Name: Etkin Bir Yöntem Dediferansiye Yağ Hücreleri Elde (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: Keşfedin, geliştirilmiş bir hücre kültürü yöntemiyle yüksek kaliteli dediferansiye yağ hücreleri (DFAT) üretmeyi. Bu protokol, rejeneratif tıp ve doku mühendisliği araştırmalarında hücre terapisi uygulamalarını ilerletmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma kısmen Japonya Bilimi Teşvik Derneği'nin (ST261006IP, TM) İleri Araştırma ve Teknolojiden Start-up Oluşturma Programı (START Programı) ve Milli Eğitim, Spor, Bilim ve Teknoloji Bakanlığı'ndan Özel Üniversitelerde Stratejik Araştırma Vakfı Programı (2014-2019) (S1411018, TM) tarafından desteklenmiştir.

insan deri altı yağ numuneleri Plastik Cerrahi, Üroloji, Çocuk Cerrahisi ve Nihon Üniversitesi Itabashi Hastanesi (Tokyo, Japonya) Ortopedik Cerrahi Anabilim ameliyat geçiren hastalarda elde edildi. Hastalar yazılı bilgilendirilmiş onam alındı ​​ve Tıp Nihon Üniversitesi Etik Komitesi çalışmayı onayladı. 1. Doku Hazırlanması <ol><li> laboratuvara ameliyathaneye gelen doku örneği getir. </li><li> (-) 5 ml PBS ile adipoz doku Yıkama 1-2 g ve 50 ml bir tüp içinde bir kez oda sıcaklığında (RT) ve 10 cm plastik tabak numuneyi. </li></ol> 2. kollajenaz sindirimi <ol><li> (-) PBS numune kaldır, steril% 0.1 10 ml, ardından (a / h) bir doku örneği içeren çanak kolajenaz çözeltisi (kollajenaz tip II). </li><li> Bu oluşan bir püre ulaşana kadar, yaklaşık olarak 15 dakika süre ile, cerrahi makas ile Doku kıymaEnsi. </li><li> Daha sonra,% 0.1 kıyılmış doku bir karıştırıcıda yavaşça sallanarak 50 ml&#39;lik bir tüp içinde 30 dakika boyunca (60 rpm) 37 ° C&#39;de (ağırlık / hacim) kolagenaz çözelti sindirimi. </li><li> 50 ml&#39;lik bir tüp içine, 100 um&#39;lik bir filtreden dijeste örnek filtre. Daha sonra, filtre ile% 2 FBS ile takviye edilmiş 10 ml DCM (Malzeme Tablo) geçmektedir. </li></ol> 3. Hücre İzolasyonu <ol><li> Oda sıcaklığında 1 dakika boyunca 100 x g&#39;de filtre hücreleri santrifüjleyin. </li><li> DCM, bir 50 ml tüp içinde% 2 FBS ile takviye edilmiş, bu noktada, 5 ml hazırlanması. </li><li> Sonra, 1000 ul pipet kullanarak yüzen yağ hücrelerini hazırlamak ve 50 ml&#39;lik bir tüp içeren ortama hücreleri ekleyin. </li><li> Daha sonra, hücreleri ile DCM orta karıştırmak için hafifçe 50 ml tüp sallayın. </li><li> Daha sonra, oda sıcaklığında 1 dakika boyunca 100 x g&#39;de santrifüj tüpü. </li><li> 18 G iğne ve 20 ml&#39;lik bir şırınga kullanarak tüpün dibinde orta atın. </li><li> Sonraki DCM s 10 ml ekleyinToplanan hücreler% 2 FBS ile upplemented. </li><li> yavaşça 50 ml tüp sallayarak hücreleri ile DCM karıştırın. </li><li> Oda sıcaklığında 1 dakika boyunca 100 x g&#39;de tüp santrifüjleyin. </li></ol> 4. Kaplama Hücreler <ol><li> 12.5 cm şişeye% 20 FBS ile takviye edilmiş, DCM ya da DMEM 41 ml ilave edilir. </li><li> Daha sonra, 200 ul pipet şişeye yağ hücrelerinin 40 ul kullanılmıştır. </li><li> Ardından,% 20 FBS ile takviye DCM veya DMEM ile şişeyi doldurmak. KRİTİK ADIM: Bu noktada, hücreler ortam boyunca yayılmasının sağlanması. Görme müstakil hücreleri kontrol ve sonradan düz tutmak için bir yuvarlak petri kapağına balon tutun. </li><li> Son olarak, inkübatör içinde balon koyun ve 7 gün boyunca 37 ° C&#39;de% 5 CO2 inkübatörü içinde rahatsız bırakın. </li><li> inkübasyon bir hafta sonra, şişeyi ters ve DFAT hücreleri kontrol edin. Bu nokta fibrobl başlangıcı 10 tarif edildiği gibi, DFAT hücre üretimi yeterliliğini değerlendirmekAST-benzeri hücreler (DFAT hücreleri) yağ hücrelerinden farklı bölgelerde yer almaktadır. </li><li> DCM veya DMEM ekleme 5 mi önceki hücre kültür ortamının çıkarılmasını takiben şişeye% 20 FBS ile takviye edilmiştir. DFAT hücreleri orta değiştirdikten sonra başka bir hafta boyunca büyümeye izin verin. </li><li> Bir hücre sayacını kullanarak, çeşitli hücre kültürü koşulları (DMEM vs DCM) kapsamında oluşturulan DFAT hücrelerinin sayısını saymak. </li></ol>

