Name: Bakteriler, Böcek Hücreleri ve Bitki Sistemleri: Rekombinant Protein Farklı Biofactories İfade Karşılaştırmalı Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Öğrenin, rekombinant protein üretimi için bakteri, böcek hücreleri ve bitki sistemlerini karşılaştırarak en uygun biyofabrika platformunu belirleyin. Bu yöntem verimlilik ve kalite optimizasyonuna yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, 'Moleküler pharming: Yüksek değerli proteinler için bir üretim platformu olarak bitkiler' FA0804 COST eylemi tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, araştırma amaçlı MagnICON vektörlerini sağladıkları için Dr. Anatoli Giritch ve Prof. Yuri Gleba'ya teşekkür eder.

<ol><li>Hampe, C. S., Hammerle, L. P., Falorni, A., Robertson, J., Lernmark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-directed+mutagenesis+of+K396R+of+the+65+kDa+glutamic+acid+decarboxylase+active+site+obliterates+enzyme+activity+but+not+antibody+binding%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Site-directed mutagenesis of K396R of the 65 kDa glutamic acid decarboxylase active site obliterates enzyme activity but not antibody binding.</a> FEBS Lett. 488 (3), 185-189 (2001).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+human+GAD65+accumulates+to+high+levels+in+transgenic+tobacco+plants+when+expressed+as+an+enzymatically+inactive+mutant%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biotechnol.+J%22%5BJournal%5D)">Recombinant human GAD65 accumulates to high levels in transgenic tobacco plants when expressed as an enzymatically inactive mutant.</a> Plant Biotechnol. J. 9 (8), 862-872 (2010).</li>
<li>Sambrook, J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3A+A+laboratory+manual.+Second+Edition%22">Molecular Cloning: A laboratory manual. Second Edition</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (1989).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+different+biofactories+for+the+production+of+a+major+diabetes+autoantigen%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of different biofactories for the production of a major diabetes autoantigen.</a> Transgenic Res. 23, 281-291 (2014).</li>
<li>Marillonnet, S., Giritch, A., Gils, M., Kandzia, R., Klimyuk, V., Gleba, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+planta+engineering+of+viral+RNA+replicons%3A+efficient+assembly+by+recombination+of+DNA+modules+delivered+by+Agrobacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+%28USA%29%22%5BJournal%5D)">In planta engineering of viral RNA replicons: efficient assembly by recombination of DNA modules delivered by Agrobacterium.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. (USA). 101 (18), 6852-6857 (2004).</li>
<li>Gleba, Y., Klimyuk, V., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+for+the+expression+of+proteins+in+plants%29%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Viral vectors for the expression of proteins in plants).</a> Curr. Opin. Biotechnol. 18, 134-141 (2007).</li>
<li>Engler, C., Kandzia, R., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+one+pot%2C+one+step%2C+precision+cloning+method+with+high+throughput+capability%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A one pot, one step, precision cloning method with high throughput capability.</a> PLoS One. 3 (11), (2008).</li>
<li>Xu, R., Li, Q. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol%3A+streamline+cloning+of+genes+into+binary+vectors+in+Agrobacterium+via+the+Gateway+TOPO+vector+system%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Protocol: streamline cloning of genes into binary vectors in Agrobacterium via the Gateway TOPO vector system.</a> Plant Methods. 4 (4), 1-7 (2008).</li>
<li>Fairbanks, G., Steck, T. L., Wallach, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoretic+analysis+of+the+major+polypeptides+of+the+human+erythrocyte+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Electrophoretic analysis of the major polypeptides of the human erythrocyte membrane.</a> Biochemistry. 10 (13), 2606-2617 (1971).</li>
<li>Falorni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioimmunoassay+detects+the+frequent+occurrence+of+autoantibodies+to+the+Mr+65%2C000+isoform+of+glutamic+acid+decarboxylase+in+Japanese+insulin-dependent+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Radioimmunoassay detects the frequent occurrence of autoantibodies to the Mr 65,000 isoform of glutamic acid decarboxylase in Japanese insulin-dependent diabetes.</a> Autoimmunity. 19, 113-125 (1994).</li>
<li>Hunt, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+gene+to+protein%3A+a+review+of+new+and+enabling+technologies+for+multi-parallel+protein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr.+Purif%22%5BJournal%5D)">From gene to protein: a review of new and enabling technologies for multi-parallel protein expression.</a> Protein Expr. Purif. 40 (1), 1-22 (2005).</li>
<li>Arzola, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+co-expression+of+post-transcriptional+silencing+suppressor+for+increased+in+planta+expression+of+a+recombinant+anthrax+receptor+fusion+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Mol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Transient co-expression of post-transcriptional silencing suppressor for increased in planta expression of a recombinant anthrax receptor fusion protein.</a> Int. J. Mol. Sci. 12 (8), 4975-4990 (2011).</li>
<li>Merlin, M., Gecchele, E., Capaldi, S., Pezzotti, M., Avesani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+recombinant+protein+production+in+different+biofactories%3A+the+green+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Res.+Int%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of recombinant protein production in different biofactories: the green perspective.</a> Biomed. Res. Int. 2014, 136419(2014).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+in+planta+expression+of+the+human+islet+autoantigen+glutamic+acid+decarboxylase+%28GAD65%29%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Improved in planta expression of the human islet autoantigen glutamic acid decarboxylase (GAD65).</a> Transgenic Res. 12 (2), 203-212 (2003).</li>
<li>Leuzinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+agroinfiltration+of+Plants+for+high-level+transient+expression+of+recombinant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Efficient agroinfiltration of Plants for high-level transient expression of recombinant proteins.</a> J Vis Exp. (77), (2013).</li>
</ol>

