Name: DNBS / TNBS kolit Modelleri: Koliti içine Trendleri ve Diyet Yağ Etkileri sağlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Öğrenin DNBS ile fare ve sıçanlarda kolit indüksiyonu yöntemini. Bu protokol, inflamatuar bağırsak hastalığı araştırmalarında bağırsak yanıtlarını ve diyet yağlarının etkilerini incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Fen Bilimleri ve Kanada&#39;nın Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) ve Crohn ve Kanada Kolit Vakfı (CCFC) den KJ için faaliyet hibe tarafından desteklenmiştir. VM SÜMAE Bursu ve GB Sağlık Araştırmaları Kanada Enstitüleri (CIHR) mezunu öğrencilik tarafından desteklenmektedir. BAV Bağırsak ve Karaciğer Hastalıkları Pediatrik Gastroenteroloji ve KJ Pediatrik İBH Araştırma ve Kanada Araştırma Başkanı Vakfı (ÇOCUK) Başkanı ÇOCUK ve Çocuk ve Aile Araştırma Enstitüsü (SÜMAE) Klinisyen Bilim Ödülü Programı tarafından desteklenen bir Kıdemli Klinisyen Bilimci olan bir çocuk olduğunu , British Columbia Üniversitesi.

Hayvan denekleri prosedürleri British Columbia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından açıklanan hayvan bakım yönergeleri izleyin. Temsilci sonuçlar Sprague-Dawley sıçanlarından sunulacak ise bu protokolde belirtilen prosedürler, sıçanlar ve fareler hem de tarif edilecektir. 1.. DNBS ve intrarektal İdaresi hazırlanması <ol><li> Sıçanlarda DNBS rektal damlatılması için, taze% 50 etanol DNBS/250 ul 15-30 mg hazırlar. Fareler için,% 50 etanol DNBS/100 ul 2-6 mg hazırlar. Not: Her bir tesiste uygulanacak kesin DNBS konsantrasyonunu optimize. Erkek Sprague-Dawley sıçanları ve C57BL / 6 fareleri, ancak diğer fare ve sıçan suşları kullanılabilir DNBS kolit indüksiyonu için tercih edilir. Kontrol grupları, ancak bir Omi olabilir etanolün etkilerini verilen hafif ya da mevcut olmadığı gibi sadece% 50 etanol ile muamele edilmiş fareler ve sıçanlar kullanılabilirbir çalışma 12 için bu grubun dahil t. </li><li> Sonuna bağlanmış (farenin - - sıçan ya da PE-50 PE-90), bir polietilen kateter sahip olan bir 19 G iğne ile bir 1 ml şırınga takın. </li><li> Hafif bir ısıtma yastığı sıçan veya fare istirahat uyutmak (burun konisi üzerinden% 1.5 izofluran verilerek, örneğin hayvanlar yine göz kırpma ve yutma refleksleri var ve düzenli solunum göstermelidir). Kurumasını önlemek için gözlerini onun gözlerine gözyaşı jeli uygulayın. </li><li> Yavaşça uzak kolonda mevcut olabilecek herhangi bir dışkı çıkarmak için hayvanın arka ucuna parmak uçları ile basınç uygulanır. </li><li> Yavaşça fareler için sıçan, veya 3-4 cm için anüs için yaklaşık 8 cm proksimal ulaşan kateter ile, intrarektal kateter yerleştirin. Kolay sokulmasına izin veren, yağlamak için kateteri sokulurken çözeltinin küçük bir miktar enjekte edilir. Not: kateterin yerleştirilmesi sırasında herhangi bir direnç hissedilir ise, bu delinmesi yol açabilir olarak eklemek devam etmeyinbağırsak duvarı. Kateteri çıkarın ve tekrar işlem olarak kolon yağlama, yavaşça yeniden takın girişimi. </li><li> Yavaş yavaş 250 (sıçan) ya da 100 (fare) DNBS ul ya da kontroller için eşit hacimde% 50 etanol ya da enjekte edilir. DNBS enjekte ettikten sonra, DNBS kaybını önlemek için 90 saniye boyunca hayvan baş aşağı yerleştirin. </li><li> DNBS verilmesinden sonra, ilk hafta boyunca su kaybını önlemek için% 0.2 tuzlu su içinde% 8 sükroz hayvanların suya doyurmaya. </li><li> Dikkatle kilo kaybı ve deney süresince dehidratasyon veya rahatsızlığı işaretleri için günlük izleme ile, hayvanlar dikkat edin. Not: Kilo kaybı hızla maksimum izin verilen ağırlık kaybı CCAC öneriler yaklaşım olabilir. Bu çoğunlukla dehidratasyon türetilmiş için, kilo kaybı dehidratasyon sınırlamak