığıyla izofluran teslim. <ol><li> Fare çoğunlukla kendi burun yoluyla havalandırılması, bu yüzden sadece başka yerde sınıflandırılmamış olanAnestezi maskesi diyafram ile burunlarını kapatmak için Gerekli veri. </li></ol></li><li> Gerekiyorsa, kırpma makası ve tüy dökücü krem ​​kullanarak arkasından saç kaldırmak. </li><li> Isı pad hayvan taşıyın. <ol><li> Soğuk-bağlı vazokonstrüksiyon önlemek için euthermic durumda fareler korumak için önemli olduğunu, bu lambalar aracılığıyla gerçekleştirilebilir, su ısı pedleri dolaşan, mikrodalga yastıkları, vb ısıtır </li></ol></li><li> Rektal ısı probu yerleştirin ve 35 termo-kontrolörü set ° C. </li><li> Iris makas ve standart desen forseps kullanarak spinotrapezius en kaudal sonunda cilt kesi olun. </li><li> , Yağ yastığı için kraniyale kesi uzatın bir at nalı kesi oluşturma ve kuruma önlemek için plastik wrap ile flep kapsamaktadır. </li><li> Görünürlüğünü maksimize etmek için forseps ve yaylı makas ile cilt altı bağ dokusu teşrih Blunt. </li><li> Yakın toge gibi uyarıcı elektrotlar yerleştirinmümkün gibi termik olarak, mevcut alanın boyutunu küçültmek ve omurga için sadece yanal maruz kas kuyruk sonunda yerleştirmek için. </li><li> 1 Hz teslim 200 μsec süresi, 2 mA amplitüdlü, kare dalgalar ile, bir elektrot veri toplama sistemi, elektrot uyaran izolatör ve bilgisayar denetleyicisi kullanarak elektrot yerleşimini doğrulamak için bir test stimülasyonu gerçekleştirin. </li><li> Kuruma önlemek için maruz kası üzerinde plastik wrap yerleştirin. </li><li> Damar çapları muvazene alacağı bir 30 dakika süre zamanlama başlayın. </li><li> Vasküler mimari görüntülemek için spinotrapezius kası üzerinde intravital mikroskop yerleştirin. <ol><li> Immersiyon objektif kullanıyorsanız, objektif ve plastik wrap ile PBS bir damla yerleştirin. </li></ol></li><li> Ana arteriyol (büyük damar görünür) Yukarıdaki başlayan faiz gemi bulmak için XY düzleminde sahne işlemek. <ol><li> Küçük arteriol görselleştirmeyansıyan ışık mikroskobu ile es-kırmızı hücre sütun tarafından sağlanan daha fazla kontrast gerektirir. Biz öncelikle mikrovasküler kontrastı arttırmak için bir yan-akım karanlık alan mikroskobu görüntüleme kullanabilirsiniz, ancak kontrast da yüksek molekül ağırlıklı floresan dekstran intravenöz enjeksiyonundan sonra bir yansıyan ışık floresan mikroskop ile geliştirilebilir. </li></ol></li><li> 30 dakika dengelenme sonra, ilgilenilen damarın bir görüntü / video yakalama. </li><li> 90 saniye için 8 Hz, teslim 200 μsec süresi, 2 mA genlik, yukarıda tanımlandığı gibi, bir kare dalgalar ile kas teşvik. </li><li> Başka bir görüntü / video hemen sonrası stimülasyon Yakalama ve damar dinlenme çapı dönene kadar her dakika yakalamak için devam ediyor, 10 dk ~. </li><li> Kontralateral kas kullanarak adımları 6-18 tekrarlayın. </li><li> Veri analizi görüntü analiz yazılımı ile video kaliperler veya off-line ile gerçek zamanlı olarak yapılabilmektedir. </li><li> Fareyi takip Euthanizeing IACUC protokolü. </li></ol> 3. Spinotrapezius Doku Hasat ve Fiksasyon <ol><li> Spinotrapezius Besleme ligasyonu adım 1 &#39;deki gibi formülasyon; intraperitonal enjeksiyon yoluyla fareler anestetize. </li><li> Iris makas ve standart desen forseps kullanarak fare kürek kemikli öne kranial bir kesi birkaç milimetre olun. Her iki yanal tarafta kaudal ve ensizyon genişletir. </li><li> Cildi nazikçe yansıtan ve yüzeysel fasya keserek dorsal gövdesinden cildi serbest bırakın. </li><li> Standart forseps kullanarak dorsal adipoz doku kaldırmak ve sonra kas yansıtacak ve benzer ventral adipoz doku teşrih künt diseksiyon kullanın. </li><li> Forseps ve yaylı makas kullanılarak kas örten fasya çıkarın. Bu adım, zor ve zaman alıcı olabilir, ama immünofloresan boyama ve görüntüleme artırmak için önemli olabilir. Doku sulu tutulması fasya kaldırılmasını kolaylaştırabilir. </li><li> YerleştirmekLateral kas sınır ve ventral yatıyor yağ yastığı gelen spinotrapezius kas ayırmak için künt diseksiyon kullanabilirsiniz. </li><li> Kaudal yönde bir Kranyal künt diseksiyon devam edin. Birçok kan damarları bu durum kas ventral yüzeyi girip terk unutmayın; perfüzyon gerekli ise, bu kapların transecting önce yapılmalıdır. Bu kas kaudal yarısında, lateral sınır ekler ventral yalan kas içine unutmayın. Bazı kesim tamamen kenar tanımlamak ve serbest bırakmak için bu sınır boyunca gerekli olabilir. </li><li> Tüketim spinotrapezius kas. Bunu yapmak için: <ol><li> Serbest yukarıda tarif edildiği gibi kas yanal kenarı. </li><li> Kas en kranial ölçüde boyunca enine kesin. </li><li> Sagital planda, medial sınır (omurga boyunca) boyunca kesin. </li></ol></li><li> Tekrar prosedürü kontralateral kas 4-9 adımları yineleyin ve sonra m euthanizeBir IACUC onaylanmış yöntemi ile ouse. </li><li> Soğutulmuş metanol (4 ° C) ya da 20 dakika için% 4 paraformaldehit / oda sıcaklığında deiyonize su çözeltisi ile daldırma yoluyla jelatin kaplı cam slaytlar üzerine doku düzeltildi. <ol><li> Alternatif olarak, perfüzyon fiksasyon istihdam edilebilir. 2. adıma önce, 1, 5 ml × 4 5 ml ardından, 0.1 mM CaCl2 ve sol ventrikül ile% 2 heparin ile salin Tris tamponlu ile sağ atrium bir kesi yapmak, bir torakotomi gerçekleştirmek ve perfuse damar % damar tespiti için paraformaldehit ve 1 sonunda 5 ml x 0.1 mM CaCl2 ile 7 Tris-tamponlu salin. </li></ol></li><li> Hemen sonra fiksasyonu, dört kez, 20 dakika boyunca numune yıkama her biri% 0.1 saponin ile, 0.01 M fosfat-tamponlu salin (PBS) ile. </li></ol>

