Name: Frenik Motor Nöronlar tarafından Diyafram İNNERVASYONU Fonksiyonel ve Morfolojik Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Öğrenin, farenik motor nöronların diyafram innervasyonunu fonksiyonel ve morfolojik olarak değerlendirmek için bileşik kas aksiyon potansiyeli kaydı ve tam diyafram immünohistokimyası yöntemlerini. Bu protokol omurilik hastalıklarının kemirgen modellerinde solunum fonksiyonunun restorasyonuna yönelik terapötik stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, NINDS (#1R01NS079702 A.C.L.'ye hibe) ve Thomas Jefferson Üniversitesi'ndeki (M.M.) SURP Programı tarafından desteklenmiştir.

Deneysel işlemler Thomas Jefferson Üniversitesi, kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından onaylanmış ve (86/609 / EEC ve 87-848 / EEC 2010/63 / AB), Avrupa Toplulukları Konseyi Direktifi, NIH Kılavuzu ile uyumlu yapılmıştır bakım ve laboratuar hayvanlarının kullanımı ve Nörobilim Araştırma Hayvanların Kullanımına İlişkin Neuroscience adlı Politikalar Derneği. 1. Bileşik kas Aksiyon Potansiyelleri (Cmaps) <ol><li> Hayvan hazırlanması: <ol><li> Enjeksiyonu (ketamin, ksilazin, asepromazin) etkisi veya teslim% 1-2 bir inhalant (izofluran) kullanarak sıçan anestezisi. Ketamin 95.0 mg / kg, 10.0 mg / ksilazin kg, 0.075 mg / kg asepromazin aşağıdaki gibi enjekte edilebilir anestezi dozajdır. NOT: Biz başarıyla hem inhalant kullanabilir ve bu CMAP kayıt protokolü yaparken enjektabl anestezi hiçbir tercihle, yaklaşımlar. </li><li> Hayvan uygun a muhafaza edilmelidirAmeliyat öncesi nesthetic derinlik ameliyatı sonucunda yoluyla başlatılır ve post-operatif buprenorfın kadar etkili almıştır. Bir geri çekme tepkisi ortaya olmadığını belirlemek için kısa ayak tutam tarafından uygun anesthetization onaylayın. Ayrıca, bir pamuklu çubukla kornea refleksi sınayın. Cerrahi işlem boyunca, kalp hızı ve solunum sayısı anestezi derinliği çok hafif hale geldiğini ileri süren artış olmamıştır belirlemek. </li><li> Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için hayvanın gözleri bir veteriner merhem sürün. </li><li> Cerrah ameliyat başlamadan önce bir dezenfektan (klorheksidin fırçalayın) ile / ellerini ona yıkamak gerekir. Cerrah, steril eldiven, yüz maskesi ve cüppe veya temiz laboratuvar önlüğü giymeli. Tüm enstrümanlar yıkanır ve ameliyat öncesi otoklava edilmelidir. Bu sterilizasyon işlemi tamamlandıktan doğrulamak için araçların seviyesinde otoklav önce alet kiti içinde bir sterilizasyon göstergesi şeridi ekleyin. Cerrah gerekirStrip tüm çizgi ameliyat başlamadan önce siyah olduğunu doğrulayın. Yanı sıra otoklav bandı gösteren kutunun dışını bantlayın. Cerrahi aynı gün birkaç hayvanlar üzerinde yapılacak olursa, ameliyatlar arasında aletleri temizlemek ve cam boncuk sterilizatör sterilize edin. Gerekirse, steril hemostatla aleti kaldırarak, uygun süre sterilizatör enstrümanın kolu yerleştirerek steril bir alanda soğutulması ve daha sonra fonksiyonel ucunu yerleştirerek cam boncuk sterilizatör enstrümanın iki ucunu sterilize zaman uygun bir süre için cam boncuk sterilizatör içine alet. </li><li> Hayvan anestezi edildikten sonra, aşağı dorsal yüzeyi ile cerrahi gemide ve böylece bant yukarı bakacak karın yerde cerrahi kuruluna hayvanın ön ayakları korumak için kullanılabilir. </li><li> Kafatasının dibinde başlayan ventral yüzey kaudal Tıraş ve orta hat her iki tarafında karın çevresi sh olduğundan emin olunaved hemi-diyafram kaydedilirken bağlı olarak hangi. Cilt traş yüzeyine povidon-iyot uygulayın. </li></ol></li><li> CMAP kayıtları için hazırlık: <ol><li> Kuyruk içine hayvan hazırlama, yer zemin elektrot deri altına takiben (Şekil 1). </li><li> Kontralateral alt karın bölgesi içine referans elektrot deri altına yerleştirin. </li><li> Kendinden yapışkanlı yüzey şerit veya disk kayıt elektrot (yüzey şerit elektrot boyutları: 0,5 x 3 cm) üzerine iletken jel yerleştirin ve sonra tek taraflı kot kenarı boyunca enine yüzey elektrodu yerleştirin. </li><li> Transkutanoz 0.5 cm arayla trakea lateral ve klavikula üstün uyarıcı elektrotlar yerleştirin. Deri yoluyla yaklaşık 1.0 cm derinliğinde elektrotlar yerleştirin. Onların yeri daha sonraki uyarılara ile hareket etmez, böylece elle elektrotlar sabitleyin. Not: yapışma yeri yerinde cilde 90 ° görece açı uyarıcı elektrotlarn. </li></ol></li><li> Bileşik kas Aksiyon Potansiyeli (CMAP) kayıtları: <ol><li> Bilgisayar destekli veri analizi ve ardından bir uyarıcısı / amplifikatör kullanarak elektrofizyolojik kayıtlar edinin. </li><li> Tek çekme stimülasyon uyaran parametreleri 0.5 msn, 1.0 Hz supramaksimal darbeleri olmalıdır. uyarıcı genlik V 6.0 ile 8.0 arasında (Şekil 2A) olmalıdır. NOT: Bir deney içinde, hayvanlar üzerinde aynı genlikli bir uyarıcı yoğunluğu kullanın. Amaç stimülasyon az genliği kullanarak yanıt genlik maksimize etmektir. Bu stimülasyon sırasında meydana ilk tepkisi bir uyarım eser olduğuna dikkat etmek önemlidir. Buna ek olarak, bakımı daha sonra hızlı bir şekilde CMAP tepki izlemektedir stimülasyon artifakt sonra kararlı / yassı taban öncesinde bir CMAP tepki elde etmek için dikkat edilmelidir. Bu tür bir yanıt elde etmek için, bu uyarım yeniden konumlandırmak için gerekli olabilir ve / veyaKayıt elektrotları. </li><li> Uyarımlar arasında 30 saniye bekleyin ve ortalama yanıt (Şekil 2B - C) elde etmek için arka arkaya 10 uyarılmalara tekrarlayın. Pik (Şekil 2A), başlangıçtan genlik ölçün. Frenik sinir / diyafram aktif değilken hayvanın solunum döngüsünün aşamasında frenik sinir stimülasyonu yürütün. işlem karşı yarı-diyafram için aynı hayvan üzerinde tekrar edilebilir. </li><li> NMJ boyama yapılacaktır eğer son BKAP kayıt seansından sonra, hayvan serpmek. Yaklaşık bir kez aynı hayvan üzerinde defalarca her hafta CMAP kayıtları Davranış (ya da tercih aralığında). </li><li> Sağkalım CMAP kayıtları sonrasında, hayvan uyanık ve sternally yatarak kadar kurtarma sırasında dolaşan sıcak su ısıtma yastığı kurtarmak ve sürekli izlemek için izin verir. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin. &lt;/ Li&gt; <li> Bir kez sternally yaslanmış, hayvana ilk 48 saat (günde bir kez bundan sonra) her 12 saat izliyoruz. (Siteleri döndürülmüş olan enjeksiyon başına 1-2 ml,,, deri altından laktatlı zilleri çözümü 2 günde kez) hayvan susuz (sarkık cilt, halsizlik) olarak görünüyorsa, sıvılar yönetmek ameliyat sonrası kilo ve sıvı kaybı stabilize kadar. Onlar tel çubuk kapak besleyici ulaşamadığı takdirde yeme teşvik etmek gerekirse, akut post-operatif dönemde küçük yemekler yumuşatılmış gıda ile hayvanların sağlamak. </li><li> Ameliyat sonundan önce 0.05 mg / kg bir dozda buprenorfin yönetme ve daha sonra 12 saat aralıklarla, ilk 24 saat boyunca (ve bundan sonra da ağrı / stres belirtileri bağlı) deri altı enjeksiyon yoluyla (Alanı döndürülmüş). Ağrı veya sıkıntı belirtileri sonra fark ise, buprenorfin hayvanları davranın. Gösterge ağrı / sıkıntı belirtileri aktivite eksikliği, vocalizations, yeme eksikliği veya içme (dehidratasyon), aşırı kilo kaybı, nöbet, exc dahilkemiren veya kesi yerinde tırmalama essive. Ağrı ve sıkıntı belirlenmesinde kullanılan ek ölçütler yabancı uyaranlara yanıtsızlık, geçici ya da sebepsiz seslendirme, yorucu veya anormal nefes, kalıcı kırmızımsı-kahverengi nazo-oküler akıntı, işaretli piloerection içerir. Ayrıca hasta hayvanlar öneririm kötü hijyen kanıt izlemek. Hayvan hala tedavi 72 saat sonra sıkıntı olduğu gözlenirse hayvan euthanize (yukarıda ana hatlarıyla ağrı / stres kriterlerine göre ve aldıktan sonra analjezik protokol yukarıda açıklanan). </li></ol></li></ol> 2. Diyafram Nöromüsküler Junction (NMJ) Analizler <ol><li> Hayvan diseksiyonu: <ol><li> Hayvana