Yazarlar, bu makalenin yayınlanmasıyla ilgili herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan eder.

Bakteriyel hücreler, Bakulovirüs / böcek hücreleri ve bitkiler: Bu çalışmada üç farklı ortam, bir rekombinant insan proteininin sentezlenmesi için karşılaştırıldı. (- MagnICON ve pK7WG2 tabanlı - ve istikrarlı, yani geçici) bitki bazlı bir platform daha üç yaygın olarak kullanılan ifade teknolojilerini istismar tarafından araştırılmıştır. Bu deneyde, hGAD65mut için seçilen hedef protein önceden farklı sistemlerde 13 olarak ifade edildi ve üretim ve işlevselliği kolayca saptanabilir ve 14 ö...

Rekombinant proteinler, gelişmekte olan biyoteknoloji araçlarının yardımıyla heterolog ekspresyon sistemlerinde ticari olarak seri üretilir. Heterolog ekspresyon sistemini seçerken göz önünde bulundurulması gereken temel faktörler şunları içerir: protein kalitesi, işlevsellik, işlem hızı, verim ve maliyet.
Rekombinant protein alanında, farmasötik pazarı hızla genişlemektedir ve sonuç olarak günümüzde üretilen çoğu biyofarmasötik rekombinanttır. Proteinler, bakteri, maya, küf, memeli, bitki ve böceklerin hücre kültürlerinde ve ayrıca bitki sistemlerinde (kararlı veya geçici dönüşüm yoluyla) ve transgenik hayvanlarda ifade edilebilir; Her ekspresyon sisteminin kendine özgü avantajları ve sınırlamaları vardır ve her hedef rekombinant protein için optimal üretim sistemi dikkatli bir şekilde değerlendirilmelidir.
Bitki bazlı platformlar, güvenli ve uygun maliyetli rekombinant protein üretimi için geleneksel fermentör bazlı sistemlere önemli bir alternatif olarak ortaya çıkmaktadır. Her ne kadar aşağı akış işleme maliyetleri mikrobiyal ve memeli hücrelerininkilerle karşılaştırılabilir olsa da, bitkilerde ticari üretim için gereken daha düşük ön yatırım ve geniş alanlarda yetiştirme ile sağlanan potansiyel ölçek ekonomisi önemli avantajlardır.
Tip 1 otoimmün diyabetteki (T1D) majör otoantijenlerden biri olan insan glutamik asit dekarboksilazın (hGAD65) 65 kDa izoformunun ekspresyonu için bitkileri biyoreaktör olarak değerlendirdik. hGAD65, hem hastalığın ilerlemesini sınıflandırmak ve izlemek için büyük ölçüde bir belirteç olarak benimsenmiştir ve T1D'nin önlenmesindeki rolü şu anda klinik çalışmalarda araştırılmaktadır. Bu denemeler başarılı olursa, rekombinant hGAD65 için küresel talep önemli ölçüde artacaktır.
Burada, kofaktör PLP'yi (piridoksal-5'-fosfat) bağlayan lizin kalıntısının bir arginin kalıntısı (K396R)1 ile ikame edilmesiyle üretilen bir mutant olan hGAD65'in enzimatik olarak aktif olmayan karşılığı olan hGAD65mut'un ekspresyonuna odaklanıyoruz. 
hGAD65mut, immünojenisitesini korur ve bitki ve böcek hücrelerinde, vahşi tip muadili olan hGAD65'ten on kata kadar daha fazla birikir. hGAD65'in enzimatik aktivitesinin, bitki hücre metabolizmasına kendi sentezini baskılayacak kadar müdahale ettiği, enzimatik olarak aktif olmayan form olan hGAD65mut'un ise bitki hücrelerinde daha yüksek seviyelerde birikebileceği varsayılmıştır.
hGAD65mut'un ekspresyonu için, bitki biyoteknolojisinde yaygın olarak kullanılan farklı teknolojilerin kullanımı burada incelenmiş ve geleneksel ekspresyon platformlarıyla (Escherichia coli ve Baculovirus/böcek hücresi tabanlı) karşılaştırılmıştır.
Bu çalışmada, geleneksel ve bitki bazlı sistemlerden oluşan hGAD65mut ekspresyonu için geliştirilen rekombinant platformlar, proses hızı ve verimi ile nihai ürün kalitesi ve işlevselliği temelinde gözden geçirilmiş ve karşılaştırılmıştır.