<ol><li>Bailey, A. M., O'Neill, T. J., Morris, C. E., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arteriolar+Remodeling+Following+Ischemic+Injury+Extends+from+Capillary+to+Large+Arteriole+in+the+Microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Arteriolar Remodeling Following Ischemic Injury Extends from Capillary to Large Arteriole in the Microcirculation.</a> Microcirculation. 15, 389-404 (2010).</li>
<li>Bruce, A. C., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exogenous+Thrombin+Delivery+Promotes+Collateral+Capillary+Arterialization+and+Tissue+Reperfusion+in+the+Murine+Spinotrapezius+Muscle+Ischemia+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Exogenous Thrombin Delivery Promotes Collateral Capillary Arterialization and Tissue Reperfusion in the Murine Spinotrapezius Muscle Ischemia Model.</a> Microcirculation. 19, 143-154 (2012).</li>
<li>Mac Gabhann, F., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collateral+capillary+arterialization+following+arteriolar+ligation+in+murine+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Collateral capillary arterialization following arteriolar ligation in murine skeletal muscle.</a> Microcirculation. 17, 333-347 (2010).</li>
<li>Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M. D., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+Model+of+Hindlimb+Ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Murine Model of Hindlimb Ischemia.</a> J. Vis. Exp. (23), e1035(2009).</li>
<li>Madeddu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+myocardial+and+limb+ischemia%3A+diagnostic+end-points+and+relevance+to+clinical+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Vascul.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Murine models of myocardial and limb ischemia: diagnostic end-points and relevance to clinical problems.</a> Vascul. Pharmacol. 45, 281-301 (2006).</li>
<li>Cardinal, T. R., Kurjiaka, D. T., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+hindlimb+ischemia+impairs+functional+vasodilation+and+vascular+reactivity+in+mouse+feed+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Physio%22%5BJournal%5D)">Chronic hindlimb ischemia impairs functional vasodilation and vascular reactivity in mouse feed arteries.</a> Front. Physio. 2, 91(2011).</li>
<li>Sefcik, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+Activation+of+Sphingosine+1-Phosphate+Receptors+1+and+3+Promotes+Local+Microvascular+Network+Growth%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Selective Activation of Sphingosine 1-Phosphate Receptors 1 and 3 Promotes Local Microvascular Network Growth.</a> Tissue Eng. Part A. 17, 617-629 (2011).</li>
<li>Deindl, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Ischemia+and+of+Hypoxia-Inducible+Genes+in+Arteriogenesis+After+Femoral+Artery+Occlusion+in+the+Rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Role of Ischemia and of Hypoxia-Inducible Genes in Arteriogenesis After Femoral Artery Occlusion in the Rabbit.</a> Circulation Research. 89, 779-786 (2001).</li>
<li>Chalothorn, D., Zhang, H., Smith, J. E., Edwards, J. C., Faber, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloride+Intracellular+Channel-4+Is+a+Determinant+of+Native+Collateral+Formation+in+Skeletal+Muscle+and+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Chloride Intracellular Channel-4 Is a Determinant of Native Collateral Formation in Skeletal Muscle and Brain.</a> Circulation Research. 105, 89-98 (2009).</li>
<li>Scholz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+Arteriogenesis+and+Angiogenesis+to+Postocclusive+Hindlimb+Perfusion+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Molecular+and+Cellular+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Contribution of Arteriogenesis and Angiogenesis to Postocclusive Hindlimb Perfusion in Mice.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 34, 775-787 (2002).</li>
<li>McClung, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle-specific+genetic+determinants+contribute+to+the+differential+strain-dependent+effects+of+hindlimb+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle-specific genetic determinants contribute to the differential strain-dependent effects of hindlimb ischemia in mice.</a> Am. J. Pathol. 180, 2156-2169 (2012).</li>
<li>Dokun, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
<li>Faber, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+causes+collateral+rarefaction+and+increased+severity+of+ischemic+injury+in+multiple+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Aging causes collateral rarefaction and increased severity of ischemic injury in multiple tissues.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 31, 1748-1756 (2011).</li>
<li>Peng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+affect+blood+flow+recovery+in+a+mouse+model+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gender differences affect blood flow recovery in a mouse model of hindlimb ischemia.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 300, 2027-2034 (2011).</li>
<li>Li, Y., Guan, H., Hazarika, S., Liu, C., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+angiogenesis+following+hind-limb+ischemia+in+diabetes+mellitus+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chin.+Med.+Sci.+J%22%5BJournal%5D)">Impaired angiogenesis following hind-limb ischemia in diabetes mellitus mice.</a> Chin. Med. Sci. J. 22, 232-237 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları var beyan.