<ol><li>Lanzoni, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+clinical+programs+of+stem+cell+therapies+for+liver+and+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: clinical programs of stem cell therapies for liver and pancreas.</a> Stem Cells. 31 (10), 2047-2060 (2013).</li>
<li>de Girolamo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%3A+a+new+%22cells+as+drugs%22+paradigm.+Efficacy+and+critical+aspects+in+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Pharm.+Des%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem/stromal cells: a new "cells as drugs" paradigm. Efficacy and critical aspects in cell therapy.</a> Curr. Pharm. Des. 19 (13), 2459-2473 (2013).</li>
<li>Lindroos, B., Suuronen, R., Miettinen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+adipose+stem+cells+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">The potential of adipose stem cells in regenerative medicine.</a> Stem Cell. Rev. 7 (2), 269-291 (2011).</li>
<li>Yan, J., Tie, G., Xu, T. Y., Cecchini, K., Messina, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+as+a+treatment+for+peripheral+arterial+disease%3A+current+status+and+potential+impact+of+type+II+diabetes+on+their+therapeutic+efficacy%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell.+Rev%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells as a treatment for peripheral arterial disease: current status and potential impact of type II diabetes on their therapeutic efficacy.</a> Stem Cell. Rev. 9 (3), 360-372 (2013).</li>
<li>Ringden, O., Keating, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stromal+cells+as+treatment+for+chronic+GVHD%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Marrow+Transplant%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stromal cells as treatment for chronic GVHD.</a> Bone Marrow Transplant. 46 (2), 163-164 (2011).</li>
<li>Matsumoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+adipocyte-derived+dedifferentiated+fat+cells+exhibit+multilineage+potential%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mature adipocyte-derived dedifferentiated fat cells exhibit multilineage potential.</a> J. Cell. Physiol. 215 (1), 210-222 (2008).</li>
<li>Lessard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+adipose+stem+cells+through+dedifferentiation+of+mature+adipocytes+in+ceiling+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of human adipose stem cells through dedifferentiation of mature adipocytes in ceiling cultures.</a> J. Vis. Exp. (97), (2015).</li>
<li>Lessard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+dedifferentiating+human+mature+adipocytes+from+the+visceral+and+subcutaneous+fat+compartments%3A+fibroblast-activation+protein+alpha+and+dipeptidyl+peptidase+4+as+major+components+of+matrix+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of dedifferentiating human mature adipocytes from the visceral and subcutaneous fat compartments: fibroblast-activation protein alpha and dipeptidyl peptidase 4 as major components of matrix remodeling.</a> PLoS One. 10 (3), 0122065(2015).</li>
<li>Peng, X., et al. Phenotypic and Functional Properties of Porcine Dedifferentiated Fat Cells during the Long-Term Culture In Vitro. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPeng%2C+X+%22Biomed.+Res.+Int%22">Biomed. Res. Int</a>. 2015, 673651(2015).</li>
<li>Kono, S., Kazama, T., Kano, K., Harada, K., Uechi, M., Matsumoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+and+functional+properties+of+feline+dedifferentiated+fat+cells+and+adipose-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+J%22%5BJournal%5D)">Phenotypic and functional properties of feline dedifferentiated fat cells and adipose-derived stem cells.</a> Vet. J. 199 (1), 88-96 (2014).</li>
<li>Bellin, M., Marchetto, M. C., Gage, F. H., Mummery, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+pluripotent+stem+cells%3A+the+new+patient%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induced pluripotent stem cells: the new patient.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 13 (11), 713-726 (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