enjekte edilebilir anestezi aşırı dozda yönetme (:; intraperitoneal olarak uygulanmıştır 0.225 mg / kg ve 30.0 mg / kg, asepromazin de 285,0 mg / kg ksilazin ile ketamin 3 kez yukarıda kullanılan doz). Doz aşımı sonrasında, tüm hayvanlar t ötenazi (torakotomi) ikinci bir yöntem olmalıdıro ölüm sağlamak. Ölüm kalp ve solunum arrest gözlemleyerek ve hayvanın sabit ve dilate öğrenciler belirterek tarafından teyit edilmelidir. </li><li> Neşter veya diseksiyon makas kaudal orta hat boyunca zyphoid süreçten eksizyonu uzanan bir laparotomi yapınız. Dikkatle neşter ve forseps kullanılarak altta yatan kas deri ve bağ dokusu ayırın. </li><li> Zyphoid süreci yukarı çekerken, diyafram kemiği çevreleyen bağlı kalır sağlanması, bütün diyaframı kaldırmak için diseksiyon makas kullanın. O bütün diyaframın başarılı diseksiyon sağlayacak, diyafram kası zarar görmesini önlemek ve daha sonraki boyama için kas temizliğinde yardımcı olacak gibi bu çok önemlidir. Not: Gerekirse, bu noktada, hayvan perfüze edilebilir. </li></ol></li><li> Temizlik ve diyaframın boyama: <ol><li> Bütün disseke diyaframı aşağı pin, üstün yüzey cam 100 mm petri içinde silikon kauçuk, yukarı bakacak şekildeBir stereomikroskop kullanılarak 20 dakika boyunca -% 4 paraformaldehit (PBS,% 1 fosfat yapılan tamponlu tuz). O gergin hale getirmek için diyaframı gerin ve böcek pimleri kullanarak, diyafram kasını kendisi (Şekil 3) iğneleme önlemek için çevredeki dokuyu aşağı pin. </li><li> Dikkatle 5. forseps ve küçük makas ile kas sadece üstün yüzeyinden bağ dokusu temizleyin. NOT: Aksi belirtilmediği sürece, bu boyama protokolü yavaş yavaş ışık kaplı oda sıcaklığında sallanan sonraki tüm adımları uygulayın. Diyafram kası her zaman tamamen kurumasını önlemek için sıvı batık emin olun. </li><li> (0.2 1 x PBS,% 2 sığır serum albümini (BSA) / PBS BSA / PBS,% 4 paraformaldehit 1x PBS (PFA), ve% 0.2 TBP% 2 yapılır 0.1 M glisin: boyamadan önce, gerekli tüm reaktifleri hazırlanması 2% BSA / PBS) içinde% Triton X100. -20 ° C&#39;de metanol-serin öncesi emin olun. </li><li> 1 x PBS içinde 10 dakika boyunca yıkama 3x. </li><li> 2&#39;de yapılan 0.1 M glisin (inkübe% BSA, 30 dakika boyunca / PBS). </li><li> 15 dakika boyunca RBTX (rodamin-konjuge α-bungarotoxin) çözelti içinde inkübe edilir. Şöyle RBTX için çözüm: Rhodamine-konjuge a bungarotoxin 1: 1 x PBS içinde 400 dilüsyon. NOT: Bu protokol, rodamin kullanılır, ancak tercih edilen bir flüorofor boyanması için de kullanılabilir. </li><li> 1 x PBS içinde 10 dakika boyunca yıkama 3x. </li><li> -20 ° C dondurucu içinde, 5 dakika boyunca MeOH ile inkübe edin. NOT: dondurucuda kas yerleştirmeden önce MeOH ekleyin ve hemen kuluçka dönemi izleyen çözümü çıkarmayın. </li><li> 1 x PBS içinde 10 dakika boyunca yıkama 3x. </li><li> 1 saat süre ile% 0.2 TBP Blok (% 0.2 Triton% 2 BSA / PBS içinde yapılan). </li><li> Sallanan ise gece boyunca 4 ° C &#39;de primer antikor çözeltisi (% 0.2 TBP) ile inkübe edin. Antikorların çözeltiler aşağıdaki gibi: SV2 olduğunda (1:10) ve SMI-312 (1: 1.000). </li><li> % 0.2, TBP ile 10 dakika boyunca 3 kez yıkayın. </li><li> FGM1 (FITC-konjuge keçi anti-fare IgG-100 seyreltme: 1 kullanılarak ikincil antikor ile inkübe1 &#39;dir; 1 saat için sallanan ise% 0.2 TBP) yapılmış. NOT: boyama için protokol kalanı için ışıktan koruyun. </li><li> 1 x PBS ile 10 dakika boyunca yıkama 3x. </li><li> Yeniden temiz öncesinde montaj ve coverslipping kasın üstün (yukarıya bakınız) yüzeyinde bağ dokusunu çevreleyen. NOT: temizlemek ve sonra lekelenme hemen sonra örnek monte edilmesi tavsiye edilir. Ancak gerektiğinde, örnek 1 x PBS içinde kapsanabilir halinde, buharlaşmayı önlemek için parafilm ile sarılmış ve günlük PBS değişen, 1 haftaya kadar 4 ° C &#39;de muhafaza edilmiştir. </li><li> Cam slayt, sigara hardset Vectashield ile lamel üzerine monte üzerine. Kurumasını önlemek için net bir oje ile lamel kenarları mühür. Uzun vadede -20 ° C karton slayt klasörlerinde düz yalan Mağaza slaytlar. </li></ol></li><li> Analiz ve Konfokal Görüntüleme: <ol><li> Kantitatif lekeli morfolojisi analiz ve dik bir Epifloresans kullanarak 20X ve 40X büyütme altında hemi-diyaframı montemikroskop. NOT: Diyafram lekeli ve tüm montaj şekilde analiz olduğundan, kas oldukça kalındır. Statik görüntü olmayan konfokal floresan mikroskopi kullanılarak alındığında Sonuç olarak, floresan boyama çoğu tamamen odak dışında. Bu nedenle, bu sürekli düzgün bireysel NMJs her morfolojisi tanımlamak için &quot;yukarı&quot; ve &quot;aşağı&quot; kas içinden odaklanmasını sağlar olarak mikroskop üzerinde gerçek zamanlı olarak NMJ analiz yapmak en iyisidir. Onlar post-sinaptik reseptör kümelerine mekansal ilişki içinde doku yoluyla hareket olarak bu yaklaşımı kullanarak, kolayca bireysel motorlu akson yörüngesini takip edebilirsiniz. </li><li> Kas ventral-to-dorsal uzunluk ölçerek, belirli omurilik düzeyleri (Şekil 4H) topografik innervasyon şekillerine göre analiz için 3 ayrı bölüme kas bölün. </li><li> Kas ve mov ventral bölgede başlayandorsal ing, yüzey kas lifleri üzerinde bulunan yüz NMJs en tüm analiz. RBTX nedeniyle etiketlemek için kullanılan büyük antikorlar ile karşılaştırıldığında toksin küçük boyutu kas içine çok daha derin nüfuz (nedeniyle yoksul antikor penetrasyonu yorumlanması zor olabilir gibi daha derin yüzeyinden ilk 3-4 liflerden daha kaslar lifleri analiz etmeyin nöronlar). </li><li> Nöronun öncesi terminali akson çapı kalın ve sinir terminali bütün bölgeler tamamen altta yatan kas asetilkolin reseptörleri (AChRs) ile çakışıyorsa sağlam olarak her NMJ tanımlayın. </li><li> Altta yatan kas AChRs herhangi bölge sinir terminali karşılık gelen boş olup olmadığını kısmen Denerve her NMJ tanımlayın. </li><li> Olarak tamamen Denerve her NMJ tanımlayın eğer kas AChRs henüz gelen sinir terminali (bir sinir terminalinin olmaması nedeniyle sadece olmadığından emin olabilirsiniz böylece, odak aynı alanda etiketli nöronlar diğer NMJs olması da önemlidir poor kas bu bölgede antikor penetrasyon). </li><li> Birden fazla ön uç akson innerve bireysel NMJ (bu kavşakta denervasyon ve reinnervation olası girişimleri belli bir düzeyde yaşandığını gösterir) varsa her NMJ olarak çarpma innerve tanımlayın. </li><li> Olarak ince NMJ sinir terminali ve altta yatan AChRs arasında tam bir örtüşme vardır ama ince bir ön-uç akson varsa innerve her NMJ (bu da reinnervation de denervasyon ve girişimleri bazı düzeyinin göstergesidir) tanımlayın. </li><li> Her bir hayvan için, yukarıda NMJ tüm kategoriler için 3 belirlenen bölgelerin her biri için analiz yapıldı. Aynı deneysel grup için diğer hayvanlardan elde edilen sonuçlar, her bir hayvandan alınan verileri ortalama. Fare, hemi-diyafram sıçan yarı diyafram kası ve 150-200 Yaklaşık 200-300 birleşme deney grubu başına en az 3 (tercihen 5-6 veya daha fazla), hayvanlarda miktarı gerekmektedir. </li><li> Yüksek çözünürlüklü konfokal görüntüler elde, kullanımıkonfokal mikroskop ile yayına d. </li><li> 20-40 mikron derinliklerde 0.3 mikron adım boyutunda Z-yığınlarının edinin ve tüm sinaptik profil dahil olmasını sağlamak için yukarıda ve her kavşağın altında ilave optik bölümleri toplamak. </li><li> Maksimum yoğunluğu projeksiyonları içine z serisi görüntüleri yeniden satın alma yazılımını kullanın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Miller, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Practice+parameter%3A+the+care+of+the+patient+with+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28an+evidence-based+review%29%3A+report+of+the+Quality+Standards+Subcommittee+of+the+American+Academy+of+Neurology%3A+ALS+Practice+Parameters+Task+Force%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Practice parameter: the care of the patient with amyotrophic lateral sclerosis (an evidence-based review): report of the Quality Standards Subcommittee of the American Academy of Neurology: ALS Practice Parameters Task Force.</a> Neurology. 52, 1311-1323 (1999).</li>