<table><tbody><tr><td>Maya özü</td><td>Sigma</td><td>Y1333</td><td></td></tr><tr><td>Tripton</td><td>Formedium</td><td>TRP03</td><td></td></tr><tr><td>Agar Bakteriyolojik Sınıf</td><td>Aplikasyon</td><td>A0949</td><td></td></tr><tr><td>Sf-900 II SFM orta</td><td>Gibco</td><td>10902-088</td><td></td></tr><tr><td>Grace ' s Böcek Ortamı, takviyesiz</td><td>Gibco</td><td>11595-030</td><td></td></tr><tr><td>Cellfectin II Reaktifi</td><td>Invitrogen</td><td>10362-100</td><td></td></tr><tr><td>MS ortamı vitaminleri içeren</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>M0222</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>Bitki agar</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>P1001</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin sodyum</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>A0104</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Gentamisin sülfat</td><td>Duchefa Biyokimya</td><td>G0124</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Gansiklovir</td><td>İnvitrojen</td><td>I2562-023</td><td></td></tr><tr><td>Karbenikilin disodyum</td><td>Duchefa Biyokimya</td><td>C0109</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Kanamisin sülfat</td><td>Sigma</td><td>K4000</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Rifampisin</td><td>Duchefa Biyokimya</td><td>R0146</td><td>Toksik ve ndash; DMSO</td></tr><tr><td>Streptomisin sülfat</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0148</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Spektinomisin dihidroklorür</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0188</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (izopropil -&beta; -D-1-tiogalattopiranosid)</td> <td>Sigma</td><td>I5502</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>MES hidrat</td><td>Sigma</td><td>M8250</td><td></td></tr><tr><td>MgCl 2 </td> <td>Biyokimyasal</td><td>436994U</td><td></td></tr><tr><td>Asetosiringon</td><td>Sigma</td><td>D134406</td> DMSO Şırıngada <td>Toksik &ndash; 0.1 M stok</td></tr><tr><td>(1 ml)</td><td>Terumo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Fluka</td><td>63136</td><td></td></tr><tr><td>BAP (6-Benzilaminopurin)</td><td>Sigma</td><td>B3408</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>NAA (Naftalen asetik asit)</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>N0903</td><td>Tahriş Edici</td></tr><tr><td>Sefotaksim</td><td>Mylan Jenerikler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizma baz</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td>Tris-HCl tamponu HCl yapmak için pH'ı 1 N HCl ile ayarlayın</td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>H1758</td><td>Aşındırıcı</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S3014</td><td>1 M stok</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>PMSF (Fenilmetansülfonilflorür)</td><td>Sigma</td><td>P7626</td><td>Aşındırıcı, toksik</td></tr><tr><td>Üre</td><td>Sigma</td><td>U5378</td><td></td></tr> <tr><td>ve