Name: İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Öğrenin, fare beyin dilimi ortak kültüründe floresan primer insan beyin tümörü hücrelerini yetiştirme yöntemini. Tümör mikroçevresinin büyüme üzerindeki rolünü araştırın ve yeni ilaç tedavilerini test edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, NIH (P01CA142536'den RAS'a, T32CA009361 DPY'ye) ve Pediatrik Düşük Dereceli Astrositom vakfından alınan hibelerle desteklenmektedir.

<ol><li>Heddleston, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioma+stem+cell+maintenance%3A+the+role+of+the+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Pharm+Des%22%5BJournal%5D)">Glioma stem cell maintenance: the role of the microenvironment.</a> Curr Pharm Des. 17 (23), 2386-2401 (2013).</li>
<li>Sasai, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shh+pathway+activity+is+down-regulated+in+cultured+medulloblastoma+cells%3A+implications+for+preclinical+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Shh pathway activity is down-regulated in cultured medulloblastoma cells: implications for preclinical studies.</a> Cancer Res. 66 (8), 4215-4222 (2006).</li>
<li>Louis, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2007+WHO+classification+of+tumours+of+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">The 2007 WHO classification of tumours of the central nervous system.</a> Acta Neuropathol. 114 (2), 97-109 (2007).</li>
<li>Duffau, H., Capelle, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preferential+brain+locations+of+low-grade+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Preferential brain locations of low-grade gliomas.</a> Cancer. 100 (12), 2622-2626 (2004).</li>
<li>Chourmouzi, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manifestations+of+pilocytic+astrocytoma%3A+a+pictorial+review%5BTitle%5D)+AND+%22Insights+Imaging%22%5BJournal%5D)">Manifestations of pilocytic astrocytoma: a pictorial review.</a> Insights Imaging. 5 (3), 387-402 (2014).</li>
<li>Buonamici, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interfering+with+resistance+to+smoothened+antagonists+by+inhibition+of+the+PI3K+pathway+in+medulloblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Interfering with resistance to smoothened antagonists by inhibition of the PI3K pathway in medulloblastoma.</a> Sci Transl Med. 2 (51), 51ra70(2010).</li>
<li>Choi, Y., Borghesani, P. R., Chan, J. A., Segal, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+from+a+mitogenic+niche+promotes+cell-cycle+exit%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Migration from a mitogenic niche promotes cell-cycle exit.</a> J Neurosci. 25 (45), 10437-10445 (2005).</li>
<li>Chan, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteoglycan+interactions+with+Sonic+Hedgehog+specify+mitogenic+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Proteoglycan interactions with Sonic Hedgehog specify mitogenic responses.</a> Nat Neurosci. 12 (4), 409-417 (2009).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 37 (2), 173-182 (1991).</li>
<li>Kenny, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+high+throughput+screening+using+a+primary+human+three-+dimensional+organotypic+culture+predicts+in+vivo+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative high throughput screening using a primary human three- dimensional organotypic culture predicts in vivo efficacy.</a> Nat Commun. 6, 6220(2015).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROCK+inhibitor+and+feeder+cells+induce+the+conditional+reprogramming+of+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">ROCK inhibitor and feeder cells induce the conditional reprogramming of epithelial cells.</a> Am J Pathol. 180 (2), 599-607 (2012).</li>
</ol>

Yazarların hiçbirinin çatışan çıkarları veya çatışan çıkarları yoktur.

Bu protokol, beyin tümör hücreleri floresan etiketli ve P6 fare sagital beyin bölümünde kaplama ve sonra kültürde bir hafta izlenebilir açıklanır. Bu beyin tümörü / Organotipik dilim ko-kültür deneyi, tümör hücre sayısı bölgesel mikro-etkisini belirlemek için kullanılabilir ve aynı zamanda insan tümör büyümesi üzerine yeni bir ilaç tedavilerinin etkisini ölçmek için bir sistem olarak da kullanılabilir. Önceki çalışmalar nöral prekürsör çoğalma 7,8 beyin mikro-çevre rolünü değerlendirmek için benzer bir strate...