<li>Sandhu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+recovery+following+high+cervical+hemisection%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Respiratory recovery following high cervical hemisection.</a> Respir Physiol Neurobiol. 169, 94-101 (2009).</li>
<li>Kaplan, L. M., Hollander, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+dysfunction+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Respiratory dysfunction in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clin Chest Med. 15, 675-681 (1994).</li>
<li>Holtz, A., Levi, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHoltz%2C+A+%22Spinal+Cord+Injury%22">Spinal Cord Injury</a>. , Oxford. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.alibris.com/
 ">http://www.alibris.com/
 </a> (2010).</li>
<li>Bruijn, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALS-linked+SOD1+mutant+G85R+mediates+damage+to+astrocytes+and+promotes+rapidly+progressive+disease+with+SOD1-containing+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">ALS-linked SOD1 mutant G85R mediates damage to astrocytes and promotes rapidly progressive disease with SOD1-containing inclusions.</a> Neuron. 18, 327-338 (1997).</li>
<li>Sharma, H., Alilain, W. J., Sahdu, A., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatments+to+restore+respiratory+function+after+spinal+cord+injury+and+their+implications+for+regeneration%2C+plasticity+and+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Treatments to restore respiratory function after spinal cord injury and their implications for regeneration, plasticity and adaptation.</a> Experimental Neurology. 235, 18-25 (2012).</li>
<li>Gourévitch, B., Mellen, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preB%C3%B6tzinger+complex+as+a+hub+for+network+activity+along+the+ventral+respiratory+column+in+the+neonate+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimage%22%5BJournal%5D)">The preBötzinger complex as a hub for network activity along the ventral respiratory column in the neonate rat.</a> Neuroimage. 98, 460-474 (2014).</li>
<li>Strakowski, J. A., Pease, W. S., Johnson, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phrenic+nerve+stimulation+in+the+evaluation+of+ventilator-dependent+individuals+with+C4-+and+C5-level+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Phys+Med+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Phrenic nerve stimulation in the evaluation of ventilator-dependent individuals with C4- and C5-level spinal cord injury.</a> Am J Phys Med Rehabil. 86, 153-157 (2007).</li>
<li>Wright, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth%2C+but+not+compensatory+plasticity%2C+of+neuromuscular+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li>
<li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overexpression+of+the+astrocyte+glutamate+transporter+GLT1+exacerbates+phrenic+motor+neuron+degeneration%2C+diaphragm+compromise%2C+and+forelimb+motor+dysfunction+following+cervical+contusion+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Overexpression of the astrocyte glutamate transporter GLT1 exacerbates phrenic motor neuron degeneration, diaphragm compromise, and forelimb motor dysfunction following cervical contusion spinal cord injury.</a> J Neurosci. 34, 7622-7638 (2014).</li>
<li>Nicaise, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+phrenic+motor+neuron+loss+and+transient+respiratory+abnormalities+after+unilateral+cervical+spinal+cord+contusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Early phrenic motor neuron loss and transient respiratory abnormalities after unilateral cervical spinal cord contusion.</a> Journal of neurotrauma. 30, 1092-1099 (2013).</li>
<li>Nicaise, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phrenic+motor+neuron+degeneration+compromises+phrenic+axonal+circuitry+and+diaphragm+activity+in+a+unilateral+cervical+contusion+model+of+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Phrenic motor neuron degeneration compromises phrenic axonal circuitry and diaphragm activity in a unilateral cervical contusion model of spinal cord injury.</a> Exp Neurol. 235, 539-552 (2012).</li>
<li>Lepore, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+hyperstimulation+alters+site+of+disease+onset+and+course+in+SOD1+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Peripheral hyperstimulation alters site of disease onset and course in SOD1 rats.</a> Neurobiol Dis. 39, 252-264 (2010).</li>
<li>Alilain, W. J., Horn, K. P., Hu, H., Dick, T. E., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+regeneration+of+respiratory+pathways+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional regeneration of respiratory pathways after spinal cord injury.</a> Nature. 475, 196-200 (2011).</li>
<li>Zhang, B. M. F., Cummings, K. J., Frappell, P. B., Wilson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+method+for+conscious+airway+resistance+and+ventilation+estimation+in+neonatal+rodents+using+plethysmography+and+a+mechanical+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Novel method for conscious airway resistance and ventilation estimation in neonatal rodents using plethysmography and a mechanical lung.</a> Respir Physiol Neurobiol. 201, 75-83 (2014).</li>
<li>Ngo, S. T., Bellingham, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurophysiological+recording+of+the+compound+muscle+action+potential+for+motor+unit+number+estimation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromethods%22%5BJournal%5D)">Neurophysiological recording of the compound muscle action potential for motor unit number estimation in mice.</a> Neuromethods. 78, 225-235 (2013).</li>
<li>Nicaise, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degeneration+of+phrenic+motor+neurons+induces+long-term+diaphragm+deficits+following+mid-cervical+spinal+contusion+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Degeneration of phrenic motor neurons induces long-term diaphragm deficits following mid-cervical spinal contusion in mice.</a> Journal of neurotrauma. 29, 2748-2760 (2012).</li>
<li>Lepore, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+glial-restricted+progenitor+transplantation+into+cervical+spinal+cord+of+the+SOD1G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human glial-restricted progenitor transplantation into cervical spinal cord of the SOD1G93A mouse model of ALS.</a> PLoS One. 6, (2011).</li>
<li>Lepore, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+transplantation-based+astrocyte+replacement+is+neuroprotective+in+a+model+of+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Focal transplantation-based astrocyte replacement is neuroprotective in a model of motor neuron disease.</a> Nature neuroscience. 11, 1294-1301 (2008).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Solunum fonksiyon solunum ve özellikle diyafram innervasyon hedefleyen tedavilerin geliştirilmesi, travmatik SKY ve ALS hem tehlikeye klinik olarak 5,6 alakalı. Kapsamlı solunum fonksiyonu çalışma için, bir birleşik yaklaşım yöntemi kullanılmalıdır. Cmaps dış frenik sinir stimülasyonu yoluyla diyaframın fonksiyonel inervasyonun derecesini ölçmek değil, endojen bulbospinal solunum sürücü 8. Buna ek olarak, bu kayıtlar, özellikle tek bir motor akson ve post-sinaptik asetilkolin reseptörleri seviyesin...