, In vitro dediferansiyasyon tavan kültürü olarak bilinen bir süreç geçmesi Olgun adipositler, daha ilkel bir fenotip dönmek ve proliferatif yetenekleri kazanmak olabilir. Bu hücreler dediferansiye yağ (DFAT) hücreleri de ifade edilmektedir. DFAT hücrelerinin multilinaj farklılaşması potansiyeli değerlendirildi. Analiz ve gen ekspresyon analizi DFAT hücreleri TSK 6 ile karşılaştırıldığında oldukça homojen olduğu saptanmıştır akım sitometrisi. Aslında, DFAT hücrelerinin hücre yüzeyi antijeni ...

Hücre tedavisi ve doku mühendisliği rejeneratif tıp 1-5 alanında sıcak konulardır. Bu tedavi yöntemleri çok ümit vericidir ederken, çeşitli teknik sorunlar şu anda bunların klinik kullanımını engelleyebilir. Bu bağlamda, iPS hücrelerinin üretiminde olduğu gibi, tüm doku mühendisliği tedavileri hasta güvenliğini korumak için dış gen iletiminin serbest hücreler üretmek gerekir. Buna göre, başarılı insan DFAT hücrelerini 6 üretmek için ilk grup oldu. Birçok diğer araştırma grupları beri daha da modelin yararlılığını vurgulayarak, memeli kökenli 7-9 DFAT hücrelerini oluşturmak için bir yöntem benimsemiştir. Birkaç çalışma boyunca, hücre kültürü ortamının kalitesi hücre orta içeriğini ayarlayarak değiştirilebilir olduğunu bulduk. Bu bulgu DFAT hücresi üretiminin başarı oranında bir artışa yol açtı ve hücre kalitesini geliştirdi; Her iki kritik faktörlerverimli gelecekte yapılacak klinik araştırmalara üreten hücreleri. Bu bağlamda ve DFAT hücresi üretimi için bir usul (benzer bir orta hücre rekombinant insan insülini, serum albümini, L-glutamik asit, çok yağ asitleri içerir orta, ve kolesterol kök mezenkimal için DCM) geliştirilmiş bir DFAT kültür ortamı içinde ve çoğalma (DKM içeriği hakkında daha fazla bilgi istek üzerine mevcuttur) geliştirildi. Kullanılan bu yöntem, yüksek kaliteli DFAT hücreleri adipojenik, osteojenik ve kondrojenik hücreleri dahil olmak üzere çeşitli hücre tiplerinin ayırt yeteneği ile üretilmiştir. Toplamda, bu valide hücre kültürü protokolü DFAT hücrelerinin kalitesini artırır ve hücre terapisi ve doku mühendisliği klinik uygulamaları geliştirmek için oldukça yararlı olabilir.

