Mikro-Bilgisayarlı Tomografi ile Çıplak Fareler içine İnsan Yağ Enjeksiyonu Canlılığına Değerlendirilmesi

Bu prosedürün genel amacı, yağ grefti hazırlama ve verme erteleme teknikleri arasındaki hacim tutulmasını karşılaştırmak için mikro BT kullanan bir fare modelini tanımlamaktır. Bu, greftlemeye hazır yağ elde etmek için önce insan lipo aspiratının işlenmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, CD bir timik çıplak farenin kafa derisine yağ greftleri yerleştirmektir.

Daha sonra, yağ grefti sağkalımı, BT tarama fareleri, görüntülerin yeniden yapılandırılması ve hacim tutulmasının ölçülmesi ile haftalık olarak analiz edilir. Son adım, sekiz haftanın sonunda yağ greftini planlamak ve bunları ağırlık ve histolojiye göre karşılaştırmaktır. Sonuç olarak, yağ grefti kalitesi ve sağkalımındaki farklılıkları göstermek için mikro BT ve histoloji kullanılır.

Bu tekniğin, yağ greftlerinin tartılması gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, çalışma hayvanını feda etmek zorunda kalmadan ilk greftlemeden sonra birden fazla zaman noktasında yağ grefti hacminin görselleştirilmesine ve objektif olarak ölçülmesine izin vermesidir. Bu yöntem için ilk olarak calva defektlerini analiz etmek için mikro BT kullanmaya başladığımızda aklımıza geldi. Bu tekniğin çıkarımları, yağ grefti, retansiyonu ve canlılığını değerlendiren tüm çalışmalar için cerrahi bir model sunmasıdır.

Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler mücadele edecektir çünkü yağ greftini kafa derisinin üzerinde doğru pozisyonda tutmak zordur. Bu tekniğin görsel olarak gösterilmesi kritiktir, çünkü greftleme ve rekonstrüksiyon adımlarının öğrenilmesi zordur, çünkü teknikteki küçük bir sapmanın sonucu değiştirebileceği çok sayıda aşama vardır. Coleman prosedürünü kullanarak, elektif liposuction uygulanan sağlıklı kadın hastaların karın, yan ve uyluk bölgelerinden insan yağ dokusu elde edin.

Greftleme için lipo aspiratını işlemek için, yağın 30 dakika boyunca oturmasına izin vererek başlayın. Lipo aspirat tipik olarak üstte yağ, ortada yağ ve altta kan olmak üzere üç katmana yerleşir. Üst yağ tabakasını ve ardından alt kan tabakasını aspire edin ve atın.

Kalan şişen sıvıyı veya hücre kalıntılarını daha fazla çıkarmak için, yağı 350 Gs ve dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin. Santrifüjlemeyi takiben, alt kan tabakası ve üst yağ tabakası aspire edilir. Metin protokolünde açıklandığı gibi greftleme için gereken yağ miktarını hesaplamak için, yağ grefti yapmak için dişi homozigot CD bir çıplak fare elde edin.

Deneysel çalışma için, anesteziyi indüklemek için sekiz ila 12 haftalık fareleri seçin. Fareyi, farenin solunum hızı yavaşladığında yaklaşık 10 dakika boyunca dakikada iki litre olmak üzere% 2,5 flor oksijen karışımı içeren bir knockdown kutusuna yerleştirin. Bir ayak parmağı tutamıyla yeterli sedasyonu onaylayın.

Farenin her iki gözüne de veteriner yağlama oftalmik merhem sürün ve farenin burnunu bir burun konisine yerleştirin ve dakikada bir ila iki litre oranında% 2,5 ISO flor oksijen karışımı sağlayın. Ardından, farenin altında steril bir alan oluşturun. Daha sonra bir kafa derisini %2.5 povidon iyot ve ardından %70 etanol çözeltisi ile sterilize edin.

Sterilizasyonu iki kez daha tekrarlayın. Oda sıcaklığına dengelenmiş, bir mililitre yağ içeren bir mililitrelik yem kilit şırıngasını geri yükleyin. Şırınganın ucuna 14 gauge sekiz santimetre uzunluğunda bir yağ grefti kanülü bağlayın.

Şırıngada 200 ila 400 mikrolitre yağ kalana kadar şırınga pistonuna bastırarak sistemi hazırlayın. Şırınga pistonuna bastırırken, ince forseps kullanarak distal kanül deliğinden çıkan yağı gözlemleyerek kanülün tamamen yağ ile dolduğunu doğrulayın. Kafatasının en çok yönünün üzerinde yer alan orta hatta sırt derisini kaldırın.

İnce makas kullanarak deride 1,5 milimetrelik bir kesi yapın. Kesiğin ortasına, daha sonra yara kenarlarını bir araya getirmek için kullanılacak olan altı oh naylon sütür yerleştirin. Greftleme yapıldıktan sonra dikişi bağlamayın.

Daha sonra, kanülü cilt kesisinden sokarak ve kanülü kafatasının üzerinde fan şeklinde bir desende ileri geri geçirerek kafatası üzerinde deri altı bir cep oluşturun, böylece cep oluşturulduktan sonra üstteki deriye herhangi bir bağ dokusu ekini serbest bırakın, kanülü farenin orta hattına, uç cebin theramos yönüne gelene kadar doğrudan kafatasının üzerine yerleştirin, gözler arasına çizilen bir çizginin hemen arkasında olmalıdır. Kanülü geri çekerken pistonu ilerleterek yağı geriye dönük bir şekilde yavaşça enjekte edin. Forseps kullanarak, yara kenarlarını bir araya getirin ve herhangi bir yağın cepten sızmasını önlemek için yukarı kaldırın.