Amyotrofik Lateral Skleroz (ALS), üst ve alt motor nöron ve buna bağlı olarak, kas felci, hem kaybı ile bağlantılı bir zayıflatıcı motor nöron hastalığıdır. Tanı üzerine, hasta sağ kalım ortalama sadece 2-5 yıl 1 üzerindedir. Frenik motor nöron (PhMN) zarar ALS patogenezinde kritik bir bileşenidir. Hastalar sonuçta nedeniyle diyaframın PhMN innervasyonu, ilham 2,3 birincil kas kaybı ölmektedir. Travmatik omurilik yaralanması (SKY) da ilişkili solunum güçlüğü ile ciddi bir sorundur. SCI yaklaşık 12.000 yeni vaka nedeniyle omuriliğe travmatik hasar her yıl 4 oluşur. Konumu, türü ve şiddetine göre hastalık heterojenite rağmen, SCI vakaların çoğunluğu genellikle zayıflatıcı ve kalıcı solunum uzlaşma ile sonuçlanan servikal spinal kord, travma içerir. ALS ve SCI ek olarak, diğer merkezi sinir sistemi (CNS) hastalıkları w ilişkilendirilebiliri&#39;inci diyafragma solunum fonksiyon bozukluğu 5,6. frenik sinir ipsilateral hemi-diyaframı innervates bir efferent motor sinir olduğunu ve aynı taraftaki servikal spinal kord C3-C5 düzeylerinde bulunan PhMN hücre gövdeleri kaynaklanır. PhMN çıkışı rostral ventral solunum grubunda (rVRG) 7 olarak bilinen bir bölgede beyin sapından bulbospinal girdi inen tarafından kontrol edilir. rVRG-PhMN-diyafram devre inspiratuar solunum yanı sıra diğer non-solunum diyafram davranışları kontrol merkezidir. Bu devrelere etkileyen çeşitli travmatik yaralanmalar ve nörodejeneratif hastalıklar, solunum fonksiyon ve hastanın yaşam kalitesinde düşüşe derin yol açabilir. Diyafram nöromüsküler bileşke (NMJ) de rVRG, PhMN hayatta kalma, frenik sinir bütünlüğü ve uygun innervasyonunun gelen PhMNs girdi Azalan Normal diyafram fonksiyonu için gerekli tüm vardır. Bu teknikler istihdam nedenle önemli olduğunukantitatif ALS, omurilik yaralanması ve diğer merkezi sinir sistemi hastalıklarının, kemirgen modellerinde in vivo olarak bu devre değerlendirebilir. Bu protokol ile, hedef elektrofizyolojik ve morfolojik düzeyde hem de diyaframın PhMN innervasyonu değerlendirmek için deneysel araçları tanımlamaktır. Bileşik kas aksiyon potansiyelleri (Cmaps) verilen bir motor sinirin tüm efferent motor nöron aksonları uyarıcı ve daha sonra hedef myofibers bir ortaya çıkardı depolarizasyon tepkisini analiz ederek kaydedilir. Bu teknik, PhMNs 8 ile hemi-diyafram fonksiyonel innervasyon ölçmek için anestezi uygulanmış farelerde ve sıçanlarda in vivo olarak kullanılabilir. Nedeniyle Cmaps hemi-diyafram bütün, aynı zamanda hastalığa izlemek için diyafram NMJ bireysel motorlu akson ve myofibers fenotipleri incelemek yararlıdır tüm (ya da en azından birçok / en) myofibers eşzamanlı kayıt temsil gerçeği - ve bu tür parsiyel ve komple olarak tedavi açısından önemli morfolojik değişimlerte denervasyon, rejeneratif filizlenme ve reinnervation. Bu kas 9 genelinde bireysel NMJs detaylı morfolojik değerlendirmenin ardından, diyaframın tüm montaj immünohistokimya (İHK) üzerinden gerçekleştirilebilir. Cmaps birleştiren ve NMJ analiz nicel MSS ve PNS hastalığı kemirgen modellerinde diyafram innervasyon çalışmak için güçlü bir yaklaşım sağlamaktadır.