Burada sunulan murin spinotrapezius ligasyonu modeli arteriyel oklüzyon gelen yapısal ve işlevsel uyarlamalar bu sonucu incelemek için etkin bir küçük hayvan modelidir. Bu model yaygın olarak kullanılan bacak iskemisi modelinde 4 tamamlayıcı olduğunu, bunda yüksek uzaysal çözünürlüğü ile sağlam mikrovasküler ağların bir bütün kas görünümü sağlar. Bu kas sadece dorsal cilt altında yer almaktadır çünkü Ayrıca, bu intravital mikroskopi ile seri görüntüleme ve superfusion veya ince film implantasyon 2 aracılığıyla yerel ilaç dağıtım için erişilebilir. Bu özellikler, arteriyel oklüzyon sonrası vasküler remodeling ve fonksiyonel vazodilatasyon üzerine yeni terapötik hedeflerin etkilerini incelemek için cazip bir küçük hayvan modeli yapmak. Nedeniyle birkaç anahtar d Bacak ligasyon modeli Elde edilen verilere spinotrapezius ligasyon modeli edinilen verilerin karşılaştırılmasında ki dikkatli kullanılması gerektiğini unutmayınifferences. İlk olarak, spinotrapezius kaslar kasları stabilize edilir ve fonksiyon ve lif türü dağılımı içinde bacak kaslarının farklıdır. Grubumuz önce spinotrapezius kas arterioler ligasyonu gibi bacak modeli 1,8 olarak femoral arter ligasyonu sonrası arka ayak gözlenen hipoksi ile karşılaştırıldığında iyi gelişmiş kollateral arterioler ağları ile suşları daha az veya önemsiz hipoksi oluşturur olduğunu göstermiştir - 10. Ayrıca spinotrapezius ligasyon modelinde, mevcut Arteriyollerde bağlantıları 3 büyümesi yoluyla kılcal kollateralizasyonu ve C57BL / 6 yeniden şekillenmesi ile Balb / c fareleri ağlar ile yeniden C57BL / 6 fareler ile karşılaştırıldığında, Balb / c farelerinde, farklı bir yeniden tepki verdiğini göstermiştir. Bu gözlemlere ve bacak ligasyon modelinde yapılmış olanlar arasında bir ilginç paralel vardır, ki burada Balb / c fareleri C57BL / 6 fareleri ile karşılaştırıldığında 9,11,12 ligasyonu sonrası uzun bir perfüzyon iyileşmektedir &lt;/&gt; Sup. Henüz spinotrapezius ligasyon modelinde bu değişkenlerin test edilmiş olmasına rağmen doku iskemisi, fare 13 yaşında cinsiyet 14 ve 15 hastalık varlığı başka modellerinde de, Arteriyollerde oklüzyon için dokular tepkilerini etkileyebilecek. İkinci olarak, spinotrapezius modelinde ligate edilir arter büyüklüğü femoral arter göre önemli ölçüde daha küçük olan, ve bu nedenle, ligasyon spinotrapezius, dolaşım ağacının daha düşük bir seviyede, yani, daha aşağıda olan daha küçük bir doku hacim etkileri Bacak 3 ile karşılaştırıldığında. Bu müdahale konusu fizyolojik tepkiler (örneğin vasküler remodeling) karşılaştırırken Dolayısıyla, bu iki modelde ligasyon konumda anatomik farklılığı dikkate alınmalıdır. Üçüncü olarak, spinotrapezius inceliği oksijen komşu doku unperfused kısmı ulaşmak için izin verebilir3, yukarıda belirtildiği gibi, arka ayakların modelinde kombine iskemi ve hipoksi ile karşılaştırıldığında doku. Dördüncü, ligasyon spinotrapezius aşağı kısmına akış kurtarma bacak ligasyon daha hızlıdır. Spinotrapezius ligasyonu modeli eşsiz bir kronik bir modeldir ve iskemi reperfüzyon hasarı geçici arteriyel oklüzyon veya modellerin diğer modelleri ile karıştırılmamalıdır. Bu koşullar, bu tür yerleştirmek için bu model uyum sağlanmasına olanak düşünün, ama bu burada sunulan çalışmalar kapsamı dışındadır. Son olarak, biz genç ve fareler sağlıklı ve böyle yüksek kalp hızı 5 sıra doğal fizyolojik sınırlar nedeniyle kullanarak özellikle doğrudan insanlarda iskemik hastalığın klinik bu modelde ön klinik gözlemler ile karşı dikkatli olun. Bununla birlikte, biz ligasyonu doku yanıtları temel mekanizmalarını ortaya çıkarılması ve potansiyel belirlenmesi için değerli bir araç olarak bu yeni model kabulbir in vivo ortamda rapeutic hedefler. Spinotrapezius besleme ligasyonu prosedürü (anatomik ven (9a) dan arter ayırt Not (6a), ve bir tek bağ (11a) kullanımı) &#39;de verilmiştir cerrahi notlar, işlem yararı, birkaç diğer yönleri ek olarak, tartışma. İlk olarak, dorsal yağ yastığı sınır (ya da transdermal görselleştirme mümkün değilse omuz bıçak kaudal birkaç mm) üzerinde yapılan ilk kesi ideal cerrahın rahat olduğu kadar küçük yapılır ve gerekirse işlem sırasında genişletilir. Bu uygulama, cerrah için uygun insizyon kapatmak için gerekli sütür minimize işlem süresini azaltır ve aynı zamanda kurtarma sırasında hayvana daha az tahriş edicidir. Kas genişletilmiş bir alan ile bulmak daha kolay olabilir çünkü Alternatif olarak, büyük bir cilt kesisi, cerrahın tercihine göre uygun olabilir. Bu durumda, kesik olabiliromurganın doğru katlayarak izin medial açık yüzü ile bir at nalı şeklinde yarar. Cilt insizyonu yapma ve bir yüzey geminin hasar ve kanama neden ise, sekonder deri katmanları boyunca uzanan iken, steril gazlı bez ile hafif basınç uygulayın ve hemostaz için zaman verin. Ayrıca şunu da unutmayın, bu gerekli minimum kuvvet ile doku işlemek için önemlidir ve mümkün olduğunca yakın kasın lateral sınırı ve uzak amaçlanan iskemik bölgeden forseps ile tutun. Bu uygulama arter ligasyonu ile uyarılmış vasküler remodeling yanıtı yanıltabilecek ek inflamatuar aracılı doku yanıtları yol açabilir ezilme yaralanması, önlemeye yardımcı olur. Sonuç olarak, Arteriyollerde ligasyon için damar ve doku tepkileri incelenmesi için bir cerrahi örnek olarak murin spinotrapezius kas kullanımını ortaya koymuştur. Bu model için (vasküler değişikliklerin intravital değerlendirilmesi için uygundurÖrneğin, fonksiyonel vazodilatasyon), ve damar değişiklikleri ex vivo değerlendirilmesi (örneğin, damar ağlar immünofloresan görüntüleme ve kantitatif) için. Hem klinik öncesi ve klinik çalışmalar arterioler obstrüksiyonu (insanlarda fareler veya aterosklerotik plakların ligasyonu yoluyla örneğin) bir bireyin tepkisi yaşlarına bağlı olduğunu göstermiştir hastalığın varlığı veya yokluğu (örneğin diyabet) tıkalı arter çapı , bireysel ve doku 11-15 metabolik talep genetik. Böyle Burada sunulan biri olarak sıçan modellerinde, bu karmaşık ilişkiler soruşturma kolaylaştırır zorlanma özgü anatomik ve genetik farklılıkları ve hastalığa özgü fenotipleri, araştırmacı boşuna.

