Name: Hidrolize Çapraz bağlayıcılar yoluyla Adenoviral vektörler gergin kullanma Metalik Stent Yüzeylerden Vasküler Gen Transferi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 30 s
Description: Öğrenin, sıçan ortak karotis arterine gen salınımlı stent yerleştirme ve biyolüminesans görüntüleme ile transgen ekspresyonunu değerlendirme yöntemini. Bu teknik vasküler gen tedavisi araştırmalarında kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların açıklamak için rekabet eden mali çıkarları yoktur.

<ol><li>Boeckle, S., Wagner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+targeted+gene+delivery%3A+chemical+modification+of+viral+vectors+and+synthesis+of+artificial+virus+vector+systems%5BTitle%5D)+AND+%22AAPS+J%22%5BJournal%5D)">Optimizing targeted gene delivery: chemical modification of viral vectors and synthesis of artificial virus vector systems.</a> AAPS J. 8, E731-E742 (2006).</li>
<li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nat Rev Genet. 8, 573-587 (2007).</li>
<li>Campos, S. K., Barry, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+advances+and+future+challenges+in+Adenoviral+vector+biology+and+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Current advances and future challenges in Adenoviral vector biology and targeting.</a> Curr Gene Ther. 7, 189-204 (2007).</li>
<li>Bangari, D. S., Mittal, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+and+future+directions+for+eluding+adenoviral+vector+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Current strategies and future directions for eluding adenoviral vector immunity.</a> Curr Gene Ther. 6, 215-226 (2006).</li>
<li>Barry, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+delivery+of+therapeutic+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic delivery of therapeutic viruses.</a> Curr Opin Mol Ther. 11, 411-420 (2009).</li>
<li>De Laporte, L., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrices+and+scaffolds+for+DNA+delivery+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Matrices and scaffolds for DNA delivery in tissue engineering.</a> Adv Drug Deliv Rev. 59, 292-307 (2007).</li>
<li>Gustafson, J. A., Price, R. A., Greish, K., Cappello, J., Ghandehari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silk-elastin-like+hydrogel+improves+the+safety+of+adenovirus-mediated+gene-directed+enzyme-prodrug+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Silk-elastin-like hydrogel improves the safety of adenovirus-mediated gene-directed enzyme-prodrug therapy.</a> Mol Pharm. 7, 1050-1056 (2010).</li>
<li>Kidd, M. E., Shin, S., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+hydrogels+for+lentiviral+gene+delivery+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Fibrin hydrogels for lentiviral gene delivery in vitro and in vivo.</a> J Control Release. 157, 80-85 (2012).</li>
<li>Lei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+active+DNA%2Fcationic+polymer+polyplexes+into+hydrogel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Incorporation of active DNA/cationic polymer polyplexes into hydrogel scaffolds.</a> Biomaterials. 31, 9106-9116 (2010).</li>
<li>Lei, Y., Rahim, M., Ng, Q., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyaluronic+acid+and+fibrin+hydrogels+with+concentrated+DNA%2FPEI+polyplexes+for+local+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Hyaluronic acid and fibrin hydrogels with concentrated DNA/PEI polyplexes for local gene delivery.</a> J Control Release. 153, 255-261 (2011).</li>
<li>Jang, J. H., Schaffer, D. V., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+biomaterial+systems+to+enhance+viral+vector+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineering biomaterial systems to enhance viral vector gene delivery.</a> Mol Ther. 19, 1407-1415 (2011).</li>
