Name: Bir Organotipik Beyin Dilim ve kanser hücrelerinin 3D Sferoid ile Coculture Sistemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-09T22:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Öğrenin, organotipik beyin dilimleri ve karsinoma hücreleriyle kookültür kullanarak serebral metastaz sırasında glial etkileşimleri görselleştirme yöntemini. Bu teknik, tümör invazyonunu ve hücresel etkileşimleri gerçek zamanlı gözlemlemek için değerli bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar onun mükemmel teknik yardım, konfokal ve zaman atlamalı mikroskopi konularındaki teknik danışmanlık için Andreas Wodarz ve Stephan Heermann&#39;ın için Chalid Ghadban teşekkür ederim. Yazarların herhangi için herhangi bir çıkar çatışması yoktur. Bu çalışma Dres tarafından, Forschergruppe 942 Proje 2 (FOR942 BI 703/3-1) Alman Araştırma Kurumu (DFG) tarafından finanse edilmektedir. Bayer-Stiftung (Baden Württembergischer Krebspreis, Almanya) ve Tıp Fakültesi, Georg-August-Üniversitesi Göttingen, Almanya Araştırma Programı tarafından.

Bu yeni model, daha önce yayınlanan organotipik hipokampal beyin dilim yaklaşımın 9-12 bir uyarlamasıdır. Değişiklikler ve ilave kanser hücresi-beyin dokusu etkileşimlerini optimize etmek ve garanti etmek için tekrarlanabilirlik tanıtıldı. Çalışma gözden ve yerel etik kurul tarafından onaylandı. Hayvanlar Üniversitesi Tıp Göttingen&#39;de hayvan bakım kurallarına göre özenle tedavi edildi. Organotipik beyin dilim kokültürü iki adım ayrılabilir. Birinci adım Organotipik beyin dilim hazırlanmasıdır. İkinci adım kokültürü modelinde tümör hücre hazırlama ve birikmesini içerir. 1.. Organotipik Beyin Dilim <ol><li> 0.2 mM glutamin, 100 U / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin, ve glukoz 4.5 mg / ml ile takviye edilmiş minimum temel ortam (MEM), aşağıdakilerden oluşan diseksiyon orta hazırlayın. </li><li> Doğum sonrası günler arasında herhangi bir fare suşundan fareler başını kesmekAltı ve sekiz (P6-8). </li><li> Aseptik koşullar altında hızlı bir şekilde kafatası beyin çıkarın ve buz gibi soğuk diseksiyon ortamına aktarmak. </li><li> Bütün beyin bölümünden ön kutup ve beyincik çıkarın. </li><li> Düzeltmek ve kriyo tutkal ve 5% agaroz ile bir sahnede beyin stabilize. </li><li> Bir Vibratome kullanarak 350 mikron kalınlığında yatay beyin bölümleri dilimleyin. </li><li> Türler ve yaşına bağlı olarak, tek bir fare beyninden 05:56 tüm beyin dilimleri toplayın. </li><li> % 50 MEM oluşan kültür ortamı hazırlanır,% 25 Hanks dengeli tuz çözeltisi (HBSS),% 25 normal at serumu (NHS), 0.2 mM glutamin, 100 U / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin (Sigma, Münih, Almanya) ve 4.5 mg / ml glükoz. </li><li> Alt de kültür ortamı içinde 1 ml olan bir altı-çukurlu plaka içinde bir 0.4 um polikarbonat membran transwell uç üzerindeki her Organotipik beyin dilim koyun. </li><li> Bir nemlendirilmiş Kültür organotipik beyin dilimleri gecede37 ° C inkübatör% 5 CO 2 ile d atmosfer. </li></ol> 2. Dilim Coculture Modeli <ol><li> GFP ile transfekte edilmiş tümör veya başka hücrelerden% 15 RPMI ortamı ve% 85 ECM jel oluşan 20 ul jel matrisi içinde (örneğin, MCF-7-hücreleri GFP), 10 5, katıştırma. </li><li> Organotipik beyin dilim kortikal bölgede doğrudan bitişik steril bir metal ara parça (3.8 mm çap) MCF-7-jel matris karışımı koyun ve 2 saat boyunca inkübe edilir. </li><li> Boşluk çıkarın ve 3D tümör sfero 24-96 saat organotipik dilim ile Coculture sağlar. </li><li> Her gün kültür ortamı değiştirin. </li></ol> 3. Organotipik Beyin Dilim Coculture içinde Astrositler ve mikrogliyal immünflöresan boyanması <ol><li> 4 ° C &#39;de 8 saat boyunca% 4 paraformaldehit ile Organotipik beyin dilim kokültür saptamak </li><li> 5 dakika boyunca (% 0,5 Triton X-100 içeren PBS) PBST ile kokültür dilim yıkayın. </li><li> S blok1 saat boyunca oda sıcaklığında PBST içinde normal keçi serumu (01:20) ile depas&#39;lar. </li><li> Keçi anti-fare-TRITC (PBST içinde 1:100) boyama, ardından 4 ° C&#39;de 36 saat boyunca anti-glial fibriler asidik protein monoklonal antikor (GFAP, PBST içinde 1:200) ile beyin dilim ortak kültürü ile enkübe astrositler Leke Oda sıcaklığında 1 saat karıştırıldı. </li><li> 5 dakika boyunca üç kez PBST ile örnekleri yıkayın. </li><li> Oda sıcaklığında 1 saat boyunca (PBST içinde 1:100) ILB 4-Alexa Fluor 647 ile mikroglial hücreleri boyamak. </li><li> Oda sıcaklığında 3 dakika boyunca DAPI ile beyin dilim kokültür (1:1000) Counterstain. </li><li> Dağı ve DAKO floresan montaj orta beyin dilim Coculture lamel. </li><li> Aşağıdaki sisteme göre tümör istilasının değerlendirilmesi notu: + + = 1/3 - 2/3,,, + &lt;1/3 hücrelerinin 0 = yok işgal hücrelerin + + + ≥ 2/3 (birinci Tümör göbek ve dilim arasındaki temas bölümünün uzunluğunu, daha sonra fractio ölçmek) İstilacı hücreler tarafından tespit temas n. </li></ol> 4. Glial ve Tümör Hücreleri arasındaki Etkileşim Canlı Görüntüleme <ol><li> Bir Leica altında deneyi gerçekleştirmek 10X büyütme lens ve bir Leica DFC 350 FX CCD kamera DMI 6000B mikroskop ters. </li></ol>

