Name: Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: Keşfedin farelerde sigara dumanına maruz kalmayla oluşan KOAH ve amfizem patolojilerini otomatik morfometri yöntemleriyle nicelendirmeyi. Bu protokol akciğer fonksiyon testleri ve görüntü analizi yazılımları kullanarak standartlaştırılmış ölçümler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz bu makalede yaptığı katkılardan dolayı Francesca Polverino MD, Brigham bir Araştırma Görevlisi ve Kadın Hastanesi teşekkür etmek istiyorum, ve aynı zamanda Monica Yao, BS, ve Kate Rydell, kemirgen hayvancılık ve sigara dumanına maruz fareler ile yardım için BS. Bu çalışma Halk Sağlığı Servisi, Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü Hibeler HL111835, HL105339, HL114501, Uçuş Hazirun Tıbbi Araştırma Enstitüsü Grant # CIA123046, Brigham ve Kadın Hastanesi-Lovelace Solunum Araştırma Enstitüsü Konsorsiyumu, ve Cambridge NIHR Biyomedikal tarafından desteklenen Araştırma Merkezi.

<ol><li>Murray, C. J., Lopez, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+the+global+burden+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J+Med%22%5BJournal%5D)">Measuring the global burden of disease.</a> N. Engl. J Med. 369, 448-457 (2013).</li>
<li>Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J+Physiol+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of chronic obstructive pulmonary disease.</a> Am. J Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 295, 1-15 (2008).</li>
<li>Hautamaki, R. D., Kobayashi, D. K., Senior, R. M., Shapiro, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+for+macrophage+elastase+for+cigarette+smoke-induced+emphysema+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Requirement for macrophage elastase for cigarette smoke-induced emphysema in mice.</a> Science. 277, 2002-2004 (1997).</li>
<li>Churg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+intervention+with+a+myeloperoxidase+inhibitor+stops+progression+of+experimental+chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Late intervention with a myeloperoxidase inhibitor stops progression of experimental chronic obstructive pulmonary disease.</a> Am. J. Respir. Crit Care Med. 185, 34-43 (2012).</li>
<li>Churg, A., Zhou, S., Wang, X., Wang, R., Wright, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+interleukin-1beta+in+murine+cigarette+smoke-induced+emphysema+and+small+airway+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of interleukin-1beta in murine cigarette smoke-induced emphysema and small airway remodeling.</a> Am J Respir. Cell Mol. Biol. 40, 482-490 (2009).</li>
<li>Hogg, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature+of+small-airway+obstruction+in+chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">The nature of small-airway obstruction in chronic obstructive pulmonary disease.</a> N. Engl. J. Med. 350, 2645-2653 (2004).</li>
<li>Paigen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+miracle+enough%3A+the+power+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">A miracle enough: the power of mice.</a> Nat. Med. 1, 215-220 (1995).</li>
<li>Vlahos, R., Bozinovski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+pre-clinical+mouse+models+of+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Sci.+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Recent advances in pre-clinical mouse models of COPD.</a> Clin. Sci. (Lond). 126, 253-265 (2014).</li>
<li>Churg, A., Tai, H., Coulthard, T., Wang, R., Wright, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+drives+small+airway+remodeling+by+induction+of+growth+factors+in+the+airway+wall%29%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke drives small airway remodeling by induction of growth factors in the airway wall).</a> Am. J. Respir. Crit Care Med. 174, 1327-1334 (2006).</li>
<li>Guerassimov, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+emphysema+in+cigarette+smoke-exposed+mice+is+strain+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">The development of emphysema in cigarette smoke-exposed mice is strain dependent.</a> Am. J. Respir. Crit Care Med. 170, 974-980 (2004).</li>
<li>van Eijl, S., van Oorschot, R., Olivier, B., Nijkamp , F. P., Bloksma, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+and+hypothermia+in+mice+in+a+nose-only+cigarette+smoke+exposure+system%5BTitle%5D)+AND+%22Inhal.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Stress and hypothermia in mice in a nose-only cigarette smoke exposure system.</a> Inhal. Toxicol. 18, 911-918 (2006).</li>