Kronik iskemi Hayvan modelleri, periferik arter hastalığı, koroner arter hastalığı ve serebrovasküler hastalık gibi iskemik hastalıkların patofizyolojisi araştırmak için değerli araçlardır. Kemirgenlerde, insanlarda olduğu gibi, arteriyel oklüzyon arteriogenesis ve anjiyojenez dahil olmak üzere, damar ağının yapısal yeniden yol açar. Sağlıklı ve genç hastalarda bu biçimlenme iskemiye bağlı yaralanma doku kurtarmak için yeterli olabilir, ancak diyabet gibi komorbiditeler ciddi biçimlenme ve kurtarma bozabilir. Vasküler remodeling olayların altında yatan mekanizmaların anlaşılması bu endojen revaskülarizasyon işlemlerini teşvik tedavilerin geliştirilmesi için esastır. Şu anda, bacak femoral arter ligasyonu veya rezeksiyon 4,5 küçük hayvanlar kronik iskemiye bağlı vasküler yeniden incelemek için standart bir tekniktir. Çapı, bağlantı ve reaktivite AnaliziBağlanmış femoral arter damar ağı alt-oluşturan mikrodamar kas kalınlığı nedeniyle güçtür. Bu istikrar dorsal kas 1&#39;de yanal yem arterin tek taraflı ligasyonu: Biz fare spinotrapezius kasında bir arteriolar ligasyonu modeli geliştirdik. Nispeten ince spinotrapezius (60-200 mikron) tüm doku boyunca vasküler remodeling olayların ayrıntılı bir incelemesini sağlayan tek hücreli çözünürlüğü ile tüm ağ topolojisi değerlendirilmesi için en face immun mükellef olduğunu. Spinotrapezius da yüzeysel ve erişilebilir ve böylece damarlar kolayca vasküler reaktivite üzerinde şekillenmesi ve arterioler ligasyon etkisinin etkin karakterizasyonu için, intravital mikroskop ile gözlemlenebilir. Bu yazıda ayrıntılı olarak açıklamak ve fare spinotrapezius arterioler ligasyonu modeli göstermektedir. Vivo ve ex vivo bana ikideğerlendirme cerrahi ve thods iskemik durumlar altında 6 bozulduğu görülmüştür fonksiyonel vazodilatasyon ve bütün kas mikrovasküler ağların immünofloresan görüntüleme ölçüm dahil olmak üzere, tarif edilmektedir. Ayrıca modelin yararlılığını ortaya iki ayrı pilot çalışmaların sonuçları içermektedir. Öncelikle, biz C57BL / 6 fareler (Şekil 2B) damar kıvrımlarında istatistiksel olarak anlamlı bir artış teşvik etmek için arteryel ligasyon modeli kullanılmıştır. Arteriyol teminatlar içinde arteriogenesis sırasında eğrilik artar. Diğer fare suşları ise, bu teminat arteriyoller yokluğunda (örneğin Balb / c) nedeniyle iskemi karşı daha savunmasız olan, kılcal arterleştirilmelerine 10 görülmektedir. Kapiler arterleştirilmelerine artan çap ve α-düz kas aktin reaktivite gelişim tarafından tespit edilir. İkincisi, kas fonksiyonel elektriksel stimülasyon spinotrapezi terminal arteriyollerde vazodilatasyona yol açarbize (Şekil 3B).

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Iris makas </td><td> FST </td><td> 14090-09 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> Boyutu 7 forseps </td><td> FST </td><td> 11271-30 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> Boyut 5 forseps </td><td> FST </td><td> 11251-20 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> Bahar makas </td><td> Roboz </td><td> RS5671 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> Mikroprop </td><td> FST </td><td> 10140-03 </td><td> Türü: Aracı Düz prob ile ikame edilebilir; </td></tr><tr><td> İğne tutucu </td><td> FST </td><td> 12500-12 </td><td> Türü: Aracı </td></tr><tr><td> İndüksiyon odası </td><td> Dist JD Medical. A.Ş. </td><td> IC-1086 </td><td>Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Göz Jeli </td><td> Dechra </td><td> NDC 17033-211-38 </td><td> Türü: Reaktif </td></tr><tr><td> Isı pedi </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Rektal sıcaklık probu </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Uyarıcı elektrotlar </td><td> FHC </td><td> UEWSGCSE0N1M </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> En Artisan Polimer Kil </td><td> Polyform </td><td> N / A </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> PowerLab veri toplama sistemi </td><td> ADInstruments </td><td> ML 845 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Stimulus izolatörü </td><td> ADInstruments </td><td> FE 180 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> LabChart </td><td> ADInstruments </td><td> ML S060 / 7 </td><td> Türü: Yazılım </td></tr&gt; <tr><td> Yansıyan ışık floresan mikroskop </td><td> Olimpos </td><td> BFXM </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Yüksek MW floresan dekstran </td><td> Sigma </td><td> FD250S-100mg </td><td> Türü: Reaktif </td></tr><tr><td> Video kaliperler </td><td> Colorado video </td><td> 308 </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Otomatik Damar Analizi (AVA) </td><td> Microvision Tıp </td><td></td><td> Türü: Yazılım </td></tr><tr><td> Anti-αSMA Konjuge florofor </td><td> Sigma </td><td> 1A4-Cy3 </td><td> Türü: Reaktif Klonal, 1:100 </td></tr><tr><td> Floresan Mikroskop </td><td> Olimpos </td><td> BFXM </td><td> Türü: Ekipman </td></tr><tr><td> Yüksek molekül ağırlığı floresan dekstran </td><td> Sigma </td><td> FD250S-100mg </td><td> Türü: Reaktif </td></tr></tbody></table>

mikrovasküler fonksiyon ve tadilat üzerine arteriolar ligasyonu etkisini değerlendirmek için mürin spinotrapezius modeli

Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

Murin spinotrapezius T3 L4 uzanan ince, yüzeysel iskelet destek kas, ve dorsal cilt insizyonu yoluyla kolayca ulaşılabilir. Eşsiz anatomisi iskemik yaralanma ve sonraki mikrovasküler remodeling soruşturma spinotrapezius kullanışlı hale getirir. Burada, bizim araştırma ekibi tarafından geliştirilen ve daha önce 1-3 yayımlandı murin spinotrapezius kasında bir arteriolar ligasyon modeli göstermektedir. Gibi Balb / c fare gibi bazı hassas fare suşları için, bu ligasyon ameliyatı güvenilir iskelet kası iskemi oluşturur ve revaskülarizasyon teşvik tedavileri araştırmak için bir platform olarak hizmet vermektedir. Ölçme ve değerlendirme yöntemleri de intravital ve konfokal mikroskop kullanımı dahil, gösterilmiştir. Spinotrapezius de onun erişilebilirlik (yüzeyel dorsal anatomi) ve göreli inceliği (60-200 mikron) nedeniyle bu tür görüntüleme çalışmaları için uygundur. Spinotrapezius kas kolaylaştırılması, cepheden monte edilebilirhistolojik kesit olmadan bütün kas mikrovasküler ağların görüntüleme. Bir işlevsel vazodilatasyon prosedür takip ölçümleri elde etmek için intravital mikroskobu kullanılmasını tarif eder ve özellikle, kas kasılma bir sonucu olarak arterilar çapı artar. Biz de dokuları ve sabitleme için prosedürler, çalışmalar ve konfokal mikroskop kullanımı immünboyama için gerekli bir öncül göstermektedir.

