Name: Bioconjugation ve radiosynthesis 89, Zr-DFO-etiketli antikorlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Öğrenin, zirkonyum-89 ile DFO etiketli radyoimmünokonjugat sentezleme ve PET görüntüleme yöntemlerini. Bu protokol, antikorların biyokonjugasyonu, radyosentez ve kanser araştırmalarında hedefe yönelik görüntüleme uygulamalarını kapsar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar yararlı konuşmalar Prof. Thomas Reiner, Jacob Houghton, Dr. Serge Lyaschenko teşekkür ederim.

Tarif in vivo hayvan deneylerinde tüm onaylanmış protokole ve Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) etik kurallar altında göre yapıldı. J591 için DFO-NCS 1. Konjugasyon <ol><li> 1.7 ml mikrosantrifüj tüpü içinde, 1 x fosfat tamponlu tuzlu çözelti (pH 7.4) ya da 0.5 M HEPES tampon (pH 7.4) ya da 1 ml J591 bir 2-5 mg / ml bir solüsyon hazırlanır. </li><li> 5-10 mM (3,8-7,6 mg / ml) arasında bir konsantrasyonda kuru DMSO içinde bulunan DFO-NCS ile çözülmüştür. Sonikasyon veya girdap tamamen çözünmesini kolaylaştırmak için iyice çözelti. </li><li> Az miktar 0.1 M Na-2 (&lt;10 | il) CO 3 eklenerek 8,8-9,0 için J591 çözeltinin pH ayarlayın. </li><li> Antikor çözeltisi doğru pH değerinde sonra, çift işlevli çelatör ve bir 3-4 kat molar fazlalık karşılık gelen DFO-NCS bir çözelti hacminin ilave edin. <ol><li> Sınavaple, bir 2 mg / ml J591 antikor çözeltisi, 1 ml (13.3 nmol J591) için 10 mM (7.6 mg / ml) DFO-NCS çözeltisi (40.4 nmol DFO-NCS), 4-5 ul ekle. Nihai sulu reaksiyon karışımı içinde DMSO miktarının% 2 v / v geçmemelidir. </li></ol></li><li> 350 rpm&#39;de çalkalanarak bir ısıtma bloğu üzerinde 37 ° C&#39;de 30 dakika boyunca reaksiyon inkübe edin. </li><li> 37 ° C&#39;de 1 saat sonra, yıkama sıvısı olarak 0.5 M HEPES tampon (pH 7.4) kullanılarak, 50,000 molekül ağırlığı kesmesi olan bir önceden paketlenmiş tek boyut dışlama tuz giderme kolonu kullanılarak elde edilen immünokonjugat temizler. Bu adım tamamlandıktan J591-DFO yapısının bir 2 ml solüsyon verecek. </li><li> UV-Vis spektrofotometre üzerinde inşa J591-DFO konsantrasyonu ölçün. </li><li> Yapının daha yüksek bir konsantrasyonu istendiğinde, 50,000 molekül ağırlığı kesmesi olan bir santrifüj filtre birimi kullanılarak J591-DFO çözelti konsantre edilir. </li><li> Karanlıkta -20 ° C&#39;de tamamlanan J591-DFO immünokonjügenin çözümü saklayın. </ol> 89 Zr 2. Radyo-etiketlenmesi J591-DFO DİKKAT: protokolün Bu adım işlenmesini ve radyoaktivite manipülasyonu içerir. Bu adımları gerçekleştirmeden veya ev kurumun Radyasyon Güvenliği Bölümü ile danışmalısınız radyoaktivite araştırmacılar ile başka bir iş yapmadan önce. Mümkün olan tüm adımlar iyonize radyasyona maruziyeti en aza indirmek için önlemler alınmalıdır. NOT: Uygun radyokimyasal not tutma adına, örnekteki radyoaktivite miktarı, bir doz kalibratörü kullanılarak ölçüldü ve kaydedildi edilmelidir aşağıdaki protokol Adımlar 2,2-2,13 sonra. Bu radyokimyasal verim ve belirli faaliyetlerin doğru kararlılıkla yardımcı olacaktır. <ol><li> 0.5 M HEPES tamponu, pH 7.5, 200 ul J591-DFO 0.5-2.0 mg ihtiva eden bir çözelti hazırlayın. </li><li> Hacmi Pipet &lt;2 ml&#39;lik plastik bir vidalı kapaklı mikrosantrifüj tüpü içine 1,0-6,0 mCi (37-222 MBq) karşılık gelen (tipik olarak 1.0 M oksalik asit bulunur) destek&gt; 89 Zr 4+ stok çözeltisi. 