<li>Mauderly, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+3+methods+of+exposing+rats+to+cigarette+smoke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Comparison of 3 methods of exposing rats to cigarette smoke.</a> Exp. Pathol. 37, 194-197 (1989).</li>
<li>Yao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+superoxide+dismutase+protects+against+pulmonary+emphysema+by+attenuating+oxidative+fragmentation+of+ECM%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Extracellular superoxide dismutase protects against pulmonary emphysema by attenuating oxidative fragmentation of ECM.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 15571-15576 (2010).</li>
<li>Crane-Godreau, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+the+influence+of+vitamin+D+deficiency+on+cigarette+smoke-induced+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modeling the influence of vitamin D deficiency on cigarette smoke-induced emphysema.</a> Front Physiol. 4, 132(2013).</li>
<li>McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+respiratory+system+mechanics+in+mice+using+the+forced+oscillation+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Evaluation of respiratory system mechanics in mice using the forced oscillation technique.</a> J Vis. Exp. , e50172(2013).</li>
<li>De Vleeschauwer, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+invasive+lung+function+measurements+in+intubated+mice%3A+an+approach+for+longitudinal+lung+research%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Repeated invasive lung function measurements in intubated mice: an approach for longitudinal lung research.</a> Lab Anim. 45, 81-89 (2011).</li>
<li>Dunnill, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+methods+in+the+study+of+pulmonary+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Quantitative methods in the study of pulmonary pathology.</a> Thorax. 17, 320-328 (1962).</li>
<li>Saetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Destructive+index%3A+a+measurement+of+lung+parenchymal+destruction+in+smokers%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev.+Respir.+Dis%22%5BJournal%5D)">Destructive index: a measurement of lung parenchymal destruction in smokers.</a> Am Rev. Respir. Dis. 131, 764-769 (1985).</li>
<li>Saito, K., Cagle, P., Berend, N., Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27destructive+index%27+in+nonemphysematous+and+emphysematous+lungs.+Morphologic+observations+and+correlation+with+function%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev.+Respir.+Dis%22%5BJournal%5D)">The 'destructive index' in nonemphysematous and emphysematous lungs. Morphologic observations and correlation with function.</a> Am Rev. Respir. Dis. 139, 308-312 (1989).</li>
<li>Robbesom, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+quantification+of+emphysema+in+small+human+lung+specimens%3A+comparison+of+methods+and+relation+with+clinical+data%5BTitle%5D)+AND+%22Mod.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Morphological quantification of emphysema in small human lung specimens: comparison of methods and relation with clinical data.</a> Mod. Pathol. 16, 1-7 (2003).</li>
<li>Moghadaszadeh, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selenoprotein+N+deficiency+in+mice+is+associated+with+abnormal+lung+development%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Selenoprotein N deficiency in mice is associated with abnormal lung development.</a> FASEB J. 4, 1585-1599 (2013).</li>
<li>Churg, A., Sin, D. D., Wright, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Everything+prevents+emphysema%3A+are+animal+models+of+cigarette+smoke-induced+chronic+obstructive+pulmonary+disease+any+use%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Everything prevents emphysema: are animal models of cigarette smoke-induced chronic obstructive pulmonary disease any use.</a> Am J Respir. Cell Mol. Biol. 45, 1111-1115 (2011).</li>
<li>McComb, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CX3CL1+up-regulation+is+associated+with+recruitment+of+CX3CR1%2B+mononuclear+phagocytes+and+T+lymphocytes+in+the+lungs+during+cigarette+smoke-induced+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">CX3CL1 up-regulation is associated with recruitment of CX3CR1+ mononuclear phagocytes and T lymphocytes in the lungs during cigarette smoke-induced emphysema.</a> Am. J. Pathol. 173, 949-961 (2008).</li>
<li>Mizumura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitophagy-dependent+necroptosis+contributes+to+the+pathogenesis+of+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Mitophagy-dependent necroptosis contributes to the pathogenesis of COPD.</a> J. Clin. Invest. 124, 3987-4003 (2014).</li>
</ol>

Açıklayacak herhangi bir çıkar çatışmamız yok.