beta;-merkaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>M3148</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Ara-20</td><td>Sigma</td><td>P5927</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>DTT (Dithiothreitol)</td><td>Sigma</td><td>D0632</td><td>Toksik &ndash; 1 M stok, -20 °C'de saklayın; C</td></tr><tr><td>CHAPS</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>C1374</td><td>Toksik</td></tr><tr><td>Bitki proteaz inhibitörü kokteyli</td><td>Sigma</td><td>P9599</td><td>Çok fazla donmayın/çözmeyin</td></tr>, <tr><td>SDS (Sodyum dodesil sülfat)</td> <td>Sigma</td><td>L3771</td><td>Yanıcı, toksik, aşındırıcı ve% 10 stok</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Parlak Mavi R-250</td><td>Sigma</td><td>B7920</td><td></td></tr><tr><td>İzopropanol</td><td>Sigma</td><td>24137</td><td>Yanıcı</td></tr><tr><td>Asetik asit</td><td>Sigma</td><td>27221</td><td>Korozif</td></tr><tr><td>Anti-Glutamik asit dekarboksilaz 65/67</td><td>Sigma</td><td>G5163</td><td>Çok fazla dondurmayın / çözmeyin</td></tr>: <tr><td>Yaban turpu peroksidaz (HRP) konjuge anti-tavşan antikoru</td><td>Sigma</td><td>A6154</td> Çok <td>fazla dondurmayın / çözmeyin</td></tr>, <tr><td>Sf9 Hücreleri Ömrü</td><td> Teknolojiler</td><td>11496</td><td></td></tr><tr><td>BL21 Yetkili E. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C2530H</td><td></td></tr><tr><td>Protein A Sefaroz</td><td>Sigma</td><td>P2545</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü plakaları</td><td>Sigma</td><td>CLS3516</td><td></td></tr><tr><td>Radyo İmmüno-Test kiti</td><td>Tekno Genetik</td><td>12650805</td><td>Radyoaktif malzeme</td></tr></tbody></table>

bakteriler, böcek hücreleri ve bitki sistemleri: rekombinant protein farklı biofactories İfade karşılaştırmalı analizi

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

Bitki esaslı sistemler, yüksek kaliteli, biyolojik olarak aktif ürünler, esnek ve düşük maliyetli bir üretim için bunların iyi belgelenmiş potansiyel bir sonucu olarak, rekombinant proteinlerin üretimi için değerli bir platform olarak kabul edilir. Bu çalışmada, geçici ve stabil olarak bitki bazlı ekspresyon sistemleri, geleneksel fermentasyon cihazı dayalı hücre kültürlerinde (bakteriyel ve böcek) ve hedef insan yeniden birleştirici proteinin ifadesini karşılaştırıldı. Her platformda için, biz set-up, optimizasyon ve üretim sürecinin uzunluğu, nihai ürün kalitesi ve verimi açıklanan ve bizim seçtiğimiz hedef rekombinant protein için özel geçici üretim maliyetlerini, değerlendirildi. Genel olarak, sonuçlar bakteri bağlı erimez içerik korları dahilinde birikmesi, hedef proteinin üretimi için uygun olduğunu göstermektedir. Öte yandan, bitki bazlı sistemler, çok yönlü platformlar t&#39;ninşapka Bakulovirüs / böcek hücre sistemine daha düşük maliyetlerle seçilen proteinin üretimine izin verir. Özellikle, istikrarlı transgenik hatları nihai ürünün en yüksek verim ve geçici ifade bitkiler hızlı süreç geliştirme görüntülenen. Ancak, tüm rekombinant proteinleri bitki-temelli sistemlerde yararlanabilirler, ancak burada anlatıldığı gibi iyi üretim platformu, bir vaka-by-case yaklaşımı ile ampirik olarak tespit edilmelidir.