1.0 M oksalik asit kullanılarak toplam 300 ul bu çözümün ses seviyesini ayarlayın. </li><li> 1,0 M Na-2 CO 3 ile 6,8-7,5 89 Zr 4+ çözeltinin pH ayarlayın. Istenen pH&#39;ı elde etmek üzere bir baz alikotları daha küçük (&lt;10 ul) ekleyin daha sonra 89 Zr 4+ çözeltisine CO 3 1.0 M Na-2 250 ul ekleyerek başlayın ve. </li><li> Aşama 2.1&#39;de elde J591-DFO çözeltisine pH ayarlı 89 Zr 4+ solüsyonunun arzu edilen miktarı ekleyin. </li><li> Bu 6,8-7,5 istenen aralık içine düşmesi için emin olmak için, radyo-etiketleme, reaksiyon karışımının pH değerini kontrol edin. </li><li> 350 rpm&#39;de çalkalanarak bir ısıtma bloğu üzerinde oda sıcaklığında 60 dakika süre ile, radyo-etiketleme reaksiyonu inkübe edin. </li><li> Kuluçkadan 60 dakika sonra, uçucu ölçmekRadyo-TLC kullanarak reaksiyonun ürünü iolabeling. <ol><li> Bu amaçla, bir silis emdirilmiş TLC şeridinde, radyo-etiketleme, reaksiyon karışımının 1 uCi nokta. 50 mM DTPA (pH 5.5) bir yıkama sıvısı kullanılarak TLC çalıştırmak, kısım kurumasını bekleyin ve bir radyo-TLC tarayıcı kullanarak TLC şerit analiz. 89 Zr 4+ kökenli görünecektir J591-DFO yapı bağlı (R &lt;Zr 89 serbest 4+ katyonlar DTPA ile şelatlı edilecek ve çözücü ön (R f ile Zehir olurken 0.1),&gt; 0.9) f. </li><li> , Radyokromatogramdır entegre eğrinin altındaki toplam alan ile 0,0-0,1 f R eğri altında kalan alan bölünmesi ve 100 ile çarpılması ile reaksiyonun Radyoetiketleme verimi,. </li></ol></li><li> Radyoetiketleme verimi, yeterli (tipik olarak&gt; 2 mCi / mg teorik spesifik aktivite) olması durumunda, 50 mM DTPA, pH 5.5, 5 ul ile reaksiyonun söndürülmesi. </li><li> Elde immünokonjugat usi arındırınng, 5 mg / mL gentisik asit ile 5 mg / mL gentisik asit veya 0.25 M sodyum asetat (pH 5.5) ile% 0.9 steril tuzlu su ya da bir yıkama sıvısı kullanılarak bir 50,000 molekül ağırlığı kesmesi olan bir önceden paketlenmiş tek boyut dışlama kullanımlık tuz alıcı sütun . Bu adım tamamlandıktan 89, Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugate bir 2 ml solüsyon verecek. </li><li> Aşama 2.7 de tarif edildiği gibi saflaştırmadan sonra, radyo-TLC kullanarak 89, Zr-DFO-J591 radyokimyasal saflığının doğrulanması. </li><li> Ilk olarak saflaştırılmış 89, Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugate izole radyoaktivite miktarına göre antikor çözeltisine ilave etkinlik miktarını bölerek reaksiyonun tüm Radyoetiketleme verimi,. </li><li> Radyoetiketleme reaksiyonunda DFO-J591 ilk kütle itibariyle arındırılmış 89, Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugate izole aktivitesi miktarının bölünerek nihai spesifik