Çoğu araştırmacı, insan hastalığında mevcut olan KOAH'taki ana kronik akciğer patolojilerini ve anormal akciğer fizyolojisini (hava sahası genişlemesi, SAR ve akciğer uyumunda artışlar) modellemek için fareleri kullanır. Bu kronik hastalık süreçlerinde ilgilenilen moleküllerin aktivitelerini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için farelerde ilgilenilen moleküllerin hem amfizem gelişimi hem de SAR üzerindeki etkisini değerlendirmek için kapsamlı bir yaklaşıma ihtiyaç vardır. 
Bu protokolde bi...

bir model mükemmel insan hastalığı (2) tüm özelliklerini taklit çünkü KOAH çalışma hayvan modellerinde kullanılması zordur. Çoğu araştırmacı nedeniyle pulmoner fizyoloji, patoloji, genetik ve metabolitleri fareler ve insanlar arasındaki benzerlikler KOAH model fareler kullanın. Ayrıca, fareler çalışma nispeten ucuzdur ve amfizem ve küçük hava yolu yeniden hem CS maruz (5,7-9) 6 ay içinde gelişir. Sigara dumanı kaynaklı KOAH: Çeşitli yöntemler farelerde KOAH neden olabilir. Çoğu araştırmacı insan KOAH için önemli etyolojik faktör olan CS, fareler maruz kalmaktadır. 6 ay boyunca CS pozlama amfizem ve farelerde küçük hava yolu yeniden (SAR) gelişimine neden olur, ancak bağlı olan hastalığın şiddeti okudu kemirgen gerginlik bağlı olarak değişir. AKR / J fareleri extremel vardır, oysa Örneğin, NZWLacZ fareler CS kaynaklı anfizemin gelişimine karşı dirençli olanHassas y (10). Çoğu araştırmacı gibi birçok gen hedefli fareler bu gerginlik mevcuttur CS pozlama modelinde C57BL / 6 suşu fareler çalışma. Sürekli maruz, amfizem ve küçük hava yolu fibroz 6 ay sonra yabani tip geliştirmektedir (WT), C57BL / 6 fareleri, her iki lezyonlar şiddeti (5,10) içinde nispeten hafiftir. Burun-tek ve tüm vücut maruz: Araştırmacılar CS maruz kalma iki türlerini kullanabilirsiniz. 1) Bir daha emek-yoğun bir yöntemdir;: burun sadece pozlama tekniği önemli dezavantajları olduğunu vardır ve 2) fareler hayvanlar (11) bir stres tepkisi ve hipertermi neden küçük odacıklarda ölçülü gerekir. (bu tarifnamede anlatıldığı gibi) tam gövde maruz önemli dezavantajı, bunların kürk temizlerken hayvanlar nikotin ve katran ürünleri (aynı zamanda inhale gibi) yutar olmasıdır. Tüm vücut dumanına maruz bırakılan fareler aynı zamanda daha düşük carboxyhemoglobin seviyeleri ve burun sadece CS (12) maruz kalan hayvan ile karşılaştırıldığında, vücut ağırlığı kaybı azalır. Solunum fonksiyon testi (SFT): Akciğer uyum ve elastansı ölçüleri genellikle C57BL / 6 yabani tip benzer (WT) nedeniyle bu geliştirir nispeten hafif amfizem 6 ay boyunca hava veya dumanına maruz bırakılan farelerde suşu CS (10) maruz kalmaktadır. Amfizem yıkım daha şiddetli Ancak, akciğer uyum ve basınç-hacim (PV) sol vardiya artışlar döngüler tespit edilebilir akış. İkincisi, C57BL / 6 WT farelere göre daha ciddi bir amfizem tip CS maruz kalan, C57BL / 6 streyn gen hedefli farelerde, CS etkilerine (10) karşı daha duyarlı olan fare suşlarının, örneğin, görülebilir ya da CS etkilerine (14) karşı daha duyarlı hale getirmek çevre değişikliklerine maruz CS maruz bırakılan farelerde (13). Bu protokol dokusunda akciğer elastik recoil (Yan statik akciğer uygun artar [Cst] azalma ve azalmalar ölçmek için küçük bir hayvan vantilatör kullanırelastisite [H]), PV akış döngüler, ve anestezi farelerin (15,16) hava yolu ve doku direnci değişir. Pulmoner amfizem Ölçüleri: dağıtım mekansal heterojen çünkü CS-maruz C56BL / 6 suşu farelerde amfizem gelişimi analizi zordur. Çeşitli farklı yöntemler farelerde bir hava boşluğu büyümesi miktarı belirlenir. Kullanılan ilk yöntem, (17) ortalama lineer ara parçası (L m) idi. Ancak, L m yöntemi (akciğerin tüm bölümleri rastgele örnekleme sürece) hastalık ve dolayısıyla analiz içine gözlemci önyargı tanıtmak olabilir kullanımı heterojen yakalamak olmayabilir yavaş, manuel süreçtir. yıkıcı indeksi [DI, (18)] aynı zamanda bir hematoksilen ve eozin lekeli akciğer bölümünün basılı sayısallaştırılmış resmin üzerine yerleştirilen 50 eşit dağıtılmış noktaları ile şeffaf bir sayfasını kullanarak hava sahasını büyütme rakamlarla. PI yöntemi puanları her nokta ac çevresiölçüde Cording olan bu alanda alveol kanalları ve alveol duvarları tahrip edilir için. DI yöntemin temel dezavantajı, zaman alan ve diğer yöntemler (19,20) göre daha doğru olmadığıdır. Bu protokol önlemler Gill&#39;ın boyası ile boyanmış parafin gömülü akciğer bölümlerinde alveol kiriş uzunluğunu ve alveol alanı demek. Morfometri yazılımı ikili görüntüleri akciğer bölümlerinin görüntüleri dönüştürür (ki doku beyaz ve hava sahasını siyah), ve daha sonra yatay ve dikey çizgiler (akorları) muntazam bir ızgara üst üste bindirir ve yazılımı daha sonra tespit alanlarda her akor uzunluğunu quantifies hava sahasını gibi yazılım. Bu yöntem kullanılarak, bir standart ve nispeten otomatik bir şekilde (21) akciğer her yerinde alveol boyutunu ölçmek mümkündür. Küçük hava yolu yeniden (SAR): ECM proteinleri artan birikim (özellikle çatlaklarküçük hava yollarının çevresindeki l kollajen) CS-maruz kalan hayvanlarda oluşur ve tıkanıklık hava akımını katkıda bulunur. Araştırmacılar, amfizem geliştirme (22) olduğu kadar sık KOAH hayvan modellerinde, SAR deneyi değildir. CS-maruz bırakılan farelerde SAR ölçmek için, bu protokol küçük hava yolları parafine gömülü akciğer bölümlerinde (üst solunum yolları 300 ve 899 m arasında bir ortalama çapa sahip olan) yaklaşık yatırılır ECM proteinlerinin tabakasının kalınlığının ölçülmesi için görüntü analizi yazılımını kullanır Masson trikrom boyası ile boyandı.