<li>Salvay, D. M., Zelivyanskaya, M., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+by+surface+immobilization+of+plasmid+to+tissue-engineering+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene delivery by surface immobilization of plasmid to tissue-engineering scaffolds.</a> Gene Ther. 17, 1134-1141 (2010).</li>
<li>Moss, A. J., Hamburger, S., Moore, R. M., Jeng, L. L., Vol Howie, L. J. Advance Data. 191, National Center for Health Statistics Vital and Health Statistics. (1991).</li>
<li>Gristina, A. G., Naylor, P., Myrvik, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infections+from+biomaterials+and+implants%3A+a+race+for+the+surface%29%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Prog+Technol%22%5BJournal%5D)">Infections from biomaterials and implants: a race for the surface).</a> Med Prog Technol. 14, 205-224 (1988).</li>
<li>Santerre, J. P., Woodhouse, K., Laroche, G., Labow, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+biodegradation+of+polyurethanes%3A+from+classical+implants+to+tissue+engineering+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Understanding the biodegradation of polyurethanes: from classical implants to tissue engineering materials.</a> Biomaterials. 26, 7457-7470 (2005).</li>
<li>Tang, L., Eaton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+responses+to+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory responses to biomaterials.</a> Am J Clin Pathol. 103, 466-471 (1995).</li>
<li>Zimmerli, W., Sendi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+implant-associated+infection%3A+the+role+of+the+host%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of implant-associated infection: the role of the host.</a> Semin Immunopathol. 33, 295-306 (2011).</li>
<li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bisphosphonate-mediated+gene+vector+delivery+from+the+metal+surfaces+of+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Bisphosphonate-mediated gene vector delivery from the metal surfaces of stents.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 159-164 (2006).</li>
<li>Levy, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+adenovirus+gene+delivery+using+antiviral+IgG+complexation%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Localized adenovirus gene delivery using antiviral IgG complexation.</a> Gene Ther. 8, 659-667 (2001).</li>
<li>Ma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anchoring+of+self-assembled+plasmid+DNA%2Fanti-DNA+antibody%2Fcationic+lipid+micelles+on+bisphosphonate-modified+stent+for+cardiovascular+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Anchoring of self-assembled plasmid DNA/anti-DNA antibody/cationic lipid micelles on bisphosphonate-modified stent for cardiovascular gene delivery.</a> Int J Nanomedicine. 8, 1029-1035 (2013).</li>
<li>Hu, W. W., Lang, M. W., Krebsbach, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+adenovirus+immobilization+strategies+for+in+situ+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gene+Med%22%5BJournal%5D)">Development of adenovirus immobilization strategies for in situ gene therapy.</a> J Gene Med. 10, 1102-1112 (2008).</li>
<li>Jang, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+immobilization+of+hexa-histidine-tagged+adeno-associated+viral+vectors+for+localized+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Surface immobilization of hexa-histidine-tagged adeno-associated viral vectors for localized gene delivery.</a> Gene Ther. 17, 1384-1389 (2010).</li>
<li>Bengali, Z., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+Delivery+by+Immobilization+to+Cell-Adhesive+Substrates%5BTitle%5D)+AND+%22MRS+Bull%22%5BJournal%5D)">Gene Delivery by Immobilization to Cell-Adhesive Substrates.</a> MRS Bull. 30, 659-662 (2005).</li>
<li>Holmes, C. A., Tabrizian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate-mediated+gene+delivery+from+glycol-chitosan%2Fhyaluronic+acid+polyelectrolyte+multilayer+films%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Substrate-mediated gene delivery from glycol-chitosan/hyaluronic acid polyelectrolyte multilayer films.</a> ACS Appl Mater Interfaces. 5, 524-531 (2013).</li>
