Name: Yağ Dokusu Depolarında içine Nakli Enkapsülasyon termojenik Preadipositler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 30 s
Description: Öğrenin termojenik preadipositlerin enkapsülasyon yöntemini yağ dokusuna nakil için. Bu teknik obezite tedavisinde enerji harcamasını artırmaya yardımcı olur ve metabolik hastalık araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz editoryal yardım için Jennifer Petrosino ve David DiSilvestro teşekkür etmek istiyorum. Bu araştırma Amerikan Yumurta Kurulu ve Novo Nordisk İlaç gelen Ödülü Numarası 10040042 yanı sıra osu Gıda İnovasyon Merkezi, Ofis Uluslararası İlişkiler, İleri Fonksiyonel Gıdalar Araştırma Merkezi ve Girişimcilik yanı sıra Ödül Numarası 20020728 tarafından desteklenen Ulusal Bilim Vakfı EEC-0914790 (LJL) hibe. Tıbbi Araştırma ve NIH Yol Haritası ile Sağlık (OD) Direktörü, National Institutes Ofisi tarafından finanse edilen ve desteklenen Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezi&#39;nden Ödülü Numarası R21OD017244 (OZ) ile UL1RR025755 (OSUCCC) tarafından desteklenmiştir açıklanan proje, NCI P30CA16058. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezi veya Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

