Tümör Gelişim Değerlendirme Mikro bilgisayarlı Tomografi ile ve Takibi Tedavi Yanıtın Akciğer Kanseri Fare Modeli

Bu videonun genel amacı, akciğer kanseri fare modellerinde tümör gelişiminin, tedavi yanıtının ve diğer deneylerin değerlendirilmesi için Mikro BT kullanmanın avantajlarını belirlemektir. Bu yöntem, fare modelini kullanırken akciğer kanseri alanında, tümörlerin ne zaman büyümeye başladığı, büyüme hızı ve terapötik müdahalelere verilen yanıt gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu teknik, tümör boyutlarındaki gerçek zamanlı değişiklikleri tespit ederken, hangi hayvanların çalışmamızdan çıkarılması gerektiğini belirlememizi sağlar.

Teknik, zamandan ve emekten tasarruf sağlar ve çalışma grubu başına fare sayısını önemli ölçüde azaltır. Micro-CT tarayıcıdan bilgisayar kontrolüne erişin ve RMCT2 adlı yazılım paketini açın"Ardından ısınma döngüsünü başlatın. Ardından, tarayıcı numune yatağını plastiğe sararak fare için hazırlayın.

Daha sonra, fareyi izofluran kullanarak uyuşturun ve bir cilt tutamını kullanarak uyuşturulduğunu onaylayın. Küçük bir cilt kıvrımının nazikçe bir tutamına dokunmak yeterlidir. Ardından, kornea kuruluğunu önlemek için oftalmik bir merhem sürün.

Şimdi fareyi sırt tarafı yukarı bakacak şekilde numune yatağına yerleştirin. Farenin başını tutun ve vücudu simetrik olarak germek ve düzeltmek için vücudu alt ekstremitelerden aşağı doğru çekin. Daha sonra, anestezik gazı odaya yönlendirin ve sürekli anestezik uygulamak için gaz tüpünü hayvanın burnunun yanına yerleştirin.

Ardından, fareyi yerinde tutmak için fareyi ve numune yatağını plastikle sarın. Farenin güvenli olduğundan emin olun, çünkü tarama sırasında herhangi bir hareket veya bükülme puslu, kullanılamaz görüntülere neden olur. Şimdi hazneyi kapatın, sistemi 90 kilo-volt ve 160 mikro ampere ayarlayın ve tarama süresini 4,5 dakikaya ayarlayın.

Görüntü aralığını 24 milimetre olarak ayarlayın. Ardından, sistemi kalp atışları için eşzamanlı moda ayarlayın. Şimdi, yeni görüntüler için veritabanında yeni bir klasör oluşturun ve taramayı başlatın.

Taramayı tamamladıktan sonra, fareyi boş bir kafese taşıyın ve bilincini geri kazanana kadar gözlemleyin. Anesteziden tamamen iyileşene kadar yuvasına geri koymayın. Seri mikro BT görüntü dosyalarını görüntü J'de açın. Her farenin tüm görüntüleri arasında boynundan karnına veya tam tersi şekilde kaydırın.

Şimdi, saf vahşi tip farelerin taramalarını kullanarak, göğüsteki farklı alanların ve normal anatomik yapıların yoğunluğunu tanımlayın. Beyazımsı karın iç organlarına ve diyaframa kadar yukarı kaydırın ve göğsün içinden ve boyuna kadar olan alanı tanımlayın. Kemikli göğüs kafesi yer işaretlerini, sternumu, omurları ve kaburgaları not edin.

Ardından, göğsün önündeki kalbi ve kalbin yakınındaki ve mediastendeki ana kan damarlarını tanımlayın. Trakeal lümen, boyun ve üst göğüs seviyesinde, sağ ve sol ana bronşlara çatallanan ve daha sonra daha küçük ve daha küçük bronşlara dallanmaya devam eden küçük koyu renkli bir dairedir. Her bronşun iki veya üç kan damarı ile yakından ilişkili olduğunu unutmayın.

Şimdi, indüklenmemiş DT farelerinin taramalarını incelemeye başlayın ve herhangi bir anormalliğin varlığını belirleyin. Nodüller veya amfizematöz büller gibi anormal indüksiyon öncesi akciğer gölgeleri olan fareleri deneyden çıkarın. Bu deney için, FGF9'un neden olduğu tümörler üretebilen normal akciğer taramalarına sahip fareler kullanın.

Tümörleri indüklemek için, yemlerinde milyonda 200 parça doksisiklin sağlayın. 10 hafta sonra, akciğerlerinde tümör nodüllerinin gelişimini doğrulamak için bu farelerin ikinci bir Mikro-BT taraması yapın. Ardından fareleri iki gruba ayırın.

FGFR blokerini AZD4547 bir mide tüpü yoluyla bir gruba uygulayın. Bunu 10 hafta boyunca haftada 6 gün yapın. Diğer gruba bir plasebo verin.

Tedaviye dört ila beş hafta kala üçüncü bir tarama yaparak nodüler gölgelerdeki değişiklikleri takip edin. Daha sonra, tam 10 haftalık tedavinin sonunda dördüncü bir tarama yapın. Ardından, tedaviye yanıt olarak, farklı zaman noktalarında seri tarama görüntülerindeki benzer pozisyonları karşılaştırarak tümör nodüllerindeki dinamik değişiklikleri tanımlayın.

Herhangi bir anormal gölgenin görünümünü veya kaybolmasını arayın. Aynı anatomik pozisyona doğru bir şekilde yönlendirmek, sonuçları yorumlamak için kritik öneme sahiptir. Trakea, çatallanması, sağ ve sol ana bronşlar, aort ve büyük kan damarları ve diyafram gibi göğüs içinde kolayca tanımlanan anatomik yer işaretlerini kullanın.

Vücut eğimleri nedeniyle, kemikler daha az kullanışlı yer işaretleridir. Bir fareye ötenazi yaptıktan ve boynuna ve akciğerlerine eriştikten sonra, kalbi ve timus bezini kesin. Yemek borusundan ayırmak için trakeanın arkasına forseps yerleştirin.

Daha sonra, bir G24 kanülü kullanarak trakeayı kanül edin ve inter-trakeal ucun etrafına yerleştirilmiş bir dikiş atarak kanülü sabitleyin. Şimdi, 25 cm'lik bir sütuna sahip kanül aracılığıyla buz gibi% 4 PFA kullanarak akciğeri şişirin ve sabitleyin. Ardından, PFA sızıntısını önlemek için kanülü ayırın ve soluk borusundaki düğümü sıkın.

Şimdi, gırtlağa bağlanması da dahil olmak üzere üst trakeayı kesin. Ve trakeayı dikiş ipliğinden çekerken, trakea ve akciğerleri tüm ataşmanlardan ayırın. Ardından, trakeayı akciğerleri en blanc ile çıkarın.

Dokuları 5 ml oda sıcaklığında %4 PFA içeren 15 ml'lik bir tüpe yerleştirin. Tam doku penetrasyonu ve fiksasyonu için akciğerleri gece boyunca PFA'da bırakın. Ardından, dokuyu her zamanki gibi işleyin.

Bu çalışma için 8-12 haftalık DT farelerinin ön taramasında, yaklaşık yarısı Mikro-BT taramasında akciğer anormallikleri gösterdi ve bu da onları dahil edilmek için uygun hale getirmedi. Çalışma için, tümör indüksiyonu 10 hafta boyunca aktive edildi, ardından tedavi uygulandı. 10 hafta boyunca FGFR inhibitörü AZD4547 verilen fareler, tedavi öncesi taramalarda görülebilen nodüllerin boyutunda kaybolma veya azalma gösterdi.

Öte yandan, plasebo verilen kontrol fareleri ya hiç değişiklik göstermedi, nodül boyutunda bir artış ve/veya yeni nodüllerin ortaya çıktı. Akciğerlerin son nokta histolojik değerlendirmesi, Mikro-BT taraması ile yapılan bulguların doğruluğunu teyit eder. Gerçekten de berrak akciğerlere sahip olduğuna karar verilen farelerin normal akciğer histolojisi vardı.

Oysa anormallik gösteren fareler, büller ve nodüller dahil olmak üzere çeşitli histolojik değişiklikler gösterdi. Doksisiklin ile 10-12 haftalık indüksiyondan sonra, tüm hayvanlarda değişken boyut ve pozisyonlarda çoklu adenokarsinom nodülleri gözlendi. 10-12 haftalık bir FGFR blokeri ile sonraki tedavi, daha az ve daha küçük nodüller gösterdi.

Bu videoyu izledikten sonra, fare akciğerindeki tümör gelişimini değerlendirmek için Mikro-BT'nin nasıl kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız. Ve çeşitli deneysel prosedürlere yanıt olarak bu tümörlerdeki herhangi bir değişikliği takip etmek. Fare başlatıldığında, taramalar fare başına 10 dakikadan daha kısa sürede gerçekleştirilebilir.

Bu prosedürü denerken, fareyi derin anestezi altında tutmayı ve taramalar sırasında hareketi en aza indirmek için numune yatağına güvenli bir şekilde sarmayı unutmamak önemlidir. Geliştirildikten sonra bu teknik, akciğer kanseri ve kanser kök hücreleri alanındaki araştırmacıların tümör gelişiminin kapsamını, ilerleyici regresyonu ve farklı deneylerin ayarını keşfetmelerinin yolunu açtı. X-Işınları ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini unutmayın.

Standart makinede, bu prosedür hazırlanırken her zaman çalışma prosedürleri uygulanmalıdır.