<li>Pannier, A. K., Wieland, J. A., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+polyethylene+glycol+enhances+substrate-mediated+gene+delivery+by+nonspecifically+immobilized+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Surface polyethylene glycol enhances substrate-mediated gene delivery by nonspecifically immobilized complexes.</a> Acta Biomater. 4, 26-39 (2008).</li>
<li>Wang, C. H., Pun, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate-mediated+nucleic+acid+delivery+from+self-assembled+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Substrate-mediated nucleic acid delivery from self-assembled monolayers.</a> Trends Biotechnol. 29, 119-126 (2011).</li>
<li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+delivery+of+gene+vectors+from+bare-metal+stents+by+use+of+a+biodegradable+synthetic+complex+inhibits+in-stent+restenosis+in+rat+carotid+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Local delivery of gene vectors from bare-metal stents by use of a biodegradable synthetic complex inhibits in-stent restenosis in rat carotid arteries.</a> Circulation. 117, 2096-2103 (2008).</li>
<li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+vector+tethering+to+metal+surfaces+via+hydrolyzable+cross-linkers+for+the+modulation+of+vector+release+and+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Adenoviral vector tethering to metal surfaces via hydrolyzable cross-linkers for the modulation of vector release and transduction.</a> Biomaterials. 34, 6938-6948 (2013).</li>
<li>Mittereder, N., March, K. L., Trapnell, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+concentration+and+bioactivity+of+adenovirus+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the concentration and bioactivity of adenovirus vectors for gene therapy.</a> J. Virol. 70, 7498-7509 (1996).</li>
<li>Forbes, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+NO+and+ROS+production+by+AdiNOS+transduced+vascular+cells+through+supplementation+with+L-Arg+and+BH4%3A+Implications+for+gene+therapy+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Modulation of NO and ROS production by AdiNOS transduced vascular cells through supplementation with L-Arg and BH4: Implications for gene therapy of restenosis.</a> Atherosclerosis. 230, 23-32 (2013).</li>
<li>Niinomi, M., Nakai, M., Hieda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+new+metallic+alloys+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Development of new metallic alloys for biomedical applications.</a> Acta Biomater. 8, 3888-3903 (2012).</li>
<li>Brito, L. A., Chandrasekhar, S., Little, S. R., Amiji, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-viral+eNOS+gene+delivery+and+transfection+with+stents+for+the+treatment+of+restenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Eng+Online%22%5BJournal%5D)">Non-viral eNOS gene delivery and transfection with stents for the treatment of restenosis.</a> Biomed Eng Online. 9, 56(2010).</li>
<li>Egashira, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+delivery+of+anti-monocyte+chemoattractant+protein-1+by+gene-eluting+stents+attenuates+in-stent+stenosis+in+rabbits+and+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Local delivery of anti-monocyte chemoattractant protein-1 by gene-eluting stents attenuates in-stent stenosis in rabbits and monkeys.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27, 2563-2568 (2007).</li>
<li>Ohtani, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stent-based+local+delivery+of+nuclear+factor-kappaB+decoy+attenuates+in-stent+restenosis+in+hypercholesterolemic+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Stent-based local delivery of nuclear factor-kappaB decoy attenuates in-stent restenosis in hypercholesterolemic rabbits.</a> Circulation. 114, 2773-2779 (2006).</li>
</ol>