Farklı üretim sistemlerinde bir yeniden birleştirici hedef proteinin heterolog ekspresyonu için bir deney tasarımı burada tarif edilmektedir. ilk odak Her sistemde hedef proteinin ekspresyonu için uygun koşullar kurarak farklı düzlemlerin kurulum oldu. Hedef protein, hGAD65mut ekspresyonu, üçlü E. indüklenmiştir E. coli kültürleri. 37 ° C&#39;de ifade 3 saat sonra, bakteri hücreleri santrifüjleme ile toplandı ve sonikasyon ile parçalanır. Bir santrifüjleme kademesinden sonr...

Bu çalışmada, hedef insan rekombinant proteininin farklı üretim platformlarındaki ekspresyonu karşılaştırıldı. Geleneksel fermentör bazlı kültürlere ve bitkilere odaklandık, her bir sistemin kurulumunu açıkladık ve rapor edilen sonuçlara dayanarak her platform için doğal sınırları ve avantajları vurguladık.

Bakteriler, Böcek Hücreleri ve Bitki Sistemleri: Rekombinant Protein Farklı Biofactories İfade Karşılaştırmalı Analizi

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...

a-comparative-analysis-recombinant-protein-expression-different

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Post-insan genomik dönemde, yerli konformasyonlar rekombinant protein durumu, yapısal, işlevsel ve tedavi araştırma ve geliştirme için çok önemlidir. Burada, bir test-ve rekombinant proteinlerin çeşitli üretmek için kullanılan insan embriyonik böbrek hücreleri 293T büyük ölçekli proteini ifade sistemi açıklamaktadır.

İnsan Hücrelerden salgılanan Proteinlerin Üretimi için Kullanışlı ve Genel Anlatım Platformu

Bitkiler Geçerli ifade paradigmalar göre daha daha fazla, ölçeklenebilir bir maliyet-etkin ve emniyetli olan, bir ticari bir ölçekte ilgili sayısız farmasötik bir proteinlerin bölgesinin üretimi için bir Roman sistem mü tavsiye edeceksiniz. Bu çalışmada, biz içeren hedef-gen tanıtmak için bir basit ve kullanışlı, henüz ölçeklenebilir bir yaklaşım...

Rekombinant Proteinlerin Yüksek-düzey Geçici İfade için Bitkiler Verimli Agroinfiltration

Biyotinile füzyon proteinleri geliştirerek araştırma çeşitli alanlarda birçok potansiyel uygulamalar vardır. Yeniden birleştirici protein mühendisliği özel olarak tasarlanmış proteinlerin yüksek verim sağlayan, düşük maliyetli olan bir düz ön işlemdir.

Sinir doku rejenerasyonu için Çözünür ve Çözünmeyen Biyotinile Proteinlerin ifade, izolasyon ve saflaştırılması

Memeli sistemleri tarafından rekombinant proteinlerin ekspresyonu, yapısal biyoloji için protein kompleksleri üretmek için çekici bir yöntem haline geliyor. Burada, yapısal çalışmalar için protein komplekslerini saflaştırmak için süspansiyonda yetiştirilen memeli hücrelerini kullanan basit ama oldukça verimli bir ekspresyon sistemi sunuyoruz.

Bir Roman ve Erişilebilir Yaklaşım: Yapısal HEK 293F Askı Hücreleri Biyoloji Rekombinant Protein

Protein ko-ekspresyonu, protein komplekslerinin in vitro olarak yeniden yapılandırılmasına güçlü bir alternatiftir ve in vivo biyokimyasal ve genetik testlerin gerçekleştirilmesinde yardımcı olur. Burada, protein kompleksleri elde etmek ve hücrelerin mutasyon frekansını ayarlamak için Escherichia coli'de protein ko-ekspresyonunun kullanımını rapor ediyoruz.