laktatlanmış Ringer çözeltisi uygulanması için bir gösterge olarak kullanılır. Uygun olarak sağlık sorunları üzerinde tesis veteriner danışın emin olun. </li></ol> 2. CoDokular llecting ve DNBS Engelliler Fareler histolojik hasarı değerlendirilmesi <ol><li> DNBS ile denemeden sonra arzu edilen bir zaman noktasında, yeterli oksijen ile takviye edilmiş bir anestezi bölmesi içerisinde izofluran ile doz aşımı ile hayvanlar ötenazi. Hiçbir yükselen veya göğüs düşen görüldüğü kadar hayvan gözlemlemek ve palpe kalp atışı var. Onay hayvan doğru servikal dislokasyon ayak tutam veya korneanın dokunma için bir yanıt, yokluğu ile kurban edilmiştir. </li><li> Karın boşluğu açın ve tüm kalın bağırsak kaldırın. Uzunlamasına bağırsak açın, makroskopik mukozal ülser farelerde kolon (farelerde 2-3 cm) en uzak ucundan itibaren yaklaşık olarak 5-6 cm proksimal dikkat edilmelidir. Not: İsterseniz kalın bağırsak çıkardıktan sonra, makroskopik hasar puanları değerlendirmek. Kontrol hayvanların anatomik konuma karşılık gelen kolon segmentleri toplayın. Not: makroskopik hasar puanları için doku puanlama bireyler olmalıdırTedavi gruplarının kimliğine kör. Şiddeti ve ülserasyon ölçüde (0-10), ya da yokluğunda ishal varlığında (0 ya da 1), adezyonlar (0, 1, ya da 2) ve maksimal kolonik duvar kalınlığı için puan ile özetlenebilir: Aşağıdaki veya benzer kriterler kullanılarak doku bölümleri Skor 11 milimetre. </li><li> 0.5 cm bölümler maksimal makroskopik hasar sitesine proksimaline toplayın. Daha sonra ek bileşen miyeloperoksidaz (MPO) aktivitesi (nötrofil infiltrasyonu bir ölçüsü) değerlendirmek ve histolojik analiz için% 10 nötr tamponlu formalin içinde diğer bölümü yerleştirmek için sıvı azot içinde bir 0.5 cm bölüm dondurma. Not: miyeloperoksidaz deney kadar 1 ay boyunca -80 ° C &#39;de muhafaza edilebilir için donmuş dokular çekin. </li><li> Adım 2.3 histolojik analiz için toplanan dokular gecede formalin düzeltmek ve daha sonra% 70 etanol ile yıkayın izin verin. Parafin dokuları embed ve istenilen kalınlıkta (3-5 mikron), histolojik puanlama için hemotoksilinle ve eozin (HE) ile leke kesilir. </li&gt; <li> Iki gözlemci, her bir grup için histolojik hasarı puanları belirlemek için, bir ışık mikroskobu altında, her bir hayvandan en az üç doku bölümleri puan yazıldı. Not: histolojik hasar skorları için doku puanlama bireylerin tedavi gruplarının kimliğine kör olmalıdır. Enflamatuar hücre infiltratın ölçüde (0 = yok, 3 = Transmural), mukozal mimari kaybı (0 = yok, 3 = şiddetli), varlığı ya da crypt apseler yokluğu (0-1): Aşağıdaki veya benzer kriterler kullanılarak doku bölümleri Puan ve goblet hücre tükenmesi (0-3). Bu puan 11 toplamı olarak histolojik hasar puanı belirler. </li></ol> 3. DNBS üzerine Miyeloperoksidaz (MPO) Tahlili Sahne Engelliler Bağırsak Dokusu <ol><li> Adım 2.3 &#39;de elde edilen 0.5 cm kolon segmentlerinde Deneyi MPO aktivitesi. MPO homojen hale getirme tamponunda dokular 50 mg kolon segme vermek üzere (50 mM potasyum fosfat tamponu içinde% 0.5 heksadesiltrimetil-amonyum bromür (pH 6.0)) homojenizehomojenizasyon tamponu süspansiyonu nt / ml. </li><li> 10,000 x g, 2 dakika boyunca 4 ° C &#39;de 1 ml kısımlar ve santrifüj içine homojenize çözeltisi kısım. </li><li> O-dianisidinedihydrochloride 0.167 mg / ml ve bir küvet içinde,% 0.0005, hidrojen peroksit içeren 2.9 ml 50 mM fosfat tampon maddesi (pH 6.0) ile her bir kısım 100 ul karıştırın. </li><li> 460 nm&#39;de bir spektrofotometre kullanılarak emme oranını ölçmek. Not: MPO aktivitesi, oda sıcaklığında, 2 H, H 2 O O 2 1 umol / dak bozundurucu enzim miktarı olarak tanımlanır ve doku mg başına birim olarak ifade edilir. </li></ol>