Bu makalede sunulan protokol geliştirme ve çalışmalar kısmen Amerikan Kalp Derneği Bilim Adamı Geliştirme hibeleri (I.F. 0735110N ve M.C. 10SDG4020003), ABD Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü hibesi HL 72108 (R.J.L.) ve ABD Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü T32 007915 (S.P.F.) tarafından desteklenmiştir. Anjiyoplasti kateterleri NuMED (Hopkinton, NY) tarafından bağışlanmıştır. Yazarlar, Bayan Susan Kerns'in sekreterlik yardımına teşekkür etmek isterler.

<html> Sunulan protokol paslanmaz çelik yüzeyleri coatless için adenoviral vektörlerin geri dönüşümlü eki yoluyla elde tabaka aracılı gen aktarımı için operasyonel bir yöntem açıklanır. Vasküler restenoz stent dayalı gen terapisi için özel olarak geliştirilmiş olup, bu teknik biyomateryaller, biyomedikal implant ve gen terapisi alanlarında çok daha geniş bir uygulama alanı vardır. Sunulan çalışmalar sadece bir prototip, metal alt tabaka olarak paslanmaz çelik yararlanmasına rağmen, PABT gibi ...

Bir tedavi yöntemi olarak gen tedavisinin etkinliği gen terapi vektörleri 1,2 fakir hedefleme kapasitesi ile engellenmektedir. Hedef bölgede transgen ekspresyonunun alt terapötik seviyelerinde uygun hedefleme sonuçları eksikliği ve vektör ve kodlanmış bir terapötik ürün 4, her iki karşı bağışıklık karşılıklarının monte edilmesi için sorumlu olanlar da dahil olmak üzere, hedef olmayan organlar 3 e vektörleri yayılmasına yol açar 5. Bir potansiyel transdüksiyon karışıklık dengelemek ve hedefleme kan ve lenf yolu ile serbest yayılmasını önleyen bir formunda, istenen konuma gen vektörlerin tanıtmaktır teşvik etmek anlamına gelir. Tipik haliyle, bu çabalar fiziksel th tutulmasıyla da enjeksiyon yerinde geçici olarak sürdürülmesi gen vektörlerin sahip olan fibrin, kollajen veya hiyalüronik asit hidrojel matrisler 6-10 ile karıştırılır, viral veya viral olmayan vektörler ya da lokal olarak oluşan enjekte edilebilir bir dağıtım sistemlerine bağlıBir polimerik ağ-em. Gen tedavisi için lokalize bir diğer genel olarak kabul edilen bir paradigma implante prostetik cihazların 11,12 yüzeyinde gen vektörlerin immobilizasyon kullanmaktadır. Kalıcı tıbbi implantlar (endovasküler, bronş, ürolojik ve gastrointestinal stentler, kalp pilleri, yapay eklemler, cerrahi ve jinekolojik kafesleri, vb.) Hastaların 13 on milyonlarca yıllık kullanılmaktadır. Genellikle etkili iken, bu cihazlar yetersiz güncel tıbbi uygulamalar 14-17 tarafından kontrol edilir komplikasyonlara yatkındır. Implante edilebilir protez cihazlar lokalize gen tedavi için proxy platformları olarak hizmet için eşsiz bir fırsat sunuyoruz. Farmakokinetik açısından, thei kinetiklerini implant / doku arayüzde gen vektörlerin yüksek lokal konsantrasyonlarda alınmasında ve yavaşlayan gen vektörler sonuç nispeten düşük giriş dozlarda tıbbi implantlar yüzey türetilmesi kaynaktanBu konumdan r eliminasyon. Hedef alınan hücre popülasyonu ile uzun süreli bir ikamet sonucu ve daha iyi alınmasıyla olarak, vektör immobilizasyon gen vektörü yayılmasını minimize eder. Böylece, hedef dışı dokuların istenmeyen aşılama azalır. (Aynı zamanda alt-tabaka-aracılı gen aktarımı ya da katı faz gen aktarımı olarak adlandırılır) implante biyomalzeme gen vektörlerin yüzey birleştirme kullanılarak hücre kültürü ve hayvan deneylerinde uygulanmıştır hem spesifik (antikor-antijen 18-20, avidin-biyotin 21,22) ve 23-26 (şarj, van der Waals) etkileşimler spesifik olmayan. Yüzey ile aşırı güçlü bağlar, hedef hücreler tarafından vektör içselleştirme engel yana implante edilmiş cihazın yüzeyine vektörlerin kovalent bağlanması, daha önce fonksiyonel olmayan olarak kabul edilmiştir. Yakın zamanda, bu sınırlama tet olarak kullanılan hidrolize edilebilir kendiliğinden çapraz bağlayıcı kullanımı ile aşılabilir olduğu gösterilmiştiradenoviral vektör 27,28 arasında stent ve kapsid proteinlerinin değiştirilmiş metal yüzey arasında onun. Ayrıca, taşıyıcıda salım hızı ve in vitro ve in vivo olarak transgen ekspresyonunun zaman seyri hidrolizi 28 farklı kinetik sergileyen hidroliz olabilen bir çapraz-bağlayıcıların kullanımı ile modüle edilebilir. Bu makale aktif metal yüzeye adenoviral vektörlerin tersine çevrilebilir kovalent bağlanması için ayrıntılı bir protokol sağlamakta ve anjiyoplasti, stent sıçan şahdamarı modelinde kültürlenmiş düz kas ve endotelyal hücrelerin in vivo ve in vitro olarak takip eden transdüksiyon olayları incelemek için uygun bir deney düzeneği getirmektedir .