Çalışma protokolü Ohio State Üniversitesi Etik Komiteleri tarafından onaylandı. Hayvan deneyleri IACUC protokolü tarafından kabul edildi. Tüm prosedürler laminer akışı ile seviye 2 biyogüvenlik kabini altında gerçekleştirildi. Biz tüm standart güvenlik şartlarını ve prosedürleri takip etti. mikrokapsüllerin hazırlanması için mikro-kapsülleme tekniği, 18 17 tarif edildiği gibi gerçekleştirilmiştir. Malzemelerin 1. Hazırlıklar <ol><li> Otoklava fizyolojik tuzlu su (su içinde% 0.9 NaCI) içinde% 2 sodyum alginat çözeltisi 10 ml hazırlayın. Fizyolojik tuzlu su içinde% 0.05 PLL çözeltisi hazırlayın. Bir gün önce bu çözümleri hazırlayın ve gece boyunca karıştırın. Kullanmadan önce 0.22 mikron filtre ile çözüm Filtre. </li><li> 50 mM sodyum sitrat ve% 0,9 NaCl solüsyonlarının 100 mM CaCl 2 hazırlayın ve bunları otoklav. </li><li> Tüm solüsyonlar, iğneler, elektrotlar ve beher otoklavlayın. Tıkanmasını önlemek için tel ile iyice temiz iğneler. </li><li> (102 mikrokapsüller kuyunun her cm 2 için gerekli ve kapsül 18 başına 500 hücre yaklaşık vardır edilir) kapsüller için kullanılacak hücrelerin uygun miktarda belirleyin. Iki milyondan hücre başına sodyum aljinat 1 ml kullanın. </li><li> Yüksek glikoz bir &quot;Fibroblast büyüme ortamı&quot; ihtiva eden,% 10 dana serumu, 100 U / ml penisilin / streptomisin hazırlanması (4,500 mg / L glikoz) Dulbecco&#39;nun modifiye edilmiş Eagle ortamı (DMEM). <ol><li> DMEM,% 10 fetal sığır serumu, 10 ug / ml insülin, 1 uM deksametazon, 0.5 mM 3-izobütil-1-metil ksantin ve 100 U / ml penisilin / streptomisin içeren bir &#39;farklılaştırma ortamı I&#39; hazırlayın. </li><li> DMEM içinde &#39;farklılaştırma ortamı II&#39; ihtiva eden,% 10 fetal sığır serumu, 10 ug / ml insülin, 100 U / ml penisilin / streptomisin hazırlayın. </li></ol></li><li> (RI 10 mi Radyo-immünopresipitasyon deney tamponu başına bir proteaz inhibitörü tablet ihtiva eden liziz tamponu hazırlayınPA tamponu). </li></ol> 2. Alginat, mikro-boncuklar hazırlanması (Şekil 1A) <ol><li> Hücre kültürü şişesi eski orta çıkarın. 10 ml PBS ile hücre durulayın. % 0.25 tripsin-EDTA (bir birbirine bağlı T175 şişesi başına 2 mL) ile süspansiyon içinde hücrelerin getirin. </li><li> Hemasitometre kullanarak hücre süspansiyonu hücreleri saymak. Hücre süspansiyonu 10 mi kısım kullanın ve üreticinin talimatlarına göre hücreleri sayın. 5 dakika boyunca oda sıcaklığında 480 x g&#39;de santrifüj ortamda kalan hücreler santrifüj. </li><li> Aşama 1.4 &#39;de tarif edildiği gibi, sodyum alginat hücre pelletini süspanse edin. 5 ml şırıngaya sodyum alginat hücre çözeltisi aktarın. </li><li> Bir 23-gauge iğne ekleme, çözelti içinde hava kabarcıklarını çıkarmak ve havanın 1 ml cep oluşturmak için şırınga ters. </li><li> Kapsülleyicide iğne ağzı altında 100 mM CaCl2 çözeltisi 144 ml içeren, küçük bir beher (180 mi) yerleştirin. Uç approxim ile kapsülleyicide elektrodu takın100 mM CaCl2 çözeltisinin yüzey üzerinde ulaştırılması 2.5 cm. </li><li> Sıkı şırınga pompası sodyum alginat hücre çözeltisi ihtiva eden şırınga yerleştirin. Şırınga açılması kauçuk tüp takın. Sodyum aljinat-hücreli çözüm tüp aracılığıyla yarıya girene kadar pistonu itin. 5.4 kV gerilim ayarlayın. Şırınga pompası 12.06 mm çapında ayarlayın. 3 ml / saat hız ayarlayın. Pompayı başlatın. Kapsülleyicide açın ve 5.4 kV gerilim korumak. </li><li> Kaputun penceresini kapatın ve aljinat mikro oluşumu sonuna kadar gereksiz titreşimi önlemek. Tüm çözeltisi iğne içinden geçtikten sonra, PLL ile kaplamadan önce 20 dakika daha 100 mM CaCl2 çözeltisi içinde aljinat top şeklindeki mikroboncukları katılaşır. </li></ol> PLL ile 3. Kaplama mikro boncuklar (Şekil 1B) <ol><li> Sodyum aljinat hücre top şeklindeki mikroboncukları içeren beher çıkarın ve bu Microb transferi50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne EADS. Mikroboncuk pelet CaCI2 çözeltisi çıkarın. </li><li> % 0.9 NaCl, 30 ml ekleyerek aljinat-hücresi top şeklindeki mikroboncukları yıkayın. Hafifçe elinizle tüpü çalkalayın. Mikro-yerçekimi tarafından çöktürülmüş sonra 25 ml pipet ile% 0.9 NaCl çıkarın. 3 yıkama olmak üzere toplam iki kez daha tekrarlayın. </li><li> Sodyum alginat çözeltisi, her 1 ml% 0.05 PLL çözeltisi 10 ml kullanın. 10 dakika boyunca dakikada 1.000 devirlerde% 0.05 PLL ve vorteks ekleyin. Not: Genellikle, 10 dakika PLL kaplama için yeterlidir. </li><li> PLL kaplama oluşturulduktan sonra, PLL çözüm kaldırmak ve 3.2 de tarif edildiği gibi kapsülleri 3 kez yıkayın. </li></ol> Aljinat Core 4. Sökme (Şekil 1C) <ol><li> 50 mM sodyum sitrat çözeltisi 30 ml ilave edilir. 5 dakika veya tüm sodyum aljinat çözülür kadar bekleyin. Aşama 3.1.1 tarif edildiği gibi üç kez yıkayın kapsüller. </li><li> % 0.9 NaCl kaldır 50 ml tüp kültür ortamı 20 ml ekleyinve bir hücre kültürü şişesine hücreleri içeren tüm kapsülleri aktarın. Standart hücre kültürü koşullarında 18 altında kapsüllü hücreleri taşıyınız. </li></ol> Vitro Uygulamaları 5. Hücreleri arasında Xenograftlarında ve Host Hücre Etkileşimleri veya metabolit Blake Kinetiği / akışını Eğitim için (Şekil 2) <ol><li> Ko-kültürler için, birbirine karışana kadar 24 oyuklu bir plaka üzerinde kültür konakçı hücreler sunar. Kültürleme preadipositler için &#39;Fibroblast Büyüme Orta&#39; kullanın. </li><li> 24 oyuklu bir plaka ihtiva eden konakçı hücreler konfluent içine aktarın mikrokapsüller. Bir tek tabaka elde etmek için mikro kapsüller (102 mikro / göz cm2) ekleyin. </li><li> Altı gün Farklılaşma Orta II öncesi adiposit Farklılaşma Orta I. ile farklılaşmayı Her 48 saat, değişim ortamını neden olur. RIPA tamponu içinde Hücreleri,. Western blot kullanılarak protein ekspresyonunu analiz etmek için durum başına 50 ug protein kullanın. </li></ol> Suların Vivo Başvurusu 6.Obezite ent (Şekil 3) <ol><li> Anestezi idamesi için oksijen ile anestezi ve% 2 izofluran uyarılması için oksijen ile% 4 izofluran karıştırın. Ayak tutam tarafından yeterli anestezi derinliği onaylayın. <ol><li> Kurumasını kornealar korumak için gözlerinin üzerinde anti-kaşıntı merhem sürün. </li></ol></li><li> Böyle yeşil floresan proteininin (GFP) olarak kalıcı yapay floresan proteini ile etiketlenmiş kapsüllü hücreleri kullanın. </li><li> 3 ml