Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Bu prosedürün amacı, sigara dumanına maruz kalan farelerin akciğerlerindeki kronik akciğer patolojileri gibi KOAH'ı ölçmektir. Bu, farelerin ilk olarak altı ay boyunca sigara dumanına veya havaya maruz bırakılmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra, bir kemirgen ventilatörü kullanılarak fareler üzerinde solunum fonksiyon testi yapılır.

Daha sonra akciğerler sabit bir basınca şişirilir, çıkarılır ve% 10 formalin içinde sabitlenir. Son olarak, solungaç lekeli akciğer bölümleri ve küçük hava yolu hücre dışı matrisi, protein tabakası kalınlığı veya mason trikom lekeli akciğer bölümlerindeki hava boşluğu boyutunu ölçmek için daha fazla bilgilendirici yazılım kullanılır. Sonuç olarak, sigara dumanına maruz kalan farelerin akciğerlerindeki hava sahası genişlemesinin ölçümü standartlaştırılmış, tarafsız ve otomatik bir şekilde gerçekleştirilir.

Bu tekniğin ortalama doğrusal kesişme ölçümü veya yıkıcı indeks gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, bu protokolün tamamlanmasının daha az zaman alması, gözlemci yanlılığına daha az duyarlı olması ve farelerde patolojinin heterojen doğasını yakalamada daha etkili olmasıdır. Fareleri sigara dumanına maruz bıraktıktan ve metin protokolüne göre uyuşturduktan sonra, trakeanın önündeki cildi tıraş edin ve iyot bazlı bir solüsyon ve ardından klavlı makas kullanarak alanı dezenfekte etmek için etanol kullanın. Trakeanın önündeki deri ve deri altı dokusundan orta hat insizyonu yapın ve Sterno tiroid kaslarını ayırmak için forseps kullanın.

Trakeayı ortaya çıkarmak için, trakeanın arkasına iki inç uzunluğunda ipek sütür geçirin, trakeanın ön tarafında bir trakeostomi yapmak için trakeal makası indükleyin. Daha sonra trakeostomiye 18 gauge kanül yerleştirin. Trakeal kanül yoluyla yerine sabitlemek için dikişi indükleyin.

Fareyi mekanik ventilatörün adaptörünün Y hortumuna bağlayın ve kilogram başına 10 mililitrelik bir tidal hacim ve dakikada 150 nefeslik bir solunum hızı kullanarak mekanik ventilasyonu başlatın. Daha sonra, akciğerleri hacim geçmişi başına üç kez toplam akciğer kapasitesine veya TLC'ye şişirin. İnspiratuar kapasiteyi veya ic'yi ölçmek ve akciğerlerin ektazisini azaltmak için, tek frekanslı zorlanmış salınım yapın, manevra yapın ve solunum sisteminin dinamik direncini, RRS'yi, elastin ERS'yi ve uyum CRS'sini değerlendirin.

Daha sonra geniş bant frekansı, zorla salınım, manevra gerçekleştirin ve merkezi hava yolu direncini, RN doku direncini, G dokusunu, elastin H'yi ve H'ye G oranını ölçün. Tutarlı okumalar elde edilene kadar bu manevraların her birini beş kez tekrarlayın. Tekrarlanan her set arasında TL C3 kez şişirme.

Her fare için her parametre için ortalama değeri kaydedin. Fareyi ventilatörden çıkarın ve metin protokolüne göre ötenazi yaptıktan sonra. Diyaframı kesin, orta hatta göğüs kafesi açın ve akciğerleri ortaya çıkarmak için ön kaburgaları çıkarın.

Trakea etrafındaki cildi ve deri altı dokusunu inceleyin ve trakeanın arkasına iki adet iki inç uzunluğunda ipek sütür geçirin. Pulmoner şişme, bir bronkoalveoler lavaj yapılarak ölçüldükten ve hava, akciğer şişirmesi için verme setinden dışarı atıldıktan sonra, intravenöz verme setini trakeal kanüle bağlayın. Valfi açın ve akciğerler tamamen şişene kadar PBS'nin yerçekimi ile akciğerlere akmasına izin verin.

Trakeal kanülün distalindeki sütür ile bir düğüm yapın. Trakeayı kaldırmak için forseps kullanın ve düğüme yakın olarak kesin. Daha sonra trakea ve akciğerlerin arkasındaki bağ dokusunu inceleyin.

Akciğerleri dikkatlice çıkarın ve% 10 salin içeren bir tüpe koyun. Arabelleğe alınmış formül içinde. Akciğerleri iki kez yıkamak için PBS kullanmadan önce gece boyunca oda sıcaklığında sabitleyin.

Akciğerleri parafine gömün ve beş mikro çalışma kalınlığında kesit kesin. Ardından, bölümleri lekelemek ve metin protokolünde belirtildiği gibi görüntülemek için solungaç lekesi kullanın. Görüntüleri Scion görüntü analizine hazırlamak için, Scion görüntüsünü başlatın ve metin protokolünün ek bölümünde belirtildiği gibi makroları yükleyin, bir TIFF dosyası seçmek ve açmak için açık parlak alan görüntüsünü bir makro seçin.