<table><tbody><tr><td>316 paslanmaz çelik hasır diskler</td><td>Electon Mikroskopi Bilimleri</td><td>E200-SS</td><td></td></tr><tr><td>Jenerik 304 dereceli paslanmaz çelik stentler</td><td>Laserage</td><td>özel sipariş</td><td></td></tr><tr><td>AdeGFP</td><td>University of Pennsylvania Vektör Çekirdeği</td><td>AD-5-PV0504</td><td></td></tr><tr><td>AdLuc</td><td>Pennsylvania Üniversitesi Vektör Çekirdeği</td><td>AD-5-PV1028</td><td></td></tr><tr><td>AdEMPTY</td><td>Pennsylvania Üniversitesi Vektör Çekirdeği</td><td>A858</td><td></td></tr><tr><td>Cy3(NHS)2</td><td>GE Sağlık</td><td>PA23000</td><td></td></tr><tr><td>Sefaroz 6B</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6B100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>UV 96 kuyulu plakalar</td><td>Costar</td><td>3635</td><td></td></tr><tr><td>Florometri 96 kuyulu plakalar</td><td>Costar</td><td>3915</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü 96 oyuklu plakalar</td><td>Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>Tris(2-karboksietil)fosfin hidroklorür (TCEP)</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>20490</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>20290</td><td></td></tr><tr><td>sulfo-LC-SPDP</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>21650</td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometre</td><td>Moleküler Cihazlar&nbsp;</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>Spektroflorometre</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>SpectraMax Gemini EM</td><td></td></tr><tr><td>Orbital çalkalayıcı inkübatör</td><td>VWR</td><td>1575R</td><td></td></tr><tr><td>Yatay hava akışlı fırın</td><td>Shel Lab</td><td>1350 FM</td><td></td></tr><tr><td>Centra-CL2 santrifüj ve nbsp;</td><td>Uluslararası Ekipman Şirketi</td><td>426</td><td></td></tr><tr><td>Dijital girdap karıştırıcı</td><td>Fisher Thermo Scientific</td><td>02-215-370</td><td></td></tr><tr><td>Eclipse TE300 floresan mikroskobu</td><td>Nikon&nbsp;</td><td>TE300</td><td></td></tr><tr><td>DC 500 CCD kamera</td><td>Leica</td><td>DC-500</td><td></td></tr><tr><td>7500 Gerçek Zamanlı PCR sistemi</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>IVIS Spectrum biyolüminesans istasyonu</td><td>Perkins-Elmer</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>EDTA dipotasyum tuzu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ED2P</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümin fraksiyonu V (BSA)</td><td>Fisher Thermo Scientific</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>Ara-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Dumont forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>A10 hücre hattı&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1476</td><td></td></tr><tr><td>Sığır aort endotel hücreleri</td><td>Lonza</td><td>BW-6002</td><td></td></tr><tr><td>Luciferin, potasyum tuzu</td><td>Altın Biyoteknoloji</td><td>LUCK-1Ge</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2443-250G</td><td></td></tr><tr><td>PBS kalsiyum ve magnezyum içermez</td><td>Gibco</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>Gemini Biyo-Ürünler</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin çözeltisi</td><td>Gibco</td><td>11540-122</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, yüksek glikoz</td><td>Corning cellgro</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr>% <tr><td>0.25 Tripsin / EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA mikro kiti</td><td>Qiagen</td><td>56304</td><td></td></tr><tr><td>Power Sybr Green PCR Master Mix</td><td>Uygulamalı</td><td>Biyosistemler 4367659</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optik 96 kuyulu Reaksiyon Plakası</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>N8010560</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optik Yapışkan Film</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4360954</td><td></td></tr><tr><td>Sefazolin&nbsp;</td><td>Apotex</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>Loxicom (Meloksikam)</td><td>Norbrook</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>Heparin sodyum</td><td>APP İlaç</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>Ketavet (Ketamin)</td><td>VEDCO</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>Anased (Xylazine)&nbsp;</td><td>Lloid</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>Forane (Isoflurane)&nbsp;</td><td>Baxter</td><td>mevcut</td><td></td>değil</tr><tr><td>Kavisli Moria iris forseps</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>11370-31</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli ekstra ince Graefe forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Vannas yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>İnce makas - ToughCut</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14101-14</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl sütür (5-0)</td><td>Ethicon</td><td>J385</td><td></td></tr><tr><td>Sütür ipliği (4/0 ipek)&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18020-40</td><td></td></tr><tr><td>Michel sütür klipsleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>12040-02</td><td></td></tr><tr><td>Yara genişletici (Lancaster göz spekululası)</td><td>KLS Martin</td><td>34-149-07</td><td></td></tr><tr><td>Sıcak boncuk sterilizatörü</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Michel sütür klipsi aplikatörü</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>112028-12</td><td></td></tr><tr><td>Insyte Autoguard 24 G IV kateter</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>381412</td><td></td></tr><tr><td>2F Fogarty kateter</td><td>Edwards Lifesciences</td><td>120602F</td><td></td></tr><tr><td>Teflon boru</td><td>Vention</td><td>041100BST</td><td></td></tr><tr><td>PTA kateter</td><td>NuMed</td><td>özel sipariş</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı bez pedleri</td><td>Kendall Healthcare</td><td>9024</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk aplikatörleri</td><td>Solon Üretim</td><td>WOD1003</td><td></td></tr><tr><td>Saline</td><td>Baxter</td><td>281321</td><td></td></tr><tr><td>10 ml şırınga (Luer-Lok)</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>1 ml şırınga (Luer-Lok)</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>#40 bıçaklı</td><td>Oster Makası&nbsp;</td><td>78005-314</td><td></td></tr><tr><td>Transpore cerrahi bant</td><td>3M</td><td>MM 15271</td><td></td></tr><tr><td>Puralube veteriner merhemi</td><td>Pharmaderm</td><td>mevcut</td><td></td> değil</tr></tbody></table>