Ligasyon uğrar spinotrapezius kas besleme ana arter bir cerrahi bakış ilgi alanlarını gösteren etiket ile, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Ligasyon Şekil 2A&#39;da gösterilmiştir sonra doğrudan alt-ligate arter bir hafta ile yer kas hasat edilmiş ve immunohistokimyasal bölge bir örnek konfokal görüntü. Düz kas hücreleri (kırmızı) ifade düz kas alfa-aktin içeren Genişletilmiş teminat arteriol ligasyonu sonrası karakteristik kıvrımlarında gösterilecek. Bağlanan kas damar yolu uzunluğu ve kablo mesafesi (yani, aynı geminin yolunu uç noktalarda uzanan çizgi) arasındaki oran olarak bildirilen Gemi kıvrımlarında, (sağ) (n = 8 Şekil 2B) unligated kontralateral kas göre geliştirilmiştir . Şekil 3, kutup vazodilatasyona arteriole fonksiyonel intravital mikroskopi kullanılarak ölçüldüğü bir pilot çalışmanın sonuçlarını gösterir. Beklendiği gibi, Arteriyollerde di<html> Seçilmiş olan disk çapından anlamlı elektriksel stimülasyon ile indüklenen kas kasılması sonrasında artar. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1.jpg" alt="Şekil 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1highres.jpg"/> Şekil 1. Yansıyan spinotrapezius kas ve yem arter Cerrahi alanında. Yem arter A0 ile gösterilen iki noktada bağlandı edilir. Bu bitişik harfler arasında ve kan tıkanması sonra, arter belirtilen sitede, D tarafından ana hatlarıyla, spinotrapezius kas içine, A. C tarafından özetlenen ventral yağ yastığı, gelen arter geçişlerin hedefli segmenti belirtilen sitede ma- ok B. Akış yönü kesik ok E. ile belirtilir ile ghres.jpg &quot;/&gt; Şekil 2. Kıvrımlar pilot çalışma için spinotrapezius kas mikrovasküler ağ Konfokal görüntü. (A) Hasat ve tam monte kas konfokal mikroskopi kullanılarak düz kas alfa-aktin ve görüntülü için immunohistokimyasal edildi. Görüş alanına kas bölgesi doğrudan doğruya aşağı bağlanan arteriole 1 hafta sonrası ligasyon yer göstermektedir. Dolambaçlı damar ligasyon sonucu olarak kas belirgindir (B), pilot çalışmanın sonuçları önemli ölçüde (p = 0.035; 1 kuyruklu Student t-testi) artış gösterirler. Eğrilik için damar yol uzunluğu ile ölçülen bağlanan kas içinde kılcal tarafından sergilenen C57BL / 6 fareler bir deneme için kordon mesafe oranı (n = 8), kontralateral kontrol ile karşılaştırılmıştır. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3.jpg" alt="Şekil 3" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3highres.jpg"/> Figu3. yeniden. In vivo spinotrapezius arteriyollerde fonksiyonel vazodilatasyon intravital mikroskobu görüntüleme. Istirahatte (A) Temsilcisi kalanı (solda) spinotrapezius terminali arteriyollerin fotomikrografı ve derhal 8 Hz kas kasılması (sağda) bırakılmasını takiben. (B) Terminal arteriyol çapı ( 8.5 ± 0.5 mikron, sol) ve hemen ardından (11 ± 1 mikron, orta) belirgin arterioler çapı (artmış kas kontraksiyonu 90 sn, p = 0.032; 1-tailed) Balb / C farelerde t-testi eşleştirilmiş (n = 6). Yüzde değişim (sağ) gösterilir.

Biz bir adım-adım prosedürü ve gerekli enstrümantasyon açıklaması dahil murin spinotrapezius kas bir roman arter ligasyonu modeli göstermektedir. Biz cerrahi ve intravital ve konfokal mikroskopi kullanılarak vasküler ağ şekillenmesi ve fonksiyonel vazodilatasyon ile ilgili, sonuç ölçümleri açıklayacağız.

Mikrovasküler Fonksiyon ve Tadilat üzerine Arteriolar Ligasyonu etkisini değerlendirmek için mürin Spinotrapezius Modeli

The murine spinotrapezius is a thin, superficial skeletal support muscle that extends from T3 to L4, and is easily accessible via dorsal skin incision. ...