Yeni kanser araştırma beyin tümörlerinin çeşitli genetik mutasyonlar, moleküler değişiklikler ve olası tedavileri belirlenmesinde önemli ilerlemeler kaydetmiştir. Bu gelişmelere rağmen, beyin tümörleri, yetişkinler ve çocuklar için kanserle ilgili mortalite üst nedenlerinden biri olmaya devam etmektedir. Beyin tümörü araştırma üzerinde sınırlandırıcı etkenler primer hasta örnekleri ve hücre çizgileri kısıtlı kullanılabilirliği ve erişilebilir deneysel sistemlerde benzersiz ve heterojen beyin mikro-çoğaltma zorluk bulunmaktadır. Birçok beyin için zamanla henüz bilinmemektedir tümör hücrelerini korumak için gerekli koşulları tümörler. Hatta neurospheres hücre süspansiyon içinde yetiştirilebilir beyin tümörleri için, kültür koşulları tümör hücrelerini 1,2 etkileyebilir. Gerçekten de, bazik fibroblast büyüme faktörü veya epidermal büyüme faktörü eklenmesi çoğalmasını teşvik etmek ve gen ekspresyonunu 1 değiştirebilir farklılaşmasını inhibe etmek. Tümör hücresi büyümesi için diğer yöntemler gibiTümör hücrelerinin ortotopik ya da deri altı doku yaması yoluyla farelerde, tümör yayılımı gibi değerli tahliller vardır, ancak bu enjekte edilmiş ve incelenebilir tümör gelişimi (özellikle düşük dereceli tümörler için), maliyeti ve tümör hücrelerinin sayısında bir zamanı gibi faktörlere ile sınırlıdır . İnsan beyni tümör hücrelerinin büyümesi için Böylece güncel yöntemler bazı tümör türleri korumak için yetersiz ve çoğunlukla yakından taklit in vivo tümör ortamları yok yapay ortamlar sağlamaktadır. Pediatrik beyin tümörlerinin Farklı türleri beynin içinde son derece uzmanlaşmış yerlerde yetişen [3, 4] ve bu tümör büyümesi için ayrı ayrı microenvironmental gereksinimlerini yansıtmak muhtemeldir [5]. Bu protokol, normal kültür koşullarında yaymak için zor olan hücreler Organotipik beyin mikro-yetiştirilebilir yeni bir sistemi tarif vivo tümör büyüme koşullarında taklit eden. Bu niceliksel deneyde, floresanla işaretlenmişbeyin tümörü hücreleri, bir jüvenil fare beyin Organotipik dilimleri üzerine kaplanmıştır ve zaman içinde kontrol edilir. Bu tahlil, tümör büyümesi üzerine mikroçevresinin etkisini araştırmak için, ve klinik olarak anlamlı beyin mikroçevresinin yeni ilaç tedavileri test etmek için kullanılır.

<table><tbody><tr><td>HEPES</td><td>Canlandırıcı&nbsp;</td><td></td><td></td>17504044</tr><tr><td>Glukoz</td><td>İnvitrojen</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>Pennisilin Streptomisin</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>14185-052</td><td></td></tr><tr><td>B-27</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>N2</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>17502-048</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Yaşam Teknolojiler</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Neurobazal-A- Orta eksi fenol kırmızısı</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td></td><td></td>12349015</tr><tr><td>Düşük Erime Noktalı Agaroz</td><td>Promega</td><td>V2111</td><td></td></tr><tr><td>Dilim Kültür Ekleri&nbsp;</td><td>Milipore</td><td>PICM0RG50</td><td></td></tr><tr><td>laminin</td><td>Invitrogen</td><td>23017015</td><td></td></tr><tr><td>Cm-DiI&nbsp;</td><td>Canlandırıcı&nbsp;</td><td>V22888</td><td></td></tr><tr><td>EDU (Etiketleme ve Algılama)&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>c10337</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Küreler&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>F-21010</td><td></td></tr><tr><td>Vibratom&nbsp;</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Konfokal Mikroskop&nbsp;</td><td>Nikon Eclipse Ni C2si</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ yazılımı&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 mm Kapak Camları&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>64-0700 (CS-5R)</td><td></td></tr></tbody></table>

İlaç tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve hedeflenen a beyin tümörü / organotipik dilim co-kültür sistemi

A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies

Beyin tümörleri kansere bağlı morbidite ve mortalitenin önemli bir nedenidir. Bu kanserler için yeni terapötikler geliştirmek zordur, çünkü bu tümörlerin çoğu standart kültür koşullarında kolayca büyütülemez. Serumsuz koşullar altında nörosfer kültürleri ve ortotopik ksenogreftler, korunabilecek tümör aralığını genişletmiştir. Bununla birlikte, birçok beyin tümörü türünün yayılması veya incelenmesi zor olmaya devam etmektedir. Bu özellikle pilositik astrositomlar ve medulloblastomlar gibi pediatrik beyin tümörleri için geçerlidir. Bu protokol, birincil insan beyin tümörlerinin kültürde büyütülmesine izin veren bir sistemi tanımlar. Bu kantitatif test, mikro çevrenin tümör büyümesi üzerindeki etkisini araştırmak ve yeni ilaç tedavilerini test etmek için kullanılabilir. Bu protokol, floresan olarak işaretlenmiş beyin tümörü hücrelerinin, genç bir fareden alınan organotipik bir beyin dilimi üzerinde büyütüldüğü bir sistemi tanımlar. Tümör hücrelerinin ilaç tedavilerine tepkisi, zaman içinde dilim üzerindeki hücre sayısındaki değişiklikleri analiz ederek bu tahlilde incelenebilir. Ek olarak, bu sistem normalde beyin tümörlerinin büyümesini teşvik eden mikro çevrenin doğasını ele alabilir. Bu beyin tümörü organotipik dilim ko-kültür testi, bir beyin mikroortamı içinde insan tümör hücreleri üzerinde yeni ilaçların test edilmesi için uygun bir sistem sağlar.