hidrolize Çapraz bağlayıcılar yoluyla adenoviral vektörler gergin kullanma metalik stent yüzeylerden vasküler gen transferi

Vascular Gene Transfer from Metallic Stent Surfaces Using Adenoviral Vectors Tethered through Hydrolysable Cross-linkers

Stent restenoz yaygın koroner ve periferik arter kritik daralmış kesimleri ile yeniden kurmak kan akışı için kullanılan stent tabanlı revaskülarizasyon işlemlerinin önemli bir komplikasyon sunar. Alternatif bir strateji sunmak anti-restenotik aktiviteye sahip genlerin ayarlanabilir serbest bırakabilen Endovasküler stentler halen ilaç salınımlı stentler kullanılan. Tipik olarak, vektörün fiziksel olarak yakalanmalarında için kullanılan polimer kaplamalarla ilişkili aşırı bir enflamatuvar yanıtı kaçınarak klinik kullanımlarını elde etmek amacıyla, gen salınımlı stent, stent hareketsizleştirilmiş gen vektörü serbest bırakılması ve damar siteye özgü iletimi öngörülebilir kinetiklerle gösterirler. Bu çalışma, bisfosfonat (PABT) hidroliz olabilen bir çapraz bağlayıcıların (HC) ile paslanmaz çelik yüzeyi uğratılmış polialilamin için adenoviral parçacıklarının geri bağlanmasına dayalı stentlere adenoviral vektörlerin gen coatless bağlanması için ayrıntılı bir yöntem anlatılmaktadır. Bir aile5 ile 50 gün arasında değişen zincir içinde bir ester hidroliz reaksiyonuna ortalama t 1/2 ile iki işlevli (amın ve tiol-reaktif) HC stent vektör bağlamak için kullanıldı. Vektör hareketsizleştirme prosedürü, 9 saat içinde gerçekleştirilir ve çeşitli adımlardan oluşur: PABT (4 saat) bir sulu çözelti içinde metal numunelerin 1) inkübasyon; Tris (2-karboksietil) fosfin (20 dk) ile PABT yüklü tiyol gruplarının 2) korumanın giderilmesi; Pırıdıldıtıo (PDT) grup (2 saat) ile derive edilmiş polietilenimin ile reaksiyona sokulması ile numune metal yüzeyin tiol reaktif kapasite 3) genişlemesi; Ditiyotreitol (10 dakika) ile tioller PDT grupların 4) dönüştürülmesi; HC (1 saat) ile adenovirüslerin 5) değiştirilmesi; Boyut dışlama sütun kromatografisi (15 dakika) ve tiollenmiş çelik yüzeye (1 saat), tiyol-reaktif bir adenoviral parçacıkların 7) immobilizasyon ile modifiye edilmiş adenovirüs partiküllerinin 6), saflaştırma. Bu teknik, stentlerin ötesinde geniş potansiyel uygulanabilirliği vardırİmplante edilen yabancı maddelerin ara-yüz hücrelere tabaka aracılı gen aktarımı yoluyla biyolojik uyumluluğunun geliştirmek için biyoprotez cihazların yüzeyi mühendisliği kolaylaştırarak.