Periferik vasküler hastalık nüfusun yaklaşık %12 ila %14'ünü etkilemektedir ve özellikle tütün kullanıcıları ile diyabet, obezite, hipertansiyon, ileri evre hastalık veya aterosklerozla seyreden bireyler arasında yaygındır. Bu cerrahinin amacı, spino trapezius kasının karşıt yarısının kaudal kısmını besleyen üç arterden birini bağlayarak iskelet kası iskemisi modeli oluşturmaktır. Bu animasyon, söz konusu arterlerin genel konumlarını betimlemekte ve iskemiye yanıt olarak hedeflenen ligasyon bölgesini göstermektedir.Vasküler doku, fare suşuna bağlı olarak arterio ajeneze karakteristik değişiklikler gösterecektir. Bu durum, köprü kollaterallerin oluşumunu veya damar tortuozitesinin artmasını içerir. Ayrıca, intravital mikroskopi kullanarak spinal trapezius üzerinde fonksiyonel bir vazodilatasyon prosedürünün nasıl gerçekleştirileceğini göstereceğiz.Bu işlem; kasın dikkatlice açığa çıkarılmasını, uyarıcı elektrotların güç kaynağı ve kontrol cihazıyla birlikte yerleştirilmesini ve ardından görüntüleme cihazının kurulmasını içerir. Son olarak, kasın nasıl eksize edileceğini göstereceğiz ve immünokimyasal boyama ile görüntüleme için uygun bir fiksasyon işlemini açıklayacağız. Merhaba, ismim Shane Pierce Kotler ve Charlottesville'deki Virginia Üniversitesi Biyomedikal Mühendisliği Bölümü'nde doçentim.Merhaba, ben Kyle Martin. Shane'in laboratuvarında lisansüstü öğrencisiyim ve spinal trapezius ligasyon modelini uygulayacağım. Laboratuvarımız, özellikle kalp hastalığı, periferik arter hastalığı ve inme gibi iskemik hastalık durumlarında mikrodamar büyümesini ve yeniden şekillenmesini incelemektedir.Arteryel kan akışının lokalize obstrüksiyonunun, distal mikrovasküler ağlarda nasıl yapısal adaptasyonlar oluşturduğunu incelemek için bu aynalı spinal trapezius ligasyon modelini geliştirdik. Bu modeli, analizi için histolojik kesitleme gerektirmeyen çok ince bir kas üzerinde arteriyogenez, nörojenez ve anjiyogenezin tüm ağ görünümünü sunduğu için, iyi bilinen ve yaygın olarak kullanılan arka ekstremite iskemi modelini tamamlayıcı nitelikte görüyoruz. Bu kasın çok ince olması ve ligasyonun kan akışında tekrarlanabilir bir azalma yaratması sayesinde, arteryel ligasyonun etkilerini tüm mikrovasküler yatak boyunca ve tek hücre çözünürlüğünde görselleştirebiliyoruz.Kyle bizi spino trapezius ligasyon modelini gerçekleştirmek için adım adım izlenecek prosedürle ilgili bilgilendirdikten sonra, Cal Poly'deki iş ortaklarımız bu modeli fonksiyonel vazodilatasyonu incelemek için nasıl kullandıklarını bize gösterecekler. Bunu gördükten sonra, görüntüleme ve boyama işlemlerinden önce yapılması gereken spino trapezius hasadını gerçekleştirmek için sizi tekrar Virginia Üniversitesi'ne götüreceğiz. Merhaba, benim adım Trevor Cardinal.Ben, California'daki San Luis Obispo'da bulunan Cal Poly State Üniversitesi Biyomedikal Mühendisliği Bölümü'nde yardımcı doçentim ve ismim Josh Cutz. Ben, San Luis Obispo'daki Cal Poly'de biyomedikal mühendisliği yüksek lisans öğrencisiyim. Araştırma laboratuvarımızın temel ilgi alanı, periferik arter hastalığında olduğu gibi gelişen kronik iskeminin, direnç damarlarının fonksiyonel yetenekleri üzerindeki etkisini anlamaktır.Spinal trapezius besleme arteri ligasyon cerrahisi gerçekleştirildikten sonra, Josh laboratuvarımızda kullanılan fonksiyonel vazodilatasyon prosedürünü uygulamalı olarak gösterecektir. Laboratuvarımızda, arteriyel oklüzyonun vasküler reaktivite ve kan akışı kontrolü üzerindeki etkisini incelemek için fonksiyonel vazodilatasyon prosedürünü kullanıyoruz. Önceden hazırlanması gereken ekipmanlar arasında 10 knot lokasyon süturu, bir kapatma süturu, bir iğne tutucu, iris makası, standart pens, yaylı makas ve bükülmüş bir mikro prob yer almaktadır.Cerrahi aletleri hazırladıktan sonra fareyi anestezi altına alın; burada gösterilen formül ve dozajı kullanın. Anesteziyi ayak parmak sıkıştırma refleksi testi ile doğrulayın, ardından elektrikli tıraş makinesi kullanarak hayvanın sırtından geniş bir kürk bölgesini temizleyerek koruyucu IGEL uygulayın. Spinal trapezius ligasyonu sadece kürek kemiğinin yakınında küçük bir alanın temizlenmesini gerektirse de, birkaç gün içinde gerçekleştirilecek olan spinal trapezius doku hasadı çok daha geniş bir temizlenmiş yüzey gerektirecektir.Fazla tüyü tıraş edin, ardından üretici talimatlarına uygun olarak tüy alma kremi uygulayın. Sırtı ıslak bir süngerle yıkayın. Daha sonra, Betadine ile bitirecek şekilde, dönüşümlü olarak üç set alkol ve Betadine mendili uygulayın.İyi aydınlatma koşulları altında, en uygun insizyon bölgesi dorsal yağ yastığının transdermal tanımlamasıyla bulunabilir. Besleyici arter spinal trapezius kasını aniden kestiği için, yağ yastığı sınırı bu konumda cildi gerer; iris makasını hayvanın sırtına dik olarak doğrudan yukarıdan getirip üç ila beş milimetrelik lineer bir insizyon yapın. Aydınlatma veya cilt pigmentasyonu transdermal tanımlamaya izin vermiyorsa.İnsizyonu kürek kemiğinin kemiksi çıkıntısının beş milimetre yanına yapın, insizyonu deri katmanları boyunca uzatın ve spinal trapezius kasını bulmak için gerektiği şekilde lateral olarak genişletin. Ligasyon bölgesine erişmek için üzerindeki fasyayı disseke edin. Eğer bu vakada olduğu gibi yüzeysel bir damar hasar görür ve hemoraji meydana gelirse, kanama süresinin bitmesini bekleyin ve gerekirse basınç uygulayın, desikasyonu önlemek için salin ile nemlendirin.Belirtilen arter, spinal trapezius'un dorsal hattı boyunca uzanır ve ardından kasın içinden geçerek ventral yağ yastığına girer. Spinal trapezius'un lateral kenarını bulun ve neredeyse ters dönecek şekilde yukarı kaldırarak yansıtın. Bu işlem, kasın ventral yüzeyini ve arterin transversal bölgesini açığa çıkarır; damarı kapatan ventral yağ yastığını disseke edin.Ezilme yaralanmasını önlemek için forseps basıncına dikkat edin. Burada cerrah, bağlanacak olan spina trapezius arterini göstermektedir. Ven çiftlerinin varlığına dikkat edin; kısa etkili adenozin veya uzun etkili papin gibi vazodilatörler uygulanabilir.Bu vakada arter, oklarla belirtildiği gibi diğer iki damarın arasında yer almaktadır. Bunlardan biri boyut olarak artere benzerdir ve kas yansıtılmamış olsaydı daha lateralde konumlandığı görülürdü; diğeri ise çok daha büyüktür ve daha medyalde yer alırdı. İki ligasyon bölgesi ai ile işaretlenmiştir.İlk ligatür, ikinciye göre akış yönünde (downstream) yerleştirilir. Bu, ikinci ligatür yerleştirilirken damarın hala kanla dolu olmasını ve görünür kalmasını sağlar. A, transektasyon yapılacak bölgeyi belirtmektedir.Arterin ve ona eşlik eden venin, C ile çevrelenen ventral yağ yastığına girdiği B konumuna dikkat edin. Bu, ikinci daha küçük damarın bir ven olduğunu anlamamızı sağlar. Ayrıca, D ile çevrelenen spinalis art trapezius kasının kendisine de dikkat edin. Arteri venden ayırt etmek için bazı ipuçları beraberindeki metin protokolünde sunulmuştur. Ancak kısaca, tercih ettiğimiz yöntem, bir mikro prob ile basınç uygulayarak kan akışını engellemekle ilgilidir.Damar bir arter ise, yansıyan kasın uygulandığı yöndeki aşağı akış yönünde akış engellenecektir. Buradaki teknik, daha büyük damarı devre dışı bırakır. Gerekirse, arteri diğer damarlardan ayırmak için 80 derecelik bükümlü mikro probu kullanın.Bu işlem, damarın altındaki bağ dokusunun delinmesi ve bir boşluk açmak için kısa lateral hareketler yapılmasıyla gerçekleştirilir. Prob kolayca geçirilene kadar, sütür iğnesi artık arterin altına daha rahatça yerleştirilebilir. Bu vakada, küçük bir venin zedelenmesi sonucu hafif bir kanama meydana gelmiştir.Bu damar, iskemik bölgeden yeterince uzakta yer aldığı için etkisinin minimum düzeyde olması gerekir. İşleme devam ederek tek bir cerrah düğümü atın ve bir sonraki dikişi hazırlayın. Ardından, önceden oluşturulan boşluktan geçerek önceki ligatürün birkaç milimetre yukarısına bir cerrah düğümü daha atın.Kasın yansıtıldığını ve akış yönünün beklenenin tersi olabileceğini unutmayın. Her iki ligatür de yerleştirildikten sonra, tıkanmış bir eritrosit sütunu kanıtı arayın. Akış durdurulmadıysa, başka bir ligatür gereklidir.Aksi takdirde, ligatürler arasından damarı kesin ve herhangi bir kanama olup olmadığını gözlemleyin; bu durumda ligasyon başarılı olmuş demektir ve arteriyel hemoraji görülmez. Alternatif bir yöntem, tek bir ligatür ve akış yönünde kesi yapılmasını içerir. Bu yöntemin ne zaman tercih edildiği için beraberindeki literatüre bakınız.Kası orijinal konumuna geri getirin, yerinden oynamış adipoz dokuyu ve fasyayı yeniden konumlandırın ve emilmeyen bir sütürle kapatın. Son olarak, fareyi spinotrapezius intravital mikroskopi için gözlem altında ve analjezik desteğiyle ısıtmalı bir iyileşme kafesine yerleştirin. Fare önce bir indüksiyon haznesinde izofluran ile anesteziye alınır ve ardından bir burun konisi aracılığıyla sürekli akışlı izoflurana bağlanır.Rektal sıcaklık probunu yerleştirin ve termo kontrol cihazını 35 °C'ye ayarlayın; iris makası, standart pens, yaylı makas ve nemlendirilmiş PBS tamponlu pamuk önceden hazırlanmalıdır. İris makası ve standart patent pens kullanarak spinal trapezius'un kaudal ucunda bir cilt insizyonu yapın. İnsizyonu yağ yastığının kraniyal yönüne doğru genişleterek at nalı şeklinde bir kesi oluşturun ve desikasyonu önlemek için cilt flebini plastik sargı ile kapatın; görünürlüğü maksimize etmek için ince pensle subkutan bağ dokusunu künt şekilde disseke edin.Akım alanının boyutunu minimize etmek için birbirlerine mümkün olduğunca yakın tutarak stimülasyon elektrotlarını yerleştirin; bunları, açığa çıkarılmış kasın omurganın hemen lateralindeki kaudal ucuna konumlandırın. Kil ile sabitleyin. PowerLab veri toplama sistemi, stimülatör, izolatör ve labchart yazılımı kullanarak, 200 microsecond süreli, two milliamp genlikli ve one hertz frekansında verilen kare dalgalar şeklinde ayarlanmış bir test stimülasyonu gerçekleştirerek elektrot yerleşimini onaylayın.Açığa çıkan kası tekrar streç filmle örtün. Kurumayı önlemek için, damar çapı başına 30 dakika dengeleme süresi tanıyın ve ardından görüntü veya videonuzu kaydedin. Vasküler yapıyı görüntülemek için intravital mikroskobu spinal trapezius kası üzerine konumlandırın.İmmersiyon objektifi kullanılıyorsa, görünürdeki en büyük damar olan ana arterin üzerinden başlayarak objektif ile streç film arasına bir damla PBS damlatın. İlgilenilen damarı bulmak için tablasını XY düzleminde hareket ettirin. Kasları, önceki süre ve genlikteki kare dalgalarla, ancak sekiz hertz frekansında ve stimülasyonun hemen ardından 90 saniye boyunca uyarın.Damarı görüntüleyin ve dinlenme çapına dönene kadar her dakika boyunca bunu yapmaya devam edin. Veri analizi, video kumpasları ile gerçek zamanlı olarak veya görüntü analiz yazılımı ile çevrimdışı olarak gerçekleştirilebilir. İlk insizyondan görüntülemeye kadar olan prosedürü karşı taraf kasını kullanarak tekrarlayın.İşlem tamamlandığında, trapezius kası doku hasadı için standart A CUC protokolünü izleyerek fareyi ötanize edin. İris makası, standart pens ve yaylı makasa ihtiyacımız olacak.Fareyi daha önce belirtildiği şekilde anestezi edin. Farenin kürek kemiğinin birkaç milimetre kraniyalinden bir insizyon yaparak başlayın. İnsizyonu lateral olarak genişletin ve ardından her iki tarafı da kote edin.Amaç, insizyon yapıldıktan sonra T3'ten L4'e kadar uzanan spinal trapezius kasını açığa çıkarmaktır. Kurumayı önlemek ve doku manipülasyonunu kolaylaştırmak için salin ile sürekli nemlendirilerek, deri sırt bölgesinden nazikçe çekilerek veya bağ dokusunun dikkatlice kesilerek ayrılabilir. Dorsal adipöz dokuyu uzaklaştırmak ve spinal trapezius kasını açığa çıkarmak için künt diseksiyon kullanın.Benzer şekilde, ventral adipöz dokuyu uzaklaştırın. Kas yansıtıldıktan sonra, hayvanın sağ taraflı spinal trapezius kası burada tanımlanır. Ardından, üzerini örten fasyayı mümkün olduğunca temizleyin.Prosedürün bu kısmı zahmetli olabilir, ancak mikroskopi sırasında artefaktların önlenmesi açısından aynı derecede önemlidir. Bağ dokusu uzaklaştırıldıktan sonra, önce lateral kenarı dorsuma kabaca paralel olarak kesip kranialden kaudale doğru ilerleyerek dokuyu gösterildiği gibi eksize edin. Ardından, en kranial uçtan transvers olarak kesin ve son olarak kontralateral kası toplamak için omurgaya en yakın olan medial sınır boyunca kesin.Aynı prosedürü uygulayın. Kesim sırasında önce dorsal yağ dokusunu, ardından ventral yağ dokusunu ve son olarak üstte kalan fasyayı uzaklaştırın. Enstrümanı baskın olmayan ele geçirmek işinizi kolaylaştırabilir.Kesilen dokular, hayvan ötanazi edildikten sonra burada ana hatları verilen prosedür takip edilerek fikse edilebilir ve yıkanabilir. Geliştirilmiş bir A CUC protokolüne göredir. Alternatif bir perfüzyon fiksasyon prosedürü hakkında detaylar için beraberindeki literatüre bakınız.Burada, yansıtılmış spini trapezius kasının etiketlenmiş bir diyagramını gösteriyoruz. Besleyici arter açığa çıkarıldıktan sonra, harfler bölgeleri daha önce belirtildiği gibi göstermektedir. Her hayvanın kendine özgü bir anatomiye sahip olduğunu unutmayın.Bu spesifik fare, diğer iki damarın yakınlığı nedeniyle bu prosedür için oldukça zor kabul edilmektedir. Burada daha tipik bir hayvan gösterilmiştir. Belirtilen arterin hemen üzerindeki para venle arasındaki nispeten geniş ayrımı ve üçüncü bir damarın yokluğunu dikkate alınız.Burada, düz kas alfa aktini için boyanmış, ligasyon uygulanmış sağ taraf spinal trapezius kasının konfokal mikroskop montajını görüyoruz. İskemik koşullar altında, ligasyon bölgesinin aşağısında belirtilen bölgede yeniden şekillenme meydana gelmiştir. Bu değişiklikler, burada arter yol uzunluğunun merkez uzaklığına oranını olarak tortuositeyi ölçmek için kullandığımız görüntü analiz yazılımı ile nicelendirilebilir.Burada gösterilen bazı örnek veriler, kontralateral kontrole kıyasla artan damar tortuozitesi için istatistiksel olarak anlamlı bir sonuç göstermektedir. Ayrıca, çevrimdışı bir karanlık alan mikroskobu üzerindeki VA'da MicroVision tıbbi yazılımını kullanarak damar reaktivitesinin fonksiyonel ölçümlerini gösteriyoruz. Video damar çapları stimülasyondan önce ve stimülasyondan sonra ölçülmekte ve ardından yüzde değişim olarak birbirleriyle karşılaştırılmaktadır.Burada gösterilen örnek veriler, stimülasyon sonrası terminal arterlerin damar çapındaki artış için istatistiksel olarak anlamlı bir sonuca işaret etmektedir. Merhaba, ben Alexander Ell; bu videoyu düzenleyen Pierce Scholer laboratuvarındaki lisans öğrencisiyim. Birlikte, mirroring spin trapezius kasında iskelet kası iskemisi için nasıl bir model oluşturulacağını size gösterdik.Ardından, vasküler reaktivite ve kan akışı kontrolünü ölçmek için uygun olan fonksiyonel bir vazodilatasyon prosedürünü gösterdik. Son olarak, immünokimyasal boyama ve görüntüleme için uygun fiksasyona hazırlamak amacıyla kasın nasıl çıkarılacağını gösterdik. San Luis Obispo'daki ve buradaki Charlottesville'deki çalışma arkadaşlarım adına, izlediğiniz için teşekkür eder, araştırmalarınızda başarılar dilerim.

murine-spinotrapezius-model-to-assess-impact-arteriolar-ligation-on

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kardiyovasküler hastalığın hayvan modellerinden arteriyel lezyonların ex vivo analizi klasik olarak histolojik ve immünohistokimyasal tekniklere dayanır. Bunlar 3 boyutlu lezyonlarda 2 boyutlu ölçümler sağlar. Bu el yazması, optik projeksiyon tomografisi kullanılarak 3 boyutlu kantitatif analiz için arteriyel lezyonların oluşumunu açıklamaktadır.

Üretim ve Farelerde arteriyel Lezyonlarının 3-Boyutlu kantitasyonu Optik Projeksiyon Tomografi ile

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

restenoz fare femoral arter yaralanması tel modeli teknik olarak zordur. Bu protokolde başarıyla restenoz çalışmaları için tutarlı neointima ikna etmek tel yaralanması gerçekleştirmek için anahtar teknik detaylar önemlidir göstermektedir.

Arter Restenozun bir fare modeli: Femur Tel Yaralanma Teknik Yönleri

arteriyel denüdasyon yaralanmasının ardından yeniden endotelizas- hücresel ve moleküler mekanizmaların anlaşılması trombozu ve arterlerin restenoz önlemede büyük önem taşımaktadır. Burada İnfrarenal abdominal aorta tekrarlanabilir arter denüdasyon yaralanması için bir protokol açıklar. prosedür fare modelleri kullanılarak endotel rejenerasyon düzenleyen altında yatan mekanizmaları araştırmak için geliştirilmiştir.

Bir Fare Modelinde İnfrarenal Abdominal Aort Bağlama Ekipmanları tarafından tekrarlanabilir Arter denüdasyon Yaralanma

Kardiyovasküler prosedürleri takiben yapılan restenoz (baypas cerrahisi, anjiyoplasti veya stentleme) bu prosedürlerin dayanıklılığını azaltmakta önemli bir sorundur. İdeal bir terapi düz kas hücresi (VSMC) proliferasyonunu inhibe ederken endotelin rejenerasyonunu teşvik eder. VSMC çoğalması ve endotel fonksiyonunun in vivo olarak eşzamanlı olarak değerlendirilmesi için bir model tanımlıyoruz.

Murin Aort Kırma Yaralanması: Verimli<emIn vivo</em&gt; Düz Kas Hücresi çoğalması ve Endotel Fonksiyon Modeli

Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

Burada, anjiogenik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için fonksiyonel, histolojik ve moleküler testlerin bir pil tarafından izlenen kritik bir hindekstremite iskemi deneysel modeli sunulmuştur.

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

Lökosit ve trombositlerin işe alınması, arteriyogenez sırasında kollateral arterlerin etkili büyümesi için gerekli olan önemli bir bileşeni oluşturur. Multifoton mikroskopisi, arteriyogenez sırasında lökosit alımını ve ekstravazasyonunu incelemek için in vivo yüksek uzay-zamansal çözünürlüğe ve daha az foto-toksisiteye sahip hücre dinamiklerini izlemek için etkili bir araçtır.

Bir Murin Arka Bacak Modelinde Arteriyogenez Sırasında Lökosit Alımını İzlemek için Multifoton İntravital Görüntüleme

Burada, araştırmacılara vasküler anastomoz darlığını incelemek ve simüle etmek için değerli bir hayvan modeli sunan femoral arter anastomozu için bir murin modeli sunuyoruz. Bu gelişme, bu durumun altında yatan patofizyolojiyi daha iyi anlamamız ve vasküler hastalıklara yönelik daha doğru ve etkili araştırmaları kolaylaştırmak için çok önemlidir.

Femoral Arter Anastomoz Darlığı için Murin Modelinin Geliştirilmesi

Keşfedin mürin spinotrapezius kasında arter ligasyonu modelini; iskemik hastalıklarda mikrovasküler ağların yeniden yapılanmasını ve fonksiyonel vazodilatasyon mekanizmalarını intravital mikroskopi ile incelemek için kullanılır.

Mikrovasküler Fonksiyon ve Tadilat üzerine Arteriolar Ligasyonu etkisini değerlendirmek için mürin Spinotrapezius Modeli

Daha fazla video keşfet