<ol><li>Langley, R. R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+seed+and+soil+hypothesis+revisited--the+role+of+tumor-stroma+interactions+in+metastasis+to+different+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">The seed and soil hypothesis revisited--the role of tumor-stroma interactions in metastasis to different organs.</a> Int. J. Cancer. 128, 2527-2535 (2011).</li>
<li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironmental+regulation+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nat. Rev. Cancer. 9, 239-252 (2009).</li>
<li>Mantovani, A., Allavena, P., Sica, A., Balkwill, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-related+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cancer-related inflammation.</a> Nature. 454, 436-444 (2008).</li>
<li>Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+organ+microenvironment+in+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of the organ microenvironment in brain metastasis.</a> Semin. Cancer Biol. 21, 107-112 (2011).</li>
<li>Rath, B. H., Fair, J. M., Jamal, M., Camphausen, K., Tofilon, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytes+enhance+the+invasion+potential+of+glioblastoma+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Astrocytes enhance the invasion potential of glioblastoma stem-like cells.</a> PloS one. 8, e54752(2013).</li>
<li>Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+metastasis%3A+mechanistic+insights+and+clinical+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges.</a> Nat. Med. 12, 895-904 (2006).</li>
<li>Eichler, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+brain+metastases-translation+to+new+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">The biology of brain metastases-translation to new therapies.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 344-356 (2011).</li>
<li>Winkler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+glioma+cell+invasion+in+vivo+reveals+mechanisms+of+dissemination+and+peritumoral+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Imaging glioma cell invasion in vivo reveals mechanisms of dissemination and peritumoral angiogenesis.</a> Glia. 57, 1306-1315 (2009).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J. Neurosci. Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Kreutz, S., Koch, M., Ghadban, C., Korf, H. W., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannabinoids+and+neuronal+damage%3A+differential+effects+of+THC%2C+AEA+and+2-AG+on+activated+microglial+cells+and+degenerating+neurons+in+excitotoxically+lesioned+rat+organotypic+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Cannabinoids and neuronal damage: differential effects of THC, AEA and 2-AG on activated microglial cells and degenerating neurons in excitotoxically lesioned rat organotypic hippocampal slice cultures.</a> Exp. Neurol. 203, 246-257 (2007).</li>
<li>De Simoni, A., Yu, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+organotypic+hippocampal+slice+cultures%3A+interface+method%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of organotypic hippocampal slice cultures: interface method.</a> Nat. Protoc. 1, 1439-1445 (2006).</li>
<li>Fuller, L., Dailey, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rodent+hippocampal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Preparation of rodent hippocampal slice cultures.</a> CSH Protoc. 2007, pdb prot4848(2007).</li>
<li>Lorger, M., Felding-Habermann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capturing+changes+in+the+brain+microenvironment+during+initial+steps+of+breast+cancer+brain+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Capturing changes in the brain microenvironment during initial steps of breast cancer brain metastasis.</a> Am. J. Pathol. 176, 2958-2971 (2010).</li>
<li>Brana, C., Biggs, T. E., Mann, D. A., Sundstrom, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+macrophage+hippocampal+slice+co-culture+system%3A+application+to+the+study+of+HIV-induced+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A macrophage hippocampal slice co-culture system: application to the study of HIV-induced brain damage.</a> J. Neurosci. Methods. 90, 7-11 (1999).</li>
<li>Kim, J. A., Yamada, M. K., Nishiyama, N., Matsuki, N., Ikegaya, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mossy+fiber+pathfinding+in+multilayer+organotypic+cultures+of+rat+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Mossy fiber pathfinding in multilayer organotypic cultures of rat hippocampal slices.</a> Cell. Mol. Neurobiol. 23, 115-119 (2003).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 269, 513-520 (2000).</li>
<li>Charles, N. A., Holland, E. C., Gilbertson, R., Glass, R., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">The brain tumor microenvironment.</a> Glia. , (2011).</li>