Vektör Yayın Deneyler Örneğin stentler gibi endovasküler girişimsel içeren implantlar, yüzeye adenoviral vektörlerin Bağ, kısmen vektörlerini fiziksel hedefleme eksikliği önüne geçmeyi, hastalık bölgesine vektör yakındır. Bununla birlikte, hedef doku transdüksiyonu yoluyla terapötik etkisini elde edebilmek için, vektör, yüzey (Şekil 2) serbest bırakılması gerekir. Hidroliz olabilen bir çapraz-bağlayıcıların kullanımı çapraz bağlayıcı, hidrolizi yolu ile arac...

Bu çalışmalar, adenoviral gen vektörlerinin stentlerin ve model ağ disklerinin kaplamasız metal yüzeylerine geri dönüşümlü bağlanmasını rapor etmektedir. Vektör immobilizasyonu için kullanılan çapraz bağlayıcıların hidrolizine bağlı olarak transdüksiyona yetkin viral partiküllerin sürekli salınımı, vasküler hücrelerde ve stentli arterlerde dayanıklı bir bölgeye özgü transgen ekspresyonu ile sonuçlanır.

Hidrolize Çapraz bağlayıcılar yoluyla Adenoviral vektörler gergin kullanma Metalik Stent Yüzeylerden Vasküler Gen Transferi

In-stent restenosis presents a major complication of stent-based revascularization procedures widely used to re-establish blood flow through critically ...

Bu prosedürün genel amacı, laboratuvar sıçanının ortak karotis arterine gen salan bir stent yerleştirmek ve zaman içinde ortaya çıkan transgen ekspresyonunun kapsamını ve konumunu belirlemektir. Bunu gerçekleştirmek için, ortak karotis arterine vasküler erişim sağlamak amacıyla eksternal karotis dalında bir arterotomi yapılır. Endoteli soyup medya tabakasına zarar vermek için, şişirilmiş iki French'lik bir Fogarty kateteri ortak karotis arteri boyunca geçirilir.Ardından, balonla hasarlanmış ortak karotis arterinin orta segmentine yerleştirilen bir anjiyoplasti kateteri üzerine gen salınımlı bir stent monte edilir ve arteriyel lusiferaz ekspresyonunu belirlemek için nihayetinde yerleştirilir. Onik jel ile birlikte formüle edilmiş lusiferin perivasküler bölgeye uygulanır ve biyolüminesans görüntüleme gerçekleştirilir. Sonuç olarak, farklı gen salınımlı stent formülasyonlarının vasküler doku transdüksiyonunun kapsamı ve süresi açısından karşılaştırılmasına olanak tanıyan sonuçlar elde edilebilir.Gen tedavisi kullanarak ani restenozu ve stent trombozunu önlemenin avantajı, viral vektörlerden kaynaklanan ekzojen gen ekspresyonunun stentli arterlerden izlenmesinin en doğrudan yolu olması

vascular-gene-transfer-from-metallic-stent-surfaces-using-adenoviral

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Iskemik kalp yetmezliği tedavisi için gen transferi yöntemi miyokard infarktüsü domuz modeli kullanılarak açıklanmıştır. Basit ve tekrarlanabilir bir yöntem bize kolayca çeşitli gen transferlerinin etkinliğini değerlendirmek için çok basit ve tekrarlanabilir bir yol sağlar.

Klinik öncesi Model İskemik Kalp Yetmezliği Gen Transferi

Bu biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerik nano-tanecikleri kullanılarak anjiyojenez için tedavi edici faktörler aşırı ifade programlama kök hücrelerin bir yöntem tarif eder. Tarif edilen işlemler in vitro yağ elde edilen kök hücreleri transfekte etmek ve bir murin arka bacak anjiyojenezi, iskemi modelinde desteklemek için programlanmış kök hücrelerin etkinliğini doğrulamak, polimer sentezi içerir.

Biyobozunur polimerik nano partiküllerin kullanılması Tedavi Angiogenezis Programlama Kök Hücreler

İnsan diyabetik organ kültürü yapılmış kornealarda adenoviral gen tedavisinin bir örneği, bu kornealarda gecikmiş yara iyileşmesinin normalleşmesine ve belirgin şekilde azalmış epitelyal kök hücre belirteç ekspresyonuna yönelik olarak sunulmuştur. Ayrıca, kök hücre ile zenginleştirilmiş limbal epitel kültürlerinde bu sürecin optimizasyonunu da açıklar.

