Mezenterik Lenf Kanal Kanüllü Rat Modeli: Bağırsak Lenfatik İlaç Ulaştırma Değerlendirilmesine Uygulaması

Bu prosedürün genel amacı, bağırsak doğumunu takiben lipitlerin ve ilaçların bağırsak lenfatik sistemine taşınma hızını ve derecesini değerlendirmektir. Bu, önce lenf toplanması için mezenterik lenf kanalının izole edilmesi ve kanüle edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, bağırsağa infüzyonu sağlamak için duodenum kanüle edilir ve daha sonra kan örneklerinin toplanmasını sağlamak için karotis arter kanüle edilir.

Son adımda, deneysel tedavi duodenuma verilir ve sistemik lipid veya ilaç seviyelerinin ölçülmesi için lenf ve kan toplanır. Sonuç olarak, bu model, bağırsak doğumunu takiben lipitlerin ve ilaçların toplam emilimini ve bağırsak lenfatik taşınmasını değerlendirmek için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, mezenterik lenf kanalının doğrudan kanülasyonuna ve tüm deney süresi boyunca lenf toplanmasına izin vermesidir.

Bu, mezenterik lenfin içine ve içinden akan mutlak masif materyalin tahmin edilmesini sağlar. İn vivo, bu model ilaç ve lipid taşınmasının in vivo değerlendirmesini sağlar. Ayrıca, ilgilenilen herhangi bir faktörün bağırsak lenfatik taşınmasını ve ayrıca farklı zorluklara veya hastalık durumlarına yanıt olarak bu tür faktörlerin lenfatik taşınımındaki değişikliği ölçmek için de kullanılabilir.

Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritiktir, çünkü mezenterik lenf kanalının kanülasyonu, kanalın küçük, kırılgan ve açlık çeken hayvanlarda olması nedeniyle karmaşık ve zordur. Şeffaf Prosedürü gösteren, Monash Üniversitesi'ndeki meslektaşım ve öğretim üyesi arkadaşım Dr.Natalie cus ve gruptaki kıdemli bir doktora sonrası araştırmacı olan Dr.LJ Hugh olacak, Ameliyattan bir gün önce, kanülleri uygun uzunluklarda kesin ve steril bir cerrahi bıçak kullanarak her bir boru parçasının ucunda bir eğim yapın. Daha sonra, intra duodenal kanülü hazırlamak için, kanülü tekrar kendi üzerine geçirin ve ardından tüpte bir ankraj noktası oluşturmak için kanülü ısıtın.

Ameliyat günü, anestezi uygulanmış bir yetişkin sıçanın karnının ve boynunun sağ tarafından ve sol köprücük kemiği bölgelerinden kürkü tıraş edin ve ardından cerrahi bölgeleri aseptik olarak üç ardışık povidon iyot çözeltisi ve% 70 etanol ovma ile temizleyin. Hayvanı sağ tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve karın kas duvarının üst tabakasını, ksifoid işleminden sağ yana, kostal kenarın yaklaşık iki santimetre altına uzanan dört santimetrelik düz bir kesi ile açmak için steril bir neşter bıçağı kullanın. İnce bağırsağı sol karın duvarının altına geri çekin ve yerinde tutmak için normal tuzlu su ile doyurulmuş iki ila üç parça steril gazlı bez kullanın.

Daha sonra fareyi, hayvanın sırtının altına sağ böbrek seviyesinde yatay olarak yerleştirilmiş 10 mililitrelik plastik bir şırınga üzerine köprüleyin. Mezenterik lenf kanalının görüntülenmesine yardımcı olmak için, çapı yaklaşık 0,5 ila bir milimetre olan, sağ böbreğe dik olan ve hemen rostral ve koyu kırmızı titreşimli mezenterik artere paralel olan superior mezenterik lenf kanalını bulun. Burada gösterildiği gibi açlık tutmayan sıçanlarda, superior mezenterik lenf kanalının beyaz, opak ve istila edilmiş sıçanlara göre görselleştirilmesi daha kolay olduğunu unutmayın.