<table><tbody><tr><td>CSTI303-MSC orta&nbsp;</td><td>CSTI</td><td>87-671</td><td>Bu besiyeri metinde DCM olarak tanımlanır</td></tr><tr><td>PBS(-)</td><td>Wako</td><td>166-23555</td><td>Mg2+ ve Ca2+</td></tr><tr><td>DMEM ortamı</td> içermez <td>Gibco</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır</td><td>Serumu Sigma</td><td>172012</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz tip II</td><td>Sigma</td><td>C-6885</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Takasago Medical Industry Co., Ltd</td><td>TKZ-F2194-1</td><td></td></tr><tr><td>Çalkalayıcı</td><td>TAITEC</td><td>Bioshaker V.BR-36</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Hücre Süzgeci 100 &mu; m</td><td>Sarı CORNING YAŞAM BİLİMLERİ & nbsp;</td><td>DL 352360</td><td></td></tr><tr><td>Şahin 12,5 cm&sup2; Mavi Bacalı Vidalı Kapaklı Dikdörtgen Eğimli Boyun Hücre Kültürü Şişesi</td><td>CORNING YAŞAM BİLİMLERİ & nbsp;</td><td></td><td></td>353107</tr><tr><td>18 G iğne</td><td>NIPRO</td><td>02-002</td><td></td></tr><tr><td>20 ml Şırınga&nbsp;</td><td>NIPRO</td><td>08-753</td><td></td></tr><tr><td>Z Serisi Sürgü Sayacı</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>383550</td><td></td></tr></tbody></table>

etkin bir yöntem dediferansiye yağ hücreleri elde

An Efficient Method to Obtain Dedifferentiated Fat Cells

Doku mühendisliği ve hücre tedavisi klinik büyük umutlar tutun. Bu bağlamda, bu tür mezenkimal kök hücreler (MSC&#39;ler), multipotent hücreler, hasar görmüş organ fonksiyonu geri yakın gelecekte tedavi edici kullanılabilir. Bununla birlikte, MKH&#39;lerin ve amplifikasyon çevreleyen verimsizlik izole oldukça invaziv prosedürü dahil olmak üzere birçok teknik sorunlar, şu anda bu tedavi yöntemlerinin potansiyel klinik kullanımını engellemektedir. Burada, dediferansiye yağ hücreleri (DFAT), MSC-benzeri hücrelerin oluşumu için son derece etkili bir yöntem getirmektedir. İlginç bir şekilde, DFAT hücreleri adipojenik, osteojenik ve kondrojenik hücreleri dahil olmak üzere çeşitli hücre tiplerine ayırt edilebilir. diğer gruplar, daha önce olgun adipoz dokudan DFAT hücrelerini oluşturmak için çeşitli yöntemler sunulmuştur olmasına rağmen, bizim yöntem daha etkili DFAT hücreleri üretmek için izin verir. Bu bağlamda, ortaya DFAT kültür ortamı (DCM), FBS% 20 ile desteklenen,% 20 FBS ile takviye edilmiş DMEM den DFAT hücreleri üreten daha etkilidir. Ayrıca, hücre kültürü yöntemi ile üretilen DFAT hücreleri çeşitli doku tiplerine redifferentiated edilebilir. Bu nedenle, doku, farklılaşmadan çalışmaları için çok ilginç ve faydalı model sunulmuştur.

<html> Bu çalışmada, DFAT hücre üretme yöntemi ve araç takımı (Şekil 1) geliştirilmiştir. Bizim yöntem bize DCM ve% 20 FBS (Şekil 2A) ihtiva eden DMEM ortamı her ikisini de kullanarak DFAT hücreleri oluşturmasına olanak sağlar. Bu nedenle, biz DFAT hücrelerini üreten DCM ve DMEM verimliliğini karşılaştırıldı. Bağımsız olarak, adipositlerin sayısına (Şekil 2A ve B), DMEM karşılaştırıldığında, bu bağlamda, DCM, üç kat DFAT ...