Bu bölüm sonuçlarının tip bölgesel mikroçevresinin tercih araştırmak için hem de yeni tedaviler test etmek için beyin tümörü / Organotipik dilim ko-kültür kullanmasını beklenen örneğidir. Biz tahlil doku örgütü olarak, beyin tümörleri için mikro çoğaltmak için tasarlanmış ve dilim proliferatif durumu (Şekil 3) muhafaza olduğunu göstermektedir. Ayrıca, zaman içinde dilim tümör hücrelerinin sayısında bir artış, kısmen beyin kesiti mikro-üzerine hücre göçü (Şekil 4) bağlı olabileceğini gös...

İnsan beyni tümörlerinin birçok türü, beynin belirli bölgelerine lokalizedir ve kültürde büyümesi zordur. Bu protokol, tümör mikroçevresinin rolünü ele alır ve organotipik bir fare beyin diliminde büyüyen floresan primer beyin tümörü hücrelerini analiz ederek yeni ilaç tedavilerini araştırır.

İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi

Brain tumors are a major cause of cancer-related morbidity and mortality. Developing new therapeutics for these cancers is difficult, as many of these ...

Bu prosedürün genel amacı, beyin mikroçevresinin tümör hücresi büyümesi üzerindeki rolünü araştırmak ve olası yeni ilaç tedavilerini test etmek amacıyla, floresan primer insan beyin tümörü hücrelerini bir fare beyin kesiti ko-kültüründe büyütmektir. Bu yöntem, hangi beyin bölgelerinin tümör büyümesini desteklediği ve potansiyel olarak beyin tümörlerinin neden belirli beyin bölgelerinde geliştiği gibi kanser biyolojisi alanındaki temel soruların araştırılmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, normal hücre kültürü koşullarında büyümeyen insan beyin tümörü hücreleri üzerinde yeni ilaç tedavilerini test etmek için bir sistem olarak da kullanılabilmesidir.Bu prosedüre başlamak için, postnatal altıncı gündeki bir farenin başını burnundan tutun ve kafatasının posterior kısmından göz çukurlarına doğru bilateral olarak iki kesi yapın. Doku hasarını önlemek için makasın ucunu mümkün olduğunca kafatasına yakın tutun. Ardından, birinci ve ikinci kesiyi kesecek şekilde üçüncü bir kesi yapın.Ardından, küçük yaylı makas kullanarak kafatası kemiğini nazikçe soyun. Kalan kafatası kısmını orta hat boyunca kesin. Olfaktör bulbları açığa çıkarmak için kafatasını soyun.Diseksiyon tamponu

a-brain-tumororganotypic-slice-co-culture-system-for-studying-tumor

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, bir 3B ortak kültür sisteminin gelişimini göstermektedir. Fare beyni dilimleri bir zar üzerine yerleştirilir ve floresan olarak etiketlenmiş insan beyni tümör hücrelerinin üzerinde büyümesine izin verilir. Sistem hazır olduğunda, görüntüleme için boyanır.

Organotipik Dilim Ko-kültür Modelinde Beyin Tümörü Kurulması

Video, glioblastoma dokusundan organotipik dilim kültürlerinin oluşturulmasını ve sürdürülmesini göstermektedir. İzole edilen doku bir agaroz matrisine gömülür ve bir vibratom kullanılarak ince kesitler elde edilir. Bu bölümler daha sonra bir mikroplaka içindeki geçirgen membran eklerine yerleştirilir ve uzun süreli bakım için bir dilim kültür bakım ortamında kültürlenir.

İnsan Glioblastoma Dokusundan Dilim Kültürlerinin Oluşturulması ve Sürdürülmesi

Karsinom hücreleri ile Organotipik beyin kesit kokültürü beyin dokusu karsinoma hücre istilası sürecinde floresan gibi parlak saha (video) mikroskopisi ile görselleştirme morfolojik değişiklikler sağlar. Bu model sistem ayrıca hücre değişimi ve ikmal yaklaşımlar sağlar ve manipülasyonlar ve analizlerin bir yelpazede sunuyor.