<li>Mizutani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fractalkine+receptor+but+not+CCR2+is+present+on+microglia+from+embryonic+development+throughout+adulthood%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The fractalkine receptor but not CCR2 is present on microglia from embryonic development throughout adulthood.</a> J. Immunol. 188, 29-36 (2012).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol. Rev. 91, 461-553 (2011).</li>
<li>Markovic, D. S., Glass, R., Synowitz, M., Rooijen, N., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+stimulate+the+invasiveness+of+glioma+cells+by+increasing+the+activity+of+metalloprotease-2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Microglia stimulate the invasiveness of glioma cells by increasing the activity of metalloprotease-2.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 64, 754-762 (2005).</li>
<li>Baumert, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pathology-based+substrate+for+target+definition+in+radiosurgery+of+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Radiat.+Oncol.+Biol.+Phys%22%5BJournal%5D)">A pathology-based substrate for target definition in radiosurgery of brain metastases.</a> Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. 66, 187-194 (2006).</li>
<li>Palmieri, D., Chambers, A. F., Felding-Habermann, B., Huang, S., Steeg, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+metastasis+to+a+sanctuary+site%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The biology of metastasis to a sanctuary site.</a> Clin. Cancer Res. 13, 1656-1662 (2007).</li>
<li>Pukrop, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+colonization+of+brain+tissue+by+breast+cancer+cells+in+a+Wnt-dependent+way%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Microglia promote colonization of brain tissue by breast cancer cells in a Wnt-dependent way.</a> Glia. 58, 1477-1489 (2010).</li>
<li>Bos, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to the brain.</a> Nature. 459, 1005-1009 (2009).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Serebral metastaz Önceki histolojik araştırmalar özellikle astrositlerde ve mikrogliya 13 yerleşik glial hücrelerin hızlı ve köklü değişiklikler göstermiştir. Karsinom hücreleri ile bu değişiklikleri ve etkileşimleri incelemek için, bu yeni kokültürü sistemi iyi uygundur. Diğer araştırmalar alanlar zaten organotipik hipokampal beyin dilimleri ile uzun yıllara dayanan bir deneyime sahip. Bir avantajı organotipik hipokampal beyin dilim kültürlerin uzun süreli deneyler için uygun hale, hafta canlı ve etkili bir gün boyunca korunmuş olmasıdır. 1991 yılında Organotipik hippocampal slice sistemi Stoppini en tanıtılmasından bu yana, yaygın dejeneratif hastalıkların araştırmada, örneğin kullanılmıştır. Bu nedenle, bu yenilik kokültürü sistemi tümörü 9,11 biyoloji uygulamaları bir dizi iyi kurulmuş bir yaklaşım bir modifikasyonunu ifade eder. Modifikasyon tümör yayılması af derecesini değerlendirmek için bize bir tekrarlanabilir bir model sunduArabirim yöntemiyle geliştirilmişlerdir terwards ve kültürler, ideal olarak, üç boyutlu bir yapı gerektiren deneyler için uygundur. Çeşitli teknikler diğer hücrelerle Organotipik hipokampal dilimler ortak kültürü için kullanılmıştır. Bunlar, makrofaj hücreleri ve Organotipik beyin dilim 14 arasında dolaylı sistemi ve hipokamp bölgesinin 15 iki farklı dilim doğrudan bir ortak kültürü içerir. Glioma agrega Ayrıca beyin dilimleri 16 ile kültüre edilmiştir. Bu modeller Beyin dilimleri hücresel ve moleküler olayları incelemek için kullanılabilir, ancak tümör hücreleri, mikroglia ve beyin parankiması arasındaki doğrudan temas fizyolojik izin vermez. Ayrıca, bu yöntem, kemik iliği kaynaklı periferal monositler / makrofajlar kirlenme olmadan mikroglia gözlem sağlar. CCR2 ve CX3CR1 transgenik fare modeli kullanılması nedeniyle monositler işgal yerleşik mikroglia ayırt etmek zor olduğu gerçeğinden için önemli bir gelişmedirOnların benzer özelliklere 17,18,19 dayanmaktadır. Karsinom hücrelerinin intraserebral enjeksiyonu tümör gelişimini araştıran sağlar rağmen, çevrili makrofaj benzeri hücreler beyin-yerleşik mikrogliya nüfus veya kemik iliğinden elde edilen periferal monositler / makrofajlar 17 kaynaklanan olmadığı kadar söyleyemem. Kettenmann ekibi bir micromanipulator 20 ile beyin dilimler halinde glioma hücrelerinin aşılanması dahil bir organotipik beyin dilim modelini tanıttı. Ancak primer kötü huylu gliyömların metastatik karsinom birçok bakımdan farklıdır. İlk olarak, malign gliomalar mezenkimal kökenli, tümör ve beyin dokusu arasında hiçbir sınır gibi tek hücreleri istila / sinir sistemi dışında metastaz ve göç yok. Buna karşılık, infiltratif büyüme tipik patolojik özelliğidir ve bu karsinomlar genellikle göç / kohortlarda olarak işgal. Hücreleri glial İkincisi, karsinom genellikle beyinde epitel yapıları yeniden deneyina (sözde) kapsül ile beyin doku tümörü ayırmak için deneyin. Biyolojik ve morfolojik özellikleri göz önüne alındığında, malign glioma ve karsinom metastazı gerçekten karşılaştırılabilir değildir. Bu nedenlerden dolayı, biz değiştirilmiş ve biz beyin dilim bitişik bir kanserli hücre fiş enjekte ama kokültürü olmayan bir kokültürü sistem geliştirdi. Ayrıca, mikroglia tümör fiş kolayca girip