DFAT hücre üretimi için koşulları değiştirdik ve burada bu hücrelerin üretimi için geliştirilmiş bir büyüme ortamının kullanımına ilişkin bilgi veriyoruz.

Etkin Bir Yöntem Dediferansiye Yağ Hücreleri Elde

Tissue engineering and cell therapy hold great promise clinically. In this regard, multipotent cells, such as mesenchymal stem cells (MSCs), may be used ...

Bu özgün hücre kültürü yönteminin genel amacı, dediferansiye olmuş yağ hücrelerini daha yüksek verimlilikle üretmektir. Yöntemimiz, rejeneratif tıp alanında çalışan araştırmacıların adipojenik, osteojenik ve kondrojenik hücrelerin üretimine dahil olan çeşitli süreçler hakkındaki temel sorulara yanıt bulmasına yardımcı olabilir. Hücre kültürü protokolümüzün temel avantajı DEFAT hücrelerinin kalitesini artırması olduğundan, yakın gelecekte hücre tedavisi ve doku mühendisliğindeki mevcut uygulamaları geliştirmek için uygulanabilir.Hastanın deri altı yağ örneği ameliyathaneden laboratuvara getirildikten sonra, dokuyu tartın ve bir ila iki gramlık bir adipoz doku örneğini 15 mililitrelik bir tüpe yerleştirin. Ardından örneği beş mililitre PBS ile yıkayın ve örneği 10 santimetrelik plastik bir kaba aktarın. PBS'yi uzaklaştırın.Ardından, numuneyi içeren kaba 10 mililitre steril %0,1 ağırlık/hacim kollajenaz ekleyin. Sonra, doku püre kıvamına gelene kadar cerrahi makas kullanarak ince parçalara ayırın. Parçalanmış dokuyu ve kollajenaz çözeltisini 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın ve 60 RPM'de çalkalayarak 37 °C'de 30 dakika boyunca sindirin.Sindirimin ardından, sindirilmiş örneği 100 mikronluk bir filtreden geçirerek yeni bir 15 mililitrelik tüpe süzün. Daha sonra, filtreden %2 FBS ile desteklenmiş 10 mililitre DEFAT kültür ortamı geçirin. Hücre süspansiyonundan yağ hücrelerini izole etmek için, önce filtrelenmiş hücreleri oda sıcaklığında bir dakika boyunca 100 ×g hızında santrifüjleyin.Santrifüj sırasında, 15 mililitrelik bir tüp içerisinde %2 FBS ile takviye edilmiş beş mililitre DCM hazırlayın. Ardından, santrifüj edilen tüpteki yüzen yağ hücrelerini çekmek için 1000 mikrolitrelik bir pipet kullanın ve hücreleri ortam içeren 15 mililitrelik bir tüpe ekleyin. DCM ortamını hücrelerle karıştırmak için tüpü nazikçe çalkalayın.Ardından, tüpü oda sıcaklığında bir dakika boyunca 100 ×g'de santrifüjleyin. Santrifüjlemeden sonra, tüpün altındaki besiyerini uzaklaştırmak için 18 gauge iğne ve 20 mililitrelik bir şırınga