<table><tbody><tr><td>Tüm vücut dumanına maruz kalma cihazı</td><td>Teague Enterprise</td><td>TE-10z</td><td>Farelerde kronik akciğer hastalığını indüklemek için Kronik Duman maruziyetleri</td></tr><tr><td>Araştırma Sigarası</td><td>Kentucky Üniversitesi</td><td>3R4F referans sigaraları</td><td></td></tr><tr><td>Pallflex&reg; Hava İzleme Filtreleri, Dekoratif Filtreler TX40HI20WW, 25 mm</td><td>Pall Corporation</td><td>7219</td><td>TPM'lerin ölçümü için</td></tr><tr><td>25 mm filtre tutucu</td><td>Pall Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtre örnekleyici</td><td>Intermatic</td><td>Metal T100</td><td></td></tr><tr><td>Gaz sayacı</td><td>AEM</td><td>Gaz sayaçları G1.6; G2.5; Fare için G4</td><td></td></tr><tr><td>Trakeal Kanül 18 gauge</td><td>Labinvention</td><td></td><td>Solunum fonksiyonunun analizi</td></tr><tr><td>Mekanik ventilatör</td><td>Scireq</td><td>FlexiVent</td><td></td></tr><tr><td>Gill'in hematoksilen çözeltisi&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GSH316</td><td>Solungaç boyama için, çeker ocak altında çalışın</td></tr><tr><td>Hematoksilen çözeltisi, Harris modifiye</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HHS16</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal-60</td><td>Thermo Scientific</td><td>8310-16</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Slayt Alan Bulucu</td><td>Andwin Scientific INC</td><td>50-949-582</td><td>Amfizem analizi için</td></tr><tr><td>Scion Görüntü Programı</td><td>Scion Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mason'un trikrom lekesi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT15</td><td>Küçük hava yolu fibrozunun analizi için</td></tr><tr><td>MetaMorp Çevrimdışı sürüm 7.0</td><td>Molecullar Devices LLC</td><td>31032</td><td></td></tr></tbody></table>

