DNBS / TNBS kolit Modelleri: Koliti içine Trendleri ve Diyet Yağ Etkileri sağlanması

Bu prosedürün genel amacı, DY, nitro, benzen, zonik asit veya DNBS kullanarak inflamatuar bağırsak hastalığı veya IBD'yi incelemek için alternatif ve ucuz bir yöntem sunmaktır. Bu, ilk olarak anüse nazikçe yerleştirilerek DNBS'nin intra-rektal olarak uygulanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, histolojik tarama için kalın bağırsağın doku kesitleri elde edilir ve DNBS'ye meydan okuyan dokuların miyelo peroksidaz aktivitesini değerlendirmek için, sonuçta diyet yağlarının kilo kaybı ve kolit üzerindeki etkileri hem makroskopik hem de mikroskobik yöntemlerle değerlendirilebilir.

Bu maddenin mevcut dekstron sodyum sülfat yöntemine göre en büyük avantajı, DNBS yönteminin uygulanmasının kolay, daha ucuz ve yüksek oranda tekrarlanabilir olmasıdır. Bu yöntem, IBD araştırma alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir, örneğin IBD'nin nüksetmesinde stres ve depresyonun rolleri nelerdir veya bağırsak yaralanması ve onarımında altta yatan mekanizmalar nelerdir DNBS'nin farelerde rektal montajı için 19 gauge iğneye bir mililitrelik bir şırınga takarak başlayın. Bir polietilen 50 kateter ile donatılmış, daha sonra taze hazırlanmış DNBS'yi katetere aspire edin.

Daha sonra, anestezi uygulanmış bir fareye gözyaşı jeli uygulayın ve distal kolonda bulunan herhangi bir dışkıyı çıkarmak için parmak uçlarıyla hayvanın arka ucuna hafif bir baskı uygulayın. Şimdi, kateteri rektal olarak yaklaşık üç ila dört santimetre hafifçe yerleştirirken, daha kolay yerleştirme için kolonu yağlamak için az miktarda DNBS solüsyonu enjekte edin. Kateter yerleştirildikten sonra, kontrol hayvanları için 100 mikrolitre DNBS veya eşit hacimde %50 etanol enjekte edin.

Ardından, reaktiflerin kaybını önlemek için hayvanın başını 90 saniye aşağı yerleştirin. DNBS uygulamasından sonra, ilk hafta boyunca dehidrasyonu önlemek için hayvanlara% 0.2 tuzlu su içinde% 8 sükroz suyu verin. İstenilen zaman noktasında kastedilen deney süresince hayvanın günlük kilo kaybı, dehidrasyon veya sıkıntı açısından dikkatlice izlenmesi.

DNBS meydan okumasından sonra, ötenazi yapılan hayvanın karın boşluğunu açın ve tüm kalın bağırsağı çıkarın. Sonra bağırsağı uzunlamasına açın. Makroskopik mukozal ülserler, kolonun distal ucundan yaklaşık iki ila üç santimetre proksimalde gözlenmelidir.

Deney hayvanlarında maksimum makroskopik hasar bölgesine yakın 0,5 santimetrelik kesitleri ve kontrol hayvanlarından karşılık gelen anatomik konumlardan kolonun segmentlerini toplayın. Daha sonra, miyelo peroksidaz aktivitesinin değerlendirilmesi için sıvı nitrojen içinde bir kontrol ve 1D NBS ile muamele edilen bölümden 0,5 santimetre dondurun ve diğer bölümleri gece boyunca% 10 nötr tamponlu formin veya histolojik analizde sabitleyin. Ertesi sabah, formalinle sabitlenmiş dokuları% 70 etanol ile yıkayın ve parafine gömülmek ve histolojik skorlama için hematin ve eoin ile boyanmak üzere bir histoloji tesisine göndermek için bir kasete yerleştirin.

Daha sonra, DNBS'ye meydan okuyan dokuların miyelo peroksidaz aktivitesini test etmek için her grup için histolojik hasar skorlarını belirlemek için ışık mikroskobu altında her hayvandan en az üç doku kesiti puanlayın. İlk olarak, mililitre homojenizasyon tamponu süspansiyonu başına 50 miligramlık bir kolon segmenti vermek için myelo peroksidaz homojenizasyon tamponunda çıtçıtlı donmuş kontrol ve deney dokularını homojenize edin. Daha sonra homojenize edilmiş çözeltiyi bir mililitrelik porsiyonlara ayırın ve 10.000 kez g ve dört santigrat derecede iki dakika santrifüjleyin.