Daha sonra, üst mezenterik lenf kanalına paralel olarak sağ böbreğin alt kenarındaki perineal yağ yatağından ve vena kavanın hemen altındaki bağ dokusu katmanlarından bir çift düz forseps geçirin. Daha sonra forsepsin ucunu kullanarak, lenf kanülünü, bir ucu mezenterik lenf kanalının hemen bitişiğinde, diğer ucu ise sağ böbrek seviyesinde hayvandan dışsal olacak şekilde perren yağ yatağından çekin. Daha sonra bir cerrahi mikroskop ve kuyumcu forsepsleri kullanarak, alt uçtan başlayarak künt diseksiyon ile ve kanal izole edildiğinde lenf kanalına zarar vermemeye dikkat ederek üstteki bağ ve yağ dokusu katmanlarından mezenterik lenf kanalını izole edin.

Lenf kanalında küçük bir delik açmak için ince uçlu forsepsin ucunu kullanın. Lenf kanülünün tamamen antikoagülan solüsyonla doldurulduğundan ve hava boşluğu olmadığından emin olduktan sonra, lenf kanülünü delinme yoluyla mezenterik lenf kanalının yaklaşık iki ila dört milimetre içine yerleştirmek için küçük bir forseps kullanın. Kanülasyon başarılı olursa, kanülün serbest toplama ucundan kademeli bir bağırsak lenfi akışı gözlenecektir.

Bu meydana geldiğinde, kanülü sabitlemek için lenf kanalına giriş deliğinin üzerine küçük bir damla siyanoakrilat yapıştırıcı damlatın ve duodenumu kanül etmek için damarı fazla yapıştırıcı ile tıkamamaya dikkat edin. İlk olarak, ince bağırsağın parlak pembe kısmı hafifçe aşağı doğru çekerek mideyi ortaya çıkaracak şekilde dokuyu bulun. Ardından, mide ve duodenumun birleştiği yerin yaklaşık iki santimetre altında, pilorideki duodenumda küçük bir delme deliği açmak için steril bir 23 gauge iğne kullanın.

Ardından, duodenal kanülün js şeklindeki kanca ucunu delikten geçirin ve kanülü bir damla Sano akrilat yapıştırıcısı ile yerine sabitleyin. Daha sonra karın kası duvarı kesisini kapatmak için dikişler kullanın Ve karotis arter kanülasyonu, mezenterik lenf kanalının kanülasyonundan önce veya sonra yapılabilir. Tipik olarak, lenf kanalının kanülasyonundan önce karotis arteri kanüle etmeyi tercih ederiz, bu nedenle hayvanı hareket ettirirken lenf kanülünün yerinden çıkma potansiyelini azaltmak için Karotis arteri kanüle etmek için, önce karotis arter kanülünü eğim ucundan 2,5 santimetre uzakta işaretleyin ve borunun artere yerleştirilecek kısmını belirleyin.

Daha sonra kanülün eğimsiz ucunu antikoagülan solüsyonla doldurulmuş bir şırıngaya bağlı 25 gauge bir iğneye bağlayın ve kanülü solüsyonla doldurun, hava boşluğu olmadığından emin olun. Daha sonra, sagital düzlemde trakeanın solundaki cilt tabakasından bir ila 1,5 santimetre uzunlamasına bir kesi yapın ve ardından deri altı bağ dokusunu incelemek ve alttaki eşleştirilmiş boyun kaslarını ortaya çıkarmak için künt uçlu forseps kullanın. Cilt yüzeyinin yaklaşık bir santimetre altında bulunan titreşimli sol karotis arteri ortaya çıkarmak için boyun kaslarını geri çekin.

Daha sonra üstteki bağ dokusunu arterden künt diseksiyon ile temizleyin ve arterin yaklaşık bir santimetrelik bir bölümünü izole etmek için künt doku forsepsleri kullanın. Daha sonra, karotis arterin altına iki ipek sütür geçirmek için ince uçlu forseps kullanın ve bunları izole arter bölümünün her iki ucuna yerleştirin. Daha sonra sıçanın kalbinden ve köprücük kemiğinden en uzaktaki dikişi bağlayın ve arterden kan akışını engellemek için karotisin altına bir çift düz ince uçlu forseps yerleştirin.