şırınga ve kapsüllü hücreleri enjekte etmek için 20 iğne kullanın. <ol><li> 0.5 x 10 6 hücre Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, bir gonad ve böbrekler intraperitoneal bir alanda yer almaktadır, her Iab yağ depo içine 0.2 ml PBS içinde süspansiyon haline enjekte edilir. Ortalama ağırlığı olan farelerde bu PBS hacmi ve hücre sayısı kullanın 40 gr. Farklı ağırlık ya da doza bağımlı etkileri belirlenmesi için sahip farelerde hücre sayısını ve ses düzeyini ayarlayın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Vogeli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+chronic+conditions%3A+prevalence%2C+health+consequences%2C+and+implications+for+quality%2C+care+management%2C+and+costs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+general+internal+medicine%22%5BJournal%5D)">Multiple chronic conditions: prevalence, health consequences, and implications for quality, care management, and costs.</a> Journal of general internal medicine. 22, Suppl 3. 391-395 (2007).</li>
<li>Vija, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%3A+Stem+cell+therapy+perspectives+for+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+%26+metabolism%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells: Stem cell therapy perspectives for type 1 diabetes.</a> Diabetes & metabolism. 35, 85-93 (2009).</li>
<li>Acarregui, A., Orive, G., Pedraz, J. L., Hernandez, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+applications+of+encapsulated+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Therapeutic applications of encapsulated cells.</a> Methods in molecular biology. 1051, 349-364 (2013).</li>
<li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semipermeable+Microcapsules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Semipermeable Microcapsules.</a> Science. 146, 524-525 (1964).</li>
<li>Elliott, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+encapsulated+porcine+islets+from+a+type+1+diabetic+patient+9.5+yr+after+xenotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Xenotransplantation%22%5BJournal%5D)">Live encapsulated porcine islets from a type 1 diabetic patient 9.5 yr after xenotransplantation.</a> Xenotransplantation. 14, 157-161 (2007).</li>
<li>Lim, F., Sun, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microencapsulated+islets+as+bioartificial+endocrine+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Microencapsulated islets as bioartificial endocrine pancreas.</a> Science. 210, 908-910 (1980).</li>
<li>Vos, P., Spasojevic, M., Faas, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+diabetes+with+encapsulated+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+experimental+medicine+and+biology%22%5BJournal%5D)">Treatment of diabetes with encapsulated islets.</a> Advances in experimental medicine and biology. 670, 38-53 (2010).</li>
<li>Cotton, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+challenges+in+cell-encapsulation+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Engineering challenges in cell-encapsulation technology.</a> Trends in biotechnology. 14, 158-162 (1996).</li>
<li>Yach, D., Stuckler, D., Brownell, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiologic+and+economic+consequences+of+the+global+epidemics+of+obesity+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Epidemiologic and economic consequences of the global epidemics of obesity and diabetes.</a> Nature medicine. 12, 62-66 (2006).</li>
<li>Ng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+prevalence+of+overweight+and+obesity+in+children+and+adults+during+1980-2013%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2013%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013.</a> Lancet. 384, 766-781 (2014).</li>
<li>Kissebah, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+body+fat+distribution+to+metabolic+complications+of+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+endocrinology+and+metabolism%22%5BJournal%5D)">Relation of body fat distribution to metabolic complications of obesity.</a> The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 54, 254-260 (1982).</li>
<li>Bray, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+central+adiposity+and+body+mass+index+to+the+development+of+diabetes+in+the+Diabetes+Prevention+Program%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+clinical+nutrition%22%5BJournal%5D)">Relation of central adiposity and body mass index to the development of diabetes in the Diabetes Prevention Program.</a> The American journal of clinical nutrition. 87, 1212-1218 (2008).</li>
<li>Klein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+are+subcutaneous+adipocytes+really+good+for%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+dermatology%22%5BJournal%5D)">What are subcutaneous adipocytes really good for.</a> Experimental dermatology. 16, 45-70 (2007).</li>
<li>Tran, T. T., Yamamoto, Y., Gesta, S., Kahn, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+subcutaneous+fat+transplantation+on+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+metabolism%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of subcutaneous fat transplantation on metabolism.</a> Cell metabolism. 7, 410-420 (2008).</li>
<li>Seale, P., Kajimura, S., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+brown+adipocyte+development+and+physiological+function--of+mice+and+men%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+development%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of brown adipocyte development and physiological function--of mice and men.</a> Genes & development. 23, 788-797 (2009).</li>
<li>Kozak, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+variation+in+brown+fat+activity+and+body+weight+regulation+in+mice%3A+lessons+for+human+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+biophysica+acta%22%5BJournal%5D)">Genetic variation in brown fat activity and body weight regulation in mice: lessons for human studies.</a> Biochimica et biophysica acta. 1842, 370-376 (2014).</li>