sigara duman maruz kalan fare akciğer amfizem ve küçük havayolu yaptırma otomatik ölçüm

Automated Measurement of Pulmonary Emphysema and Small Airway Remodeling in Cigarette Smoke-exposed Mice

KOAH'ın 2020 yılına kadar dünya genelinde en sık üçüncü mortalite nedeni olacağı tahmin edilmektedir(1). KOAH'ın hayvan modelleri, hastalık sürecine katkıda bulunan molekülleri tanımlamak ve KOAH için yeni tedavilerin etkinliğini test etmek için kullanılır. Araştırmacılar, kemirgenler, kobaylar, tavşanlar ve köpekler dahil olmak üzere farklı türlerin kullanıldığı bir dizi KOAH modeli kullanmaktadır (2). Bununla birlikte, en yaygın kullanılan model, farelerin sigara dumanına maruz kaldığı modeldir. Fareler, KOAH'ı modellemek için özellikle yararlı bir türdür, çünkü genomları, bireysel proteinlerde eksik olan veya aşırı eksprese eden hayvanlar üretmek için kolayca manipüle edilebilir. Sigara dumanına maruz kalmış gen hedefli fareler üzerinde yapılan çalışmalar, KOAH'ta tek tek moleküllerin farklı akciğer patolojilerine katkıları hakkında değerli bilgiler sağlamıştır (3-5). Çoğu çalışma, KOAH'ın karakteristiği olan hava akımı tıkanıklığına katkıda bulunan amfizem gelişiminde yer alan yollara odaklanmıştır. Bununla birlikte, küçük hava yolu fibrozu da insan KOAH hastalarında hava akımı tıkanıklığına önemli ölçüde katkıda bulunur (6), ancak dumana maruz kalan hayvanlarda bu lezyonun patogenezi hakkında çok daha az şey bilinmektedir. Bu bilgi boşluğunu gidermek için, bu protokol dumana maruz kalan farelerde hem amfizem gelişimini hem de küçük hava yolu fibrozunu ölçer. Bu protokol, tüm vücut maruz kalma tekniği kullanarak fareleri CS'ye maruz bırakır, daha sonra farelerde solunum mekaniğini ölçer, farelerin akciğerlerini standart bir basınca şişirir ve akciğerleri formalin içinde sabitler. Araştırmacı daha sonra akciğer bölümlerini ortalama alveolar akor uzunluğunu ölçmek için Gill boyası (amfizem şiddetinin bir okuması olarak) veya küçük hava yolları etrafındaki hücre dışı matris (ECM) proteinlerinin birikimini ölçmek için Masson'un trikrom boyası ile boyar (küçük hava yolu fibrozunun bir okuması olarak). Moleküler yolakların bu akciğer patolojilerinin her ikisi üzerindeki etkilerinin incelenmesi, KOAH patogenezinin daha iyi anlaşılmasına yol açacaktır.

