Name: Elektrokemiluminesan immunoassay Serum Kardiyak Miyozin Bağlayıcı Protein-C belirlenmesi için hassas ve özel miktar tayini yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-08T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 12 s
Description: Öğrenin serum örneklerinde kardiyak miyozin bağlayıcı protein-C ve kardiyak troponin I'yi eşzamanlı olarak elektrokemiluminesan immunoassay ile nicelendirmeyi. Bu hassas yöntem miyokard infarktüsü tanısında klinik araştırmalara yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Sağlık hibe Ulusal Sağlık Enstitüleri R01HL105826 ve K02HL114749 (Dr Sadayappan) ve Amerikan Kalp Derneği Midwest Arkadaş grupları tarafından finanse edildi; 11PRE7240022 (Bay Barefield) ve 13POST14720024 (Dr Govindan). Yazarlar minnetle tahlil gelişmekte olan kendi mükemmel teknik ve edebiyat destek için Dr Jimmy Page, Jill Clampit ve Dr John Hudson, MSD, yardımı kabul.

1. UNIPLEX cMyBP-C Testi <ol><li> Yakalama antikor ile deney, kat 96-MSD çıplak standart plaka önceki gün. CMyBP-C, 5 mg / fosfat içinde seyreltilmiş ml &#39;lik bir konsantrasyonda, fare monoklonal anti-cMyBP-C antikoru (jelatin serbest) bir 30 ul hacim kullanımı salin (PBS) tamponlu. </li><li> Iyi hidrofobik olduğu için, kuyunun dibinde köşeye çözüm pipetle, daha sonra tüm aşkın çözüm yaymak için plaka yanlarına dokunun. </li><li> Plaka plaka örtücü ile kaplı ve sallayarak olmadan 4 ° C&#39;de O / N inkübe edilir. </li><li> Bir lavabonun üzerinde ve sonra kağıt havlu bir yığın çözüm dokunarak yakalama antikor çözüm çıkarın. Plakasına Spesifik olmayan bağlanma,% 5 (w / v) engelleyici her oyuğa PBS içinde bir (yüksek dereceli BSA) çözeltisi 150 ul ilave edilerek bloke edilmiştir. </li><li> 700 rpm&#39;de çalkalayarak, oda sıcaklığında 1 saat boyunca inkübe plakası ve Seal. </li><li> Bloke adım sırasında, standart hazırlama ve Sdepas&#39;lar. 1% 2.000 ng / ml (k / h) engelleyici bir PBS / bir başlangıç ​​konsantrasyonuna - Rekombinant cMyBP-C protein parçası (271 amino asit 1) seyreltilmesi ile standart seri olun. Daha sonra seri olarak% 1 (w / v) &#39;engelleyici ° C&#39;de PBS / 5 oranında seyreltilir. 7 standartları toplam + 1 boş (% 1 (w / v) &#39;engelleyici A / PBS) kullanılmıştır. </li><li> Bloke etme çözeltisi uzaklaştırılır ve 150 ul% 0.05 (v / v) ile 3 kez Tween-20/PBS plaka yıkayın. Her zaman, bir lavabo üzerinde ters plaka ile yıkama solüsyonu çıkarın. Üçüncü yıkama adımdan sonra, şiddetle bir lavabonun üzerinde plaka fiske ve tamamen kuruyana kadar kağıt havlu tabakası üzerinde şiddetle plaka pat. Kuluçka hacimleri küçük gibi bu, çok önemli bir adımdır, ve kalan yıkama solüsyonu önemli ölçüde bir sonraki kuluçka sulandırmak olur. </li><li> Kuyulara standartlar ve numuneler bir pipetle 25 ul. 1 saat boyunca 700 rpm&#39;de çalkalayarak, oda sıcaklığında plaka ve inkübe Seal. </li><li> % 1 engelleyici / PBS içinde 1 ug / ml &#39;de tespit antikor çözeltisi hazırlayın. Bir CuMSD sülfo-TAG etiketleme algılama antikoru olarak hizmet ile - zel cMyBP-C antikoru (14 epitop amino asitler 2) yapılmıştır. Kitler, herhangi bir antikor etiketlemek için nispeten basit bir işlem yapmak, sülfo-TAG etiketleme için kullanılabilir. </li><li> , Adım 1.4 &#39;de tarif edilen yıkama adımı tekrar edin. </li><li> Her kuyucuğa algılama antikor çözeltisi 25 ul ekle çalkalayıcı 700 rpm&#39;de bir plaka üzerine, 1 saat boyunca oda sıcaklığında ve plaka ve inkübe mühür. </li><li> Kuluçka döneminde, Sektör Görüntüleyici ve yazılım (Reaktif bölüm bakınız) uygun çalışmasını sağlamak için MSD demo-levha (LED ışıkları ile plaka) çalıştırın. Aynı zamanda, 15 ml distile su ile 4x salt tampon 5 ml eklenerek MSD tarafından sağlanan salt tampon, seyreltin. </li><li> , Adım 1.4 &#39;de tarif edilen yıkama adımı tekrar edin. </li><li> Bir çok kanallı pipet kullanarak her bir kuyunun salt tampon 150 ul ekleyin. Hava kabarcıkları (ters pipetleme uygun bir yöntemdir) önlemek için emin olun. Salt tamponu ilave edildikten sonra hemen Sektördeki plaka taramaGörüntüleyici. </li></ol> 2. 