<table><tbody><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Fisher</td><td>T353-500</td><td>Önce deiyonize damıtılmış suda% 10'luk çözelti yapın; 1x PBS ile% 4 yapın, pH'ı 7.4'e ayarlayın</td></tr><tr><td>1x Fosfat tamponlu salin, pH 7.4</td><td>Invitrojen</td><td>10010049</td><td></td></tr><tr><td>% 2 Sığır serum albümini (% 2 BSA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>A3059-100g</td><td>2 g BSA'yı 100 ml 1x PBS%</td></tr><tr><td>0.2 Triton X100'e% 2 BSA / PBS'de (engelleme tamponu)</td> <td>çözünSigma-Aldrich</td><td>T9284-100mL</td><td>Çözün 0.2 ml / 100 ml 2% BSA/PBS</td></tr><tr><td>0.1 M Glisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7126</td><td>0.185 g ila 25 ml 2% BSA / PBS</td></tr> <tr><td>& alfa; - bungarotoksin</td><td>ekleyin İnvitrojen</td><td>T1175</td><td>Konsantrasyon 1:400</td></tr><tr><td>SMI-312</td><td>Sternberger Monoklonaller</td><td>SMI312</td><td>Konsantrasyon 1: 1.000</td></tr><tr><td>SV2</td><td>Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma Bankası</td><td>SV2-Süpernatan</td><td>Konsantrasyonu 1:10</td></tr><tr><td>FITC keçi anti-fare IgG1</td><td>Roche</td><td>3117731001</td><td>Konsantrasyonu 1:100</td></tr><tr><td>Silikon kauçuk</td><td>Sylgard, Dow Corning</td><td>Bölüm # 184</td><td>Kit ile birlikte gelen talimatları izleyin: ihtiyaca bağlı olarak birden fazla boyutta kültür kabı (30 mm, 60 mm, 100 mm) kullanabilir</td></tr><tr><td>Vectashield floresan montaj ortamı</td><td>Vektör laboratuvarları</td><td>H-1000</td><td>Bu sabit ayarlanmış bir ortam değil. Kapak fişini şeffaf oje ile sabitlemeniz gerekecektir.</td></tr><tr><td>Küçük yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>CMAP kayıtları için yazılım</td><td>Kapsam 3.5.6; ADI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Disk yüzey elektrotları</td><td>Natus nöroloji</td><td>019-409000</td><td></td></tr><tr><td>Subdermal iğne elektrotları</td><td>Natus nöroloji</td><td>019-453100</td><td></td></tr><tr><td>İletken jel</td><td>Aquasonic</td><td>122-73720</td><td></td></tr><tr><td>CMAP kayıtları için stimülatör / kayıt sistemi CMAP kayıtları</td><td>için ADI Powerlab 8SP stimülatör</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amplifikatörü</td><td>BiyoAMP</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