Bu protokol, CS farelerin tüm vücut teması ile başlar. Yeterli gözetim ve cihaz ve TPM izlenmesi bakım tutarlı duman risklerini (Şekil 1) sağlamak sayar. Araştırmacı enflasyon cihazı kullanarak akciğer enflasyon tekniği uygulamaları olduğunu önemlidir Bu protokol, CS farelerin tüm vücut teması ile başlar. Yeterli gözetim ve cihaz ve TPM izlenmesi bakım tutarlı duman risklerini (Şekil 1) sağlamak sayar. Bu araştırmacı uygulamaları dikkatle enflasyon cihazı <s...

Bu protokolün amacı, KOAH'ın bir fare modelinde kronik akciğer patolojilerini ölçmek için otomatik yöntemler sağlamaktır. Protokol, fareleri sigara dumanına (CS) maruz bırakmayı, pulmoner fonksiyonu ölçmeyi, akciğerleri şişirmeyi ve farelerde amfizem ve küçük hava yolu yeniden şekillenmesini ölçmek için morfometri yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

COPD is projected to be the third most common cause of mortality world-wide by 2020(1).  Animal models of COPD are used to identify molecules that ...

Bu prosedürün amacı, sigara dumanına maruz kalan farelerin akciğerlerindeki kronik akciğer patolojileri gibi KOAH'ı ölçmektir. Bu, farelerin ilk olarak altı ay boyunca sigara dumanına veya havaya maruz bırakılmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra, bir kemirgen ventilatörü kullanılarak fareler üzerinde solunum fonksiyon testi yapılır.Daha sonra akciğerler sabit bir basınca şişirilir, çıkarılır ve% 10 formalin içinde sabitlenir. Son olarak, solungaç lekeli akciğer bölümleri ve küçük hava yolu hücre dışı matrisi, protein tabakası kalınlığı veya mason trikom lekeli akciğer bölümlerindeki hava boşluğu boyutunu ölçmek için daha fazla bilgilendirici yazılım kullanılır. Sonuç olarak, sigara dumanına maruz kalan farelerin akciğerlerindeki hava sahası genişlemesinin ölçümü standartlaştırılmış, tarafsız ve otomatik bir şekilde gerçekleştirilir.Bu tekniğin ortalama doğrusal kesişme ölçümü veya yıkıcı indeks gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, bu protokolün tamamlanmasının daha az zaman alması, gözlemci yanlılığına daha az duyarlı olması ve farelerde patolojinin heterojen doğasını yakalamada daha etkili olmasıdır. Fareleri sigara dumanına maruz bıraktıktan ve metin protokolüne göre uyuştur

automated-measurement-pulmonary-emphysema-small-airway-remodeling

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Pulmoner farelerin solunum yolu epitel hücreleri izole ve farklılaşmış bir solunum yolu epitel bir model olarak hava-sıvı arayüzü kültüre olabilir. Bu çevresel toksin moleküler yanıtların incelemek üzere bir protokol, tecrit, kültür ve bu hücreler ana sigara dumanına maruz için tarif edilir.

Hava Sıvı Arabirimi Fare Solunum Epitel Hücreleri ve Deneysel sigara dumanına maruz kalma izolasyonu

Alerjik astım Deneysel fare modelleri hastalığı patogenezinde okuyan ve yeni ilaçlar geliştirmek için yeni olanaklar sunar. Bu modeller de alerjik immün yanıt, hava yolu inflamasyonu ve pulmoner patofizyolojisi yöneten ölçüm faktörleri için uygundur.

Alerjen Bağlı Astım murin Modeli

SCIREQ Inc, Montreal, Qc; İşbu Protokol solunum sistemi mekaniği ölçümleri yanı sıra zorla salınım tekniği kullanarak farelerde inhale metakoline hava yolu duyarlılığı değerlendirilmesi (flexiVent yürütmek için gerekli prosedürleri ayrıntılı bir adım adım açıklamasını sağlar , Kanada).