Şimdi ince uçlu iris makası kullanarak, arterin üst yüzeyinde, izole alanın tepesinden yaklaşık üçte biri kadar küçük bir kesi yapın. Kanülün ucunu kavisli uçlu forseps ile artere yerleştirin. Yerleştirildikten sonra, kan akışını tıkayan düz ince uçlu forsepsleri çıkarın ve iki çift forseps kullanarak kanülü artere 2,5 santimetre ilerletin.

Biri kanın geri sızmasını önlemek için kanülü arterin içinde tutmak, diğeri ise kanülü yerleştirmek için. Ardından kanülü arterin içinde tutmak için küçük bir arter kelepçesi kullanın. Kanül içine antikoagülan solüsyon enjekte edin, ardından borunun açıklığını doğrulamak için az miktarda kan çekin.

Ardından kanülü pıhtılaşma önleyici solüsyonla yıkayın ve ucunu bir çakmak alevi kullanarak kapatın. Son olarak, kanülü yerine bağlamak için dikişleri kullanın ve arter klempini çıkarın. Daha sonra arter ve kanül etrafına üçüncü bir sütür sabitleyin, arter etrafındaki dikişlerin uzunluğunu kısaltın ve iyileşme dönemini takiben boyun yarasını daha fazla dikişle kapatın, duodenum kanülü yoluyla hayvana ilgi çekici bir formülasyon aşılayın.

Modelin uygulanmasından sonra grafikte gösterildiği gibi, lipofilik ilaç helal fanen, başarılı bir şekilde kanüle edilmiş sıçanlar için ortalama lenf akış hızı saatte 0.4 ila 1.3 mililitre arasındaydı. Bazı hayvanlarda, lenf akış hızı, başarısız kanüle edilmiş sıçanlarda başarılı lenf kanülasyonunu takiben yaygın olarak gözlenen bir fenomeni artırmadan önce, kanülasyonu takip eden ilk bir ila üç saat boyunca biraz daha düşüktü. Bununla birlikte, akış hızı, toplama süresi boyunca başarılı deneylerde görülenden önemli ölçüde daha düşük kalır.

Benzer şekilde, bu temsili deneylerde, trigliserit ve helal RIN'in kümülatif lenfatik taşınması, başarısız kanüle edilmiş hayvanlarda önemli ölçüde daha düşüktü. Başarılı kanüle edilmiş gruplarda ise, ortalama kümülatif halalan taşınması dozun% 15.1'i ve kümülatif trigliserit taşınması 10 saat boyunca 61 miligram idi. Bu temsili lipid taşıma deneyinde, lenfte taşınan uygulanan radyo etiketli eksojen lipid dozunun oranı %54 idi. Bu değerler daha önce gözlemlenenlerden önemli ölçüde farklı değildi.

Benzer bir formülasyon için, hem trigliseritlerin hem de ilaçların lenf zirvelerine taşınma hızı, birkaçı lipit ve ilaç uygulamasını takiben ve daha sonra başlangıç seviyelerine geri döner. Tipik ve bağırsak lenfatik lipid ve ilaç taşıma deneyleri gibi. Her bir zaman periyodunda lenfteki ilaç taşıma hızı, ilacın lenf içine taşınması sırasında trigliserit taşınması için bu sahneyi yansıtır.

Trigliserid açısından zengin lipoproteinler ile birlikte Bir kez ustalaştıktan sonra, herhangi bir zorlukla karşılaşılmazsa kanülasyon 30 dakika içinde tamamlanabilir. Bu prosedürü takiben, toplanan lenf içindeki bileşenler izole edilebilir ve işlevlerini, metabolizmalarını, klirenslerini veya eğilim modellerini doğrudan değerlendirmek için alıcı hayvanlara reinfüzyon gibi ek deneyler için kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, mezenterik lenf kanalını, karotis arteri ve duodenumu izole etme ve kanüle etme tekniklerini iyi anlamış olmalısınız.

Bu teknikleri kullanarak, hem ilaçların, lipitlerin hem de diğer faktörlerin bağırsaktan mezenterik lenflere ve in Viva'ya taşınmasını değerlendirebilmelisiniz.