frenik motor nöronlar tarafından diyafram İnnervasyonu fonksiyonel ve morfolojik değerlendirmesi

Functional and Morphological Assessment of Diaphragm Innervation by Phrenic Motor Neurons

Bu protokol özellikle diyaframın frenik motor nöron (PhMN) innervasyonunu hem elektrofizyolojik hem de morfolojik seviyelerde değerlendirmek için kullanılan araçlara odaklanmaktadır. Frenik sinir stimülasyonunu takiben bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) kaydı, anestezi uygulanmış sıçanlarda ve farelerde in vivo olarak servikal omuriliğin PhMN'leri tarafından fonksiyonel diyafram innervasyonunu kantitatif olarak değerlendirmek için kullanılabilir. CMAP'ler tüm hemi-diyaframın tüm miyofiberlerinin eş zamanlı kaydını temsil ettiğinden, kısmi ve tam denervasyon, rejeneratif filizlenme ve reinnervasyon gibi hastalık ve tedaviye bağlı morfolojik değişiklikleri izlemek için diyafram NMJ'sindeki bireysel motor aksonların ve miyofiberlerin fenotiplerini de incelemek yararlıdır. Bu, diyaframın tam montajlı immünohistokimyası (IHC) ve ardından kas boyunca bireysel NMJ'lerin ayrıntılı morfolojik değerlendirmesi yoluyla gerçekleştirilebilir. CMAP'leri ve NMJ analizini birleştirmek, CNS ve PNS hastalığının kemirgen modellerinde diyafragma innervasyonunu kantitatif olarak incelemek için güçlü bir yaklaşım sağlar.

Yetişkin Sprague-Dawley sıçanları C4 omurilik düzeyinde 10-12 ya laminektomi sadece (yaralanmamış kontrol) veya tek taraflı hemi-kontüzyon SCI aldı. 5 hafta sonrası Ameliyatta, zirve CMAP genlik kaydedilen hemi-diyafram ölçüde laminektomi sadece kontrol (Şekil 2B) ile karşılaştırıldığında SCI sıçanlarda (Şekil 2C) azalmıştır laminektomi / yaralanma siteye ipsilateral. Hemi-diyafram tüm NMJs kontrol dışı hastalıklı yabani tip sıçanlarda (Şekil 4A, C) tamamen s...

Bileşik kas aksiyon potansiyeli kaydı, frenik motor nöronlar tarafından fonksiyonel diyafram innervasyonunu kantitatif olarak değerlendirir. Tam montajlı diyafram immünohistokimyası, bireysel nöromüsküler kavşaklarda morfolojik innervasyonu değerlendirir. Bu protokolün amacı, bu iki güçlü metodolojinin omurilik hastalığının çeşitli kemirgen modellerinde nasıl kullanılabileceğini göstermektir.

Frenik Motor Nöronlar tarafından Diyafram İNNERVASYONU Fonksiyonel ve Morfolojik Değerlendirmesi

This protocol specifically focuses on tools for assessing phrenic motor neuron (PhMN) innervation of the diaphragm at both the electrophysiological and ...