kullanın. Daha sonra hücrelere %2 FBS ile desteklenmiş 10 mililitre DCM ekleyin ve tüpü nazikçe çalkalayarak karıştırın.Hücreleri oda sıcaklığında bir dakika boyunca 100 ×g'de tekrar santrifüjleyin. Ekime başlamak için, 12,5 cm'lik bir flaska 41 mL DCM veya %20 FBS ile desteklenmiş DMEM ekleyin. Ardından, 200 µL'lik bir pipet kullanarak 40 µL yağ hücresi çekin ve bunları flaska ekleyin.Ardından flaskı DCM veya %20 FBS ile desteklenmiş DMEM ile doldurun. Hücrelerin besiyeri boyunca yayılması kritik önem taşır. Flaskı düz tutmak için yuvarlak bir Petri kabı kapağının üzerine yerleştirin.Son olarak, flaskı %5 karbon dioksit ve 37 °C'ye ayarlanmış bir inkübatöre yerleştirin ve yedi gün boyunca rahatsız edilmeden bekletin. Bir haftalık inkübasyonun ardından, flaskı ters çevirerek dediferansiye olmuş yağ hücrelerini kontrol edin. Ardından, medyumu aspire edin ve flaska 20% FBS ile takviye edilmiş beş mililitre DCM veya DMEM ekleyin.Besiyeri değişiminden sonra DEFAT hücrelerinin bir hafta daha büyümesine izin verin. Bir hafta sonra, çeşitli hücre kültürü koşulları altında üretilen DEFAT hücrelerinin sayısını belirlemek için bir hücre sayıcı kullanın. Bu görüntü, DMEM içinde 14 günlük kültür sonrası DEFAT hücre kolonilerini göstermektedir.Burada, DCM içerisinde 14 günlük kültür sonrası DEFAT hücreleri gösterilmektedir. Her durumda, ölçek çubuğu 200 mikronu temsil etmektedir. DEFAT hücre proliferasyonu bir hücre sayıcı kullanılarak nicelendirilmiş ve DCM ile DMEM'nin DEFAT hücreleri üretmedeki etkinliği karşılaştırılmıştır.Burada görüldüğü üzere, DCM kullanımı ile artmış hücre proliferasyonu gözlemlenmektedir. Burada, DCM kullanılarak üretilen insan DEFAT hücreleri, DEFAT hücrelerinin yeniden farklılaşma ve farklılaşma yeteneklerini değerlendirmek amacıyla uygun indüksiyon ortamlarında üç hafta boyunca kültüre edilmiştir. Hücreler, alkalin fosfataz boyaması ve Alizarin Red S boyaması ile osteojenik kapasite açısından pozitif sonuç vermiştir. Son olarak, adipojenik kapasite Oil Red O boyaması ile gösterilmiştir.Yüksek kaliteli DEFAT hücrelerini başarıyla üretmek için, rudiment ile kollajenaz işleminin ve yağ hücresi izolasyonunun her ikisinin de azami dikkatle gerçekleştirilmesi oldukça önemlidir. Bu çalışmalar aracılığıyla, doğrulanmış hücre kültürü yöntemimiz, gelişimsel biyoloji ve rejeneratif tıp alanlarındaki mevcut ve gelecekteki araştırma çalışmalarını kolaylaştırmayı amaçlamaktadır.