<li>Zhang, X., He, H., Yen, C., Ho, W., Lee, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biodegradable%2C+immunoprotective%2C+dual+nanoporous+capsule+for+cell-based+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A biodegradable, immunoprotective, dual nanoporous capsule for cell-based therapies.</a> Biomaterials. 29, 4253-4259 (2008).</li>
<li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+prolonged+survival+of+fibroblasts+with+forced+lipid+catabolism+in+visceral+fat+following+encapsulation+in+alginate-poly-L-lysine%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The prolonged survival of fibroblasts with forced lipid catabolism in visceral fat following encapsulation in alginate-poly-L-lysine.</a> Biomaterials. 33, 5638-5649 (2012).</li>
<li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+cells+with+emphasis+on+bioencapsulation+in+biotechnology%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+annual+review%22%5BJournal%5D)">Artificial cells with emphasis on bioencapsulation in biotechnology.</a> Biotechnology annual review. 1, 267-295 (1995).</li>
<li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+artificial+cells%3A+microencapsulation+of+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22ASAIO+journal%22%5BJournal%5D)">Hybrid artificial cells: microencapsulation of living cells.</a> ASAIO journal. 38, 128-130 (1992).</li>
<li>Koo, J., Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretion+of+erythropoietin+from+microencapsulated+rat+kidney+cells%3A+preliminary+results%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+journal+of+artificial+organs%22%5BJournal%5D)">Secretion of erythropoietin from microencapsulated rat kidney cells: preliminary results.</a> The International journal of artificial organs. 16, 557-560 (1993).</li>
<li>Weidenauer, U., Bodmer, D., Kissel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microencapsulation+of+hydrophilic+drug+substances+using+biodegradable+polyesters.+Part+I%3A+evaluation+of+different+techniques+for+the+encapsulation+of+pamidronate+di-sodium+salt%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+microencapsulation%22%5BJournal%5D)">Microencapsulation of hydrophilic drug substances using biodegradable polyesters. Part I: evaluation of different techniques for the encapsulation of pamidronate di-sodium salt.</a> Journal of microencapsulation. 20, 509-524 (2003).</li>
<li>Smidsrod, O., Skjak-Braek, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alginate+as+immobilization+matrix+for+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Alginate as immobilization matrix for cells.</a> Trends in biotechnology. 8, 71-78 (1990).</li>
<li>Lewinska, D., Rosinski, S., Werynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+process+conditions+during+impulsed+electrostatic+droplet+formation+on+size+distribution+of+hydrogel+beads%5BTitle%5D)+AND+%22Artificial+cells%2C+blood+substitutes%2C+and+immobilization+biotechnology%22%5BJournal%5D)">Influence of process conditions during impulsed electrostatic droplet formation on size distribution of hydrogel beads.</a> Artificial cells, blood substitutes, and immobilization biotechnology. 32, 41-53 (2004).</li>
<li>Chan, E. S., Lee, B. B., Ravindra, P., Poncelet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+models+for+shape+and+size+of+ca-alginate+macrobeads+produced+through+extrusion-dripping+method%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+colloid+and+interface+science%22%5BJournal%5D)">Prediction models for shape and size of ca-alginate macrobeads produced through extrusion-dripping method.</a> Journal of colloid and interface science. 338, 62-72 (2009).</li>
<li>Bhujbal, S. V., Paredes-Juarez, G. A., Niclou, S. P., de Vos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+influencing+the+mechanical+stability+of+alginate+beads+applicable+for+immunoisolation+of+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+behavior+of+biomedical+materials%22%5BJournal%5D)">Factors influencing the mechanical stability of alginate beads applicable for immunoisolation of mammalian cells.</a> Journal of the behavior of biomedical materials. 37, 196-208 (2014).</li>
<li>Gushchina, L. V., Yasmeen, R., Ziouzenkova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate+vitamin+A+supplementation+in+obese+mice+regulates+tissue+factor+and+cytokine+production+in+a+sex-specific+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+biochemistry+and+biophysics%22%5BJournal%5D)">Moderate vitamin A supplementation in obese mice regulates tissue factor and cytokine production in a sex-specific manner.</a> Archives of biochemistry and biophysics. 539, 239-247 (2013).</li>
<li>Ziouzenkova, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinaldehyde+represses+adipogenesis+and+diet-induced+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Retinaldehyde represses adipogenesis and diet-induced obesity.</a> Nature. 13, 695-702 (2007).</li>
<li>Yasmeen, R., Jeyakumar, S. M., Reichert, B., Yang, F., Ziouzenkova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+vitamin+A+to+autocrine+regulation+of+fat+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+biophysica+acta%22%5BJournal%5D)">The contribution of vitamin A to autocrine regulation of fat depots.</a> Biochimica et biophysica acta. 1821, 190-197 (2012).</li>
<li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miR-133a+regulates+adipocyte+browning+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+genetics%22%5BJournal%5D)">miR-133a regulates adipocyte browning in vivo.</a> PLoS genetics. 9, e1003626(2013).</li>
<li>Rao, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meteorin-like+is+a+hormone+that+regulates+immune-adipose+interactions+to+increase+beige+fat+thermogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Meteorin-like is a hormone that regulates immune-adipose interactions to increase beige fat thermogenesis.</a> Cell. 157, 1279-1291 (2014).</li>
<li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-derived+PTH-related+protein+triggers+adipose+tissue+browning+and+cancer+cachexia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tumour-derived PTH-related protein triggers adipose tissue browning and cancer cachexia.</a> Nature. 513, 100-104 (2014).</li>
</ol>

Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmemiştir.

Çeşitli yöntemler, kurutma, haddeleme, ve emülsiyonun 19 de dahil olmak üzere hücreleri kapsüllemek için kullanılmıştır. Bu yöntemde, aljinat taneleri daha sonra PLL ile kaplanmış ve aljinat çekirdek kapsülleme tamamlamak için çözülmüş olan, bir iğne aracılığıyla ekstrüde edilir. Bu yöntem yıldır kullanılmaktadır, ancak, arzu edilen boyut ve küresel şekle sahip tanelerin oluşumu hala zordur. kapsüllerin boyutu, sodyum aljinat çözeltisi, ekstruder çapı ve iğne ucu ve CaCI2 çözeltisi 20 ar...

Kronik hastalıkların 1 artan insidansı tedavi hücre popülasyonlarının 2 nakli çalışmalar teşvik etmiştir. Sinjenik veya allojenik kök hücreleri, bu uygulamalar 2 için en yaygın olarak kullanılan hücre tipi vardır. Bununla birlikte, bu tedaviler implantasyondan sonra farklılaşması ve kök hücre göçü kontrol izin vermez ve maliyet etkin değildir. Yararlı fonksiyonları ile genetiği değiştirilmiş hücrelerin Transplantasyon birçok hastalığın tedavisini geliştirmek öngörmektedir. Ancak genetik hücre değişiklikleri konağın bağışıklık sistemi tarafından tanınan, bu nedenle, bu tedaviler immünosupresyonu 3 gerektirir. Insülin üreten hücrelerin kapsüllenmesi Chang 4 tarafından geliştirilmiştir. teknik, bir kalsiyum klorür çözeltisi içine daldırılır alginat damlacıklar halinde hücrelerin kapsüllenmesi dayanmaktadır. Aljinat molekülleri (G) (E) manuronik ve guluronik asit oluşur ve Ca ile bağlı olabilir 2+. Jelleşme sonra, taneler, bir poli-L-lisin (PLL) çözeltisi süspanse edilir. Bu adım sırasında, PLL kapsül membran oluşturan alginat moleküllerinde G ve M bağlanır. kapsül, zarın gözeneklilik, M ve PLL konsantrasyonları, inkübasyon süresi, ve sıcaklığı değiştirilerek modüle edilebilir. PLL bağlanmasının, aynı zamanda Çeşidi ve aljinat konsantrasyonuna bağlıdır. Ca + 2 iyonları ile çapraz bağlanmış Alginat matrisler, fizyolojik bir ortamda ya da fosfat ve sitrat iyonları konsantrasyonunun ortak tampon çözeltiler içinde kararlı değildir. Bu tamponlar alginattan Ca 2 + özü ve çekirdeği sıvılaştırılması yapabilirsiniz. Aljinat çekirdeğin Sıvılaşma hücresel hareket ve büyüme için kapsül içindeki alan sağlar. Polikatyonik poli-L-lisin (APL) polianyonik Aljinatta kapsüllenmiş hücreler immünoglobülin için geçirgen olan, ancak toksin besin girişini ve çıkışını sahiptir. Bunlar APL en özellikler uzun vadeli su etkinleştirmekgenetik olarak farklı bilgisayarlar içine naklinden sonra kapsüllü hücrelerin rvival. Elliott ve diğ., Dokuz yıllık implantasyon 5 sonra, bir insan hastada kapsüllenmiş domuz pankreatik hücrelerin saptanmıştır hayatta bildirilmiştir. Kapsülleme teknikleri, mikrokapsülleme (3-800 um) ve macroencapsulation (daha büyük 1000 um) olarak sınıflandırılabilir. Mikrokapsüller macrocapsules 6 daha dayanıklıdır. Dr Chang ve 1964 yılında meslektaşları tarafından keşfedilmesinden bu yana, mikroenkapsülasyon yaygın insülin üreten hücreler anabolik, diğer hormonlar ve biyoaktif moleküllerin 7 enkapsülasyonunda kullanılmıştır. Bu tedaviler fibrozis ve bağışıklık yanıtı 8 olmak üzere konak dokusunda çeşitli zorluklarla karşı karşıya. Başlangıçta, biyopolimerlerin kalitesine ilişkin yan etkiler çözüme kavuşturuldu. Bununla birlikte, anabolik hücrelerinin nakli de hormon overpr bir sonucu olarak, örneğin fibroz gibi yan etkilere, başlatırözel bir bezin dışına oduction. Son yıllarda, obezite ve tip 2 diyabet salgın boyutlarına 9 ulaşmıştır. Yetişkin insanların% 30&#39;dan fazla dünya çapında kilolu ve 10 obez. Artan karın içi (IAB) yağ oluşumu kronik inflamasyon insidansını artırır ve tip 2 diyabet, kardiyovasküler hastalık, bazı kanserler ve diğer morbidite 11-13 teşvik etmektedir. Çeşitli türden kanıtlar IAB yağ ile ilişkili patogenez belirli adipositlerce önlenebilir önerdi. Son çalışmalar metabolizma artırmak ve in vivo 14 kemirgenlerde obezite ve insülin direnci azaltabilir IAB bölgeye deri altı adipositlere bu nakli göstermiştir. Obezite ve insülin direnci etkili azalma, ısı 15,16 şeklinde enerji dağıtma yeteneğine sahip termojenik adipositler ile ilişkilendirilmiştir. Adipositlerin termojenik modifikasyonu kararlı transfeksiyonu ile elde edilebilirBu tür eşleşmemiş protein 1 (UCP1) veya UCP1 ve diğer termojenik genlerin 15,16 ekspresyonunu düzenleyen genlerin mitokondriyal proton uncoupling, katılan genlerin. Bizim son çalışmalar aldehit dehidrojenaz 1 a1 (Aldh1a1) yetersizlik bu farelerde 17,18 obezite ve insülin direnci azaltır IAB yağ termojenik yeniden yol açtığını gösterdi. Özellikle, termojenik Aldh1a1 eksikliği kapsüllenmesi (Aldh1a1 - / -) Preadipositler Iab yağ 18 tedavisi için yeni bir terapötik fırsat düşündüren obez vahşi tip farelerde Iab yağ aynı terapötik etkisine aracılık eder. Deneysel ayarlarında, kapsüllü hücreler maliyet etkin bir şekilde 19 özel hücre popülasyonlarının etkilerini incelemek için araştırmacılar sağlar. Burada obezite bir fare modelinde termojenik katabolik hücre çizgisinin kapsüllenmesi ve laboratuar ve terapötik uygulama yöntemini tartışır. protokol t açıklarmikrokapsül üretiminde (Şekil 1) için HREE fazlar: alginat mikro (Şekil 1A), polikatyonik poli-L-lisin (PLL), mikro yüzeyi (Şekil 1B) ilgili membranlar, oluşumu ve çıkarılması oluşumu alginat çekirdekler (Şekil 1C).