aktivite hesaplanır. </li><li> Daha yüksek bir konsantrasyonu, arzu edildiği takdirde, inci konsantreE 89 50000 molekül ağırlığı kesmesi olan bir santrifüj filtre birimi kullanılarak, Zr-DFO-J591 çözeltisi. NOT: Son arıtma aşamasında kullanılan gentisik asit nedeniyle radyoliz antikorun zararın en aza düşürülmesi için kullanılan bir radyo-koruyucu olduğu 46 da 4 ° C &#39;de en fazla 48 saat için 89, Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugate depolanması. mümkün, bu tavsiye edilmez. Radioimmunoconjugate saklanabilir ise, hipoklorit aracılı radyoliz riskini en aza indirmek amacıyla, depolama tamponu olarak, 5 mg / mL gentisik asit 0.25 M sodyum asetat (pH 5.5) kullanın. 47 </li></ol> 89 Zr-DFO-J591 ile Vivo PET Görüntüleme 3. DİKKAT: Protokol Bölüm 2&#39;de olduğu gibi, protokol, bu adımı işlenmesini ve radyoaktivite manipülasyonu içerir. Bu adımları gerçekleştirmeden önce araştırmacılar kendi kurumun Radyasyon Güvenliği Bölümü ile başvurmalısınız. Tüm possible adımlar iyonize radyasyona maruziyeti en aza indirmek için önlemler alınmalıdır. <ol><li> Erkek atimik çıplak farelerde deri altından, 5 x 10 6 LNCaP prostat kanser hücreleri implant ve bu (3-4 hafta, aşılamadan sonra) 100-150 mm3 xenograft büyümeye izin verir. 44 &#39; </li><li> % 0.9 steril tuzlu su içinde 1.0 mCi / ml &#39;lik bir konsantrasyona kadar 89, Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugate seyreltin. </li><li> 89, Zr-DFO-J591 çözeltisi (200 uCi, 7.4 MBq) 200 ul enjekte edilir. Nakil doku taşıyan kobay farelerinin yanal kuyruk damarı içine 48 </li><li> Istenen görüntüleme zaman noktasında (örneğin, 12, 24, 48, 72, 96 ya da 120 saat sonra enjeksiyon), bir% 2 izofluran ile anestezi fare: oksijen gazı karışımı. </li><li> Küçük hayvan PET tarayıcı yatakta farenizle ve% 1 izofluran kullanarak tarama sırasında anestezi korumak: Oksijen gazı karışımı. Tarayıcı yatakta hayvan yerleştirerek önce, ayak-tutam yöntem ve Uyg kullanarak anestezi doğrulamakanestezi sırasında kurumasını önlemek için fare gözleri y oftalmik merhem. 49 </li><li> 350-700 keV enerji penceresi ve 6 nsaniye bir tesadüf zamanlama penceresini kullanarak 40 milyon tesadüf olaylar minimum statik tarama yoluyla fare PET veri elde. 50 </li><li> Görüntü yakalanmasını tamamladıktan sonra, gözetimsiz fare bırakmayın ve bilinci kazanmış kadar diğer fareler ile bir kafese koymayın. </li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Inşaat, Radyoetiketleme ve görüntüleme 89 Zr-DFO-etiketli radioimmunoconjugates oldukça basit prosedür genellikle iken, bu sürecin her aşamasında akılda birkaç önemli hususlar tutmak önemlidir. Örneğin, diyelim prosedürün konjugasyon aşamasında endişe en muhtemel nedeni birleşme reaksiyonu sırasında antikorun toplanmasıdır. Bu sorun, genellikle DFO-NCS stok çözeltisi ilave edildikten sonra birleşme reaksiyonu zayıf bir karıştırma ürünüdür. Bu durumda, DFO-NCS homojen olmayan dağılımı, yerel reaksiyon, aşırı y...