an-efficient-method-to-obtain-dedifferentiated-fat-cells

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Olgun adipositler, homojen bir fibroblast benzeri hücre popülasyonuna yol açan farklılaşma yoluyla bol miktarda kök hücre kaynağını temsil edebilir. Kollajenaz sindirimi, olgun adipositleri insan yağından izole etmek için kullanılır. Protokolümüzün amacı, insan olgun adipositlerinden multipotent, farklılaşmış yağ hücreleri elde etmektir.

Tavan Kültürlerde Olgun adipositlerinde ve dediferansiyonunu ile İnsan adipoz Kök Hücre Üretimi

Yağ dokusu vasküler ataları gelen beyaz ve bej adiposit farklılaşma obezite metabolik iyileştirme için potansiyel taşımaktadır. CD34 + CD31 + insan yağı endotel hücre izolasyon ve bir sonraki vitro genişleme ve farklılaşma beyaz ve bej adiposit içine iletişim kurallarını açıklar. Birkaç aşağı akım uygulamaları ele alınmıştır.

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Beyaz Yağ dokusundan (WAT) farmakolojik geliştirme ve metabolik çalışmalar engelleyen onun geçerli birincil kültür modelleri içinde önemli eksiklikleri vardır. Burada, bir yağ microphysiological sistem tarafından sandviç WAT levha stromal hücreler arasında üretmek için bir protokol mevcut. Bu yapıyı birincil WAT kültür için istikrarlı ve uyarlanabilir bir platform sağlar.

İnsan yağı için bir Microphysiologic Platform: beyaz yağ dokusu sandviç

Bu protokol, adipojenik ve fibro-inflamatuar stromal hücre alt popülasyonlarını murin karın içi beyaz yağ dokusu (WAT) depolarından floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması veya immünmanyetik boncuk ayırma yoluyla izole etmek için teknik yaklaşımı açıklar.

Murin İntraabdominal Yağ Depolarından Adipojenik ve Fibroinflamatuar Stromal Hücre Alt Popülasyonlarının İzolasyonu

Floresan aktif hücre sıralamasını kullanarak fare epidididimal yağ pedlerinden yüksek oranda uygulanabilir yağ progenitör hücrelerini izole etmek için basit bir yöntem sunuyoruz.

Fare Epidididimal Yağ Dokularından Yağ Progenitör Hücrelerinin Hazırlanması

Protokol, indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) saf bir adiposit popülasyonunun üretilmesine izin verir. Retinoik asit, iPSC'leri adiposit üretmek için kullanılan mezenkimal kök hücrelere (MSC'ler) ayırmak için kullanılır. Daha sonra, saf adipositler elde etmek için Nil kırmızısı boyamaya dayalı bir sıralama yaklaşımı kullanılır.

Adipositle İlişkili Bozuklukları İncelemek için İnsan iPSC'lerinin Saf Bir Adiposit Popülasyonuna Sağlam Farklılaşması

Bu protokol, preadipositleri elde etmek ve in vitro adiposit diferansiyasyonunu sağlamak için stromal vasküler fraksiyonun (SVF) murin yağ dokusundan yarı otomatik izolasyonunu tanımlar. Kollajenaz sindirimi için bir doku ayrıştırıcısı kullanmak deneysel varyasyonu azaltır ve tekrarlanabilirliği arttırır.

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

Bu protokol, iskelet ve kalp kası fibro-adipojenik progenitörlerinin (FAP'ler) dikenli fareden (Acomys) enzimatik ayrışma ve floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması yoluyla izolasyonunu ana hatlarıyla belirtir. Bu protokolden elde edilen FAP'lar etkili bir şekilde genişletilebilir ve miyofibroblastlara ve adipositlere farklılaştırılabilir.

Dikenli Fare Modelinden Fibro-Adipojenik Progenitör İzolasyonu, Genişlemesi ve Farklılaşması

Burada, otolog yağ dokusunu farklı fizikokimyasal özelliklere ve fonksiyonlara sahip çeşitli yağ bileşeni maddelere dönüştürebilen bir protokol sunuyoruz.

Yağları Özel Bileşenlere Dönüştürmek için Yenilikçi Yağ Dokusu Fraksiyonasyonu

Burada, &gt;90% işlem süresi azalması, yüksek hücre canlılığı ve geniş uyumlulukla karakterize edilen yağ kaynaklı kök hücreleri ve adipositleri verimli şekilde izole etmek için standart bir yöntem sunuyoruz.

Domuz yağ dokusundan yağ kök hücrelerinin ve adipositlerin etkili izolasyonu

Keşfedin, geliştirilmiş bir hücre kültürü yöntemiyle yüksek kaliteli dediferansiye yağ hücreleri (DFAT) üretmeyi. Bu protokol, rejeneratif tıp ve doku mühendisliği araştırmalarında hücre terapisi uygulamalarını ilerletmeye yardımcı olur.

Etkin Bir Yöntem Dediferansiye Yağ Hücreleri Elde

Daha fazla video keşfet