Zorla Salınım Tekniği kullanarak Fare Solunum Sistemi Mekanik Değerlendirilmesi

Burada, farelerde akciğer basınç-hacim eğrisini basit ve güvenilir bir şekilde ölçmek için bir protokol sunuyoruz ve bu, iki yaygın akciğer patolojisi olan pulmoner fibroz ve amfizemde fenotipik parankimal değişiklikleri tespit etmek için yeterince duyarlı olduğunu gösteriyor. Bu metrik, gelişen patoloji ile akciğerin yapısal değişikliklerini ölçmek için bir araç sağlar.

Fare Akciğerler Basınç-hacim Eğrisi Ölçümü

Bu çalışmada art arda fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) hayvan modeli başarılı nesil açıklar.

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Biz bir non-invaziv multimodal bleomycin Çift Kişilik boğaza korumak tarafından indüklenen fare akciğer fibrozis modelinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı yaklaşım Imaging tanımlamak.

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Burada sunulan amfizem bir fare modeli akciğer örneklerinin histolojik değerlendirilmesi için istikrarlı bir durum oluşturur akciğer fiksasyonu için yararlı bir protokoldür. Bu modelin ana avantajı akciğer çökmesi veya deflasyon olmadan aynı sabit basınç ile birçok akciğer düzeltebilirsiniz.

Farelerde AmfizemIn Değerlendirilmesi İçin Sabit Basınç Altında Akciğer Fiksasyonu

Bu protokol, sigara dumanının (CS) patofizyolojik etkilerinin, şirket içinde inşa edilmiş bir tüm vücut soluma (WBI) maruz kalma sistemi (WBIS) ile incelenmesini göstermektedir. Bu sistem, akciğer amfizem ve hematopoez üzerindeki CS aracılı etkilerin araştırılması için kontrollü tekrarlanabilir koşullar altında hayvanları CS'ye maruz bırakabilir.

Tüm Vücut Soluma Sistemi Kullanan Farelerde Sigara Dumanına Maruz Kalma

Burada, murin hava yolu epitel hücrelerini izole etmek ve farklılaştırmak için, kronik sigara dumanı ekstraktına (CSE) alışmalarına odaklanan bir in vitro model açıklıyoruz. Model, CSE'nin multi-omik etkisini kapsamlı bir şekilde karakterize etmek için kullanılabilir, bu da muhtemelen kronik duman maruziyeti altındaki hücresel tepkiler hakkında bilgi sağlar.

Sigara Dumanı Ekstraktı ile Uyarılan Murin Hava Yolu Epitel Hücrelerinde Multi-Omiklerin Farklılaşması ve Değişikliklerinin İncelenmesi için İn Vitro Model

Burada, lezyon tarafında intratrakeal damlatma yoluyla tek taraflı bleomisin ile indüklenen pulmoner fibrozis modelinde ventilasyon bölgelerini ölçmek için mikro-bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) kullanan bir protokol sunuyoruz.

Preklinik Modellerde Pulmoner Fibrozisin Gelişmiş Değerlendirmesi için Mikro-BT Kullanılarak Tek Taraflı Akciğer Hacmi Analizi

Burada, trakea yoluyla taşınan aerosol bleomisin kullanarak farelerde pulmoner fibrozisin modeli için bir protokol sunuyoruz. Bu optimize edilmiş yöntem, cerrahi kesi olmadan tekiz, nicel ve hassas bir doğum sağlar ve bleomisin kaynaklı fibrozun tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini artırır.

Tekrarlanabilir ve minimal invaziv fare modelleri için Rafine Aerosol Tabanlı intratrakeal bleomicin teslimat yöntemi

Keşfedin farelerde sigara dumanına maruz kalmayla oluşan KOAH ve amfizem patolojilerini otomatik morfometri yöntemleriyle nicelendirmeyi. Bu protokol akciğer fonksiyon testleri ve görüntü analizi yazılımları kullanarak standartlaştırılmış ölçümler sunar.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Daha fazla video keşfet