<table><tbody><tr><td>Kapsülleme cihazı (VAR V1)</td><td>Nisco</td><td>LIN-0042</td><td>Yok</td></tr><tr><td>KD bilimsel şırınga pompası</td><td>KD bilimsel</td><td>780100Y</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Olympus mikroskobu&nbsp;</td><td>Olympus Optik</td><td>IX70-S8F2</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Sodyum aljinat</td><td>Sigma</td><td>MKBP8122V</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Poli-L-lizin hidrobromür (PLL)</td> <td>Sigma</td><td>020M5006V</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Sigma</td><td>SLBJ2662V</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Sodyum sitrat tribazik dihidrat</td><td>Sigma</td><td>030M0200</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma</td><td>SLBD2595V</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN TGX Jeller</td><td>Bio-Rad</td><td>456-1093</td><td>Yok</td></tr><tr><td>ATGL birincil antikoru (tavşandan)</td> <td>Hücre Sinyali</td><td>2138S</td><td>Yok</td></tr><tr><td>İkincil anti cisim (tavşan karşıtı)</td> <td>LI-COR</td><td>926-68071</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Radyo-İmmünopresipitasyon Testi (RIPA) tamponu</td><td>Boston BioProducts</td><td>D25Y6Z</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS)</td><td>Sigma</td><td>RNBD2893</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Kortizon 10 kaşıntı önleyici merhem</td><td>Kortizon 10</td><td>C4029138</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Yenidoğan buzağı serumu (CS)</td><td>Sigma</td><td>N4762</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td>Yok</td></tr><tr><td>3-İzobutil-1-metilksantin (IBMX)</td><td>Sigma</td><td>I0516</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td>Yok</td></tr><tr><td>İnsülin (sığır)</td><td>Sigma</td><td>I5879</td><td>Yok</td></tr><tr><td>Proteaz inhibitörü kokteyl tabletleri</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td>Yok</td></tr></tbody></table>