Diyabetik Keratopatide için adenoviral Gen Tedavisi: İnsan Organ-kültürlü kornealar ve Limbal Epitel Hücreleri Yara İyileşmesi Üzerine Etkileri ve Hücre Marker İfade Kök

Bu yöntem bir transgene tavşan Karotid arter endotel tanıtmak için hazırlanmıştır. Transgene getirilmesi transgene ürün normal damar veya hastalık modelleri biyolojik rolü değerlendirmesini sağlar. Yöntem düzenleyici DNA dizilerinin etkinliği ölçmek için yararlıdır.

Vivo Gen transferi için tavşan ortak Karotid arter endotel

Bu yöntem interpozisyonu ven greft tavşanların yerleşimini, greft iletim ve dayanıklı transgene ifade ulaşılmasına anlatılmaktadır. Bu soruşturma transgenes ve protein ürünlerini aşılı damarlarında fizyolojik ve patolojik rolleri ve gen terapileri ven greft hastalığı için test sağlar.

Tavşan manken dayanıklı Transgene ifade juguler ven ortak karotid arter interpozisyonu Greftler için

Bu iletişim kuralı modelleri otolog hücre transplantasyonu ile metabolik hastalıkların tedavisi için domuz hepatosit yalıtım ve ex vivo gen teslim açıklamak için tasarlanmıştır. Her ne kadar bu modelle başarılı terapi lehine benzersiz avantajlar sahiptir, uygulama ek hastalıklar ve göstergeler yönelik olarak ilgili bir temelidir.

Lentiviral vektör-aracılı gen terapisi tetkikine Ex Vivo domuz otolog nakli için

Burada açıklanan protokol araştırmacılar özellikle adenovirus capsids seçilen siteler tarafından basit Kimya değiştirmek sağlar. Korumalı adenovirus parçacıklar vektörler ve yeniden hedeflenen gen transferi vektörel çizimler oluşturulacak ve vektör ana etkileşimler okudu.

Genetik ve kimyasal kapsid değişiklikler Adenovirus tabanlı gen transferi vektörlerin koruyucu ve hedefleme için kombine

Büyük miktarlarda rekombinant adenovirüslerin üretimi için yöntemler tanımlanmıştır, bu daha sonra transgenlerin ekspresyonuna veya endojen gen ürünlerinin aşağı regülasyonuna izin veren doğal kemirgen ürotelyumunu dönüştürmek için kullanılabilir.

Adenovirüs Aracılı Transdüksiyon Kullanılarak Doğal Mesane Urothelyumunda Transgenlerin Ekspresyonu

Bu protokol, AAV8 ile verilen küçük firkete RNA'sının intrasplenik enjeksiyonunun, karaciğerde portal ven enjeksiyonu ile aynı gen yıkım etkinliğini nasıl sağladığını açıklar ve çok daha düşük perioperatif ve postoperatif mortalite ve komplikasyonlar ile daha basit bir prosedürü temsil eder.

Adeno-ilişkili virüs serotip 8 (AAV8) ile verilen küçük firkete RNA'sının intrasplenik enjeksiyonu yoluyla karaciğerde etkili gen yıkımı

Burada, doku mühendisliği yapılmış bir vasküler greftin manşet tekniği kullanılarak fare karotis arterine implantasyonu için bir protokol sunulmakta ve vasküler doku rejenerasyon mekanizmalarının araştırılması için uygun bir hayvan modeli sağlanmaktadır.

Fare Karotis Arterine Manşet Tekniği ile Doku Mühendisliği Yapılmış Vasküler Greft İmplantasyonu

Öğrenin, sıçan ortak karotis arterine gen salınımlı stent yerleştirme ve biyolüminesans görüntüleme ile transgen ekspresyonunu değerlendirme yöntemini. Bu teknik vasküler gen tedavisi araştırmalarında kullanılır.

Hidrolize Çapraz bağlayıcılar yoluyla Adenoviral vektörler gergin kullanma Metalik Stent Yüzeylerden Vasküler Gen Transferi

Daha fazla video keşfet