Bu prosedürün genel amacı, diyaframın servikal spinal korddaki frenik motor nöronlar tarafından sağlanan hem fonksiyonel hem de morfolojik innervasyonunu nicel olarak değerlendirmektir. Bu işlem, anestezi altındaki hayvanlarda ipsilateral frenik sinirin supramaksimal stimülasyonunu takiben, hemi diyaframdan bileşik kas aksiyon potansiyeli kaydı gerçekleştirilerek tamamlanır. Bir sonraki adım, bireysel nöromüsküler bağlantıların innervasyonunu morfolojik olarak değerlendirmek için diyaframın tüm mount immünohistokimyasının yapılmasıdır.Nihayetinde, bileşik kas aksiyon potansiyeli ve nöromüsküler kavşak analizlerinin birleştirilmesi, MSS ve ÇSS hastalıklarının kemirgen modellerinde diyafragmatik innervasyonun nicel olarak incelenmesi için güçlü bir yaklaşım sağlar. Bu yöntem, spinal kord yaralanması alanındaki "terapötik müdahaleler diyafragmatik fonksiyonu başarıyla geri kazandırmak için kullanılabilir mi?" gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin etkileri, travmatik spinal kord yaralanması ve ALS gibi hastalıkların tedavisine kadar uzanmaktadır; çünkü diyafragmatik solunum fonksiyonu, bu her iki yıpratıcı durumda da hastanın klinik seyrinde kilit bir rol oynar. Prosedürü, laboratuvarımdaki doktora sonrası araştırmacı Dr. Kali, Dr. Wright'ın laboratuvarındaki lisans öğrencisi Melanie Martin ve laboratuvarımdaki araştırma teknisyeni Tamara Holla gösterecektir.Hayvan anestezi altına alındıktan sonra, sırt tarafı aşağı gelecek şekilde cerrahi tahtaya yerleştirin ve ön üyeleri tahtaya sabitleyin. Ardından, orta hattın her iki yanından kafatasının tabanından karna doğru ventral yüzeyi tıraş edin. Cilt temizlendikten sonra elektrotları konumlandırın, toprak hattını kuyruğa bağlayın ve referans elektrodu karşı taraf alt karnına subkütan olarak yerleştirin.Kayıt elektrodu, kendinden yapışkanlı kısmına iletken jel sürülerek hazırlanmalı ve ardından tek taraflı kostal kenar boyunca yapıştırılmalıdır. Şimdi uyarıcı elektrotları, transkutanöz olarak yarım santimetre arayla, trakeanın lateraline ve klavikulan superiyoruna yerleştirin. Elektrotlar cilde dik olarak girmeli ve yaklaşık bir santimetre derinliğe ulaşmalıdır.Bu elektrotlar iyice sabitlenmelidir; bunun elle yapılması en iyisidir. Tüm elektrotları uygun stimülatörlerine ve amplifikatörlerine bağlayın. Toplanan veriler bir bilgisayara kaydedilmelidir.Analiz için, tek kutuplu stimülasyonun stimülasyon parametrelerini 0,5 milisaniye, bir hertz süper maksimal impulslar şeklinde ayarlayın. Amplitüd altı ile sekiz volt arasında değişebilir. İlgi stimülasyon süresini 30 saniye olarak ayarlayın ve arzu edilirse her hayvandan yaklaşık haftada bir kez alınan baseline'dan tepe amplitüde kadar olan kaydı kullanarak, ardışık 10 stimülasyondan gelen yanıtın ortalamasını alın.Hayvanların yönetimi metin protokolünde detaylandırılmıştır. Enjekte edilebilir anestezi doz aşımı ile bir hayvanu ötanize ettikten sonra, bistüri veya makas kullanarak laparotomi gerçekleştirin. Xiphoid çıkıntıdan başlayarak orta hat boyunca dikkatli bir şekilde insizyon yapın.Ardından, bir skalpel ve penset kullanarak deri ile bağ dokuyu kas sisteminden dikkatlice ayırın. Kılıç şeklindeki çıkıntıyı (xiphoid process) yukarı çekip diyaframı çevreleyen kemikten keserek çıkarın. Diyafram kasına zarar vermemeye dikkat edin.Stereoskop altında, diyaframı üst tarafı yukarı gelecek şekilde PBS içinde %4 paraformaldehit ile doldurulmuş bir silikon hat kabına aktarın. Diyaframın etrafındaki dokuyu iğneleyerek diyaframı gergin hale getirin. Ardından, üst yüzeydeki bağ dokusunu pens ve makas kullanarak temizleyin.Fiksatifin 20 dakika boyunca etki etmesini bekleyin ve ardından PBS ile üç kez 10 dakikalık yıkamalar yaparak uzaklaştırın. Sonrasında, PBS içinde %2 BSA ile birlikte 0,1 molar glisin uygulamasını 30 dakika boyunca gerçekleştirin. Ardından diyaframı, rod Domine konjuge alpha bungalow toin çözeltisi içinde 15 dakika inkübe edin.Fiksatif için yapıldığı gibi, bungalow toksinini PBS ile yıkayarak uzaklaştırın. Ardından, banyoyu soğuk metanol ile değiştirin ve dokuyu -20 °C'de beş dakika boyunca soğutun. Beş dakika sonunda metanolü hızla uzaklaştırın ve dokuyu daha önce yaptığınız gibi PBS ile yıkayın.Şimdi, bir saat boyunca %0,2 TBP çözeltisi kullanarak bloklama uygulayın. Çözeltiyi %0,2 TBP içindeki primer antikor ile değiştirin ve dokuyu hafif ajitasyonla dört santigrat derecede gece boyunca inkübe edin. Ertesi gün, primer antikoru uzaklaştırmak için %0,2 TBP ile üç kez 10 dakikalık yıkama yapın ve ardından dokuyu sekonder antikor çözeltisinde bir saat boyunca sallayarak ve karanlıkta inkübe edin; daha sonra, sekonder antikoru uzaklaştırmak için PBS ile üç yıkama yapın ve dokuyu karanlıkta tutun.Ardından bir stereoskop altında, kasın üst yüzeyindeki bağ dokusunun geri kalanını temizleyin. Temizleme işlemi tamamlandıktan sonra dokuyu monte edin ve dik epi-floresan mikroskop altında görüntüleyerek boyanmış hemi diyaframın morfolojisini kantitatif olarak analiz edin. Diyafram bütün halde (whole mount) analiz edildiği için 20 ve 40 x büyütme kullanın.Floresan boyamanın çoğu odak dışında kalmıştır. Standart bir mikroskop kullanıldığında, analizin gerçek zamanlı olarak yapılması en uygunudur. Münferit NM eklemlerinin morfolojisini doğru şekilde puanlamak için, kası omuriliğin topografik innervasyon paternlerine göre analiz amacıyla üç bölüme ayırın.Ventral bölgeden başlayarak, kas lifleri boyunca görünür olan tüm NMJ'leri analiz edin; antikor penetrasyonu hiçbir zaman tam olarak gerçekleşmediği için yüzeyden itibaren ilk üç ila dört liften daha derine inmeyin. Sağlam bir NMJ, kalın bir preterminal aksona sahiptir ve sinir terminalinin tüm bölgeleri, alttaki kas asetilkolin reseptörleriyle tamamen örtüşür. Kısmen denerve olmuş bir NMJ'de ise, alttaki asetilkolin reseptörlerinin bazı bölgeleri boş kalmış olacaktır.Tamamen denerve olmuş bir NMJ, sinir terminalindeki asetilkolin reseptörleri ile herhangi bir uyumluluk göstermeyecektir. Bölgedeki diğer NMJ'ler farklı bir morfoloji sergilemelidir; aksi takdirde, bir NMJ'yi birden fazla pre-terminal akson innerve ediyorsa, antikorların penetrasyon başarısı sorgulanabilir. NMJ çokludur.Bu vakada, ardından yeniden sinirlenme (reinnervasyon) meydana gelen bir denervasyon gerçekleşmiş olabilir. Sinir terminali ile alttaki asetilkolin reseptörleri arasında örtüşme varsa ve terminal öncesi akson çok inceyse, NMJ zayıf şekilde sinirlenmiştir. Bu aynı zamanda bir reaksiyon göstergesidir.Yetişkin Sprague Dawley sıçanların kullanıldığı bir deneyde, kontrol grubuna laminektomi uygulanırken, diğer gruba tek taraflı hemikontüzyon şeklinde omurilik yaralanması (SCI) uygulanmıştır. Yaralanmadan 4,5 hafta sonra, laminektomi veya yaralanma bölgesinin ipsilateral tarafındaki hemidiyaframa ait pik CMAP amplitüdü kaydedilmiştir.Mutasyona uğramış insan SOD1 proteinini eksprese eden ve ALS modelini oluşturmak için kullanılan sıçanlarla yapılan farklı bir deneyde, SCI grubu sıçanlarda bu değer, yalnızca laminektomi yapılan kontrol sıçanlarına kıyasla önemli ölçüde azalmıştır. Yaban tipi kontrol hayvanlarında hemidiyaframdaki NMJ morfolojisi tamamen sağlamdı. Ancak, transgenik sıçanlarda NMJ'ler belirgin patoloji göstermiştir. Bazıları, ok ucuyla işaretlenmiş tam denervasyon sergilemiştir.Ok ucuyla işaretlendiği üzere diğer njs'ler kısmen denerve olmuştur ve sağdaki NMJ'de görüldüğü gibi, diğer njs'ler çoklu innervasyona sahiptir ve bazılarında burada ok ucuyla işaretlenmiş ince pre-terminal aksonlar bulunmaktadır. Bu videoyu izledikten sonra, frenik motor nöronların diyafram üzerindeki hem fonksiyonel hem de morfolojik innervasyonunun nasıl kantitatif olarak değerlendirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. İzlediğiniz için teşekkürler, tüm deneylerinizde başarılar dileriz.