Dolayı belirgin bir duyarlılık, afinite ve seçicilik için, antikorlar çok kanser hücrelerine radyoizotoplar verilmesi için gelecek vaat eden vektörler olarak kabul edilmiştir. Ancak, pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme başvurularının kendi etiketleme için uygun bir pozitron yayan radyoizotop eksikliği engel olmuştur. Radioimmunoconjugates tasarımında en kritik hususlar 1-3 birisi fiziksel çürüme eşleştirme yarı antikor in vivo farmakokinetik radyoizotop hayatı. Daha özel olarak, antikorlar, çoğu zaman, nispeten uzun, çok günlük biyolojik yarılanma ömürlerine sahiptir ve bu nedenle benzer fiziksel yarı ömrü olan radyoizotoplar ile işaretlenmelidir. PET görüntüleme uygulamaları için, antikorlar geleneksel 64 Cu (t 1/2 = 12.7 saat), 86 Y (t 1/2 = 14.7 saat), ya da 124 I (t 1/2 = 4.18 d). 4 ile radyoaktif işaretli olmuştur, 5 Bununla birlikte, her birBu radyoizotoplar klinik görüntüleme için uygunlukları engel önemli sınırlamalar sahiptir. 86 Y ve 64 Cu ile etiketlenmiş radioimmunoconjugates Klinik öncesi araştırmalarda umut verici kanıtlamış olmakla birlikte, her iki izotoplar insanlarda görüntüleme için etkili olduğu için çok kısa olan bir fiziksel yarılanma ömürlerine sahiptirler. 124 I, aksine, bir hemen hemen ideal fiziksel bir yarı ömre sahip antikorlar ile görüntüleme, ama pahalı ve nispeten düşük çözünürlüklü klinik görüntüleri neden optimal çürüme özelliklere sahiptir. Bundan başka, 124-işaretli radioimmunoconjugates, in vivo olarak tümör-zemin aktivitesi oranını düşürebilir bir işlem ite tabi olabilir. 6,7 Sürücü 64 Cu, 86 Y yerini bir pozitron yayan radyoizotop bulmak ve radioimmunoconjugates 124 Ben 89 Zr-etiketli antikorlar araştırma son dalgalanma körükledi. 8-12 T89 Zr habercisi de nedeni basittir: radiometal tanısal PET radioimmunoconjugates kullanım için ideale yakın kimyasal ve fiziksel özelliklere sahip 13 89 Zr 89 Y (p, n) bir kullanan bir siklotron 89 Zr reaksiyonu vasıtasıyla üretilir. ticari olarak temin edilebilen ve% 100 doğal olarak bol miktarda 89 Y, hedef. 14,15 radiometal,% 23 pozitron verim vardır 78.4 saatlik bir yarılanma ömrü ile azalır ve 395,5 keV (Şekil 1) nispeten düşük enerji pozitronlar neşreden. 13,16,17 Bu 89 Zr, aynı zamanda yüksek bir enerji yayar ki dikkat etmek önemlidir, 909 keV γ-ray% 99 verim ile. Bu emisyon yayılan 511 keV fotonlar ile enerjik karışmaz iken, ulaşım, taşıma, ve dozimetrisi ile ilgili ekstra dikkate gerektirir. Bu uyarı rağmen, bu çürüme özellikleri sonuçta 89 Zr daha olumlu bir h sahip değil sadece anlamınaCu 86 Y ve 64 den antikorlar ile görüntüleme için alf-hayat değil, aynı zamanda yüksek 687 ve 975 keV enerjilerin yanı sıra 100-150 keV içinde enerjiler ile fotonların sayısı ile pozitron yayan, hangi 124 Ben daha yüksek çözünürlüklü görüntüler üretebilir 511 keV pozitron oluşturulan fotonlar. 13 Dahası, 89 Zr onun radyoaktif iyot meslektaşı daha etkili de tümörlerde, işlemek için daha güvenli üretmek için daha az pahalı ve residualizes olduğunu. 89 Zr 18,19 potansiyel bir sınırlama yok ki terapötik isotopologue, örneğin, 86 Y (PET) vs 90 Y (tedavi). Bu onların tedavi meslektaşları için dozimetrik izciler olarak istihdam edilebilir kimyasal özdeş, vekil görüntüleme ajanları yapımını engeller. O dedi, araştırmalar 89 Zr-etiketli antikorlar 90 Y- ve 177 Lu-etiketli immünoeşlenikler görüntüleme suretler olarak potansiyeli var olduğunu göstermektedir.20,21 Kimyasal bir bakış, bir grup IV metal, 89 Zr, sulu çözelti içinde bir 4 katyon olarak bulunur. Zr 4+ iyon yüksek, nispeten büyük (etkin iyonlu yarıçapı = 0.84 A) doldurulur ve bir &quot;sert&quot; katyon olarak sınıflandırılabilir. Bu nedenle, bu sekiz sabit anyonik oksijen donör kadar taşıyan ligandlar için bir tercih sergilemektedir. Kolayca 89, Zr-etiketli radioimmunoconjugates en sık kullanılan kenetleme maddesi desferrioksamin olan (DFO), üç hidroksamat grubu taşıyan bir siderofor türetilmiş asiklik şelatör. Ligand stabil biyolojik ilgili pH seviyelerinde oda sıcaklığında hızlı ve temiz Zr 4+ katyon koordinatları ve ortaya çıkan Zr-DFO kompleksi tuz, kan serumunda birden fazla gün boyunca sabit kalır ve tam kan. 22 Hesaplamalı çalışmalar kuvvetle öneririz DFO metal merkez üç neut koordinatlanmış olan Zr 4+ bir hexacoordinate kompleks oluşturmasıRal ve ligand üç anyonik oksijen donör olarak, iki ekzojen su ligandlar (Şekil 2). 