<ol><li>Perše, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPer%C5%A1e%2C+M+%22Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model%3A+traps+and+tricks%22">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks</a>. Biotechnol, J. . B. iomed , (2012).</li>
<li>Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Deng, Y., Verdu, E., Khan, W., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactivation+of+inflammatory+bowel+disease+in+a+mouse+model+of+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Reactivation of inflammatory bowel disease in a mouse model of depression.</a> Gastroenterology. 136 (7), 2280-2288 (2009).</li>
<li>Reber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+and+animal+models+of+inflammatory+bowel+disease-an+update+on+the+role+of+the+hypothalamo-pituitary-adrenal+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Psychoneuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Stress and animal models of inflammatory bowel disease-an update on the role of the hypothalamo-pituitary-adrenal axis.</a> Psychoneuroendocrinology. 37 (1), 1-19 (2012).</li>
<li>Qiu, B., Vallance, B., Blennerhassett, P., Collins, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+CD4%2B+lymphocytes+in+the+susceptibility+of+mice+to+stress-induced+reactivation+of+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">The role of CD4+ lymphocytes in the susceptibility of mice to stress-induced reactivation of experimental colitis.</a> Nat. Med. 5 (10), 1178-1182 (1999).</li>
<li>Boyer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myenteric+plexus+injury+and+apoptosis+in+experimental+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Auto.+Neurosci.+Basic+Clin%22%5BJournal%5D)">Myenteric plexus injury and apoptosis in experimental colitis.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 117 (1), 41-53 (2005).</li>
<li>Saunders, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noradrenergic+and+cholinergic+neural+pathways+mediate+stress-induced+reactivation+of+colitis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Auto.+Neurosci.+Basic+Clin%22%5BJournal%5D)">Noradrenergic and cholinergic neural pathways mediate stress-induced reactivation of colitis in the rat.</a> Auto. Neurosci. Basic Clin. 124 (1-2), 56-68 (2006).</li>
<li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain+inhibitor+I+reduces+colon+injury+caused+by+dinitrobenzene+sulphonic+acid+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Calpain inhibitor I reduces colon injury caused by dinitrobenzene sulphonic acid in the rat.</a> Gut. 48 (4), 478-488 (2001).</li>
<li>Cuzzocrea, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+reduces+dinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pineal+Res%22%5BJournal%5D)">Melatonin reduces dinitrobenzene sulfonic acid-induced colitis.</a> J. Pineal Res. 30 (1), 1-12 (2001).</li>
<li>Innis, S., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+lipids+in+early+development+and+intestinal+inflammatory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr.+Rev%22%5BJournal%5D)">Dietary lipids in early development and intestinal inflammatory disease.</a> Nutr. Rev. 65, S188-S193 (2007).</li>
<li>Innis, S. M., de La Presa Owens, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fatty+acid+composition+in+pregnancy+alters+neurite+membrane+fatty+acids+and+dopamine+in+newborn+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Dietary fatty acid composition in pregnancy alters neurite membrane fatty acids and dopamine in newborn rat brain.</a> J. Nutr. 131 (1), 118-122 (2001).</li>
<li>Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mundra+H.%2CInnis+S.M.+Intestinal+responsiveness+to+experimental+colitis+in+young+rats+is+altered+by+maternal+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mundra H.,Innis S.M. Intestinal responsiveness to experimental colitis in young rats is altered by maternal diet.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 289, 13-20 (2005).</li>
<li>Sanovic, S., Lamb, D. P., Blennerhassett, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Damage+to+the+enteric+nervous+system+in+experimentalcolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Damage to the enteric nervous system in experimentalcolitis.</a> Am. J. Pathol. 155 (4), 1051-107 (1999).</li>
<li>Vilaseca, J., Salas, A., Guarner, F., Rodriguez, R., Martinez, M., Malagelada, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fish+oil+reduces+progression+of+chronic+inflammatory+lesions+in+a+rat+model+of+granulomatous+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.</a> Gut. 31, 539-544 (1990).</li>
<li>N-3 fatty acid-rich diet prevents early response of interleukin-6 elevation in trinitrobenzene sulfonic acid-induced enteritis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Int.+J.+Mol.+Med%22">Int. J. Mol. Med</a>. Andoh, A., Tsujikawa, T., Ishizuka, I., Araki, Y., Sasaki, M., Koyama, S., Fujiyama, Y. 12, 721-725 (2003).</li>
<li>Barros, K. V., Xavier, R. A., Abreu, G. G., Martinez, C. A., Ribeiro, M. L., Gambero, A., Carvalho, P. O., Nascimento, C. M., Silveira, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Soybean+and+fish+oil+mixture+increases+IL-10%2C+protects+against+DNA+damage+and+decreases+colonic+inflammation+in+rats+with+dextran+sulfate+sodium+%28DSS%29+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">Soybean and fish oil mixture increases IL-10, protects against DNA damage and decreases colonic inflammation in rats with dextran sulfate sodium (DSS) colitis.</a> Lipids Health Dis. 9, 68 (2010).</li>
<li>Hekmatdoost, A., Wu, X., Morampudi, V., Innis, S. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+oils+modify+the+host+immune+response+and+colonic+tissue+damage+following+Citrobacter+rodentium+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary oils modify the host immune response and colonic tissue damage following Citrobacter rodentium infection in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 304 (10), 917-928 (2013).</li>
<li>Innis, S. M., Dai, C., Wu, X., Buchan, A. M., Jacobson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+lipid+nutrition+alters+early+intestinal+development+and+programs+the+response+to+experimental+colitis+in+young+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Perinatal lipid nutrition alters early intestinal development and programs the response to experimental colitis in young adult rats.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 299 (6), 1376-1385 (1152).</li>
</ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu protokol açıklanan DNBS IBD modeli çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir değerli, ucuz ve tekrarlanabilir kolit modelidir. Sıçan veya intrarektal farelere verildiği zaman, DNBS polimorfonükleer hücrelerin infiltrasyonu transmural ve baskın NF-KB-bağımlı Th1 aktivasyonu dahil, çeşitli histolojik özellikleri açısından insan Crohn hastalığı benzeyen, kolon enflamasyonun ve doku hasarının önemli bir derecede neden olur. Bu model, stres, depresyon, ve diyet, hem de enterik sinir sist...