Protein birlikte-ifade edilme yönlü Faydalar<em&gt; Escherichia coli</em

Ökaryotik proteinlerin uygun translasyon sonrası modifikasyonla laboratuvar ölçeğinde üretimi önemli bir engel teşkil etmektedir. İşte bir memeli ekspresyon sistemi kullanarak protein ekspresyonu için hızlı kuruluş ve geri dönüşe sahip sağlam bir protokol. Bu sistem, seçici amino asidi, proteinlerin seçici etiketlenmesini ve glikan bileşiminin küçük molekül modülatörlerini destekler.

Süspansiyon HEK293 hücrelerinin kısa süreli transfection ile Rekombinant İnsan Proteinlerinin Yüksek Verimli İfadesi

Nonlytic böcek hücresi ifade sistemleri üretim, selüler trafik / lokalizasyonu ve rekombinant protein, fonksiyonel analiz için atıl edilir. Burada, ticari olarak temin edilebilen bir lepidopteran hücresi çizgilerinde ifade vektörleri ve daha sonra geçici protein sentezlenmesinin üretilmesi için yöntemleri tarif eder. Hücre içi fluoresan işaretleyici proteinleri ile Bemisia tabaci aquaporins eş yerleşimi de sunulmuştur.

Kültürlü Böcek Hücrelerinde Geçici İfade ve Rekombinant Proteinlerin Hücresel Yerelleştirme

Bu el yazması mikrobiyal yetiştirme ortamının terzi tasarımı için genel bir yaklaşımı açıklar. Bu güvenilirlik ve sıvı ortam işleme hızı artırmak için laboratuvar robot tarafından desteklenen yeterli ekimi verimi için deneysel tasarım ve microbioreactor teknoloji Kriging tabanlı birleştiren yinelemeli bir iş akışı tarafından etkin hazırlık.

Otomatik Microbioreactor teknolojisini kullanarak Contegra Protein üretim duruma getirilmesi için genel iletişim kuralı

Yabancı proteinler ifade veya anti-apoptotik etkinliğini potansiyel yabancı proteinler ve onların kesilmiş amino değerlendirmek için kullanılabilir bir ısı şok kaynaklı protein ifade sistemi (pDHsp/V5-O'nun/sf9 hücre), bu iletişim kuralını açıklar asitler böcek hücrelerinde.

Geçici ifade, yabancı genlerin Protein fonksiyonel tahlil için böcek hücrelerindeki (sf9)

Burada, bitki salgılanan proteinler için protein kristalizasyon büyük miktarlarda üretmek için böcek hücre ve baculovirus protein ifade sistemi kullanan iletişim kurallarını mevcut. Bir baculovirus ifade vektör GP67 ya da böcek hemolin sinyal peptid bitki protein salgılanması ifade böcek hücrelerinde ile değiştirildi.

Bitki proteinleri böcek hücrelerinde salgılanan Baculovirus ifade vektörel çizimler oluşturmak için değiştirme

Baculovirüs ekspresyon vektör sistemi (BEVS), biyokimyasal, biyofiziksel ve yapısal çalışmalarda kullanılacak protein arginin metiltransfenazlarının (PRMT) ekspresyon taraması ve üretimi için sağlam bir platformdur. Milligram miktarda malzeme, ökaryotik bir ifade platformu gerektiren PRMT'lerin ve diğer ilgi proteinlerinin çoğunluğu için üretilebilir.

Baculovirüs Ekspresyon Vektör Sistemi Kullanılarak Rekombinant PRMT Proteinlerinin Üretimi

Öğrenin, rekombinant protein üretimi için bakteri, böcek hücreleri ve bitki sistemlerini karşılaştırarak en uygun biyofabrika platformunu belirleyin. Bu yöntem verimlilik ve kalite optimizasyonuna yardımcı olur.

Bakteriler, Böcek Hücreleri ve Bitki Sistemleri: Rekombinant Protein Farklı Biofactories İfade Karşılaştırmalı Analizi

Daha fazla video keşfet