23,24 89 Zr-DFO çekimleri iskele istihdam radioimmunoconjugates in vivo davranış genellikle mükemmel olmuştur. Bununla birlikte, bazı durumlarda, görüntüleme ve akut biyolojik dağılım çalışmaları 89, Zr-etiketli antikorlar ile enjekte edilen farelerin kemik yükseltilmiş aktivite düzeylerini Zr 4+ katyon, daha sonra in vivo olarak kenetleme salınır ve 89 osteophilic mineralleşir düşündürmektedir verileri ortaya koymuştur Kemikte. sekiz oksijen donör literatürde adı geçen 25 en son, yeni 89 Zr 4+ kenetleme geliştirilmesine yönelik araştırmalardan bir dizi özel olarak, şu anda Bununla birlikte, 24,26,27. ligandları DFO en yaygın olarak kullanılan şelatördür 89 yılında bir farkla radioimmunoconjugates Zr-etiketli. Farklı bir dizibioconjugation stratejileri bioorthogonal tıklama kimya, antikorda sistein ile inşa tiol-reaktif DFO reaksiyonu ve ester taşıyan DFO antikorda bir lisin ile inşa aktif reaksiyonunu da dahil olmak üzere antikorlar DFO eklemek için kullanılmaktadır. 4,28- 30 kolayca en yaygın strateji, ancak, 22 sağlam Bu ticari olarak temin edilebilen iki fonksiyonlu kenetleyici. DFO, DFO-NCS bir izotiyosiyanat taşıyan bir türevinin kullanılması ile (Şekil 2) olan ve güvenilir bir şekilde bir lisin ile sabit, kovalent tioüre bağlar oluşturan olan antikoru (Şekil 3). Son birkaç yıl içinde, 89, Zr-DFO-işaretli radioimmunoconjugates çok çeşitli literatürde bildirilmiştir. Klinik öncesi araştırmalar gibi CD105-hedefleme T gibi cetuximab, bevacizumab ve trastuzumab daha ezoterik antikorların daha iyi bilinen arasında değişen antikorlar içeren, özellikle bol olmuşturRC105 ve 5A10 sPSA hedefleme. 30-36 Daha yakın zamanlarda, 89, Zr-DFO etiketli antikorlar kullanılarak erken faz klinik çalışmaların az sayıda literatürde ortaya çıkmıştır. 89 Zr-DFO-CMAB U36, 89, Zr-DFO-ibritumomab tiuksetan ve 89 Zr-DFO-trastuzumab. 21,32,37 Ayrıca, 89 ile diğer klinik çalışmaların bir dizi istihdam Özellikle, Hollanda&#39;da gruplar yayınladık çalışmalar Zr-etiketli radioimmunoconjugates prostat kanseri görüntüleme için PSMA hedefleme 89 Zr-DFO-J591 ve meme kanseri görüntüleme için HER2-hedefleme 89 Zr-DFO-trastuzumab ile Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi&#39;nde burada soruşturma da dahil olmak üzere, halen devam etmektedir. 23, Radyo-etiketli antikorlar, en çok 89, Zr-etiketli radyofarmasötik kalır Buna ek olarak, 30, radiometal da artan bir peptit, protein, ve nano malzemelerin de dahil olmak üzere başka vektörler ile kullanılmıştır. 38-43 </sup&gt; Bu 89 Zr-DFO etiketleme metodolojisi modülerlik muazzam bir varlıktır. biyobelirtecin hedefleme antikorların repertuar sürekli genişleyen ve bu yapıları kullanarak in vivo PET görüntülemede performans ilgi hızla büyüyor olmasıdır. Sonuç olarak, biz daha standart uygulamalar ve protokollerin geliştirilmesi alanını yararlanabilir inanıyorum. DFO-NCS konjugasyon ve 89 Zr Radyoaktif için mükemmel bir yazılı deneysel protokol zaten Vosjan tarafından yayımlanmış, vd. 22 Biz bu işin tarafından sağlanan görsel gösteri daha bu tekniklerin yeni müfettişler yardımcı olabilir hissediyorum. Eldeki Protokolde, prostat spesifik membran antijeni hedefleyen antikor J591 göstermek için bir model sistem olarak kullanılır (1) bir antikora DFO-izotiyosiyanat çift işlevli çelatör bioconjugation, 89 (2) radiosynthesis ve arıtma Zr-DFO mAb radioimmunoconjugate,ve (3) &#39;de bir kanser sıçangil modelinde 89, Zr-DFO mAb radioimmunoconjugate in vivo PET görüntülemesi. 23,44,45

<table><tbody><tr><td>p-SCN-Bn-DFO</td><td>Makrosiklik</td><td>B-705</td><td>-80 derecede saklayın; C</td></tr><tr><td>[89Zr]Zr-oksalat</td><td>Çeşitli, Perkin-Elmer</td><td></td> dahil <td>Dikkat: Radyoaktif malzeme</td></tr><tr><td>PD-10 Tuz Giderme Sütunları</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0851-01&nbsp;</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-4 Santrifüj Filtre Üniteleri</td><td>EMD Millipore</td><td>UFC805024</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>Silika Jel Emprenyeli RadioTLC Kağıt</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td>0,5 cm genişliğinde şeritler halinde kesin</td></tr></tbody></table>

bioconjugation ve radiosynthesis<sup&gt; 89</sup&gt;, zr-dfo-etiketli antikorlar

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

antikorların olağanüstü afinite, özgüllük ve seçicilik onlara tümör hedefli PET radyofarmasötikler için olağanüstü cazip vektörleri yapmak. Dolayı çok günlük biyolojik yarı-ömrü, antikorlar nispeten uzun fiziksel bozunma yarı ömürleri ile pozitron yayıcı radyonüklitler ile etiketlenmiş olması gerekir. Geleneksel olarak, pozitron yayan izotoplar 124 I (t 1/2 = 4.18 d), 86 Y, (t 1/2 = 14.7 saat) ve 64 Cu (t 1/2 = 12.7 saat) için antikorlar etiketlemek için kullanılmıştır PET görüntüleme. Daha yakın zamanlarda, ancak, saha antikor bazlı PET görüntüleme ajanları pozitron yayan radiometal 89 Zr kullanımında bir artışa şahit olunmaktadır. Fiziksel bir yarısını sahip gibi 89 Zr, immünoeşlenikler ile PET görüntüleme için neredeyse ideal bir radyoizotop antikorların in vivo farmakokinetikleri ile uyumlu olan ve nispeten düşük bir enerjini yayar Ömrü (t 1/2 = 78.4 saat)yüksek çözünürlüklü görüntüler üretir rgy pozitron. Bundan başka, antikorlar doğrudan, siderofor türetilmiş kenetleme maddesi desferrioksamin (DFO) ile 89 Zr ile etiketlenebilir. Bu protokol, prostat spesifik membran antijeni hedefleyen antikor J591 göstermek için bir model sistem olarak kullanılır (1) bir antikor, (2) radiosynthesis ve 89 Zr- saflaştırılması kadar izotiyosiyanat DFO çift işlevli çelatör bioconjugation Kanser bir murin modelinde 89, Zr-DFO mAb radioimmunoconjugate ile DFO mAb radioimmunoconjugate, ve (3) &#39;de in vivo PET.

Bu protokol antikora DFO-NCS konjugasyon ilk adım genellikle oldukça sağlam ve güvenilir. Genel olarak, saflaştırılmış, kenetleme maddesi ile modifiye edilmiş immüno&gt;% 90 verimle elde edilebilir ve ilk birleşme reaksiyonu içinde bulunan DFO-NCS 3 mol eşdeğeri kullanılarak bir derece-of-etiketleme, yaklaşık 1,0-1,5 arasında kenetleme DFO verecek / mAb. Işlemin 89, Zr, radyo-etiketleme ve saflaştırma aşamaları aynı şekilde basittir. Yukarıdaki protokole belirtilen konsantrasyonlarda&gt;% 80, radyo-etiketleme...

Çok günlük radyoaktif yarılanma ömrü ve uygun bozunma özellikleri nedeniyle, pozitron yayan radyometal 89Zr, PET görüntüleme için antikor bazlı radyofarmasötiklerde kullanım için son derece uygundur. Bu protokolde, 89Zr işaretli antikorun biyokonjugasyonu, radyosentezi ve klinik öncesi uygulaması anlatılacaktır.

Bioconjugation ve radiosynthesis<sup&gt; 89</sup&gt;, Zr-DFO-etiketli antikorlar

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

Bu prosedürün genel amacı, zirkonyum 89 DFO ile işaretlenmiş bir radyo immünkonjugat sentezlemek ve bunun in vivo performansını değerlendirmektir. Bu işlem, öncelikle şelatör deferoksaminin antikora bağlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise antikor DFO konjugatının zirkonyum 89 ile radyolojik olarak işaretlenmesidir.Ardından, radyo immunokonjugat boyut dışlama kromatografisi kullanılarak saflaştırılır. Son adım, bir kanser fare modelinde küçük hayvan pozitron emisyon tomografisi veya PET görüntülemesi gerçekleştirmektir. Nihayetinde PET görüntüleme, zirkonyum 89 ile işaretlenmiş radyo immunokonjugatın in vivo dağılımının görüntülerini elde etmek için kullanılır.Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler, zirkonyum 89 oksalat çözeltisinin pH ayarı biraz zahmetli olabildiği için zorluk yaşayabilirler. Bu prosedürü, laboratuvarımızdaki teknisyen Dalia Abdi ile birlikte uygulamalı olarak göstereceğim. İlk olarak, 1,7 mL'lik bir mikro santrifüj tüpü içerisinde 1 mL 0,5 molar HEPes tamponu kullanarak 2 ila 5 mg/mL konsantrasyonunda J 5 91 çözeltisi hazırlayın; D-F-O-N-C-S'yi kuru DMSO içerisinde 5 ila 10 milimolar arası bir konsantrasyonda çözün, tam çözünmeyi kolaylaştırmak için çö

the-bioconjugation-and-radiosynthesis-of-89zr-dfo-labeled-antibodies

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Bu video, tümörleri tedavi etmek için immünokonjugatların ve ardından radyoligandların uygulandığı önceden hedeflenmiş radyoimmünoterapi veya PRIT tekniğini açıklar. Bu radyoimmünoterapi, sağlıklı dokulara radyasyon dozlarını azaltır ve antikor bazlı vektörlerle uyumlu olmayan çok düşük yarı ömre sahip radyonüklidleri kullanır.

Önceden Hedeflenmiş Radyoimmünoterapi: Terapötik Radyonüklidlerin Tümörlere Hedefe Yönelik Verilmesi İçin Bir Yöntem

Bu video, bir fare modelinde bir tümörün in vivo görüntülenmesi için bir radyoimmünokonjugatı içeren bir tekniği göstermektedir. Radyoimmünokonjugatın enjeksiyonu üzerine, konjugatın antikorları kanser hücreleri üzerindeki spesifik bir membran antijenine bağlanır. Konjugatın radyoizleyicisi, tümörün bir görüntüsünü oluşturmak için bir pozitron emisyon tomografisi (PET) tarayıcısı tarafından tespit edilen enerji üretmek için komşu elektronlarla etkileşime giren pozitronlar yayar.

Radyoaktif İşaretli Antikorlar Kullanarak Bir Murin Modelindeki Tümörleri Tespit Etmek için İn Vivo PET Görüntüleme Tekniği

Biyoortogonal ters elektron talebi Diels-Alder sikloilavesi, kanser için etkili ve modüler önceden hedeflenmiş bir PET görüntüleme stratejisi oluşturmak için kullanılmıştır. Bu protokolde, bu metodolojinin adımları, kolorektal kanser hedefli antikor huA33 ve 64Cu etiketli bir radyoligand kullanan bir model sistem bağlamında açıklanmaktadır.

Pretargeted PET Görüntüleme Bioorthogonal Ters Elektron Talep Diels-Alder Katılma Harnessing

125-etiketli azid sentezi ve bir bakır içermeyen tıklama reaksiyonu kullanılarak dibenzocyclooctyne (DBCO) -grubu ile konjüge edilmiş 13-mil ölçekli altın nanopartiküllerinin radyo-etiketlenmesi için ayrıntılı bir işlem tarif edilmektedir.

Bir Kullanarak Altın Nanopartiküller Verimli Radyoaktif bir Optimize Protokolü<sup&gt; 125</sup&gt; I-etiketli Azid Protez Grubu

Burada, ön hedefleme ve biyoortogonal kimya için tridentat 99mTc(I) şelat-tetrazin türevlerinin radyoetiketleme ve in vivo testi için bir protokol açıklıyoruz.

Hazırlama ve Değerlendirilmesi<sup&gt; 99m</sup&gt; Bioorthogonal Kimya Kullanarak Öncesi hedeflemek için üç dişli Şelatlar Tc-etiketli

Antikor-conjugates için (ACs) birleştiğinde Viral kaynaklı peptidler, moleküler yükleri artan tümör hücre birikmesi ile teslim etme potansiyeli nedeniyle ivme kazanıyor bir yaklaşım var. Peptid konjügasyon, AC ve hücre içi yük birikimi ve tümör hedefleme değerlendirmek için ortak yöntemleri kullanarak, bu protokolü anahtar ilk geliştirme aşamalarında araştırmacılar yardımcı olur.

Antikor conjugates ilk değerlendirilmesi ile Viral kaynaklı peptidler hücresel birikimi artan ve tümör hedefleme artırmak için değiştirilmiş

Sentez ve karakterizasyonu bir trans- cyclooctene (TCO) bu protokolünü açıklar-modifiye antikor ve 177Lu etiketli tetrazine (Tz) radioligand pretargeted radioimmunotherapy (PRIT) için. Buna ek olarak, bu iki yapıları kullanımı vivo içinde biodistribution ve boyuna terapi çalışmaları kolorektal kanser, bir fare modeli için ayrıntıları.

Pretargeted Radioimmunotherapy ters elektron talep Diels-Alder reaksiyonu üzerinde dayalı

Bu protokol için biz BAKLA, bir phenyoxadiazolyl metil sulfone tabanlı reaktif yükler site seçici bağlantı için biomolecules, özellikle antikorlar thiols sentezi anlatacağız. Buna ek olarak, biz malzemelerin ve BAKLA taşıyan bifonksiyonel şelatör ve onun konjugasyon bir modeli antikor için anlatacağız.

Sentez ve Site seçici olarak oluşturulması için Thiol reaktif reaktif Bioconjugation Immunoconjugates modifiye

Burada, radyoaktif işaretli antikorların immobilize antijenlere bağlanma afinitesini (KD) belirlemek için bir yöntem açıklanmaktadır. KD , radyoaktif etiketli bir antikorun antijenine çeşitli konsantrasyonlarda toplam, spesifik ve spesifik olmayan bağlanmasını ölçerek bir doygunluk bağlama deneyinden belirlenebilen denge ayrışma sabitidir.

Radyoaktif Etiketli Antikorların İmmobilize Antijenlere Bağlanma Afinitesinin (KD) Belirlenmesi

Burada sunulan, kullanıma hazır bir radyoetiketleme synthonu, [89 Zr]Zr-p-izotiyosiyatobenzil-desferrioksamin ([89Zr]Zr-p-izotiyosiyatobenzil-desferrioksamin ([89 Zr]Zr-DBN) kullanılarak bir pozitron emisyon tomografisi (PET) radyoizotopu, 89Zr (t1/2 78.4 h) ile radyoetiket hücrelerine yönelik bir protokoldür. [89Zr] Zr-DBN ile radyo-etiketleme hücreleri, uygulamadan sonra 7 güne kadar PET ile vücutta uygulanan radyoaktif işaretli hücrelerin invaziv olmayan izlenmesine ve görüntülenmesine izin...

Hücre Kaçakçılığının Pozitron Emisyon Tomografisi Görüntülemesi: Bir Hücre Radyo-Etiketleme Yöntemi

Bu çalışma, fibroblast aktivasyon proteininin PET görüntülemesi için iPHASE MultiSyn sentezleyici üzerinde 1,7 GBq'ye kadar [68Ga]Ga-FAPI-46'nın otomatik üretimini açıklar.

Rutin Klinik Kullanım için [68Ga]Ga-FAPI-46'nın Otomatik Radyosentezi

Öğrenin, zirkonyum-89 ile DFO etiketli radyoimmünokonjugat sentezleme ve PET görüntüleme yöntemlerini. Bu protokol, antikorların biyokonjugasyonu, radyosentez ve kanser araştırmalarında hedefe yönelik görüntüleme uygulamalarını kapsar.

Bioconjugation ve radiosynthesis

Daha fazla video keşfet