functional-morphological-assessment-diaphragm-innervation-phrenic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu videoda, frenik sinir stimülasyonu yoluyla bir sıçanda diyafram kas liflerindeki bileşik kas aksiyon potansiyellerinin (CMAP'ler) kaydedilmesi açıklanmaktadır. Frenik sinirin yüksek yoğunluklu bir elektrik nabız stimülasyonu, diyafram kası liflerinde tepki eğrisi elde edilerek gözlemlenen aksiyon potansiyelleri üretir.

Bir Sıçanda Frenik Siniri Uyararak Bileşik Kas Aksiyon Potansiyellerinin Ölçülmesi

Nöromüsküler kavşak (NMJ) işlevsel bir değerlendirilmesi sinir ve kas arasındaki iletişimi ilgili gerekli bilgileri sağlar. Burada biz kapsamlı bir şekilde kullanarak iki farklı kas-sinir hazırlıklar, yani soleus siyatik ve diyafram frenik NMJ ve kas işlevselliğini değerlendirmek için bir protokol tanımlamak.

Nöromüsküler kavşak işlevleri ölçme

Burada, sonra intrapleural teslim fluorophore kolera toksini alt birim beta Birleşik frenik motor nöronlar farelerde belirlenmesi için bir protokol açıklayın. İki teknik plevral boşluğu enjekte etmek için karşılaştırılır: Transtorasik yaklaşımlar karşı transdiaphragmatic.

Farelerde frenik Motor nöronların retrograd nöroanatomik izleme

Bu çalışmada, sıçan diyaframlı motor ünitesi bağlantısını ölçmek için motor ünite sayısını ve boyutunu tahmin etmek için in vivo bir yöntem sunuyoruz. Bu tekniklere adım adım bir yaklaşım açıklanmaktadır.

Frenik Motor Nöron Dejenerasyonu ve Kompanzasyonunun Kantitatif Biyobelirteçleri Olarak Sıçan Diyafram Motor Ünitesi Bağlantı Sonuç Ölçütlerinin Değerlendirilmesi

Solunum komplikasyonları, servikal omurilik yaralanması (cSCI) olan bireylerde önde gelen ölüm nedenidir. cSCI'nin hayvan modelleri, mekanik değerlendirmeler ve klinik öncesi çalışmalar için gereklidir. Burada, sıçanlarda tek taraflı C2 spinal hemiseksiyon (C2SH) sonrası diyafram kası (DIAm) aktivitesinin fonksiyonel iyileşmesini değerlendirmek için tekrarlanabilir bir yöntem sunuyoruz.

Sıçanlarda Tek Taraflı Servikal Omurilik Hemiseksiyonu Sonrası Eupneik Diyafram Aktivitesinin Fonksiyonel İyileşmesinin Değerlendirilmesi

Bakım noktası ultrasonu (POCUS), taşınabilirliği, non-invaziv olması ve gerçek zamanlı görüntüleme yetenekleri nedeniyle diyafragma disfonksiyonunu taramak için önemli bir tekniktir. Mevcut diyafragmatik POCUS protokolleri mevcut olmasına rağmen, operatörler arası güvenilirliğin zayıf olmasından muzdariptirler ve fikir birliği yönergelerinden yoksundurlar. Burada tekrarlanabilir ve gerçekleştirilmesi basit bir tekniği açıklıyoruz.

Yetişkinlerde Diyafragma Ultrasonu: Görüntü Elde Etme ve Yorumlama

Ince motor koordinasyonu Açıkları denge ışın testi ile tespit edilebilir. Performans kiriş, kiriş geçiş hızını ve kiriş üzerinde fare kayar sayısını miktarı.

Denge kullanarak Fare Motor Denge ve Koordinasyon Değerlendirme

Hareketi sırasında memeli nöronlar in vivo fizyolojik tepki ölçmek ve nöronal morfoloji, nörokimyasal fenotip ve sinaptik mikrodevreler nöron fizyoloji ilişkilendirmek için bir teknik tarif edilir.

Hareketi tarafından Modülasyonlu Nöronlar Fizyolojik, Morfolojik ve nörokimyasal Karakterizasyonu

Ekstraselüler bir kas Motor Pool için motor nöronlar belirlenmesi<em&gt; Aplysia&#39;nın californica</em

Bu yazıda normal farelerde morfolojik özellikleri ve kurdele sinüslerinin fonksiyonel durumunu değerlendirmek için deneysel bir protokol açıklanmaktadır. Bu model aynı zamanda gürültüye bağlı ve yaşa bağlı Cochlear synaptopathy-kısıtlanmış modeller için de uygundur. Önceki fare çalışmalarından gelen göreli sonuçlar da tartışılmaktadır.

Fare koklea belirli frekans bölgelerinde şerit synapses morfolojik ve fonksiyonel değerlendirilmesi

Öğrenin, farenik motor nöronların diyafram innervasyonunu fonksiyonel ve morfolojik olarak değerlendirmek için bileşik kas aksiyon potansiyeli kaydı ve tam diyafram immünohistokimyası yöntemlerini. Bu protokol omurilik hastalıklarının kemirgen modellerinde solunum fonksiyonunun restorasyonuna yönelik terapötik stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

Frenik Motor Nöronlar tarafından Diyafram İNNERVASYONU Fonksiyonel ve Morfolojik Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet