Name: Tümör Gelişim Değerlendirme Mikro bilgisayarlı Tomografi ile ve Takibi Tedavi Yanıtın Akciğer Kanseri Fare Modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-20T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: Öğrenin akciğer kanseri fare modelinde mikro bilgisayarlı tomografi ile tümör gelişimini değerlendirme ve tedavi yanıtını takip etme yöntemini. Bu teknik, tümör büyüklüğündeki gerçek zamanlı değişiklikleri izleyerek kanser araştırmalarını geliştirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Sağlık hibe HL111190 bir AEH (Hibe Numarası 25461196) ve TB için JSPS KAKENHI dan-Aid Grant-(Hibe Numaraları 23390218 ve 15H04833) ve National Institutes (DMO) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, hayvan genotipleme ve histolojik kesitlerin hazırlanması ile yardımcı onun çabaları için Miyuki Yamamoto kabul etmek istiyorum. Biz teknik destek ve reaktifler için Ortak Araştırma Kaynakları, Tıp Fakültesi, Keio Üniversitesi minnettarız.

Hayvan deneyleri Keio Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Not: Bu çalışmada, Sftpc-rtTA ve akciğer adenokarsinomu hızla doksisiklin 6,7 içeren yemi besleyerek indüksiyon sonrası geliştiği Tre-Fgf9-Teller-eGFP DT fareler kullanıldı. Bununla birlikte, tüm değerlendirme işlemleri diğer akciğer kanseri fare modellerinde uygulanabilir. 1. Deney Anahat: <ol><li> Başlangıçta akciğerlerin durumunu belirlemek: <ol><li> Tümör indüksiyon öncesi, DT fareler 8 olduğunda - 12 haftalık ilk mikro-CT taraması (aşağıdaki bölümlere 2 ve 3&#39;e bakın) gerçekleştirin. Bu, akciğer bazal tarama olarak hizmet veren bir sızdıran transgen neden kendiliğinden geliştirilen nodüllerin yokluğunu teyit ve tümör indüksiyon öncesi varolan herhangi bir akciğer patolojisi yokluğunu belgelemek. </li></ol></li><li> Tümör indüksiyon başlatın: <ol><li> Düzenli ch DT fareler geçişdoksisiklin Chow akış alveoler hücreler, fibroblast büyüme faktörü (FGF), 9 ekspresyonunu indükleme ve tümör gelişimini başlatmak için. doksisiklin yemi (200 ppm) libitum verin. </li></ol></li><li> fare akciğerlerinde tümör nodüllerinin gelişimini teyit: <ol><li> Ön indüksiyon tarama ile karşılaştırıldığında tümör nodüllerinin gelişimini tanımlamak için bir mikro-CT taraması gerçekleştirin. </li></ol></li><li> tedaviye yanıtın değerlendirilmesinde: <ol><li> Tedaviye tepki olarak tümör nodülleri değişiklikleri tespit FGF reseptörü (FGFR) inhibitörü AZD4547 yönetmek için mikro-CT yeteneğini test etmek için, daha sonra 5 ve 10 hafta sonra ek mikro-CT tarama. </li></ol></li><li> Uç nokta değerlendirme: <ol><li> histolojik değerlendirme (aşağıdaki bölüm 6&#39;ya bakınız) için tüm tedavi ve kontrol fareleri ve süreç dokuları euthanize. </li></ol></li></ol> Mikro-CT Image Acquisition 2. hazırlanması Fare: <ol><li> Mikro-BT tarayıcı ve bilgisayarı açın. </li><li> clic&quot;R_m CT2&quot; adlı yazılım üzerinde k, sonra &quot;ısınma&quot; üzerine tıklayın. </li><li> Fare mikro-BT odasından alınacaktır bunun üzerine örnek yatak çıkarın. naylon ile yatak sarın. </li><li> belirtilen seviyeye kadar anestezi buharlaştırıcı için izofluran ekleyerek anestezi indüksiyon kutusunu ayarlayın. / Dk 3 L izofluran akış hızını ayarlayın. </li><li> indüksiyon kutunun içine oksijen akışını başlatmak ve 1 l / dk akış hızını ayarlamak için oksijen tankı açın. </li><li> anestezi indüksiyon kutusunda fare yerleştirin ve derinden kendiliğinden hareketin ve bir cilt tutam yanıt yokluğunda (doku hasarı veya deri molası neden olmaz cildin küçük bir kıvrım, yumuşak bir tutam) ile anestezi emin olun. </li><li> Anestezi sırasında kornea kuruluğunu önlemek için bir göz yağ sürün. </li><li> Mikro-BT odasına açın ve örnek yatakta sırt tarafında fareyi yukarı yerleştirin. fare başını tutun ve orde alt ekstremitelerde aşağıya doğru vücudu çekinr germek ve simetrik vücudu düzeltmek için. </li><li> indüksiyon kutusuna anestezi akışını kapatın ve mikro-BT odasına bağlayan tüp doğru açın. </li><li> Sürekli anestezi yönetmek için farenin burun içine anestezi tüp yerleştirin. </li><li> pozisyonda fare düzeltmek için; Fare ve plastik wrap ile örnek yatak sarın. Not: Derin anestezi altında ve tarama sırasında herhangi bir hafif bir hareket ya da vücudunun büküm puslu görüntü ve yorumlanmasında zorluk neden olur, çünkü örnek yatağa sarılı fare tutmak için kritik öneme sahiptir. </li><li> Mikro-BT odası kapatın. </li><li> 90 kV ve 160 uA ve 4.5 dk tarama zamanı mikro-BT sistemini ayarlayın. 50 × 50 × 50 mm 24 × 19 mm görüntü aralığı ve voksel boyutunu ayarlayın. kalp atışları için senkron modunu kullanın. </li><li> o klasördeki yeni görüntüleri kaydetmek için &quot;Veritabanı&quot; yeni bir klasör yapın. </li><li> Taramayı başlatın. </li><li> Taramanın tamamlanmasından sonra, boş bir kafesin içine fare taşımak ve bilinci yerine gelene kadar gözlemleyin. tamamen anestezi etkisinden iyileşene kadar diğer farelerin ile koymayın. </li></ol> 3. Ön indüksiyon Mikro-BT Görüntü Görselleştirme ve Analiz: <ol><li> : Mikro-BT görüntüleri görselleştirmek için, aşağıdaki web sitesinden ücretsiz ImageJ yazılımı indirmek <a href="http://imagej.nih.gov/ij/">http://imagej.nih.gov/ij/</a> . Not: Her mikro-BT veri dosyası yaklaşık 500 TIF dosyaları bir yığını (tif). Diğer resim görüntüleme yazılımı da kullanılabilir. </li><li> seri mikro-BT görüntüleri dosyaları açmak ve tersi karın veya boyun her fare tüm görüntüleri ilerleyin. </li><li> Naif vahşi tip farelerin taramaları kullanarak, (Şekil 1A bakınız) fare anatomi bilgisine dayanarak göğüs farklı alanlarda ve normal anatomik yapıların yoğunluğunu belirlemek. <ol><li> ile imleci tutunbilgisayar fare ve boyun göğsüne beyazımsı abdominal organlar ve diyafram gelen ve yukarı başlayarak yukarı ilerleyin. </li><li> kemikli göğüs kafesi işaretlerini (tarafta sırt ve kaburga ön sternum, vertebra) belirleyin. </li><li> göğüs ön ve kalbine yakın ve mediastende büyük kan damarları kalbi belirleyin. </li><li> sağ üzere iki kola ayrılır ve sol ana bronş daha küçük ve daha küçük bronşlara şube