Daha önce yerleştirilmiş olan dikişi bağlayın ve ilk düğümün cilde hafifçe dayandığından emin olun. Üç kare düğüm daha bağlayın ve dikişi üç milimetre kuyrukla kesin. Fareyi anesteziden çıkarın ve metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi kurtarmaya devam edin.

İlk taramayı gerçekleştirmeden önce, mikro BT'yi hava, su ve kemik yoğunluğu arasında ayrım yapan bir görüntüleme fantomu ile kalibre edin. Kalibrasyonu takiben. Dört fareyi ventral pozisyonda, ikisi üstte ve ikisi altta olacak şekilde tarayıcıya yerleştirin.

Bir tarama yatağına yerleştirin. Daha önce fare gövdesini tutmak için 60 mililitrelik şırıngalardan ve burun konisi olarak 10 mililitrelik şırıngalardan yapılmıştır. Burundan ilk servikal omura ve kafatasının tepesinden kafatasının tabanına kadar farenin tüm kafatasının görüntüleneceğini bir izci görüntüsü ile onaylayın.

Metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklandığı gibi taramaya devam edin. Piksel yoğunluğu eşiklerini kullanarak vokselleri seçerek ilgi bölgelerinin veya ROI'lerin oluşturulmasına izin veren bir mikro CT görüntüleme analiz yazılımı ile yeniden yapılandırılmış görüntüleri açın. Yeniden yapılandırılmış BT görüntülerini iki boyutlu, koronal, aksiyel ve sagital görünümlerde yükleyerek başlayın.

Eksenel dilimi kılavuz olarak kullanarak, yağ greftinin en sol yönüne karşılık gelen sagital dilime gidin. Yağ greftine karşılık gelen tüm vokselleri yakalayan, ancak çevredeki dokuyu ve kemiği hariç tutan piksel yoğunluğu için bir üst ve alt eşik seçin. Sagital görünümde yağ greftine karşılık gelen bir ROI tanımlayın.

Önceden tanımlanmış piksel yoğunluğu eşiklerini kullanarak, greftin en sağ yönüne ulaşılana kadar her beşinci sagital dilimde bir bu prosedürü tekrarlayın. Ardından, tüm 2D ROI'lerden seçilen vokselleri tek bir birleşik 3D ROI'ye enterpolasyon yapın, yazılım tarafından hesaplanan ROI hacmini kaydedin. Son yağ grefti hacmini görselleştirmek için 3D izoyüzeyi işleyin.

Sonraki analizde, maksimum ve minimum piksel yoğunluğu değerlerini, fareler sekizinci hafta zaman noktası için tarandıktan sonra temel analiz için kullanılanlarla aynı tuttuğunuzdan emin olun. Fareleri metin protokolünde açıklandığı gibi ötenazi yapın. Fareyi tenotomi makası kullanarak ameliyat alanına yerleştirin, cebi ve üstteki deri ve bağ dokusu eklerini yağ greftinden dikkatlice açın.

Bu noktada, greftin çıkarılmasına yardımcı olmak için üstteki sırt derisinin bir yamasının çıkarılmasına yardımcı olabilir. Greft eksize edildikten sonra greftten alınan bağ dokusunu en aza indirmek için eksize ederken grefte mümkün olduğunca yakın kalın. Kütleyi en az 0.01 grama kadar doğru olan yırtık bir ölçekte ölçün.

Yağ greftleri, çalışma süresince hacim olarak kademeli olarak azaldı ve sekizinci haftaya kadar ortalama %62.2 sağkalım ile sonuçlandı. Sekizinci hafta taramasının tamamlanmasının ardından, her bir yağ grefti tek parça halinde çıkarıldı. Mikro BT ile elde edilen veya fiziksel kütleden hesaplanan yağ greftinin hacim ölçümleri arasındaki farkı karşılaştırmak için bir WIL koksin sıra toplamı testi kullanıldı.

Bu iki yöntem arasında anlamlı bir fark bulunamamıştır. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa seans başına iki saat içinde gerçekleştirilebilir. Bu prosedürü denerken, bu prosedürü takiben ameliyatları ve rekonstrüksiyonları her seferinde aynı şekilde yapmayı unutmamak önemlidir.

İmmüno boyama ve Q-R-T-P-C-R gibi diğer yöntemler, vaskülarite ve gen ekspresyonunun farklı greftleme yöntemlerinden nasıl etkilendiği gibi ek soruları yanıtlamak için gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, greftleme için lipo aspiratın nasıl işleneceğini, in vivo olarak BT taraması greftlerinin nasıl işleneceğini, greft sağkalımının nasıl değerlendirileceğini ve ağırlık histolojisi için greftlerin nasıl planlanacağını ve geliştirildikten sonra gelecekteki analizleri iyi anlamış olmalısınız. Bu teknik, plastik cerrahi alanındaki araştırmacıların aynalama modelinde yağ greftini keşfetmelerinin yolunu açtı.