Bir Organotipik Beyin Dilim ve kanser hücrelerinin 3D Sferoid ile Coculture Sistemi

Günümüzde glioblastoma (GBM) 'nin ex vivo modelleri, insan tümörü invazyonunun fizyolojik olarak ilgili çalışması için optimize edilmemiştir. Burada, taze insan GBM dokusundan alınan organotipik dilim kültürlerinin üretimi ve bakımı için bir protokol sunuyoruz. Zaman atlamalı mikroskopi ve kantitatif hücre göç analiz tekniklerinin bir açıklaması sağlanmıştır.

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli

Organotypic Hipokampal dilim kültürler (OHSC) vivo durumu çok iyi taklit bir vitro modeli temsil. Burada biz vibratome tabanlı açıklar yüksek kaliteli dilimleri tümör hücreleri biyolojik davranışını veya yeni maddeler nöroprotektif potansiyelini değerlendirmek amacıyla elde etmek için iletişim kuralı Dilimleme geliştirilmiş.

Organotypic Hipokampal dilim kültürler çalışma Neuroprotection ve tümör hücrelerinin Invasiveness Model olarak

Biz üretimi, yetiştirme ve fare akciğer tümörleri türetilmiş organotypic dilimleri sistematik analizi için bir yöntem sağlar. Biz de dilim kalınlığı için en iyi duruma getirme ve tümör dilimleri tedavisi için ilaç konsantrasyonları seçin anlatan.

Kuruluş ve tümör dilim analizini Explants tanı testleri için bir önkoşul olarak

Organotipik tümör doku dilimlerinde gerçek zamanlı ilaç yanıtını ölçmek için bir protokol uyguluyoruz. Burada özetlenen deneysel strateji, ekstrem koşullarda klinik veya fare tümörlerinden elde edilen doku dilimlerinde orta-yüksek iş yapma ilaç ekranları yürütmek için bir platform sağlar.

Organotipik Tümör Doku Dilimlerinde Gerçek Zamanlı İlaç Yanıtının Ölçülmesi

Bu protokol, organotipik dilim kültürlerinin (OTSC'ler) hazırlanmasını tanımlar. Bu teknik, sağlam çok hücreli dokunun ex vivo olarak yetiştirilmesini kolaylaştırır. OTSC'ler, çok hücreli bir ortamda ilaçlara karşı ilgili yanıtlarını test etmek için hemen kullanılabilir.

Primer Pankreas Kanseri ve Metastazında Tümör Mikroçevresinin Preklinik Modelleri Olarak Organotipik Dilim Kültürleri

Meme kanseri beyin metastatik hücrelerinin gerçek zamanlı ilaç ve radyasyon yanıtını ölçmek için organotipik bir beyin dilimi modelinde bir protokol sunuyoruz. Yöntemler, çeşitli tedavilerin meme kanserinden beyin metastazları üzerindeki terapötik etkilerini, beyin mikroçevre arayüzü içinde ex vivo bir şekilde araştırmak için nicel bir test sağlar.

Meme Kanseri Beyin Metastatik Tümör Büyümesini İncelemek ve Hedeflemek için Ex Vivo Beyin Dilimi Modeli

Periton yüzeylerine metastaz yapmış insan kanserlerinin üretimi, kültürü ve görselleştirilmesi için bir protokol tanımlıyoruz. Rezeke edilen tümör örnekleri bir vibratom kullanılarak kesilir ve oksijenasyon ve canlılığın artması için geçirgen ekler üzerinde kültürlenir, ardından konfokal mikroskopi ve akış sitometrisi kullanılarak görüntüleme ve aşağı akış analizleri yapılır.

Rezeke Edilen İnsan Tümör Örneklerinden Ex Vivo Organotipik Psödomiksoma Peritonei Tümör Dilimlerinin Kültürü ve Görüntülenmesi

Burada, genotip-fenotip bağımlılıklarını araştırmak ve glioblastoma tedavisi için potansiyel ilaçları taramak için laboratuvar mühendisliği glioblastoma organoidleri (LEGO) üretmek ve kullanmak için kapsamlı bir protokolün ana hatlarını çiziyoruz.

Laboratuvar Mühendisliği: Glioblastoma Organoid Kültürü ve İlaç Taraması

Öğrenin, fare beyin dilimi ortak kültüründe floresan primer insan beyin tümörü hücrelerini yetiştirme yöntemini. Tümör mikroçevresinin büyüme üzerindeki rolünü araştırın ve yeni ilaç tedavilerini test edin.

İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi

Daha fazla video keşfet