Görüntüyü hazırlamak için görüntü düzenleme araçlarını kullanın. Analiz için, LUT penceresinin altındaki siyah veya beyaza tıklayarak boya fırçası rengini seçin. Ardından fırça boyutunu değiştirmek için fırça aracını tıklayın.

Fırça aracına çift tıklayın ve uygun bir fırça boyutu girin. Bronşları ve damarları siyaha boyayarak hava sahası veya alveol duvarları olmayan alanları hava sahası veya doku olarak muamele görmeye zorlamak için boya fırçası aracını kullanın, böylece doku olarak analiz edilirler. Hava sahasının ortalama kablo uzunluğunu ölçmek için, makro kablo uzunluğunu hava iki olarak seçin.

Bu adım, gri tonlamalı görüntüyü yalnızca siyah veya beyaz piksel eşiği olan ikili bir görüntüye dönüştürür. Görüntünün merkezine yakın bir yere tıklayarak ve fareyi yukarı veya aşağı sürükleyerek ikili görüntü. Eşik değerini ayarlamak için, değeri kabul etmek üzere fareyi ikinci kez tıklatın.

Alveolar duvarları orijinal görüntülerdeki ile aynı kalınlıkta yapmak için eşiği ayarlayın. Eşiğin altında kalmamak ve böylece orijinal görüntüde bulunmayan alveol duvarlarında kırılmalar oluşturmak çok önemlidir, bu da yapay olarak yüksek kordon uzunluğu değerleri üretecektir. İkili görüntünün yeniden eşiklanmasını isteyen bir pencereyi gözlemleyin ve makroyu eşiğe devam ettirin veya iptal edin.

Yine, komut istemine nedenini yanıtlayın ve tamam düğmesini seçin. Makro tarafından oluşturulan yatay ve dikey ızgara penceresini, beş piksel aralıklı çizgilerle gözlemleyin. Program, hava sahasıyla örtüşen yatay dikey çizgilerin uzunluklarını ölçer.

Varsayılan adı kullanarak dosyayı herhangi bir klasöre kaydedin. Bu, hava sahası kablosu uzunluğu için C LA TXT ile eklenen bir dosya biçimini içerir. Bu, Excel rapor makrolarının dosyayı bulmasını sağlar.

Raporları analiz etmek için X Excel raporunu TWENTYX XLS'yi açın. Dosya penceresinden birden fazla fareden gelen görüntülere karşılık gelen birden çok klasör için alveolar kordon uzunluğu ölçümlerini raporlamak için CL m çoklu makroyu seçin. Klasörü vurgulayarak her seferinde bir klasör seçin ve ardından Tamam'ı seçin.

Her klasör seçiliyken, her CL txt dosyası için istatistikleri gösteren çalışma sayfasına bakın. Tüm dosyalardan birleştirilen kablo uzunluğu verileri için istatistiklerin ardından, tüm çalışma sayfalarındaki verileri görüntülemek için tüm CL dosyasını açın. Son olarak, elektronik tabloyu yeniden adlandırın ve kaydedin.

Varsayılan dosya adı, c xls ile eklenen üst klasörün adıdır. İyi şişirilmiş bir akciğerden bir kesit burada gösterilmektedir. Alveol boşluklarındaki makrofajlar beyaza, damarlar ve bronşlar siyaha boyanır.

Daha sonra, görüntü, orijinal görüntü kullanılarak eşiklemeye tabi tutulan ikili bir görüntüye dönüştürülür ve daha sonra alveolar boşluktaki tüm pikseller siyah ve/veya akciğerin alveol olmayan bölgelerindeki pikseller beyaz olacak şekilde ters çevrilir. Bu şekillerde, yazılım makrosunun oluşturduğu dikey ve yatay alveolar kordon uzunlukları gösterilmektedir. Bu deney, dumana maruz kalan C 57 siyah altı vahşi tip farelerin, yaş ve cinsiyete uygun havaya maruz kalan vahşi tip farelere kıyasla alveolar hava sahası boyutunda %23'lük bir artışa sahip olduğunu göstermektedir.

Solunum fonksiyon testleri, sigara dumanına maruz kalan C 37 siyah altı vahşi tip farelerde gelişen hafif amfizem ile tutarlı olarak, akciğerin mütevazı elastik geri tepme kaybını yansıtan basınç hacmi döngülerinde mütevazı sola kaymalar gösterir. Burada gösterilen altı ay, altı ay boyunca havaya veya sigara dumanına maruz kalan C 57 siyah altı vahşi tip fareden alınan massen tri krom lekeli akciğer bölümlerinin görüntüleridir ve sigaradaki küçük hava yolları etrafında hücre dışı matriks protein birikimindeki artışları göstermektedir, dumana maruz kalan hayvanlar Bu prosedürü denerken. Fareler geliştikten sonra akciğerleri göğüs kafesinden çıkarırken çentiklememeye dikkat etmeyi unutmamak önemlidir.

Bu teknik, farelerde kronik proobstrüktif akciğer hastalıklarının patogenezine katkıda bulunan yolakları araştırmak ve KOAH'ımızın yeni tedavilerinin etkinliğini klinik öncesi bir model sistemde değerlendirmek için akciğer hastalıkları alanındaki araştırmaların önünü açmıştır.