yağ dokusu depolarında içine nakli enkapsülasyon termojenik preadipositler

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Hücre kapsülleme yarı geçirgen zarlar içinde canlı hücre tutmak üzere geliştirilmiştir. engrafted kapsüllü hücreler uzun süreli sağkalım elde etmek için tedavi edilen hastaya dokularında düşük molekül ağırlıklı metabolitleri alışverişi yapabilirsiniz. yarı-geçirgen zar, bağışıklık sistemi tarafından reddini önlemek için kapsüllenmiş hücrelerin engrafted sağlar. Kapsülleme işlemi insülin gibi biyolojik olarak aktif bileşiklerin, başka hormonlar ve sitokinler kontrollü bir şekilde serbest bırakılmasını sağlayacak şekilde tasarlanmıştır. Burada obez farelerin karın içi adipoz dokusunda ısı üretimi ve enerji tüketimine (termogenez) için lipitler tüketen katabolik hücrelerin kapsüllenmesi için bir yöntem tarif eder. Termojenik katabolik hücrelerin kapsüllenmesi obezitenin önlenmesi ve tedavisi için potansiyel olarak uygulanabilir ve tip 2 diyabet olabilir. Katabolik hücrelerin başka potansiyel uygulama alkoller veya diğer toksik metabolitler ve çevresel kirleticiler gelen detoksifikasyon içerebilir.

Şekil 1 mikro-üretimin her aşaması mikroskop altında kontrol edilebilir olduğunu göstermektedir. Şekil 2A co-kültür nasıl adipositleri kapsüllü hücreleri tek tabaka ile gösterir. Şekil 2B adiposit / mikro kapsüller ko-kültürlerini kullanarak kantitatif çalışma temsili bir örnek olduğunu adipositler Western blot ile analiz edilmiştir bölüm 5. Lisatlar tarif edilmiştir. Kapsüllenmiş hücrelerin Bu deneyde analiz edilmemiştir. 1000 seyreltme: Primer ATGL ve β-aktin antikor,...

Burada, karın içi yağ dokusunda ısı üretimi için lipitleri tüketen ve obez farelerde enerji dağılımını artıran katabolik hücrelerin kapsüllenmesi için bir protokol sunuyoruz.

Yağ Dokusu Depolarında içine Nakli Enkapsülasyon termojenik Preadipositler

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Bu prosedürün genel amacı, termojenik katabolik bir hücre hattının enkapsülasyonunu ve bunun in vitro ve potansiyel olarak in vivo uygulamalarını göstermektir. Bu prosedüre başlamak için, bir sodyum aljinat hücre süspansiyonu hazırlayın ve bunu beş mililitrelik bir şırıngaya aktarın. Bir sonraki adım, aljinat mikroboncukları üretmek için bir enkapsülasyon cihazı kullanmaktır.Mikroboncuklar daha sonra poliyonik poli L lizin çözeltisi ile kaplanır ve ardından hücre süspansiyonu etrafında yarı geçirgen bir membran oluşturmak için aljinat çekirdek kaldırılır. Son adım, kapsüllenen hücrelerin diğer hücre hatlarıyla birlikte kültüre edilmesi veya farelerin yağ dokularına enjekte edilmesidir. Nihayetinde, immün kan analizi, aldehit dehidrogenaz eksikliği olan bir adiposit içeren mikrokapsüllerle birlikte kültüre edilen adipositlerde daha yüksek lipolitik aktivite olduğunu göstermektedir.İmmünohistokimya, enkapsüle edilmiş hücrelerin farelerin yağ dokularına başarılı bir şekilde transplantasyon edildiğini gösterirken; bu yöntem, termojenez ve adipoz doku hakkında bilgi sağlayabilir. Ayrıca, hücre alt kümelerini in vivo test etmek için düşük maliyetli deneysel model sistemleri sağlamak amac

encapsulation-thermogenic-preadipocytes-for-transplantation-into

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Farelerde beyaz adipoz dokulardan izole İlköğretim beyaz preadipositlerden bej / brite hücrelerine ayırt edilebilir. Burada sunulan beyaz yağ "esmerleşme" moleküler düzenlenmesi okumak için güvenilir hücresel modeli sistemidir.