Daha sonra, her bir alikottan 100 mikrolitreyi ayrı küvetlere aktarın ve IDE, dihidroklorür ve hidrojen peroksit ile kuvvetlice karıştırılmış 2.9 mililitre PBS ekleyin. Son olarak, 460 nanometrede bir spektrofotometre kullanarak absorbans oranını ölçün. Az önce gösterildiği gibi DNBS ile intra rektal zorluğun ardından.

Balık veya kanola yağı ile takviye edilmiş sıçanlarda 48 saat ve aspir yağı ile takviye edilmiş sıçanlarda 72 saat boyunca önemli kilo kaybı gözlenir. Gözlenen maksimum kilo kaybı, balık yağında, takviye edilmiş sıçanlarda 48 saatte ve sıçanlarda 72 saatte meydana gelir. Kanola veya aspir yağı ile desteklenir.

Kilo alımı 72 saat sonra yeniden başladı ve DNBS uygulamasından beş gün sonra, balık yağı ve aspir yağı ile muamele edilen gruplar, başlangıç değerlerine benzer vücut ağırlıkları sergiledi. Diyet yağları ile takviye edilen ve intra-rektal etanol ile zorlanan kontrol fareleri, beş günlük çalışma süresi boyunca istikrarlı bir şekilde kilo aldı. DNBS'nin neden olduğu bağırsak hasarı yaygın olabilir.

Bununla birlikte, maksimum hasar alanı genellikle sıçanlarda kolonun distal altı santimetresine ve farelerde distal üç santimetreye lokalizedir. Daha yakın histolojik değerlendirmede, ülser oluşumu, nötrofil ve lenfosit infiltrasyonu, mukus tükenmesi ve ödem dahil olmak üzere geniş epitel hasarı gözlenir. Bu histolojik inflamasyon ve doku hasarı belirtileri, DNBS ile meydan okuma üzerine diyet yağı takviyesi yapılan üç grubun hepsinde belirgin olmasına rağmen, en ciddi hasar aspir yağı grubunda görülür ve bunu kanola yağı grubu takip eder.

Balık yağı grubundaki sıçanlar ise minimal epitel hasarı ve enflamatuar hücrelerin mukoza kozaya sınırlı bir infiltrasyonu gösterir. Örnekler arasındaki histolojik hasardaki farklılıklar, gruplar arasında daha iyi bir karşılaştırma sağlamak için ölçülebilir. Grafik, DNBS koliti sırasında üç diyet yağ grubu için histolojik hasar skorlarını göstermektedir.

H ve e lekeli bölümlerde görüldüğü gibi, aspir yağı takviyeli grup en büyük hasarı gösterirken, bunu kanola yağı grubu takip etmektedir. Balık yağı grubu en az hasarı gösterirken, özellikle nötrofillerin enflamatuar hücre infiltrasyonunun derecesi, bir miyelo peroksidaz aktivite testi yapılarak daha fazla incelenebilir. Histolojik hasar skorlarından beklendiği gibi.

DNBS maruziyetinden sonraki beşinci günde sıçan kolonlarındaki miyelo peroksidaz aktivitesinin değerlendirilmesi, aspir yağı grubunda gözlenen en büyük miyelo peroksidaz aktivitesine sahip üç grupta da aktivitede bir artış olduğunu ortaya koymaktadır, bunu kanola yağı grubu ve balık yağı grubu izlemektedir. Bu prosedürü denerken, fareleri hafifçe uyuşturmayı ve geliştirildikten sonra DNBS dozlarını optimize etmeyi unutmamak önemlidir. Bu teknik, inflamatuar bağırsak hastalığı alanındaki araştırmacıların, IBD'nin hayvan modellerinde bağırsak iltihabını kontrol eden mekanizmaları keşfetmelerinin yolunu açtı.

DNBS ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın, bu nedenle solüsyon hazırlanırken her zaman koruyucu giysi, eldiven, gözlük ve yüz bakımı gibi önlemler alınmalıdır.