3-karmaşık cMyBP-C, CK-MB ve cTnI Testi <ol><li> 96 oyuklu bir plaka 3-Plex ve bir seyreltici solüsyonların kullanımı daha önce oda sıcaklığına kadar denge sağlaması için izin verilmiştir. Bu plaka MSD tarafından cMyBP-C, CK-MB ve cTnI için yakalama antikorlar ile ön kaplı. </li><li> % 1 (w / v) &#39;engelleyici her bir A / PBS içinde 25 ul ekle. Tüm iyi çözüm kapalı olduğundan emin olmak için plaka yanlarına dokunun. </li><li> Bir tabak mühürleyen ile plaka mühür, bir plaka çalkalayıcı plaka yerleştirin ve 30 dakika için 700 rpm&#39;de sallayın. </li><li> Bu arada, bireysel kalibratörlerin bir seyreltme serisi hazırlanır. Her iyi üç yakalama antikorlar olduğu için üç kalibratör karışık olması ve seri olarak kullanılmadan önce seyreltilmiş gerekir. 2.000 ng / ml &#39;cMyBP-C, 100 ng / ml&#39; si ile bir örnek oluşturmak için% 1 birlikte yeniden birleştirici cMyBP-C, CK-MB (MSD) ve cTnl (MSD) (w / v) &#39;engelleyici A / PBS ile seyreltilir CK- MB ve 25 ng / ml cTnI (örnek A). </li><li> En az 100 ul son hacim, her bir standart için hazırlanmıştır. KarşıStandart seri tamamlamak, seri örneklerin 5 kat olan sulandırmak. Örnek, 25 ul kullanarak bir 100 ul% 1 (w / v) &#39;engelleyici örnek oluşturmak C için 100 ul% 1 (w / v)&#39; engelleyici A / PBS içinde örnek B 25 ul kullanımı, daha sonra örnek B&#39;yi oluşturmak için A / PBS içinde ve benzeri. MI ile 16 konu ve 16 kontrol grubu insan serum örneklerinde cMyBP-C, CK-MB ve cTnI düzeylerini ölçmek için kullanıldı. Bu örnekler,% 1 (w / v) &#39;engelleyici A / PBS içinde 2x seyreltilmiştir. </li><li> 3-Plex plaka gözenekleri içinde zaten mevcut olan 25 ul standart ve seyreltilmiş numune, 25 ul ekle. Ayrıca, boş (sadece seyreltici) dahil edilmesi önemlidir. Tekniğin kurmak için, numuneler teknik üçlü olarak yüklenir. Aksi takdirde, çiftleri yeterlidir. </li><li> Tekrar plaka Seal (plaka örtücü yeniden kullanılabilir) ve 2 saat oda sıcaklığında bir plaka çalkalayıcı (700 rpm) üzerinde kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> Kuluçka tamamlandıktan hemen sonra, algılama antikoru çözeltisi hazırlanır. Kullanılan seyreltici, PBS içinde% 1 (w / v) &#39;engelleyici. Tüm thrEE sülfo-etiketli antikorlar tespit 1 ug / ml her biri bir son konsantrasyon halinde bir araya seyreltilir. Algılama antikorlar tipik bir 50x stok konsantrasyonu sağlanır. </li><li> Tam 96 oyuklu plaka için, toplam seyreltik çözeltinin 2.700 ul (hata dahil pipetleme ile) gereklidir. 2.538 ul% 1 (w / v) &#39;engelleyici bir PBS / her bir algılama antikoru 54 ul ekle. </li><li> 2 saat sonra, şiddetle bir lavabo üzerinde plaka hafifçe vurarak çözümler çıkarın. PBS içinde% 0.05 Tween-20 150 ul ile kuyu 3x yıkayın. Algılama antikor çözeltisi 25 ul her bir çok kanallı bir pipet kullanarak, ve plaka iki tüm iyi çözelti ile kapalı olduğundan emin olmak için aday edilir. </li><li> Plaka sızdırmaz ve 700 rpm&#39;de çalkalayarak, 1 saat boyunca inkübe edilir. </li><li> Kuluçka döneminde, Sektör Görüntüleyici ve yazılım düzgün çalışmasını sağlamak için MSD demo-levha (LED ışıkları ile plaka) çalıştırın. Ayrıca 4x oku-5 ml eklenerek MSD tarafından sağlanan salt tampon, seyreltik15 ml distile su için tampon. </li><li> Adım 2.8 &#39;de tarif edilen yıkama adımı tekrar edin. </li><li> De, çok kanallı bir pipet kullanarak her bir salt tampon 150 ul ekleyin. Hava kabarcıkları kaçınmak önemlidir (ters pipetleme uygun bir yöntemdir). Salt tamponu ilave edildikten sonra hemen Sektör Imager plaka tarama. </li></ol>

<ol><li>Thygesen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Third+universal+definition+of+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Third universal definition of myocardial infarction.</a> Eur. Heart J. 33, 2551-2567 (2012).</li>
<li>Leng, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ELISA+and+multiplex+technologies+for+cytokine+measurement+in+inflammation+and+aging+research%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A.+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">ELISA and multiplex technologies for cytokine measurement in inflammation and aging research.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 63, 879-884 (2008).</li>
<li>Thompson, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Competitive+electrochemiluminescence+wash+and+no-wash+immunoassays+for+detection+of+serum+antibodies+to+smooth+Brucella+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Vaccine+Immunol%22%5BJournal%5D)">Competitive electrochemiluminescence wash and no-wash immunoassays for detection of serum antibodies to smooth Brucella strains.</a> Clin. Vaccine Immunol. 16, 765-771 (2009).</li>
<li>Kingsmore, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+protein+measurement%3A+technologies+and+applications+of+protein+and+antibody+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Drug.+Discov%22%5BJournal%5D)">Multiplexed protein measurement: technologies and applications of protein and antibody arrays.</a> Nat. Rev. Drug. Discov. 5, 310-320 (2006).</li>
<li>Altan, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+long-acting+tumor+necrosis+factor+alpha-binding+protein+demonstrates+activity+in+both+in+vitro+and+in+vivo+models+of+endometriosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">A long-acting tumor necrosis factor alpha-binding protein demonstrates activity in both in vitro and in vivo models of endometriosis.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 334, 460-466 (2010).</li>
<li>Patel, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+sensitivity+cytokine+detection+in+acute+coronary+syndrome+reveals+up-regulation+of+interferon+gamma+and+interleukin-10+post+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">High sensitivity cytokine detection in acute coronary syndrome reveals up-regulation of interferon gamma and interleukin-10 post myocardial infarction.</a> Clin. Immunol. 133, 251-256 (2009).</li>
<li>Fu, Q., Zhu, J., Van Eyk, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+multiplex+immunoassay+platforms%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">Comparison of multiplex immunoassay platforms.</a> Clin. Chem. 56, 314-318 (2010).</li>
<li>Mahajan, V. S., Jarolim, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+interpret+elevated+cardiac+troponin+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">How to interpret elevated cardiac troponin levels.</a> Circulation. 124, 2350-2354 (2011).</li>
<li>Govindan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+myosin+binding+protein-C+is+a+potential+diagnostic+biomarker+for+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac myosin binding protein-C is a potential diagnostic biomarker for myocardial infarction.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 52, 154-164 (2012).</li>
<li>Barefield, D., Sadayappan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation+and+function+of+cardiac+myosin+binding+protein-C+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation and function of cardiac myosin binding protein-C in health and disease.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 48, 866-875 (2010).</li>
<li>Kuster, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+myosin+binding+protein+C+phosphorylation+in+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Muscle+Res.+Cell+Motil%22%5BJournal%5D)">Cardiac myosin binding protein C phosphorylation in cardiac disease.</a> J. Muscle Res. Cell Motil. 33, 43-52 (2012).</li>
<li>Sadayappan, S., de Tombe, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+myosin+binding+protein-C%3A+redefining+its+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+Rev%22%5BJournal%5D)">Cardiac myosin binding protein-C: redefining its structure and function.</a> Biophys. Rev. 4, 93-106 (2012).</li>
<li>Sadayappan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+myosin+binding+protein-C%3A+a+potential+early-stage%2C+cardiac-specific+biomarker+of+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Biomark+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiac myosin binding protein-C: a potential early-stage, cardiac-specific biomarker of ischemia-reperfusion injury.</a> Biomark Med. 6, 69-72 (2012).</li>
<li>Fichorova, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+and+technical+variables+affecting+immunoassay+recovery+of+cytokines+from+human+serum+and+simulated+vaginal+fluid%3A+a+multicenter+study%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Biological and technical variables affecting immunoassay recovery of cytokines from human serum and simulated vaginal fluid: a multicenter study.</a> Anal. Chem. 80, 4741-4751 (2008).</li>
<li>Malekzadeh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+multi-plex+and+mono-plex+platforms+for+the+discovery+of+inflammatory+profiles+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Challenges in multi-plex and mono-plex platforms for the discovery of inflammatory profiles in neurodegenerative diseases.</a> Methods. 56, 508-513 (2012).</li>
</ol>

İnsan vücut sıvısı içine cMyBP-C bozulması ve serbest bırakılması ile ilişkili risk faktörleri belirlemek için: Tam patent başvurusu (05/04/12. Başvuru Seri 13 No&#39;lu / 464, 466, Birahane No US 2012 / 0.282.618 A1 ve tarihi) beklemede ve insan vücut sıvısında cMyBP-C düzeyini nicelendirmek.

Bu çalışmada, hastalarda serum birden fazla kardiyak biyolojik tespiti için bir multipleks immunoassay uygulanabilirliğini göstermektedir. Bu teknik, geleneksel ELISA üzerinde birçok avantajı vardır. İlk olarak, test kiti ECL kolorimetrik tespit yerine kullanılır. ECL olarak, bir elektrik sinyali 14 azaltır, böylece arka plan sinyali, ikinci uyarım durumunda ayrılmasının, ölçülen özelliği (ışık) yerel üretimini uyarır. Bu durum, Tablo 2&#39;de de görülebileceği gibi, yüksek hassasiyet sağlama...

Örneğin, serum gibi karmaşık biyolojik örnekler, protein düşük miktarda ölçümü hasta yönetimi, hem de temel bilim için artan bir klinik önem taşımaktadır. Örneğin, bir klinik ortamda bu troponin I gibi kardiyak biyolojik serum, artış akut miyokard infarktüsü (Mİ) 1 ile tutarlıdır. Bu yüksek hassasiyete sahiptir ve analit ölçümü için mutlak izin verdiği serum örneklerinde proteinleri saptamak için, standart bir enzim-linked immunosorbent assay (ELISA), en sık kullanılan bir tekniktir. Ancak, geleneksel ELISA, örneğin nispeten büyük miktarda (tipik olarak 100 ul) gerektiren bazı biyolojik akışkanlar içinde yüksek bir arka plan sinyali, ve ELISA 2 başına sadece bir analit ölçümü ile sınırlıdır. Son zamanlarda, yeni bir immunoassay tekniği bu sakıncaları birçok circumvents geçilmiştir. Bu modifiye tahlil, MSD tarafından geliştirilen, electrochemiluminesc kullanırKüçük bir numune hacimlerinin kullanımını mümkün kılmak için çok düşük arka plan ve artan bir hassasiyet sağlayan sinyal tespiti için etkisiyle (ECL). Elektro algılama antikorlara bağlı raportör molekülün rutenyum (II) &#39;trisbipyridal esas alınmaktadır. Bu, raportör molekülün bunları 3 entegre karbon elektrot olan 96-kuyulu plakanın alt elektriksel stimülasyonu üzerine 620 nm&#39;de ışık yayar. Ayrıca, spot kaplama kullanılarak, birden çok yakalama antikorları, tek bir örnek 4, farklı proteinlerinin aynı anda ölçümü sağlayan, iyi bir (en fazla 10, 96 oyuklu plaka) halinde kaplanabilir. Bu teknik en son serum 5,6 proinflamatuar sitokin profilleri ölçmek için kullanılmıştır. MSD gelen çok katlı levhalar olumlu diğer çok katlı testi platformlara 7 karşılaştırmak. Birincil test platformu olarak MSD kullanarak, daha fazla 3-karmaşık plaka yapılmış bir özel geliştirilen cbir anda kalp miyozin bağlayıcı protein-C (cMyBP-C), kreatin-kinaz MB (CK-MB) ve kardiyak troponin I (cTnI) seviyesini ölçmek ve sonuçları cMyBP-C Monoplex tespiti ile karşılaştırıldı. CK-MB ve cTnI MI için köklü biyolojik bulunmaktadır. Ancak bu biyolojik artışlar örneğin miyokardit veya böbrek yetmezliği 8, MI dışındaki patolojiler neden olabilir. Bu MI tanı özgünlüğünü artırmak için ek biyolojik eklenmesi için savunuyor. Son zamanlarda cMyBP-C de mi 9 için potansiyel bir biyolojik olduğunu göstermiştir. cMyBP-C kalp, iskelet veya değil, düz kaslarda, 10-12 olarak ifade edilir, kalın filaman ilişkili bir proteindir. Bu nedenle, kan dolaşım sistemi içinde cMyBP-C artan seviyesi kalp hasarı 13 belirli bir göstergesidir. Bu çalışmada, serum seviyelerinin ölçülmesi için özel bir 3-Plex tahlilin kullanımı ile cMyBP-C UNIPLEX tespiti görecMyBP-C, CK-MB ve MI hastaların serum cTnI. Gelecekte, bu imza teknik acil serviste göğüs ağrısı ile başvuran hastalarda MI teşhis etmek için kullanılabilir. Loyola University Chicago kurumu inceleme kurulu (KİK) deidentified insan örneklerinin kullanımı ve immunoassay ve kullanımı (LU # 20392) için çalışmayı onayladı.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Reagents</td></tr><tr><td>MSD Yüzey Aktif Madde</td><td>Meso Scale Discovery</td><td>R92TC-2&</td><td>nbsp;</td></tr><tr><td>Ara-20</td><td>Acros</td><td>9005-64-5</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>MSD Engelleyici A</td><td>Meso Scale Discovery</td><td>R93BA-1</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su, 10X</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP399-4</td><td>Kullanmadan önce filtreleyin</td></tr><tr><td>Miyozin bağlayıcı protein C antikoru, fare monoklonal (E7), jelatin içermez</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-137180L</td><td>Kaplama için antikor jelatin içermemelidir</td></tr><tr><td colspan="4"><güçlü> colspan="4" Plakalar ve Ekipman</güçlü></td></tr><tr><td>Çok Dizili 96 oyuklu standart plaka</td><td>Meso Scale Discovery</td><td>L15XA-3</td><td>&nbsp;</td></tr><tr>cMyBP-C, cTnI ve CK-MB <td>Meso Scale Discovery</td><td>N452A-1</td><td>&nbsp;</td> ile <td>prototip 3 pleks, dört noktalı, 96 oyuklu plaka</td>;</tr><tr><td>ThermaSeal Sızdırmazlık Filmi</td><td>Yaşam Bilimleri Ürünleri A.Ş.</td><td>ST-3098</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>MSD SECTOR Imager 2400A</td><td>Meso Scale Discovery</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>MTS 2/4 dijital mikro titre çalkalayıcı</td><td>IKA</td><td>3208001</td><td>&nbsp;</td></tr></tbody></table>

elektrokemiluminesan immunoassay serum kardiyak miyozin bağlayıcı protein-c belirlenmesi için hassas ve özel miktar tayini yöntemi

A Sensitive and Specific Quantitation Method for Determination of Serum Cardiac Myosin Binding Protein-C by Electrochemiluminescence Immunoassay

Biyolojik hem de temel bilim, karar verme klinik giderek daha önemli hale gelmektedir. Teşhis miyokard infarktüsü (Mİ) büyük ölçüde miyokard hasarının bir göstergesi olarak hastaların serum veya plazma kardiyak-spesifik proteinlerin tespit ile tahrik edilir. Son zamanlarda kardiyak miyosin bağlayıcı protein-C (cMyBP-C), MI sonrası serum içinde tespit olduğunu göstermiştir, biz MI için potansiyel bir biyolojik olarak önerilmiştir. Biyolojik genellikle geleneksel sandviç enzim-bağlı immünosorbent testleri ile tespit edilir. Ancak, bu teknik, büyük bir örnek hacmi gerektiren küçük bir dinamik aralık vardır ve bir seferde sadece bir protein ölçebilirsiniz. Burada üç kalp proteinler yüksek hassasiyet ile eş zamanlı olarak ölçülebilir hangi çok katlı bir bağışıklık göstermektedir. Kreatin kinaz MB ve kardiyak troponin ile UNIPLEX veya birlikte cMyBP-C Ölçüm ben karşılaştırılabilir duyarlılık gösterdi. Bu teknik Mezo Ölçeği Discovery kullanırTespiti için elektro ile birlikte bir 96 oyuklu plaka çoğullama (MSD) yöntemi. Sadece küçük bir örnek hacimleri gerekli iken, yüksek hassasiyet ve geniş dinamik aralık elde edilir. Bu tekniği kullanarak, cMyBP-C, kreatin kinaz MB ve kardiyak troponin MI ile 16 denekten serum örneklerinde Ben düzeyleri ölçüldü ve 16 kontrol grubu ile sonuçlar karşılaştırıldı. Biz bu örnekleri her üç işaretleri tespit başardık ve MI sonrası artmış olduğu üç biyolojik bulundu. Bu teknik, bu nedenle, serum numuneleri kalp biyolojik arasında hassas bir şekilde tespit uygundur.

3-Plex tahlilinin temel ilkeler ve akışı Şekil 1 &#39;de gösterilmektedir ve genel akışı Tablo 1&#39; de tarif edilmektedir. UNIPLEX deneyleri tüm alt iyi bir yakalama antikor ile kaplı olması dışında aynı prensip boyunca çalışır. Sinyal algılama bir elektrik sinyali kuyunun dibine uygulandığı ECL yapılır. Bu da, algılama antikoru üzerindeki sülfo-etiketi ile salt tampon, bir kimyasal reaksiyon yoluyla bir ışık yerel üretimini başlatır. Bu, düşük arka plan ve analiz içi...

Karmaşık biyolojik örneklerde ölçüm biyolojik giderek karar verme klinik rehberlik. Biz aynı anda kalp miyozin bağlayıcı protein-C, kreatin kinaz MB ve miyokard infarktüsü ve sağlıklı kontrol grubu olan hastalarda serum örneklerinde kardiyak troponin I ölçmek için son derece hassas bir yöntem açıklanmaktadır.

Elektrokemiluminesan immunoassay Serum Kardiyak Miyozin Bağlayıcı Protein-C belirlenmesi için hassas ve özel miktar tayini yöntemi

Biomarkers are becoming increasingly more  important in clinical decision-making, as well as basic science. Diagnosing  myocardial infarction (MI) is ...

Bu prosedürün genel amacı, serum örneklerindeki kardiyak miyozin bağlayıcı protein C ve kardiyak troponin I miktarlarını eş zamanlı olarak belirlemektir. Bu işlem, öncelikle 96 kuyucuklu bir plakanın pleks bir analiz için kardiyak miyozin bağlayıcı protein C antikoru ile kaplanmasıyla veya önceden kodlanmış bir üçlü pleks analiz kullanılarak gerçekleştirilir. İkinci adımda, kaplanmış plakalar kalibratörler ve serum örnekleri ile inkübe edilir.Son adımda, işaretli tespit antikorları eklenir ve plaka okuyucu tarafından tespit edilen bir kemilüminesans sinyali üretilir. Nihayetinde, serum örneklerinde bulunan ilgili kardiyak proteinlerin seviyeleri, tekli veya multipleks immünolojik analizlerle belirlenebilir. Deneyden bir gün önce, 96 kuyucuklu bir Meso Scale Discovery standart plakasının her kuyucuğunun alt köşesine 30 µL jelatin içermeyen fare monoklonal anti kardiyak miyozin bağlayıcı protein C antikoru pipetleyin.Ardından, antikor solüsyonunu her bir kuyucuğun tabanına yaymak için plağın kenarlarına hafifçe vurun. Mühürledikten sonra, plağı sarsmadan dört derece Celsius'ta gece boyunca inkübe edin. Ertesi sabah, solüsyonu önce bir lavaboya, ardından bir kağıt havlu yığınına boşal

a-sensitive-specific-quantitation-method-for-determination-serum

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Trichothecenes (insan sağlığı için endişe mikotoksinler) rekabetçi bir immünokimyasal yöntemi ve bir final elektrokimyasal algılama dayalı yeni geliştirilen bir tarama yöntemi kullanılarak tespit etmek için bir protokol olduğunu göstermiştir.

Mikotoksin Algılama ELIME (Enzim İmmüno Manyetik Elektrokimyasal Bağlantılı) Yöntem

Sunulan yöntem izole sıçan kardiyomiyositlerde hücresel kısalma ve hücre içi kalsiyum geçici üzerinde izole hasta immunglobulin etkisini analiz ederek, bağımsız spesifik antijen, dilate kardiyomiyopatili hastaların plazmasında fonksiyonel etkin cardiotropic otoantikor saptamak için bir yol sunar.

İzole kardiyomiyositlerin Hücresel Fonksiyon üzerine Antikor Etkilerinin Ölçümü

Bu videoda, farklı numunelerde hedef protein seviyelerinin kantitasyonu için elektrokemilüminesans immünolojik testini gösteriyoruz. Bu tahlil, elektrokimyasal reaksiyonda üretilen lüminesansa dayanmaktadır. Yayılan ışığın yoğunluğu, numunedeki hedef proteinin miktarı ile orantılıdır.

Beyin Lizatında Hedef Protein Seviyelerinin Ölçülmesi için Elektrokemilüminesans Testi

Bu video, insan kan trombositlerinden amyotrofik lateral skleroz (ALS) ile ilişkili bir protein biyobelirtecini tespit etmek için bir kılcal elektroforez immünolojik test protokolünü göstermektedir. ALS biyobelirteç proteininin varlığının doğrulanması, trombosit proteinlerinin boyuta dayalı olarak ayrılması ve ardından kemilüminesan tespiti ile elde edilir.

Protein Biyobelirteç Tespiti için Bir Kapiller Elektroforez İmmünoassay

Bu makale, sıçan kalbinden izole edilen kardiyak miyositlerde kasılma sırasında miyofilament Ca2+ duyarlılığındaki değişiklikleri değerlendiren bir protokolü açıklamaktadır. Kardiyak elektrofizyoloji, sistolik/diyastolik sitozol Ca2+ seviyeleri ve kasılma/gevşeme ile birlikte bu ölçüm, sağlıklı ve hastalıklı kalplerde kardiyak uyarılma-kasılma eşleşmesine aracılık eden mekanizmaların desteklenmesinde zorunludur.

Myofilament Ca Değerlendirilmesi<sup&gt; 2+</sup&gt; Duyarlılık temelinde Kardiyak Uyarma-kasılma Kaplin

Bu eser olağanüstü optik iletim prensibine göre çalışan yüksek kaliteli algılama diziler imal nanoimprinting litografi yöntemi açıklanır. Biyoalgılayıcı düşük maliyetli, güçlü, kullanımı kolay ve kardiyak troponin algılayabilir ben Serumda klinik konsantrasyonlarda (99inci yüzdelik kesme ∼10-400 pg/mL, tahlil bağlı olarak).

İnsan Serumda kardiyak biyolojik ölçmek için olağanüstü optik iletim kullanma

Kapiller isoelectric odaklanarak proteinler ve onların izoformlarının son derece küçük biyolojik örneklerinden detaylı karakterizasyonu etkinleştirme bir antikor tabanlı, vericiyi, yüksek üretilen iş, tekniğidir. Aşağıda bir protokol olarak algılanmasını ve miktar belirli proteinlerin ve onların izoformlarının otomatik ve robotized bir şekilde açıklanmıştır.

Proteinler ve onların izoformlarının kapiller Isoelectric odaklanarak yöntemi tarafından son derece hassas ve nicel tespiti

Burada, biz electrochemiluminescence (ECL) deneyleri kullanarak insan adacık otoantikorlar algılamak için yöntemler sundu. Tip 1 diyabet, tahmin etmek için kullanılan iletişim kuralı, üzerine otoantikorlar diğer otoimmün hastalıklar için algılamak için genişletilebilir.

Electrochemiluminescence deneyleri için insan adacık otoantikorlar

Elektrokemilüminesans immünoassay (ECLIA), geniş bir çalışma aralığında düşük intra ve inter-assay hatası ile yüksek nicel, doğru ve tekrarlanabilir ölçümler üreten endojen ve eksojen olarak uygulanan MeCP2 protein varyantlarının kantitatif tespiti için yeni bir yaklaşımdır. Burada, 96-iyi formatta MeCP2-ECLIA için protokol açıklanmıştır.

MeCP2 Protein Varyantları için Elektrokemilüminesans Bazlı Bir Test

Bu protokol, rekabetçi enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) kullanarak katı dokulardaki siklik guanozin monofosfat (cGMP) konsantrasyonlarını ölçer. Protokol, katı dokunun nasıl işleneceğini, rekabetçi ELISA'nın nasıl gerçekleştirileceğini, absorbansların mililitre başına pikomollerde cGMP konsantrasyonlarına nasıl dönüştürüleceğini ve nihai konsantrasyonların doku gramı başına cGMP'nin nanomolleri olarak nasıl hesaplanacağını açıklar.

Rekabetçi Enzime Bağlı İmmünosorbent Testi (ELISA) Kullanılarak Katı Dokularda Siklik Guanozin Monofosfat (cGMP) Ölçümü

Öğrenin serum örneklerinde kardiyak miyozin bağlayıcı protein-C ve kardiyak troponin I'yi eşzamanlı olarak elektrokemiluminesan immunoassay ile nicelendirmeyi. Bu hassas yöntem miyokard infarktüsü tanısında klinik araştırmalara yardımcı olur.

Elektrokemiluminesan immunoassay Serum Kardiyak Miyozin Bağlayıcı Protein-C belirlenmesi için hassas ve özel miktar tayini yöntemi (Video) | JoVE Journal

Elektrokemiluminesan immunoassay Serum Kardiyak Miyozin Bağlayıcı Protein-C belirlenmesi için hassas ve özel miktar tayini yöntemi

Daha fazla video keşfet