devam (boyun ve göğsün üst seviyesinde küçük bir koyu daire gibi) trakea lümeni gözlemleyin. Her bir bronş yakın iki ya da üç kan damarları (Şekil 1A) ile ilişkili olduğunu not edin. </li></ol></li><li> un kaynaklı DT farelerin taramaları inceleyerek başlayın ve herhangi bir anormallik varlığı tespit. <ol><li> Başka deneyler anormal öncesi indüksiyon akciğer gölgeler (örneğin, nodüller, amfizemli bül, vs.) ile fareler hariç. (Şekil 1 C-E, G, H </strong&gt;). </li></ol></li></ol> 4. Tümör indüksiyonu: <ol><li> Normal akciğer taramaları gösterdi deney farelerinde, tümör gelişmesini teşvik etmek için, doksisiklin içeren yemi (200 ppm), düzenli olarak yiyecek kendi gıda geçiş. </li></ol> 5. Takip taramaları: <ol><li> 10 hafta sonra, akciğerlerinde (bakınız Şekil 2) tümör nodüllerinin gelişimini doğrulamak için bütün farelerde bir ikinci mikro-CT taraması yapar. </li><li> iki gruba fareler ayrıldı. Bir grup için 10 hafta daha başka kontrol grubuna bir plasebo (10 hafta boyunca / hafta 6 gün gastrik tüpü yolu ile 125 ug / kg / gün) FGFR engelleyici AZD4547 yönetme. </li><li> 5 hafta sonra - 4 üncü tarama yaparak nodüler gölgeler değişiklikleri takip edin. </li><li> Tedavi 10 hafta sonunda, dördüncü bir tarama yapar. </li><li> CO2 inhalasyonu ile ya da 0.1 mg / pentobarbital 200 ul intraperitonal enjeksiyonu ile tüm fareleri öldürülür. </li><li> içinSonra görünüm / herhangi bir anormal gölgeler ortadan kaybolması (Şekil 3 kontrol, indüksiyon sonrası ve tedaviye yanıt tümör nodülleri dinamik değişimleri tespit iki veya daha fazla farklı zaman noktalarında aynı fare seri tarama görüntüleri içinde benzer pozisyonları belirlemek ). </li><li> farklı zaman noktalarında aynı fare aynı düzlemde belirlenmesini kolaylaştırmak için, fare göğüs içinde anatomik dönüm yapıları ile ilgi uçağı ilişkilendirmek için deneyin. <ol><li> Böyle trakea, onun çatallanma, sağ ve sol ana bronş, aort, diyafram ve büyük kan damarları gibi işaretlerini kullanın. Not: torakal vertebraların, kaburga ve sternum dahil Göğüs kemikleri, çünkü tarama pozisyonu yanlış yorumlanmasına olasılığını artırmak örnek yatakta fare vücut uyum ortak küçük yatırır, konumlandırma simge olarak daha az yararlıdır. Benzer şekilde, tarama dosya içinde görüntü seri numarası identifyin için güvenilmezg zaman için başka bir zaman noktası fare vücut uzunluğu değişiklik aynı pozisyon. Farklı zaman noktalarında aynı düzlem belirlenmesi başarısızlık ya da hata bulgular yanlış pozitif / negatif yorumlanmasına neden olabilir. </li></ol></li></ol> 6. Fare Ötenazi ve Akciğer Koleksiyonu: <ol><li> CO2 inhalasyonu ile ya da 0.1 mg / pentobarbital 200 ul intraperitoneal enjeksiyonu ile farelere öldürülür. </li><li> Karın duvarından boylamasına keserek karın iç organ Açığa. abdominal aorta diseksiyon ile akciğerlerde kan hacmini azaltmak için fareyi havasını alın. </li><li> ince makas ile diyafram yarık; Bu nedenle akciğerleri çöken, göğüs boşluğundan negatif basınç kaybına neden olur. kesme ve göğüs ön duvarının kaburga parçaları kaldırarak akciğer ve kalp Açığa. trake maruz cilt ve yumuşak dokuları keserek boyun ön kısmını temizleyina. </li><li> kalp ve timus bezi kesip. yemek borusu ayırmak için trakea arkasında forseps yerleştirin. </li><li> daha sonra bir G24 kanül ile trakea cannulate eklenen parçası etrafında bir iş parçacığı sıkarak yerine sabitleyin. </li><li> Şişirme ve 25 cm kolon kullanılarak trakeal kanül ile buz soğukluğunda% 4 paraformaldehit (PFA) ile akciğer sabitleyin. kanül ayırın ve sonra PFA sızmasını önlemek gırtlak onun eki kapalı üst trakea kesmek için iplik sıkın. </li><li> Dikiş ipliğinin gelen trakea çekin ve eki onu incelemek ve -bloku tr akciğer ile çıkarmak için aşağı doğru devam ediyor. % 4 PFA 5 ml ihtiva eden 15 ml&#39;lik bir tüp içine yerleştirin. Tam doku penetrasyonu ve fiksasyonu sağlamak için PFA O / N akciğerleri bırakın, daha sonra standart bir parafin blok 8 içine doku işlemek. </li><li> Hematoksilen ve eozin standart teknikler kullanılarak bir mikrotom ve leke 6 um kalınlığında dilimler halinde parafin blokları kesin. </li></ol&gt; 7. Histolojik Değerlendirme: Not: Dijital histolojik değerlendirme için bir &quot;slayt tarayıcı&quot; kullanımı burada tarif edilmesine rağmen, değerlendirme için, düzenli mikroskobu ve görüntü histolojik değerlendirme kullanılması da mümkündür. <ol><li> slayt tarayıcı enstrüman ve bilgisayarı açın. </li><li> &quot;NDP tarama&quot; yazılım tıklayın. </li><li> &quot;Slaytlar Toplu&quot; ve slaytlar bir dizi taranması için &quot;Yarı Otomatik Mod&quot; tarama modunu seçin. Not: sıralı tarama sırasında slaytlar alır robotik kol cam slaytlar kenarlarında herhangi bir düzensizlik karşı çok duyarlıdır. </li><li> Makinenin içerisine yerleştirmeden önce tüm cam slaytların kenarlarını elle muayene edin. Herhangi bir kapak cam çıkıntı veya kurutulmuş montaj orta varsa, bir kesici veya bir neşter ile temizleyin. </li><li> bir slayt kaset içine slaytlar yükleyin. numune kapağı açın ve pozisyon &quot;bir&quot; içine kaseti kaydırın;. Kapıyı kapat. </li><li> bilgisayar yazılımları, daha sonra &quot;Tamam&quot; düğmesine tıklayın kaset kendi uygun pozisyonda tüm slaytlara kısa açıklayıcı adlar vermek. </li><li> &quot;Aydınlık&quot;: profil modunu seçin. </li><li> Geçici Taramaya başlamak için &quot;Başlat Toplu&quot; üzerine tıklayın. Not: Makine tüm slaytları taramayı bittikten sonra, yazılım otomatik olarak tüm slaytlar üzerinde dokularla alanları tespit ve ilgi bir bölge olarak önerecektir. </li><li> Gerekirse, sol fare tuşunu basılı tutarak ve bölgenin sınırını çekerek ilgi bölgeyi yeniden tanımlıyor. Not: Söz konusu bölgeler çok daha uzun bir tarama süresi neden olacak gibi slaytların aşırı büyük alanlarını belirlemek. </li><li> slaytların tümü üzerinde çıkarları bölgeleri memnun kez, tüm slaytlar taramaya başlamak için &quot;Scan&quot; butonuna tıklayınız. taranmış dosyaları düşük ve yüksek çözünürlükte dijital görülebilir ve görüntüleri JPEG olarak ihraç edilebilir: Notdosyaları. </li></ol>

<ol><li>Ferlay, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+incidence+and+mortality+worldwide%3A+sources%2C+methods+and+major+patterns+in+GLOBOCAN+2012%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012.</a> Int. J. Cancer. 136, 359-386 (2015).</li>
<li>Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lost+in+translation%3A+animal+models+and+clinical+trials+in+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Transl.+Res%22%5BJournal%5D)">Lost in translation: animal models and clinical trials in cancer treatment.</a> Am. J. Transl. Res. 15, 114-118 (2014).</li>
<li>Chen, Z., Fillmore, C. M., Hammerman, P. S., Kim, C. F., Wong, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-small-cell+lung+cancers%3A+a+heterogeneous+set+of+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Non-small-cell lung cancers: a heterogeneous set of diseases.</a> Nat. Rev. Cancer. 14, 535-546 (2014).</li>
<li>Kwon, M. C., Berns, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+for+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mouse models for lung cancer.</a> Mol. Oncol. 7, 165-177 (2013).</li>
<li>Malkinson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetic+basis+of+susceptibility+to+lung+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">The genetic basis of susceptibility to lung tumors in mice.</a> Toxicology. 54, 241-271 (1989).</li>
<li>Yin, Y., Betsuyaku, T., Garbow, J. R., Miao, J., Govindan, R., Ornitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+induction+of+lung+adenocarcinoma+by+fibroblast+growth+factor+9+signaling+through+FGF+receptor+3%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid induction of lung adenocarcinoma by fibroblast growth factor 9 signaling through FGF receptor 3.</a> Cancer Res. 73, 5730-5741 (2013).</li>
<li>Arai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+cell+of+origin+and+propagation+potential+of+the+fibroblast+growth+factor+9-induced+mouse+model+of+lung+adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Characterization of the cell of origin and propagation potential of the fibroblast growth factor 9-induced mouse model of lung adenocarcinoma.</a> J. Pathol. 235, 593-605 (2015).</li>
<li>Paraffin processing of tissue. , Available from: http://protocolsonline.com/histology/sample-preparation/paraffin-processing-of-tissue/ (2012).</li>
<li>Curtis, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+tumor+genotype+is+an+important+determinant+in+identification+of+lung+cancer+propagating+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Primary tumor genotype is an important determinant in identification of lung cancer propagating cells.</a> Cell Stem Cell. 7, 127-133 (2010).</li>
<li>Lau, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-propagating+cells+and+Yap%2FTaz+activity+contribute+to+lung+tumor+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Tumor-propagating cells and Yap/Taz activity contribute to lung tumor progression and metastasis.</a> EMBO J. 33, 468-481 (2014).</li>
<li>Santos, A. M., Jung, J., Aziz, N., Kissil, J. L., Puré, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+fibroblast+activation+protein+inhibits+tumor+stromagenesis+and+growth+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Targeting fibroblast activation protein inhibits tumor stromagenesis and growth in mice.</a> J Clin Invest. 119, 3613-3625 (2009).</li>
<li>Zinn, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+Bioluminescence+Imaging+in+Small+Animals%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Noninvasive Bioluminescence Imaging in Small Animals.</a> ILAR J. 49, 103-115 (2008).</li>
<li>Yao, R., Lecomte, R., Crawford, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-Animal+PET%3A+What+Is+It%2C+and+Why+Do+We+Need+It%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med+Technol%22%5BJournal%5D)">Small-Animal PET: What Is It, and Why Do We Need It.</a> J Nucl Med Technol. 40, 157-165 (2012).</li>
<li>Haruyama, N., Cho, A., Kulkarni, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview%3A+Engineering+transgenic+constructs+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Overview: Engineering transgenic constructs and mice.</a> Curr Protoc Cell Biol. , Chapter 19, Unit 19.10 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Tümör nodül gelisimi ve daha planlamak için akciğer kanseri ile ilişkili deneyler yapıyorlar bilim adamları sağlayacak akciğer kanseri hayvan modellerinde tedaviye yanıtın gerçek zamanlı akciğer anormalliklerinin belirlenmesi ve takibi için burada açıklanan mikro-BT tabanlı bir yöntem doğru ve etkili deneyler zaman ve kaynak tasarruf ederken. Biz daha önce aynı amaçla 6 MRG kullandık. MRG ile akciğer nodüllerinin tespiti için tarama ve eşik netlik Bu çalışmada 6 açıklanan mikro-BT ile ölçüşebiliyor...

Akciğer kanseri dünyada yaklaşık 1 kanseri önde gelen ölüm nedenidir. Akciğer kanserinin önlenmesi, erken tespit ve tedavisi üzerine araştırmalar, dünya 2,3 genelinde birçok araştırma merkezlerinde devam etmektedir. Akciğer kanseri için çeşitli hayvan modelleri geliştirilmiştir ve bunlar kanser kök hücrelerinin varlığını belirlemede, akciğer karsinogenezindeki ve menşe hücrenin mekanizmaları çalışmak yararlı olduğu kanıtlanmıştır ve çeşitli yeni tedavi stratejileri 4 incelerken. Daha önce modelleri farelerin 5 hassas suşlarında kanserojen kaynaklı tümör başlaması dayanıyordu. Akciğer kanseri özellikle manipüle genetik lezyonlar sonucu ortaya çıktığı nakavt ve transgenik fare modellerinin geliştirilmesi önemli ölçüde tümör indüksiyonu ve insan akciğer kanseri 4 mimik çeşitli yönlerini kontrol yeteneğimizi geliştirdi. Bununla birlikte, akciğer kanseri, hayvan modellerinde kullanımında büyük bir sorun, gerçek zamanlı bir yöntemi yokluğu içindoğru tespit etmek ve fare akciğerlerde tümör başlangıcı ve gelişimini izlemek ve bu tür tedavilere yanıt devam eden büyüme ya da azaltılması gibi boylarına, herhangi bir sonraki değişiklik belgelemek. Bu birkaç kez, çaba ve kaynak tüketen teknikleri tümörleri belirlemek ve bunların deney sonuçlarını değerlendirmek için başvurmak araştırmacılar zorlamıştır. Tümör başlatılmasına cevaben doğal arası fare varyasyonu, bu veri değişkenliği azaltmak için her bir deney grubu hayvanların çok sayıda kullanılmasını gerektirir. gerçek zamanlı olarak tedavi tümör büyümesini veya yanıtı değerlendirmek için yetersizlik örneklerinden kaynak israfı ile sonuçlanan, körü körüne doğru veri toplamak garanti uzun süreli deneysel protokolleri birden fazla zaman noktalarında fareler euthanize araştırmacılar zorlamıştır ya çok erken ya da çok geç zaman noktalarında toplanan. Bu çalışmada, bir yöntem olup, küçük bir hayvan mikro c yararlanmaomputed tomografi (mikro-CT) tarayıcı tespit ve takip akciğer tümörleri farelere yaşayan tanıtıldı &#39;de. Biz son zamanlarda tarif Sftpc-rtTA ve Tre-Fgf9-Teller-eGFP çift transgenik (DT) hızla doksisiklin 6,7 ile indüksiyon aşağıdaki akciğer adenokarsinomu geliştirmek fareler kullanıldı. Mikro-BT kullanımı (diğer şeylerin yanı sıra) bize sağlayan indüksiyon sonrası akciğerde tümör nodülleri gelişimini onaylamak ve deneysel tedavilere yanıt tümör nodülleri değişiklikleri gözlemlemek, indüksiyon öncesi anormal akciğer anomalileri olan fareler dahil değildir. fareler ve histolojik değerlendirme son nokta ötanazi mikro-CT ile gerçekleştirilen gerçek zamanlı değerlendirilmesi doğruluğunu teyit etti. Biz bu teknik, değerli kaynakların tasarrufu gözlem süresini kısaltarak ve sonuçlarının doğruluğunu ve anlayış artırırken akciğer kanseri hayvan modelleri kullanılarak daha iyi planlanmış deneyler önünü inanıyoruz.

<table><tbody><tr><td>mikro röntgen ışını; bilgisayarlı tomografi</td><td>Rigaku R_mCT2</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoZoomer RS Dijital Patoloji Sistemi</td><td>Hamamatsu&nbsp;</td><td>RS C10730</td><td></td></tr><tr><td>NDP.view2&nbsp; Görüntüleme yazılımı</td><td>Hamamatsu&nbsp;</td><td>U12388-01</td><td>http://www.hamamatsu.com/jp/en/U12388-01.html</td></tr><tr><td>İzofluran Buharlaştırıcı - Huni Doldurma</td><td>VETEQUIP</td><td>911103</td><td></td></tr><tr><td>İndüksiyon odası, 2 L&nbsp; W9.5 ve kez; D23 ve zamanları; H9.5</td><td>VETEQUIP</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Mylan</td><td>ES2303-01</td><td></td></tr><tr><td>AZD 4547</td><td>LC Labratories</td><td>A-1088</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Kyoritsu</td><td>SOM02-YA1312</td><td></td></tr><tr><td>G24 kanül ve nbsp;</td><td>Terumo</td><td>SP-FS2419</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Wako</td><td>163-20145</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Leica</td><td>RM2265</td><td></td></tr><tr><td>Doksisiklin</td><td>SLC Japonya / PMI Nutrition International</td><td>5TP7</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ yazılımı&nbsp;</td><td>Ulusal Sağlık</td><td></td> Enstitüsü <td>http://imagej.nih.gov/ij/</td></tr> <tr><td>Puralube veteriner merhemi (Oküler kayganlaştırıcı)</td><td>Dechra</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr></tbody></table>

tümör gelişim değerlendirme mikro bilgisayarlı tomografi ile ve takibi tedavi yanıtın akciğer kanseri fare modeli

Using Micro-computed Tomography for the Assessment of Tumor Development and Follow-up of Response to Treatment in a Mouse Model of Lung Cancer

Akciğer kanseri dünyanın en ölümcül kanseridir. Akciğer kanseri için yeni tedavileri tanımlamak için dünya çapında yoğun araştırmalar devam etmektedir. Akciğer kanserinin çeşitli fare modelleri, kanser gelişim mekanizmasını incelemek ve çeşitli terapötik stratejileri denemek için kullanılmaktadır. Bununla birlikte, farelerin akciğerlerinde tümör nodüllerinin gelişimini tanımlamak ve çeşitli deneysel ve terapötik müdahalelere yanıt olarak boyutlarındaki değişiklikleri izlemek için gerçek zamanlı bir tekniğin olmaması, hastalığın seyrinin doğru bir tanımını elde etme yeteneğini ve tedavilere zamanında yanıtını engellemektedir. Bu çalışmada, akciğer adenokarsinomunun bir fare modelinde akciğer tümörlerinin gelişiminin tespiti için mikro bilgisayarlı tomografi (BT) tarayıcısı kullanan bir yöntem tanımlanmıştır. Daha sonra, mikro-BT ile aylık takiplerin, akciğer tümöründe ek nodüllerin ortaya çıkması, daha önce tespit edilen nodüllerin boyutunda artış ve tedaviye yanıt olarak nodüllerin boyutunda azalma veya tam çözünürlük gibi dinamik değişiklikleri tanımlayabildiğini gösterdik. Son olarak, bu gerçek zamanlı değerlendirme yönteminin doğruluğu son nokta histolojik nicelemesi ile doğrulandı. Bu teknik, akciğer kanseri hayvan modelleri üzerinde daha karmaşık deneylerin planlanması ve yürütülmesinin önünü açmakta, zaman ve kaynak tasarrufu sağlarken karsinogenez mekanizmalarını ve farklı tedavi yöntemlerinin etkilerini daha iyi anlamamızı sağlamaktadır.

Akciğer anormallikleri olan fareler tanımlanması başlangıçta uygulandı. DT fareler 8 idi tümör indüksiyonu önce - 12 haftalık, tüm farelerin akciğerleri mikro-BT ile tarandı. Şaşırtıcı bir şekilde, farelerin yaklaşık% 50 oranında daha sonraki çalışmaya dahil onları uygun gördükleri için bizi zorladı anormallik saptandı. Bu anormallikler nodül gibi gölgeler, büyük tek veya multipl küçük amfizematöz bül ve / veya lober atelektazi (Şekil 1A, C, DE, GH) idi. Ardından, FG...

Mikro bilgisayarlı tomografi kullanarak bir adenokarsinom fare modelinin akciğerlerinde tümör nodülü gelişiminin saptanması için bir yöntem ve bunun zaman içinde ve tedaviye yanıt olarak nodül boyutundaki değişiklikleri izlemek için kullanımını açıklıyoruz. Değerlendirmenin doğruluğu son nokta histolojik kantizasyonu ile doğrulandı.

Tümör Gelişim Değerlendirme Mikro bilgisayarlı Tomografi ile ve Takibi Tedavi Yanıtın Akciğer Kanseri Fare Modeli

Lung cancer is the most lethal cancer in the world. Intensive research is ongoing worldwide to identify new therapies for lung cancer. Several mouse ...

Bu videonun genel amacı, akciğer kanseri fare modellerinde tümör gelişiminin, tedavi yanıtının ve diğer deneylerin değerlendirilmesi için Mikro BT kullanmanın avantajlarını belirlemektir. Bu yöntem, fare modeli kullanıldığında akciğer kanseri alanındaki; tümörlerin ne zaman büyümeye başladığı, büyüme hızı ve terapötik müdahalelere verilen yanıt gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu teknik, tümör boyutlarındaki gerçek zamanlı değişiklikleri tespit ederken, hangi hayvanların çalışmamızdan hariç tutulması gerektiğini belirlememize olanak tanır.Bu teknik zaman ve emek tasarrufu sağlar ve çalışma grubu başına düşen fare sayısını belirgin şekilde azaltır. Micro-CT tarayıcıdan bilgisayar kontrolüne erişin ve "RMCT2" adlı yazılım paketini açın. Ardından, ısıtma döngüsünü başlatın. Sonrasında, fare için tarayıcı numune yatağını plastik ile sararak hazırlayın.Ardından, fareyi izofluran kullanarak anestezi altına alın ve deri sıkıştırma yöntemiyle anestezinin gerçekleştiğini doğrulayın. Küçük bir deri kıvrımının nazikçe sıkıştırılması yeterlidir. Sonrasında, kornea kuruluğunu önlemek için oftalmik pomad uygulayın.Şimdi fareyi, sırtı yukarı gelecek şekilde örnek yatağına yerleştirin. Farenin başını tutun ve vücudu simetrik olarak germek ve düzeltmek için gövdeyi alt ekstremitelerden aşağıya doğru çekin. Ardından, sürekli anestezi uygulamak için anestezik gazı hazneye yönlendirin ve gaz tüpünü hayvanın burnunun yanına konumlandırın.Ardından, fareyi sabit tutmak için fareyi ve örnek yatağını plastik ile sarın. Tarama sırasında meydana gelecek herhangi bir hareket veya dönme bulanık ve kullanılamaz görüntülere yol açacağından, farenin sabitlendiğinden emin olun. Şimdi bölmeyi kapatın, sistemi 90 kilo-volt ve 160 mikro-ampere ayarlayın ve tarama süresini 4.5 dakika olarak belirleyin.Görüntü aralığını 24 milimetre olarak ayarlayın. Ardından, sistemi kalp atışları için senkron moduna getirin. Şimdi, veritabanında yeni görüntüler için yeni bir klasör oluşturun ve taramayı başlatın.Taramayı tamamladıktan sonra, fareyi boş bir kafese taşıyın ve bilinci yerine gelene kadar gözlemleyin. Anesteziden tamamen çıkana kadar onu kafes arkadaşlarına geri döndürmeyin. Seri mikro CT görüntü dosyalarını Image J'de açın. Her bir farenin boyundan abdomene veya tam tersi yönde tüm görüntüleri arasında kaydırma yaparak ilerleyin.Şimdi, naive yabani tip farelerin taramalarını kullanarak, göğüsteki farklı bölgelerin yoğunluğunu ve normal anatomik yapıları belirleyin. Beyazımsı abdominal viseral organlara ve diyaframa kadar yukarı kaydırın; göğüs boyunca boyun bölgesine kadar olan alanı belirleyin. Kemikli göğüs kafesi referans noktaları olan sternum, vertebra ve kaburgaları not edin.Ardından, göğsün ön kısmındaki kalbi, kalbin yakınındaki ve mediastinumdaki ana kan damarlarını belirleyin. Trake lumen, boyun ve üst göğüs seviyesinde bulunan küçük, koyu renkli bir dairedir; sağ ve sol ana bronşlara ayrılır ve ardından giderek daha küçük bronşlara dallanmaya devam eder. Her bir bronşun iki veya üç kan damarıyla yakından ilişkili olduğunu not edin.Şimdi, indüklenmemiş DT farelerinin taramalarını incelemeye başlayın ve herhangi bir anormallik olup olmadığını belirleyin. Nodüller veya amfizematöz bullae gibi indüksiyon öncesi anormal akciğer gölgeleri olan fareleri deneyden hariç tutun. Bu deney için, FGF9 ile indüklenen tümörler oluşturabilen, normal akciğer taramalarına sahip fareleri kullanın.Tümörleri indüklemek için yemlerine 200 ppm konsantrasyonda doksisiklin ekleyin. 10 hafta sonra, farelerin akciğerlerinde tümör nodülleri geliştiğini doğrulamak için ikinci bir Mikro-BT taraması yapın. Ardından, fareleri iki gruba ayırın.FGFR bloker olan AZD4547'yi bir gruba gastrik tüp aracılığıyla uygulayın. Bu işlemi 10 hafta boyunca haftada 6 gün gerçekleştirin. Diğer gruba plasebo verin.Tedavinin dördüncü ila beşinci haftasında üçüncü bir tarama yaparak nodüler gölgelerdeki değişiklikleri takip edin. Daha sonra, 10 haftalık tam tedavinin sonunda dördüncü bir tarama gerçekleştirin. Ardından, farklı zaman noktalarındaki seri tarama görüntülerinde benzer konumları karşılaştırarak, tedaviye yanıt olarak tümör nodüllerindeki dinamik değişiklikleri belirleyin.Herhangi bir anormal gölgenin ortaya çıkışını veya kayboluşunu inceleyin. Sonuçları yorumlamak için aynı anatomik pozisyona doğru şekilde yönlendirme yapmak kritik öneme sahiptir. Göğüs içerisinde kolayca tanımlanabilen trake, bifurkasyon noktası, sağ ve sol ana bronşlar, aorta ve büyük kan damarları ile diyafram gibi anatomik işaretçileri kullanın.Vücut eğilmeleri nedeniyle, kemikler daha az kullanışlı referans noktalardır. Bir fareyi ötanize edip boynuna ve akciğerlerine erişim sağladıktan sonra, kalbi ve timus bezini kesin. Trakeayı özofagustan ayırmak için pensi trakeanın arkasına yerleştirin.Ardından, G24 kanül kullanarak trakeayı kanüle edin ve trakealar arası uca yerleştirilen bir sütürü düğümleyerek kanülü sabitleyin. Şimdi, kanül aracılığıyla 25 cm'lik bir kolon oluşturacak şekilde buz gibi soğuk %4 PFA ile akciğeri şişirin ve sabitleyin. Daha sonra, PFA sızıntısını önlemek için kanülü çıkarın ve trakeadaki düğümü sıkılaştırın.Şimdi, larinkse olan bağlantısı da dahil olmak üzere üst trakeayı kesin. Trakeayı sütür ipinden çekerken, trakea ve akciğerleri tüm bağlantılarından diseke edin. Ardından, trakeayı akciğerlerle birlikte en bloc olarak çıkarın.Dokuları, oda sıcaklığında 5ml %4 PFA içeren 15ml'lik bir tüpe yerleştirin. Dokunun tamamen nüfuz etmesi ve fikse olması için akciğerleri gece boyunca PFA içinde bekletin. Ardından, dokuyu her zamanki gibi işleyin.Bu çalışma için 8-12 haftalık DT farelerin ön taramasında, yaklaşık yarısında Mikro-BT taramasında akciğer anomalileri görülmüş ve bu durum onları çalışmaya dahil edilmek için uygunsuz kılmıştır. Çalışma kapsamında, tümör indüksiyonu 10 hafta boyunca aktive edilmiş ve ardından tedavi uygulanmıştır. 10 hafta boyunca FGFR inhibitörü AZD4547 verilen farelerde, tedavi öncesi taramalarda görülen nodüllerin yok olduğu veya boyutlarının küçüldüğü gözlemlenmiştir.Öte yandan, plasebo verilen kontrol farelerinde ya hiçbir değişiklik görülmedi ya da nodül boyutunda artış ve/veya yeni nodüllerin ortaya çıkışı gözlendi. Akciğerlerin son nokta histolojik değerlendirmesi, Mikro-BT taramasıyla elde edilen bulguların doğruluğunu onaylamıştır. Akciğerleri temiz olduğu değerlendirilen farelerin gerçekten normal akciğer histolojisine sahip olduğu görülmüştür.Anormallikler gösteren farelerde, büller ve nodüller dahil olmak üzere çeşitli histolojik değişiklikler görülmüştür. Doxisiklin ile 10-12 haftalık indüksiyonun ardından, tüm hayvanlarda değişken boyut ve konumlarda çok sayıda adenokarsinom nodülü gözlemlenmiştir. Ardından uygulanan 10-12 haftalık bir FGFR blokeri tedavisi, daha az ve daha küçük nodüllerle sonuçlanmıştır.Bu videoyu izledikten sonra, fare akciğerindeki tümör gelişimini değerlendirmek için Micro-CT'nin nasıl kullanılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Ayrıca, çeşitli deneysel prosedürlere yanıt olarak bu tümörlerde meydana gelen değişiklikleri takip edebilmelisiniz. Fareler başladıktan sonra taramalar fare başına 10 dakikadan kısa sürede gerçekleştirilebilir.Bu prosedürü uygularken, taramalar sırasında hareketi en aza indirmek için farenin derin anestezi altında tutulması ve örnek tablasına güvenli bir şekilde sabitlenmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, akciğer kanseri ve kanser kök hücreleri alanındaki araştırmacıların tümör gelişiminin kapsamını, progresif regresyonu keşfetmelerine ve farklı deneyler kurgulamalarına yol açmıştır. X-Işınları ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini unutmayın.Bu prosedür uygulanırken standart makine çalıştırma prosedürleri her zaman takip edilmelidir.

using-micro-computed-tomography-for-assessment-tumor-development

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kemik metastazı deneysel bir fare modeli lusiferaz meme tümör hücreleri ifade intrakardiyak teslim edildikten sonra kurulmuştur. Biyoparlaklık ve mikro BT görüntüleme ile tümör gelişimi ve osteolitik lezyon sonuçlandı boyuna takip edildi.

Biyoparlaklık ve Micro CT Görüntüleme Tümör Metastazlari ve osteolitik Lezyonlar İzleme

Diffüz floresans tomografi preklinik için yüksek boyunca nispeten düşük maliyetli ve potansiyel bir yaklaşım...

Kanser BİYOMARKÖRLERİN Yerelleştirme Küçük Hayvanlarda Bilgisayarlı Tomografi eşliğinde Zaman alanı Diffüz Floresans Tomografi

Bu anti-kanser tedavisi için, görüntüleme yanıt için bir yöntem...

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

Biz bir non-invaziv multimodal bleomycin Çift Kişilik boğaza korumak tarafından indüklenen fare akciğer fibrozis modelinin boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı yaklaşım Imaging tanımlamak.

Yaklaşım Imaging Multimodal Bleomycin kaynaklı akciğer fibrozis farelerde boyuna değerlendirmesi için mikro-CT ve floresan moleküler tomografi dayalı

Bu protokol için biz [18F]-2-fluoro-2-deoxy-D-glucose pozitron emisyon tomografisi ve bilgisayarlı tomografi (18F-FDG PET/BT) tümör metabolik yanıt hedefe yönelik tedavi MLN0128 bir olarak ölçmek için görüntüleme nasıl tarif KRAS/Lkb1 mutant fare model akciğer kanseri ve düşsel yüksek çözünürlüklü ex vivo autoradiography ve nicel Histoloji ile birleştiğinde.

18F-FDG PET/BT görüntüleme ve nicel Histoloji glikoz metabolizması akciğer kanserinin fare modellerinde dinamik değişiklikleri ölçmek için kullanmak

Bu makalede, h2052/484 mezotelyoma hücrelerinin immünazatlı atimik farelerin plevral kaviteye implantasyonu ile insan plevral mezotelyoma bir ortopik fare modeli nin üretimi açıklanmaktadır. İntraplevral tümörlerin gelişiminin uzunlamasına takibi non-invaziv multimodal[18F]-2-floro-2-deoksi-D-glukoz pozitron emisyon tomografisi ve bilgisayarlı tomografi görüntüleme ile değerlendirildi.

Athymic Farelerde İnsan Plevral Mezotelyoma'nın Ortotopik Modelinin PET/BT ile İmplantasyonu ve İzlenmesi

Bu protokol, farelerde KRAS akciğer tümörlerini indüklemek için atılan adımları ve ultrason görüntüleme ile oluşan tümörlerin sayısallaştırılmasını açıklamaktadır. Küçük tümörler erken zaman noktalarında B-çizgileri olarak görselleştirilir. Daha sonraki zaman noktalarında ultrason yazılımında ölçüm aracı ile nispi tümör hacmi ölçümleri yapılır.

Ultrason Görüntüleme ile Farelerde Akciğer Tümörü İlerlemesinin Saptanması

Bu yayında, çift modalite radyonüklid görüntüleme kullanarak in vivo farelerde hava yolu mukozirary boşluğunu (MCC) değerlendirme protokollerini açıklıyoruz. Bu protokol, çift SPECT/CT sisteminde fare tüm gövde (MWB) kolimatörleri kullanılarak tek bir foton emisyonlu bilgisayarlı tomografi (SPECT) ve bilgisayarlı tomografi (BT) alma protokolü için tasarlanmıştır.

Farelerde Mukozdiliyel Temizliğin In vivo Değerlendirilmesi

Bu protokol, fare tiroid bezinin tamamını görselleştirmek ve anaplastik tiroid karsinomunun büyümesini izlemek için yüksek frekanslı ultrasonografiyi tanımlamaktadır.

Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Ortotopik ATC Tümörlerinin Analizi için Yüksek Çözünürlüklü Ultrasonografi

Akciğer kanseri için yeni tedaviler geliştirmenin en büyük zorluğu, bölgesel hastalık metastatik hastalığa ilerlerken tümör mikro çevresinin modellenmesini içerir. Burada, zaman içinde hastalığın in vivo olarak izlenmesine izin veren ortotopik bir sinjeneik akciğer kanseri modeli oluşturmanın basit bir yöntemini açıklıyoruz.

Akciğer Kanserinin Sinjeneik Ortotopik Fare Modelini Oluşturmak için Minimal İnvaziv Bir Yöntem

Öğrenin akciğer kanseri fare modelinde mikro bilgisayarlı tomografi ile tümör gelişimini değerlendirme ve tedavi yanıtını takip etme yöntemini. Bu teknik, tümör büyüklüğündeki gerçek zamanlı değişiklikleri izleyerek kanser araştırmalarını geliştirir.

Tümör Gelişim Değerlendirme Mikro bilgisayarlı Tomografi ile ve Takibi Tedavi Yanıtın Akciğer Kanseri Fare Modeli

Daha fazla video keşfet