parlak alan mikroskopi ile tespit edilir ve daha sonra konfokal mikroskopi ile teyit edilebilir olabilir, yani, mikroglia ve tümör tıpanın sınırında astrositik birikimi gözlemlenmiştir. Kanser hücreleri in vivo durumda gerçek ve Baumert ve beyin metastazı 21 ile otopsi olgularının% 63 bir sızma bölgesi buldu meslektaşları tarafından yapılan bir gözlem karşılaştırılabilir beyin dilim içine işgal. Çünkü kayıp kan perfüzyon, bu kültür sadece ikamet makrofaj / mikrogliya vardır. Ayrıca, çünkü mIssing T hücreleri ve bu nedenle, mevcut allo-tepkiselliğe göre insan karsinoma hücreleri da bağışıklığı fare veya sıçan beyin dilimlerindeki (NMRI, B6 veya Wistar) ile birlikte-kültür için kullanılabilir. Bu çıplak fare modelinde bir alternatif olarak hizmet verebilir. 4-5 dilim her bir fareden elde edilebildiğinden, hayvan sayısı önemli ölçüde azalır, mevcut enjeksiyon modellere kıyasla gereklidir. Buna ek olarak, hayvan metastatik hastalık uzun bir süre boyunca maruz kalmaz ve arka arkaya 22 ameliyat prosedürleri uğramaz. Bu kokültürü sistemi ile, kanser hücreleri tarafından mikroglia aktivasyonunu ve kanser hücresi istilasını teşvik kapasitesini göstermiştir. Ayrıca, bu bizim bildiğimiz kadarıyla, mikrogliya aktif kanser hücrelerini 23 taşıma bulundu, ilk kez. Tüm bu avantajlara rağmen, kokültürü sistem, gerçekten de sınırlılıkları vardır. Yine de, bir in vitro olduğuönce kolonizasyon metastaz adımlar eksik modeli. Çünkü perfüzyon eksikliği, bu ekstravazasyonu çalışma mümkün değildir. Bu nedenle, çalışma ekstravazasyonu için bir alternatif yol, kan-beyin bariyerini 22,24 taklit etmek için in vivo model veya enjeksiyon değiştirilmiş Boyden haznesi sistemi, hücre dışı matris ile, HUVEC ve astrositler ya kullanmaktır. Beyin dilim kokültürü yöntemi henüz birçok avantaj ile güvenilir ve tekrarlanabilir bir model ve bu kolonizasyon analizi gibi uygulamalar, geniş bir yelpazede, bir potansiyel yerleşik hücrelerin rolü üzerinde bir odaklanma ile özellikle. (Örneğin, immünohistokimya, konfokal mikroskopi ve zaman atlamalı mikroskopi gibi) diğer bilinen teknikler ile kombinasyon doğrudan hücre-hücre etkileşimleri soruşturma destekler. Bu kolay bir alternatif ve diğer tekniklerin tamamlama ve metastatik mikro dayattığı gibi ipuçları ve etkilerinin araştırılması erişim sunmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Hank&#039; s dengeli tuz çözeltisi (HBSS)</td><td>Gibco, Darmstadt,Almanya</td><td>24020</td><td></td></tr><tr><td>Minimum esansiyel ortam (MEM)</td><td>Gibco, Darmstadt, Almanya</td><td>32360</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>PAA Laboratories Inc., C&ouml; lbe, Almanya</td><td>E15-840</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&#039; s fosfat tamponlu salin (PBS)</td> <td>Pan Biotech, Aidenbach, Almanya</td><td>P04-36500</td><td></td></tr><tr><td>Normal at serumu (NHS)</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Almanya</td><td>16050-122</td><td></td></tr><tr><td>Fetal buzağı serumu (FCS)</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Almanya</td><td>10091148</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>B. Braum, Melsungen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin-Penisilin-Streptomisin çözeltisi</td><td>Sigma, Steinheim, Almanya</td><td>G1146</td><td></td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica, Wetzlar, Almanya</td><td>Leica VT1200S</td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica, Wetzlar, Almanya</td><td>Leica SM 2000R</td><td></td></tr><tr><td>Polikarbonat membran</td><td>BD Falcon, Heidelberg, Almanya</td><td>353090</td><td>transwell membran eki (0.4 & mu; m gözenek boyutu)</td></tr> <tr><td>ECM jel</td><td>Trevigen, R& D, Wiesbaden-Nordenstadt, Almanya</td><td>3432-005-01</td><td>Bodrum membran özü</td></tr><tr><td>Metalik ara parça</td><td>Kig GmbG, Kirkel, Almanya</td><td>DIN 433</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop</td><td>Zeiss, G&ouml; ttingen, Almanya</td><td>LSM 510</td><td></td></tr><tr><td>Hızlandırılmış mikroskop ve kamera</td><td>Leica, Wetzlar, Almanya</td><td>DMI 6000B mikroskobu ve DFC 350 FX CCD kamera</td><td></td></tr><tr><td>Anatomi mikroskobu</td><td>Zeiss, G&ouml; ttingen, Almanya</td><td>Stemi SV11</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Merck, Darmstadt, Almanya</td><td>1.04005.1000</td><td></td></tr><tr><td>Fare monoklonal anti-glial fibriler asidik protein (GFAP) antikoru</td><td>Sigma, Steinheim, Almanya</td><td>G3893</td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-fare IgG, F (ab & # 039;)2- TRITC</td><td>Santa Cruz, Heidelberg, Almanya</td> Griffonia simplicifolia'dan <td>SC3796</td><td></td></tr><tr><td>Isolectin GS-IB4, Alexa Fluor 647 konjugat</td><td>Invitrogen, Karlsruhe, Almanya</td><td>132450</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4&#039;,6&#039;-diamidino-2-fenilindol dihidroklorür)</td><td>Sigma, Steinheim, Almanya</td><td>D8417</td><td></td></tr><tr><td>Floresan montaj ortamı</td><td>DAKO, Glostrup, Danimarka</td><td>S3023</td><td></td> Serisi</tr></tbody></table>

bir organotipik beyin dilim ve kanser hücrelerinin 3d sferoid ile coculture sistemi

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

Karsinom serebral metastazı olan hastalarda kötü prognoz. Bununla birlikte, metastatik yerinde işlem ancak, özellikle, ikamet (stromal) hücrelerinin rolü araştırılmıştır. Birincil karsinomlarda çalışmalar bile prognoz 1,2 üzerinde, metastaz üzerinde mikroçevresinin etkisini göstermektedir. Özellikle tümör ilişkili makrofajlar (TAM) desteği göç, istila ve çoğalması 3. İlginç bir şekilde, metastazının başlıca hedefi siteleri gibi CNS&#39;deki karaciğer veya mikroglia Kupffer hücreleri gibi doku spesifik, makrofajları da sahiptirler. Ayrıca, metastatik siteleri de astrosit gibi diğer dokuya-özgü hücreleri sahiptirler. Son zamanlarda, astrositler ve kanser hücrelerinin çoğalmasını 4,5 kalıcılığı teşvik etmek için ortaya konmuştur. Bu nedenle, bu dokuya özel hücre tipleri fonksiyonları beyin metastazı, 6,7 sürecinde çok önemli olduğu görülmektedir. Bu gözlemlere rağmen,Bununla birlikte, şu ana kadar, doğrudan parlak alan mikroskopi ile, özellikle de serebral metastaz oluşumu sırasında, glial reaksiyonları görselleştirmek için uygun in vivo / in vitro modelinde uygun bir yoktur. Karsinom hücrelerinin in vivo canlı görüntülemede son kendi serebral kolonizasyon davranışlarını 8. gösterdi. Ancak bu yöntem çok zahmetli, maliyetli ve teknik olarak karmaşıktır. Buna ek olarak, hayvan deneyleri bu tür küçük seri kısıtlanır ve önemli bir (cam levhanın implantasyon ile, tümör hücrelerinin enjeksiyonundan, tekrar anestezi ve uzun süreli tespit) hayvanlar için stres ile birlikte gelir. Yerleşik hücreleri ile etkileşimleri henüz tasvir edilmemiş ise Dahası, in vivo görüntüleme, şimdiye kadar, karsinoma hücrelerinin görselleştirilmesi ile sınırlıdır. Son olarak, bağışıklığı yeterli hayvanlara içinde insan karsinoma hücrelerinin araştırmalar 8 imkansızdır. Bu nedenlerle, bir kokültürü sistemi consi kurulmuşmatrigel (3D hücre küre) gömülü bir organotipik fare beyin dilim ve epitel hücrelerinin sokması. 3D karsinom hücre küreleri komşu beyin dokusunun işgali araştırmak amacıyla doğrudan yanındaki beyin dilim kenarına yerleştirildi. Bu floresan ile ve daha parlak alan mikroskopi ile glial hücreleri ve kanserli hücreler arasında morfolojik değişiklikler ve etkileşimleri görselleştirmek için sağlamaktadır. Kokültürü Deney sonra beyin dokusu ya da 3B hücre küremsiler toplanabilir ve daha fazla moleküler analizler (ör. qRT-PCR, IHC veya immunoblot) hem de eş odaklı mikroskopi ile araştırmaları için kullanılmıştır. Bu yöntem, beyin dilimlerine zararlı etkiler olmadan gün boyunca canlı bir beyin dokusu içinde olayları izlemek için uygulanabilir. Bu model aynı zamanda, seçici bastırma ve belirli bir genotip ayrı etkisini belirlemek için verici bir dokudan hücrelerin yerleşik hücre değiştirilmesini sağlar. Son olarak, model, kokültürü uygulanabilir bir alternatifhedeflenen farmakolojik manipülasyonlar sınarken in vivo yaklaşımlar.

Öncelikle, kullanılan tüm kanser hücreleri (insan: MCF-7 ve kemirgen: 410.4) organotipik fare beyin dilim işgal etti. İstila türe bağımsız bir şekilde geniş bir uygulama yelpazesi gösterir, bu nedenle türe bağımsız (Şekil 1A) idi. Buna ek olarak, mikroglia hem de in vivo olarak daha önce ve hasta numuneleri 13 de tarif edildiği gibi, ara yüzeyde birikmiş astrositler. Uzun bir süre boyunca zaman atlamalı görüntüleme dilim canlılığı ortaya ama aynı zamanda hücresel etkileşimleri gözlemlemek için iyi bir platform sundu değil sadece. Time-lapse deneyleri ile, Mikroglial hücreleri sırayla, kanser hücrelerinin de beyin dilim (Şekil 1B1-B2) işgal, 3D cep küre süre girmek için kaydedildi. Ayrıca, daha önce bu şekilde karsinom işgali yardımcı olmak için bir mekanizma ile hâlâ anlaşılmaz karsinom hücreleri taşıma mikroglia yeteneğini göstermiştir. Immünofloresan etiketleme teknikleri kullanarak,işgali işlemi sırasında, bu hücreler arasında sıkı bir etkileşim olduğunu gösterir beyin dokusunda ve tümör hücresi fiş (Şekil 1 C-D) hem de tümör hücreleri ve stromal hücre ko-lokalizasyonunu (örneğin, mikroglia ve astrositler), tarif edildiği. Farklı türler, genotip ve cinslerinden hücreleri incelemek için uygulamaların geniş gösteren - Fare Beyin dilimleri bir insan için (Şekil 1C1-C3), ya murin (Şekil 1D1-D3) karsinoma hücreleri ile ya da kültüre zaman karşılaştırılabilir sonuçlar elde edilmiştir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50881/50881fig1.jpg" fo:content-width="4.75in" fo:src="/files/ftp_upload/50881/50881fig1highres.jpg" /> Şekil 1. Fare ve insan karsinoma hücrelerinin 3D sfero ile Brain dilim kokültürü modeli. Fare meme kanseri olan Organotipik bütün beyin dilim cocultures, kanser hücresi yayılımını A) miktarının belirlenmesihücre hattı 410,4 ya da bir insan göğüs kanseri hücre soyu MCF-7. Veriler n ≥ 38 ile her bir grupta beyin dilim içine cep istila derecesinin yüzdesini temsil eder. Bu iki grup arasında anlamlı bir fark (Kruskal-Wallis testi). B) MCF-7-GFP hücreleri ve gün2 (B1 temsili görüntüleri ile organotipik bütün beyin dilim cocultures Time-lapse görüntüleri) ve günde 5 (B2) idi vardı gösterilmiştir. CD) mikroskopisi görüntüleri karsinom, astrositlerde ve mikrogliya kohortlarını gösterdi. Çift astrositlerin boyama (anti-GFAP-TRITC, kırmızı) ve mikroglia 350 mikron kalınlığında Organotipik beyin dilim ve GFP-transfekte edilmiş tümör hücresi fişi (yeşil) ile bütün ko-kültürü (ILB4-Alexa Fluor 647 mor): 3D- MCF-7-GFP (C1-C3) ve 3D-410.4-GFP (D1-D3). Beyaz çizgiler beyin dilim ve tümör işgali ön kenarını gösterdi. Ölçek çubukları 50 um temsil eder. Mikroglia astrositler birnd tümörler colocalizations (C1 ve D1), astrocytes tümörler colocalizations (C2 ve D2) ve dilim kokültür mikroglia-tümör colocalizations (C3 ve D3). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50881/50881fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a>

Karsinom hücreleri ile Organotipik beyin kesit kokültürü beyin dokusu karsinoma hücre istilası sürecinde floresan gibi parlak saha (video) mikroskopisi ile görselleştirme morfolojik değişiklikler sağlar. Bu model sistem ayrıca hücre değişimi ve ikmal yaklaşımlar sağlar ve manipülasyonlar ve analizlerin bir yelpazede sunuyor.

Bir Organotipik Beyin Dilim ve kanser hücrelerinin 3D Sferoid ile Coculture Sistemi

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in ...

Bu prosedürün genel amacı, serebral metastaz oluşumu sırasında doğrudan glial etkileşimleri görselleştirmektir. Bu, önce farelerden organotipik beyin dilimleri hazırlanarak gerçekleştirilir. Daha sonra, organotipik beyin dilimleri karsinom hücreleri ile birlikte kültürlenir.Daha sonra stromal hücreler spesifik belirteçlerle floresan olarak boyanır. Son olarak, tümör invazyonu seviyesi bir floresan mikroskobu ile değerlendirilir. Sonuç olarak, immünofloresan etiketleme ve hızlandırılmış veya konfokal mikroskopi yoluyla glia kanser hücresi etkileşimini ve kolokalizasyonunu gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu tekniğin, karsinom hücrelerinin intraserebral enjeksiyonu gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, bu yöntemin kolay bir alternatif olması ve tümör ilerlemesi sırasında hücresel etkileşimleri gözlemlemek için iyi bir platform sunmasıdır. Bu tekniğin sonuçları, kanser tedavisi için yeni ve seçici tedavilerin keşfine yönelik 10'dur. Travma hücreleri metastazda önemli roller oynadığından ve aynı zamanda kanser tedavisi için potansiyel hedefler oynadığından, Tekniği gösteren Eugenia, laboratuvarımın bir doktora sonrası çalışmasını teslim edecek Cerrahi işlemden önce, 0.2 milimolar glutamin, mililitre başına 100 miligram streptomisin ve mililitre başına 4.5 miligram glikoz ile desteklenmiş minimal esansiyel ortamdan oluşan diseksiyon ortamını hazırlayın. Sekiz.Aseptik koşulları hızlı bir şekilde kullanarak, beyni kafatasından çıkarın ve diseksiyon ortamına aktarın. Ön direği ve beyinciği beyinden çıkarın. Ardından, beyinden oluşan kalan beyin dokusunu sabitlemek ve stabilize etmek için kriyo yapıştırıcı ve% 5 agros kullanın.Vibram yatay dilimi kullanan bir sahnede, farenin türüne ve yaşına bağlı olarak 350 mikron kalınlığındaki bölümler, tek bir beyinden dört ila altı tam beyin dilimi toplar. Kültür ortamını metin protokolüne göre hazırladıktan sonra, altı kuyulu bir trans kuyu plakasının her bir alt kuyucuğuna bir mililitre ekleyin. Daha sonra her organotipik beyin dilimini 0.4 mikronluk bir polikarbonat transwell membranına yerleştirin ve bunları plakanın kuyucuklarına yerleştirin.Dilimleri gece boyunca %5 karbondioksit ve 37 santigrat derece ile nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin. Ertesi gün,% 15 RPMI ortamı ve% 85 ECM jelinden oluşan 20 mikrolitre jel matrisine beşinci GFP transfekte edilmiş tümör veya diğer hücrelere 10 gömün. MCF yedi jel matris karışımını, organotipik beyin dilimlerinin kortikal bölgelerine doğrudan bitişik steril metalik ara parçalara yerleştirin ve inkübasyondan sonra iki saat inkübe edin, ara parçaları çıkarın ve 3D tümör PHE'nin beyin dilimleri ile 24 ila 96 saat boyunca inkübe etmesine izin verin.İstenirse kültür ortamını her gün değiştirin. Beyin dilimi kokültürlerini boyamak için 10 x büyütme nesnesi ile hızlandırılmış mikroskopi kullanarak canlı görüntüleme yapın. Numuneleri PBST'de beş dakika yıkamadan önce dört santigrat derecede sekiz saat boyunca% 4 paraform aldehit ile sabitleyin.Daha sonra numuneleri bloke etmek için, bir saat boyunca oda sıcaklığında PBST'de normal keçi serumu kullanın. Daha sonra, kokültürleri anti glial fibriler asidik protein veya GFAP monoklonal antikoru ile dört santigrat derecede 36 saat inkübe ederek astrositleri boyayın, ardından oda sıcaklığında bir saat boyunca keçi anti fare boyaması yapın. Numuneleri PBST ile üç kez beş dakika boyunca yıkadıktan sonra, mikroglial hücreleri oda sıcaklığında bir saat boyunca I LB dört LOR 647 ile boyayın, ardından oda sıcaklığında üç dakika boyunca DPI ile karşı boyamadan önce.Ko-kültür numunelerini monte etmek için bir floresan montaj ortamı kullandıktan sonra, numuneleri 25 x büyütmeli bir floresan mikroskop kullanarak görüntüleyin. Son olarak, aşağıdaki puanlama sistemine göre tümör invazyonunun derecesini değerlendirin. Bu, önce tümör tıkacı ve dilimi arasındaki temas bölümünün uzunluğunu ve daha sonra istilacı hücreler tarafından tespit edilebilen temas fraksiyonunu ölçer.Burada gösterildiği gibi, test edilen tüm karsinom hücre hatları, organotipik fare beyin dilimlerini istila etti, bu da istila sürecinin türden bağımsız olduğunu düşündürdü. Bu film, doğrudan glia tümör hücresi etkileşimlerinin hızlandırılmış kaydını göstermektedir. Stromal hücrelerin hücre tıkacı içeren tümörü istila ettiği ve kanser hücreleri ile etkileşime girdiği gözlendi.Uzun bir süre boyunca hızlandırılmış görüntüleme, beyin dilimlerinin canlılığını doğruladı ve üç boyutlu küreye giren mikroglial hücrelerin yanı sıra beyin dilimlerini istila eden kanser hücrelerinin görselleştirilmesine izin verdi. Ayrıca, daha önce gösterdiğimiz gibi, mikroglia karsinom hücrelerini hala esrarengiz bir mekanizma ile taşır ve immünofloresan etiketleme kullanarak karsinom istilasına yardımcı olur. Hem beyin dokusunda hem de tümör hücresi tıkaçlarında tümör ve stromal hücrelerin kolokalizasyonunu gösterdik, bu da invazyon sürecinde bu hücreler arasında sıkı bir etkileşim olduğunu düşündürdü.Burada görülebileceği gibi, fare beyin dilimleri insan veya idrar karsinomu hücreleri ile birlikte kültürlendiğinde karşılaştırılabilir sonuçlar elde edildi ve bu da farklı türlerden, genotiplerden ve suşlardan hücrelerin incelenmesi için geniş bir uygulama yelpazesini destekledi. Bu teknik, kanser metastazı alanındaki araştırmacıların, uzak bölgelerde tümör kolonizasyonu sırasında mikro çevrenin etkisini keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, doğrudan fizyolojik olarak temas eden bir sistemde hücre beyin metastazı oluşumu sırasında GL kanser hücresi reaksiyonlarının nasıl görselleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.

coculture-system-with-an-organotypic-brain-slice-3d-spheroid

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, bir 3B ortak kültür sisteminin gelişimini göstermektedir. Fare beyni dilimleri bir zar üzerine yerleştirilir ve floresan olarak etiketlenmiş insan beyni tümör hücrelerinin üzerinde büyümesine izin verilir. Sistem hazır olduğunda, görüntüleme için boyanır.

Organotipik Dilim Ko-kültür Modelinde Beyin Tümörü Kurulması

Video, glioblastoma dokusundan organotipik dilim kültürlerinin oluşturulmasını ve sürdürülmesini göstermektedir. İzole edilen doku bir agaroz matrisine gömülür ve bir vibratom kullanılarak ince kesitler elde edilir. Bu bölümler daha sonra bir mikroplaka içindeki geçirgen membran eklerine yerleştirilir ve uzun süreli bakım için bir dilim kültür bakım ortamında kültürlenir.

İnsan Glioblastoma Dokusundan Dilim Kültürlerinin Oluşturulması ve Sürdürülmesi

Bu videoda, tek hücreli süspansiyondan beyin tümörü organoidlerinin hazırlanması ve yetiştirilmesi anlatılmaktadır. Besinler için bir iskele ve kültür ortamı olarak laminin açısından zengin bir hücre dışı matris kullanılarak, hücrelerin organoid içinde çoğalması ve kendi kendini organize etmesi kolaylaştırılır. Sonuç olarak, hücresel çeşitliliği ve beyin tümörlerinin mikro çevresini taklit eden ex vivo organoidler üretilir.

Beyin Tümörü Hücre Süspansiyonundan Organoid Kültür Oluşturma

Çevredeki normal dokuların invazyonu, malign tümörlerin tanımlayıcı bir özelliğidir. Burada, bir dizi ileri insan kanseri modeliyle örneklenmiş doğal bir 3D biyomatrise basit, yarı otomatik bir mikro plaka istila testi sunuyoruz.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

İnsan beyni tümörlerinin birçok türü, beynin belirli bölgelerine lokalizedir ve kültürde büyümesi zordur. Bu protokol, tümör mikroçevresinin rolünü ele alır ve organotipik bir fare beyin diliminde büyüyen floresan primer beyin tümörü hücrelerini analiz ederek yeni ilaç tedavilerini araştırır.

İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi

Günümüzde glioblastoma (GBM) 'nin ex vivo modelleri, insan tümörü invazyonunun fizyolojik olarak ilgili çalışması için optimize edilmemiştir. Burada, taze insan GBM dokusundan alınan organotipik dilim kültürlerinin üretimi ve bakımı için bir protokol sunuyoruz. Zaman atlamalı mikroskopi ve kantitatif hücre göç analiz tekniklerinin bir açıklaması sağlanmıştır.

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli

Organotypic Hipokampal dilim kültürler (OHSC) vivo durumu çok iyi taklit bir vitro modeli temsil. Burada biz vibratome tabanlı açıklar yüksek kaliteli dilimleri tümör hücreleri biyolojik davranışını veya yeni maddeler nöroprotektif potansiyelini değerlendirmek amacıyla elde etmek için iletişim kuralı Dilimleme geliştirilmiş.

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

Burada glioblastoma için kullanımı kolay bir istila çıktısını tanımlıyoruz. Bu töz glioblastoma kök benzeri hücreler için uygundur. İstilanın, göçün ve çoğalmanın kolay ölçülmesi için bir Fiji makrosu da tanımlanmıştır.

Glioblastoma için 3D Spheroid Model

İlgili insan hastalığını sadakatle nükseden kapsamlı in vitro modeller eksiktir. Mevcut çalışma, insan hepatosellüler karsinomunda tümör-stromal etkileşimi incelemek için güvenilir bir in vitro araç olan üç boyutlu (3D) tümör sferoid oluşturma ve kültürü ssunuyor.

Hepatosellüler Karsinomdaki Tümör-Stromal Etkileşimi Araştırmak İçin Üç Boyutlu Sferoid Modeli

Civciv embriyoları, insan glioblastoma (GBM) beyin tümörlerini ovo ve in vivo beyin dilimi ko-kültürlerinde incelemek için kullanılır. GBM hücre davranışı, ex vivo ko-kültürlerde hızlandırılmış mikroskopi ile kaydedilebilir ve her iki preparat da deneysel son noktada ayrıntılı 3D konfokal analiz ile analiz edilebilir.

Civciv Embriyo Beynini, İnsan Glioblastoma Hücre Davranışının In Vivo ve Ex Vivo Analizleri için Bir Model Olarak Kullanma

Kanser metastazını incelemek için heteroselüler karışmayı yakalayan 3D kanser modellerine kritik bir ihtiyaç vardır. Çalışmamız, invazyon ve hücresel mekansal dağılımları incelemek için kullanılabilecek iskele ve iskelesiz bir ortamda heteromultisellüler stromal-epitel oluşumunu sunmaktadır.

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Öğrenin, organotipik beyin dilimleri ve karsinoma hücreleriyle kookültür kullanarak serebral metastaz sırasında glial etkileşimleri görselleştirme yöntemini. Bu teknik, tümör invazyonunu ve hücresel etkileşimleri gerçek zamanlı gözlemlemek için değerli bir platform sunar.

Bir Organotipik Beyin Dilim ve kanser hücrelerinin 3D Sferoid ile Coculture Sistemi

Daha fazla video keşfet