Bej / Brite Hücreler Stromal Vasküler Hücre İzolasyonu ve Farklılaşma

Yağ dokusu vasküler ataları gelen beyaz ve bej adiposit farklılaşma obezite metabolik iyileştirme için potansiyel taşımaktadır. CD34 + CD31 + insan yağı endotel hücre izolasyon ve bir sonraki vitro genişleme ve farklılaşma beyaz ve bej adiposit içine iletişim kurallarını açıklar. Birkaç aşağı akım uygulamaları ele alınmıştır.

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Burada, kapalı bir sistem cihazı kullanarak insan yağ dokusu enzimsiz mikro-parçalanma sıyoruz. Bu yeni yöntem, in vivo transplantasyon, in vitro kültür ve daha fazla hücre izolasyonu ve karakterizasyonu için uygun yağ dokusunun milimetre altı kümelerinin elde edilmesine olanak sağlar.

Hücre Fenotimi ve Sekretom Karakterizasyonu için İnsan Yağ Dokusu Mikro-parçalanma

Floresan aktif hücre sıralamasını kullanarak fare epidididimal yağ pedlerinden yüksek oranda uygulanabilir yağ progenitör hücrelerini izole etmek için basit bir yöntem sunuyoruz.

Fare Epidididimal Yağ Dokularından Yağ Progenitör Hücrelerinin Hazırlanması

Bu rapor, birincil kahverengi ve beyaz preadipositlerin yenidoğan farelerden eşzamanlı izolasyonu için bir protokol açıklanmaktadır. İzole hücreler kültürde yetiştirilebilir ve tamamen olgun beyaz ve kahverengi adipozitlere farklılaşmaya teşvik edilebilir. Yöntem, kültürdeki primer yağ hücrelerinin genetik, moleküler ve fonksiyonel olarak karakterizeini sağlar.

Primer Beyaz ve Kahverengi Preadipositlerin Yenidoğan Farelerden İzolasyonu ve Farklılaşması

Bu yağ kaplı adacık nakli yöntemi, intraperitoneal boşlukta engrafe adacıkların tespiti için uygundur. Özellikle, biyobağlayıcı ajanların kullanılmasını veya dikiş atılmasını gerektirmez.

Epididim Beyaz Yağ Dokusu Kullanılarak Yağ Kaplı Adacık Nakli

Preadipositler, yenidoğan farelerden alınan interskapular kahverengi yağ dokusunun stromal vasküler fraksiyonundan izole edilir ve lipid damlacıkları biriktiren, moleküler belirteçleri eksprese eden ve olgun kahverengi adipositlerin mitokondriyal morfolojisini gösteren hücrelere farklılaşır. Bu hücreler ayrıca immünofloresan ve transmisyon elektron mikroskobu ile analiz edilir.

Yenidoğan Farelerden İnterskapular Yağ Dokusunun Stromal Vasküler Fraksiyonundan Kahverengi Adipositlerin Farklılaşması ve Görüntülenmesi

Bu protokol, preadipositleri elde etmek ve in vitro adiposit diferansiyasyonunu sağlamak için stromal vasküler fraksiyonun (SVF) murin yağ dokusundan yarı otomatik izolasyonunu tanımlar. Kollajenaz sindirimi için bir doku ayrıştırıcısı kullanmak deneysel varyasyonu azaltır ve tekrarlanabilirliği arttırır.

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

Burada, insan deri altı yağ dokusundan (hSATMVEC'ler) mikrovasküler endotel hücrelerinin izole edilmesi, kültürlenmesi ve fenotiplendirilmesi için bir protokol tanımlanmıştır. Ek olarak, deneysel bir hSATMVEC-adiposit çapraz konuşma modelini açıklıyoruz.

İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi

Olgun adipositlerin büyüklüğü ve kırılganlığı, çalışmaları ve izolasyonları için mevcut teknik ve araçları sınırlamıştır. Burada, farklı yağ depoları ve fare diyetleri için kolayca uyarlanabilen olgun murin adipositlerinin izolasyonu için bir protokol açıklanmaktadır.

Yağsız ve Obez Farelerden Primer Murin Adipositlerinin İzolasyonu ve Kültürlenmesi

Öğrenin termojenik preadipositlerin enkapsülasyon yöntemini yağ dokusuna nakil için. Bu teknik obezite tedavisinde enerji harcamasını artırmaya yardımcı olur ve metabolik hastalık araştırmalarına katkı sağlar.

Yağ Dokusu Depolarında içine Nakli Enkapsülasyon termojenik Preadipositler

Daha fazla video keşfet