İnflamatuar barsak hastalığı (IBD), ishal, kilo kaybı, ve karın ağrısı semptomları ile sonuçlanan, gastro-intestinal (GI) sistemi içinde, kronik tekrarlayan bir inflamasyon ile karakterize edilir. Ülseratif kolit (UC) ve Crohn Hastalığı (CD) IBD iki biçimleridir ve GI sistemi içinde inflamasyon konumu ile ayırt edilebilir. UC hastalarda, tipik olarak, rektum iltihabı içerir ve sadece yüzeysel mukozayı etkileyen değişken bir oranda için kolon kadar bitişik olarak uzanır. Bu ağırlıklı olarak ileum ve çekum etkiler, ancak aksine, CD, GI sisteminin herhangi bir kısmını etkileyebilir. Transmural inflamasyon sıklıkla granülomlar ile ilişkili ve (fistülizan) hastalığı striktüre (fibrostenotik) ve / veya delici lider olarak CD sık tezahür eder. IBD etiyolojisi zor olmakla birlikte, iyi İBH bilgisayarlar arasında bağışıklık sistemi, genetik yatkınlık ve yanıtlayanların etkileşimler içeren multifaktöriyel olduğu kabul edilmektedirçevre ve mikrobiyal faktörlerle için ses. Bugüne kadar, IBD farklı model UC ve CD karakteristik çeşitli klinik ve histolojik bağışıklık tepkilerini gösterdikleri önerilmiştir. En yaygın olarak kullanılan model, genetik olarak tadil edilmiş farelerin (IL-2, IL-10, SAMP / Yit), enfeksiyon kaynaklı modelleri (Citrobacter rodentium, Salmonella typhimurium), adoptif transfer modeller (CD45 + RB yüksek, SCID farelere CD62L + hücre transferi) içerir ve kimyasal olarak indüklenen kolit modeli (Dekstran Sülfat Sodyum (DSS), trinitrobenzen sülfonik asit (TNBS) ve dinitrobenzen sülfonik asit (DNBS)). Düşük maliyet ve hastalıkların hızlı başlaması nedeniyle, kimyasal modeller IBD çeşitli yönlerini çalışma için çok değerli olarak kabul edilir. Listelenen kimyasal kolit modellerin her İBH onların, klinik immünolojik ve histopatolojik alaka bazı yönlerden avantajları yanı sıra sınırlamaları vardır. DSS coli ikna etmek için kullanılan en yaygın kimyasal yöntemlerden biridirkemirgenlerde 1 tis. % 3-10 DSS (MW: 42 kDa) uygulanması farelerin içme suyu içinde 7-10 gün boyunca semptom ve kilo kaybı, kan ishal, kolon kısalması, mukozal ülserasyon ve nötrofil infiltrasyon dahil kolit belirtileri neden olabilir. Bu model, ilaç tarama çalışmaları, hem de epitelyal rejenerasyon, mukozal homeostazı ile ilgili bağışıklık sisteminde etki ve bağırsak displazi ve adenokarsinoma gelişimi teşvik inflamasyonun rolünü mekanizmalarını için özellikle yararlıdır. Bazı derecesi ölçüde değişim ile sonuçlanan, farklı hayvan tesislerinde kolit başlatmak için gerekli DSS konsantrasyonu yanı sıra, fareler tarafından tutarsız su emme varyasyon ve DSS böylece tutarsız maruz kalma gibi DSS modeline dezavantajları, ve söz konusudur kolonda mukozal hasar ve ülserasyon dağıtımı. Tüm bu özellikler sonuçların heterojen yol ve çalışmalar fr çapında sonuçlarını karşılaştırmak yeteneğini sınırlayabilirom farklı araştırma grupları. DSS modele alternatif kolit hapten kaynaklı DNBS veya TNBS modelleri. Bu model, mukozal maddeleri DNBS ya da etanol içinde değişen konsantrasyonlarda seyreltildi TNBS, duyarlı rektal instilasyon kullanmaktadır. Etanol idaresi lamina propria içine DNBS veya TNBS&#39;nin nüfuz sağlamak için kolon mukoza engelini kırmak için bir ön koşuldur. DNBS / TNBS ardından böylece doğuştan gelen ev sahibi ve adaptif bağışıklık tepkileri tetikleyen İmmünojenik haline lokalize kolon ve bağırsak mikrobiyal proteinlerin haptenize olacaktır. Genel olarak, bu model şiddetli ve bazen kanlı ishal, kilo kaybı ve bağırsak duvarı kalınlaştırmanın ancak belirtileri kullanılan kemirgen türü, hem de zamanlaması, doz ve DNBS maruz kalma veya kullanılan TNBS derecesine bağlı olarak değişiklik ile ilişkili çalışma. Sıçanlar ve fareler arasında önemli ayrımlar daha düşük satın alma ve yönetim kurulu için maliyet yanı sıra Lowe faydaları ile dikkat edilmelidirin vivo tedavinin başına hayvan maliyetlerin düşürülmesi için r beden kitle. Bu daha kırılgan ve duyarlı hayvanlar hızlı bir şekilde insani bir son nokta ulaşabilir farelerde kolit daha hızlı ve şiddetli tabii ki, karşı koymak gerekir. Bağırsak iltihabı, ilk artan epitel geçirgenliği, mukoza içine nüfuz mikrobiyal konak proteinlerin haptenization, hasarlı mukoza içine nötrofil, makrofaj ve Th1 T lemfositlerinin infiltrasyonu ile sonuçlanan tüm bu yol açan, bağırsak epitelial hücrelerine etanol neden olduğu hasarların sonuçları. DNBS ile karşılaştırıldığında, TNBS örneğin sodyum ve potasyum hidroksit gibi bazlar ile temas üzerine, bir patlama riski teşkil edebilir, son derece oksidatif özellikleri nedeniyle tehlikeli bir kimyasal olarak kabul edilmektedir. Bu nedenle DNBS anda kolit başlatmak için TNBS&#39;nin üzerinde kimyasal bir tercih edilen seçenek olarak kabul edilir. Kemirgenlerde, DNBS kolit Follo çalışma için en uygun yöntemlerden biri olarak kabul edilirkanat İBH hastalığı nitelemeler ilişkili: <ol><li> Depresyon ve kolit reaktivasyonu: Bu İBH hastalarında stres, anksiyete ve depresyon sıklıkla hastalığın nüks ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. DNBS kolit farelerde kolit yeniden aktive edilmesi üzerine, depresyon ve sonuçları rolünü incelemek için uygun bir modeldir. Bu yöntem, genellikle 6-8 hafta içinde fareler bırakarak kolit çözünürlüğü ardından DNBS kolitin ilk uyarılmasını içerir. Daha sonra fareler DNBS 2 bir subcolitic doz ile yükleme yoluyla kolit yeniden aktivasyonu için bunların test edilmesi, ardından depresyon oluşturmak için bu tip rezerpin gibi depresyon neden olan ajanlar ile ya da koku bulbectomy ile tatbik edilmektedir. </li><li> Stres ve kolit reaktivasyonu: Stres İBH patogenezinde bağlantılı olan diğer bir önemli çevresel faktör olduğunu. Kronik stres ve kemirgen Yeryüzündeki semptomların başlangıcı arasında güçlü bir ilişki olduğunu kanıtlar giderek artan bir vücut varinsan ve insan olmayan primatlarda 3 yanı sıra var. DNBS kolit fareler ve sıçanlarda kolit stres ilişkili reaktivasyonunu çalışmak için iyi bir modeldir. Yöntem, genellikle depresyon yerine dışında depresyon için yukarıda belirtildiği gibi benzer bir şekilde kullanılır, hayvanlar ve bu gibi sonik sınırlandırılmış stres 4 gibi stres maruz kalmaktadır. </li><li> Nörojenik iltihap: Bazı çalışmalar hayvan modellerinde ve IBD olan hastalardan alınan doku örneklerinde görüldüğü gibi enterik sinir sistemi (ENS) yapısı ve fonksiyonu, geçici veya kalıcı değişiklikler ya tanımlamışlardır. DNBS ENS 5 üzerinde iltihaplanma etkilerini araştırmak ve noradrenerjik ve kolinerjik sinir yolları 6 hem de çalışmak için iyi bir modeldir. </li><li> Yaralanma tamir mekanizmaları: IBD patogenezi sırasında, bu reaktif oksijen türleri (ROS), nitrik oksit (NO), hücreler arası yapışma molekülü 3 (ICAM-3) ve P-selektin gibi ev sahibi türevli yaralanma aracılar tüm p gösterilmiştirbağırsak epitel bozulması bir rol yatıyordu. DNBS bu aracıların up-regülasyonu yanı sıra seçici uyuşturucu veya inhibitörleri 7,8 ile düzenlenir onarım mekanizmaları nedeniyle yaralanmalara incelemek için mükemmel bir model. </li><li> Transmural enflamasyon: DNBS yukarıda belirtilen uygulamalara ilave olarak, model aynı zamanda bağırsak transmural enflamasyon, CD&#39;li hastalardan bulunan klasik bir özelliği çalışma uygulanabilir. DNBS ve TNBS ile indüklenen kolit, her ikisi de T-hücresi bağımlı bağışıklık mekanizmaları incelemek için, bu model, özellikle faydalı bir hale getirir kolon mukozası içine, lenfositlerin önemli bir infiltrasyonu ile ilişkilidir. </li></ol> DSS modeli ile karşılaştırıldığında, DNBS ile TNBS ile indüklenen kolit avantajlar arasınnda, düşük maliyet, kolit hızlı bir gelişme (ülser çoğunlukla yeniden üretilebilmekte ve iltihap göstermek için 1-3 gün gerektirir) ve distal kolon tutarlı lokalize hasar bulunmaktadır. Ancak sakıncaları bir için bir gereklilikteknik uzmanlık, DNBS / TNBS dozunun optimizasyonu, ve rektal uygulama için anestezi için ihtiyaç daha yüksek düzeyde. Bu metodolojik yazıda (SO) bitkisel yağlar, papağanyemi yağı kullanılarak sıçanlarda DNBS indüklediği kolit için kolon mukoza yanıtı değiştiren on n-6 ve n-3 çoklu doymamış yağ asitlerinin değişik konsantrasyonlarda etkilerini inceledi ve kanola yağı, (CO) ve balık yağı (FO). Bu, n-6 ve n-3 yağ asitleri, hücre zarı phosopholipids 9 asil parçalar olarak oynadıkları rol bağırsak iltihaplı hastalıkların önemli aracılar olduğu gösterilmiştir. N-6 yağ asitleri proenflamatuar potansiyel aksine, yeterince yüksek alımı, n-3 yağ asitleri, potansiyel olarak güçlü anti-enflamatuar maddelerdir. N-3 yağ asitlerinin anti-inflamatuar etkileri proinfl değiştirilmesi yoluyla dolaylı olarak arakidonik asit metabolizma ve önleme, bir alt-tabaka olarak eicosanoid arakidonik asit yerine doğrudan aracılık ederammatory gen ekspresyon ve hücre sinyal. N-3 yağ asitleri, aynı zamanda, resolvins anti-iltihap aracılarının bir aile neden olmaktadır. N-3 yağ asitlerinin yüksek alımı proenflamatuar eikosanoidler, sitokinler, kemokinler, reaktif oksijen türleri ve yapışma moleküllerinin ifade üretiminde bir azalma ile ilişkilidir. Bu çalışmada fareler ile, yağ asitleri dışındaki tüm besinler aynı ad libitum diyetler beslenmiştir yağ,% 20 SO, 20% CO veya% 18 balık yağı artı% 2 aspur yağı (FO) 10-11 bir yüzde enerji olarak . Günlük enerjisinin bir yüzdesi olarak, SO diyet &lt;% 0,06 α-linolenik asit (ALA) ve hiçbir eikosapentaenoik asit (EPA) ve dokosaheksaenoik asit (DHA) olan,% 15 linoleik asit (LA) sağlanan, CO diyet 4.2 oldu % LA ve ALA% 1.9 no EPA veya DHA ile ve FO diyet% 1.4 EPA, DHA% 4.9,% 0.32 LA, ALA ve% 0.12 verdi. Üç hafta lipid diyetler başlandıktan sonra, fareler, intrarektal DNBS ya da% 50 etanol verilir ve 5 gün sonra kurban edilmiştir. Inflammatory tepki kilo kaybı, histolojik hasar skorları ve doku myeloperoksidaz aktivitesinin değerlendirilmesi ile değerlendirildi.

<table><tbody><tr><td>1 ml Şırınga</td><td>BD Biosciences</td><td>309659</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>19 G İğne</td><td>BD Biosciences</td><td>305187</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Farelerde intrarektal uygulama için</td> <td>polietilen boru PE-50</td><td>BD Biosciences</td><td>427517</td></tr><tr><td>Sıçanlarda intrarektal uygulama için</td><td>polietilen boru PE-90</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr><tr><td>427519 DNBS</td><td>MP Bio</td><td>150959</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Novartis Gözyaşı Jeli</td><td></td><td>63601662596</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>% 10 Formalin</td><td>Fisher</td><td>5F93-4</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Isıtma pedi</td><td>Kent Scientific</td><td>TPZ-0510</td> <td>&</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Fisher</td><td>A-962.4</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Hekzadesiltrimetil-amonyum bromür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H5882</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Potasyum fosfat tampon çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>79628-</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>o-Dianisidin dihidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D3252</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>%30 H2O2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>31642</td><td>hidrojen peroksit</td></tr><tr><td>Spektrofotometre</td><td>BioRad</td><td>Benchmarker Plus</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Işık Mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Axio Image.Z1</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Veri analizi yazılım programı&nbsp;</td><td>GraphPad Yazılımı</td><td>GraphPad Prism Yazılımı Sürüm 4.00</td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr></tbody></table>

dnbs / tnbs kolit modelleri: koliti içine trendleri ve diyet yağ etkileri sağlanması

DNBS/TNBS Colitis Models: Providing Insights Into Inflammatory Bowel Disease and Effects of Dietary Fat

Crohn hastalığı ve ülseratif kolit de dahil olmak üzere inflamatuvar bağırsak hastalığı (IBD), ve uzun bir genetik olarak bağlantılı olmuştur ve daha yakın zamanda mikrobiyal ajanlara ve çevresel bağışıklık tepkileri barındırması. Dinitrobenzen sülfonik asit (DNBS) kaynaklı kolit böyle bir stres ve beslenme, potansiyel tedavilerin etkileri ve mekanizmaları yatan bağırsak iltihabı ve mukozal hasarı gibi IBD ilişkili çevresel tetikleyiciler patogenezi çalışma sağlar. Bu yazıda, sıçanlarda DNBS kaynaklı kolit kolon mukozal inflamatuar yanıt üzerine diyet, n-3 ve n-6 yağ asitlerinin etkileri araştırıldı. Bütün sıçanlar [aspur yağı (SO), kanola yağı (CO), ya da balık yağı (FO)] üç hafta önce, maruz kalma DNBS intrarektal için yağ asitlerinin farklı hariç aynı diyetler beslenmiştir. Intrarektal etanol verilen Kontrol sıçanları DNBS-muamele edilmiş fareler ise beslenen lipid diyetler tüm los, 5 günlük çalışma boyunca kilo almaya devam ettiFO ve CO beslenen fareler, 48 saat ve 72 saat SO beslenen fareler tarafından önemli kilo kaybı gösteren ile t ağırlık. Kilo alımı 72 saat sonrası DNBS sonra tekrar başladı ve 5 gün sonrası DNBS tarafından, FO grup SO veya CO grupları daha yüksek vücut ağırlığı vardı. Kolon kesitleri 5 gün sonrası DNBS tedavi fokal ülserasyon, crypt yıkım, goblet hücre tükenmesi ve diyet gruplar arasında şiddeti farklıydı hem akut ve kronik inflamatuar hücrelerin mukozal infiltrasyon toplandı. SO beslenen grup CO ardından en ağır hasarı gösterdi, ve FO doku hasarının hafif derecesini gösterdi grupları beslenir. Benzer şekilde, myeloperoksidaz (MPO) aktivitesi, nötrofil aktivite belirteci FO beslenen fareler anlamlı düşük MPO aktivitesi olan, SO CO beslenen farelerde, ardından anlamlı olarak yüksek bulundu. IBD patogenezinde diyetin etkisini belirlemek için, bu protokolde tarif edildiği gibi bu sonuçlar DNBS kaynaklı kolit kullanımını göstermektedir.

DNBS ile sıçan (Sprague-Dawley) veya farelerde (C57BL / 6) Challenge tipik bazen dışkıda kan varken, geçici kilo kaybı ve ishal sonuçları. Ancak, bu tür genetik, beslenme ve intestinal mikrobiyota gibi faktörler DNBS indüklenen duyarlılık değiştirebilir. Bu nedenle, hayvan deneylerinde dahil lokal olarak türetilmiş ya da bir hayvan tedarikçiden sipariş ya da, aynı kurumdan olmalıdır. Tüm hayvanlar dikkatle kilo kaybı ve kolit sırasında uğradığı sıkıntı belirtilerinin derecesi için izlenmelidir. <p class="jove_conten...

DNBS / TNBS indüksiyonlu kolit bir alternatif ve iltihabik barsak hastalığı patobiyolojisini incelemek için pahalı olmayan yöntemi sunmaktadır. Bu yazıda tartışılan protokolü farelerde ve sıçanlarda kolit başlatmak için DNBS başarılı uygulama özetliyor ve bir iyice konak-aracılı bağırsak yanıtları çalışma sağlar.

DNBS / TNBS kolit Modelleri: Koliti içine Trendleri ve Diyet Yağ Etkileri sağlanması

Inflammatory Bowel Diseases (IBD), including Crohn&#39;s Disease and Ulcerative Colitis, have long been associated with a genetic basis, and more recently ...

Bu prosedürün genel amacı, DNBS (dinitrobenzen sülfonik asit) kullanarak inflamatuar bağırsak hastalığını veya IBD'yi incelemek için alternatif ve düşük maliyetli bir yöntem sunmaktır. Bu işlem, öncelikle DNBS'nin anüse nazikçe yerleştirilerek intrarektal olarak uygulanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, histolojik tarama yapmak ve DNBS ile uyarılmış dokuların miyeloperoksidaz aktivitesini değerlendirmek amacıyla kalın bağırsaktan doku kesitleri alınır; nihayetinde, diyet yağlarının kilo kaybı ve kolit üzerindeki etkileri hem makroskobik hem de mikroskobik yöntemlerle değerlendirilebilir.Bu yöntemin mevcut dekstran sodyum sülfat yöntemine göre temel avantajı, DNBS yönteminin uygulanmasının kolay, daha az maliyetli ve yüksek düzeyde tekrarlanabilir olmasıdır. Bu yöntem, IBD araştırma alanındaki; stres ve depresyonun IBD nüksündeki rolleri nelerdir veya bağırsak hasarı ve onarımındaki temel mekanizmalar nelerdir gibi kritik soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Farelerde DNBS'nin rektal uygulaması için, önce bir mililitrelik bir şırıngayı 19 gauge iğneye takarak başlayın. Polietilen 50 kateter ile donatılmış sisteme, taze hazırlanmış DNBS'yi aspire ederek katetere çekin.Ar

dnbstnbs-colitis-models-providing-insights-into-inflammatory-bowel

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Içme suyu uygulanan dekstran sülfat sodyum (DSS), akut kolit kurulmuş bir fare inflamatuar yaralanma modeli. Bu protokol, DSS tedavi ve dokuların hazırlanması için yöntemi özetlemektedir.

Dekstran Sülfat Sodyum (DSS) kullanarak murin Kolit Modelleme

Deneysel modeller inflamatuvar barsak hastalığı patogenezi ile ilişkili karmaşık doğal ve adaptif immün yanıtları incelemek için izin verdiler. Histolojik skorlama, pro-inflamatuar sitokinler ve miyeloperoksidaz aktivitesi ölçümü kullanarak, inflamatuvar barsak hastalığı görülen bu yanıtlar değerlendirmeye başlayabilirsiniz.

İBH DSS-kaynaklı Modeli Bağırsak Enflamasyon incelenmesi

Farelerde kolon patolojilerinin tedavisi için terapötiklerin etkinliğinin rijit bir endoskop kullanılarak uzunlamasına izlenmesi için yöntemleri açıklıyoruz. Bu protokol, canlı farelerde tek bir tümörün terapötik yanıtının karakterizasyonu ve ayrıca potansiyel hastalık nüksünü izlemek için kolayca kullanılabilir.

Canlı Fareler Seri endoskopik Görüntüleme kullanma Bağırsak Patolojilerde Yeni Therapeutics Etkinliğinin Non-invaziv Değerlendirme

enflamatuvar bağırsak hastalığı (IBD) Mevcut tedaviler, hastalığın semptomlarını hafifletmek amaçlamaktadır, ancak ciddi yan etkilere neden olabilir. Böylece, alternatif stratejiler hayvan kolit modellerinde araştırılmaktadır. Burada, klinik IBD işaretleri diyet takviyeleri yararlı etkileri böyle bir kolit modelinde analiz edilmektedir açıklar.

Deneysel Kolit sırasında Bağırsak epitel Bariyer Fonksiyonları Üzerine Ek Beslenme Faydalı Etkileri Analizi

Burada dextran sülfat sodyum (DSS) bağışıklık yanıtı düşmesi tadına bakma ilgili genlerin etkisini araştırmak için bir protokol mevcut-inflamatuar bağırsak hastalığı (IBD) fare modeli indüklenen.

Protein Halifeliğin bağırsak iltihabı bir iltihabi bağırsak hastalığı fare modeli üzerinde sinyal tat etkileri

Bu çalışmada, Crohn fibrozisi ile karşılaştırılabilir patofizyoloji sergileyen TNBS aracılı intestinal fibrozisin ayrıntılı bir prosedürünü açıklıyoruz. Biz de rapamisin bağırsak fibrozis üzerinde inhibitör etkileri kolaylaştırılan ışığında bu yaklaşımı tartışmak.

TNBS Aracılı Intestinal Fibrozis Gelişimi ve Rapamisin Inhibitör Etkilerinin Değerlendirilmesi Üzerine Mekanistik Bakış

Bu protokol, transmural inflamasyon ve fibrozis de dahil olmak üzere Crohn hastalığının önemli patolojik işaretleri benzer Salmonella tahrikli bağırsak fibrozis bir fare modeli açıklar. Bu yöntem, C57Bl/6 genetik arka planda tutulan mutant fareler kullanılarak fibrotik sonuçları değiştiren konak faktörlerinin değerlendirilmesi için kullanılabilir.

Kronik Salmonella EnfeksiyonuNa Bağlı Bağırsak Fibrozisi

Protokol, Crohn hastalığının tam doğrulanmış TNBS kaynaklı murine modelini ve parafine gömülü formalin-sabit kolon bölümlerinin immünororesansını kullanarak immünohistokimya ile östrojen reseptörlerinin görüntülenmesi için kullanılan yöntemleri sunar.

İmmünofluoresans kullanarak TNBS'ye Bağlı Crohn Hastalığı olan Farelerin Kolonlarında Östrojen Reseptörlerinin Görüntülenmesi

Mevcut protokol, kemirgenlerde Crohn benzeri bir kolit modelinin gelişimini açıklamaktadır. Transmural inflamasyon TNBS damlatma bölgesinde darlığa yol açar ve darlığa yakın segmentte mekanik genişleme gözlenir. Bu değişiklikler kolitte mekanik stresin incelenmesine izin verir.

Crohn Hastalığında Mekanik Stresin Patojenik Rolünü İncelemek için TNBS Kaynaklı Bir Kemirgen Modeli

Bu protokol, Crohn hastalığı (CD) benzeri ileal inflamasyon ve fibrozun Src homoloji 2 alanı içeren 5'-inositol fosfataz (SHIP) eksikliği olan fare modelinin, CD için yeni terapötikleri test etmek için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Crohn Hastalığı Benzeri İleit ve Fibrozisin SHIP Eksikliği Olan Fare Modelinde Terapötik Müdahalelerin Değerlendirilmesi

Öğrenin DNBS ile fare ve sıçanlarda kolit indüksiyonu yöntemini. Bu protokol, inflamatuar bağırsak hastalığı araştırmalarında bağırsak yanıtlarını ve diyet yağlarının etkilerini incelemek için kullanılır.

DNBS / TNBS kolit Modelleri: Koliti içine Trendleri ve Diyet Yağ Etkileri sağlanması

Daha fazla video keşfet