Name: Klinik Öncesi Bir Murin Modeli İçin Cerrahi Prosedürler ve Metodoloji emDe Novo /emMeme Kanseri Metastazı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Öğrenin, meme kanseri metastazını araştırmak için MMTV-PyMT transgenik farelerde primer tümörün cerrahi rezeksiyonunu. Bu yöntem, adjuvan tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için klinik öncesi bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, histopatoloji yardımı için Jo Hill&#39;e, ameliyat tekniği eğitimi için Dr. John Gleysteen&#39;e, videografi yardımı için Tessa Diebel&#39;e, eleştirel görüş ve tartışmalar için Wong ve Coussens laboratuvarlarının tüm üyelerine ve mali destek için OHSU Knight Cancer Institute&#39;a teşekkür ederler. Yazarlar, T32GM071388-10 ve T32CA106195-11&#39;den CEG&#39;e, NCI / NIH&#39;ye, Savunma Bakanlığı Göğüs Kanseri Araştırma Programı&#39;na, Susan G Komen Vakfı&#39;na, Meme Kanseri Araştırma Vakfı&#39;na ve Bir Kansere Karşı Stand Up - Lustgarten Vakfına verdikleri desteği onaylarlar MHW&#39;ye Vakfı Ödüllendiren Kadın Sağlığı Çemberi olan LMC&#39;ye ve MHW&#39;ye ve LMC&#39;ye Brenden-Colson Pankreas Sağlığı Merkezi&#39;ne Pankreas Kanseri Yakınsama Düşü Ekipleri Translasyonel Araştırma Granti (SU2C-AACR-DT14-14) verdi.

Aşağıdaki protokolde kullanılan hayvanlar, Hayvan Refahı Yasası düzenlemelerine ve Halk Sağlığı Hizmeti (PHS) Politikasına uyumlu olacak şekilde tasarlanan Oregon Sağlık ve Bilim Üniversitesi&#39;nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından kapsanmaktadır. Steril koşulların bakımı: Sterilize edilmiş aletler kullanılmalı ve fareler arasında steril gazlı bezle silinmeli, PBS içinde durulanır ve ardından en az 15 dakika dezenfekte edici% 70 etanolle sterilize edilmelidir. Hayatta kalma ameliyatları için cerrahi bir başlık, yüz maskesi, elbise ve eldiven giyilmelidir. Hayatta kalma ameliyatları için hayvanın ameliyat öncesi hazırlığı aşağıdaki protokole dahil edilmiştir. Reaktiflerin ve ekipmanların bir listesi için Tablo 1&#39;e bakın. 1. Primer Memeli Tümörlerden Tek Hücreli Süspansiyonların İzolasyonu ve Hazırlanması <ol><li> Denekli dişi 100 günlük transgenik MMTV-PyMT (FVB / n) farelerde anestezi uygulayın ve c altında tutunAnestezi maskesi vasıtasıyla% 2 izofluran uygulayarak onutuous sedasyon. Farenin, ayak bileği sıkışmayan bir refleksle düzgün şekilde anestezi edildiğinden emin olun. </li><li> Steril bir ortamda meme tümörünü steril makas kullanarak üstteki deri ve çevre doku dokusundan ve / veya lenf düğümlerinden ayırarak 100 günlük transgenik dişi MMTV-PyMT (FVB / n) farelerdeki primer meme tümörlerini rezekte edin. Anestezi uygulanmış fareleri servikal dislokasyonla euthanize edin. </li><li> Steril makas veya bir neşterle, primer tümörleri elle küçük parçalara (~ 1.0 mm 3 ) koyun. Tümör parçalarını 3.0 mg / mL kollajenaz A&#39;ya ve 4.0 U / mL DNase I&#39;e DMEM içerisinde çözündürün. 1.0 cm çaplı tümör için ~ 10 mL yukarıdaki sindirim ortamını kullanın. <ol><li> Steril 25 mL&#39;lik bir şişede ~ 125 rpm&#39;de ve 37 ° C&#39;de 40 dakika süreyle steril bir karıştırma çubuğu ile sindirim yapın. </li></ol></li><li> % 10&#39;luk nihai bir seyreltiye fetüs sığır serumu (FBS) ekleyerek sindirimi durdurun ve tüm karışımı wEt buz burada muhafaza edilir. </li><li> Sindirilmiş tümör süspansiyonunu 0,7 μm&#39;lik bir naylon süzgeçten 50 mL&#39;lik bir konik tüpe süzün ve süzgeçte kalan tümörleri atın. Süpernatantı 300 xg&#39;de 4 ° C&#39;de santrifüjleyin. </li><li> 1.0 cm tümör başına pelet 10 mL DMEM&#39;de süspansiyon haline getirin ve 0.7 μm&#39;lik bir naylon süzgeç ile yeniden filtre edin. Hücre konsantrasyonunu sayın, daha sonra 4 ° C&#39;de 300 xg&#39;de santrifüjleyin. </li><li> 2 x 10 7 canlı hücre / mL&#39;lik bir konsantrasyonda% 90 FBS ile% 10 dimetil sülfoksit içinde süspanse edin pelet. Tüm primer tümörün tek hücre süspansiyonlarını -80 ° C&#39;de saklayın. </li></ol> 2. Anne tümörünün ortotopik enjeksiyonu <ol><li> Donmuş primer tümör süspansiyonlarını 37 ° C&#39;de kısmen çözdürüp dondurulmuş pelet kriyojenik tüpten 20 mL DMEM&#39;ye salınana ve hücreleri sayana kadar eritin. 4 ° C&#39;de 300 xg&#39;de santrifüjleyin ve hücreleri 1: 1 DMEM&#39;de tekrar süspansiyon haline getirin: büyüme faktörü azaltılmış çözündürülmüş bazal membran hazırlığı eEngelbreth-Holm-Swarm (EHS) fare sarkomundan 1 x 10 7 hücre / mL konsantrasyonda çıkarıldı (Bkz . Malzeme Tablosu ). </li><li> Anestezi uygulanmış alıcı dişi syngeneic fare ventral tarafı yerleştirin ve bir anestezi maskesi ile% 2 izofluran uygulayarak sürekli sedasyon altında korumak. </li><li> Sağdaki 4. meme bezi enjeksiyon alanını aerosol haline getirilmiş% 70 etanol kullanarak sterilize edin ve steril bir pamuklu çubuk ile Poli (vinilpirolidon) -İyodan geçirin. </li><li> 29 G 0.3 mL insülin şırıngası kullanılarak, 6 ila 10 haftalık dişi FVB / N fare temizlenmemiş sağ 4 meme bezine 100 uL (dondurulmuş primer tümör süspansiyonlardan, 1 x 10 6 canlı hücreler) konik yan enjekte edilir. </li></ol> 3. Ortotopik meme tümörünün cerrahi rezeksiyonu <ol><li> Tümör hücresi enjekte edildikten sonra 38-60 gün sonra, farelere hacim olarak 3 mm&#39;lik 450-172 arasında [x uzunluğunda uzanan ortotopik tümör hacimleri arzetmeyen ötenazi (genişliği 2 <// 2] (enjekte edilen farelerin yaklaşık% 75&#39;i). </li><li> Bir anestezi maskesi ile% 2 izofluran uygulamak suretiyle sürekli sedasyon altında uygun tümör boyutu ventral tarafı gösteren anestezi uygulanmış fareler yerleştirin ve fare uygunsuz ayak tutam refleksiyle düzgün şekilde anestezi doğrulayın. Sedasyon sırasında kuruluğu önlemek için gözlere veteriner merhemi uygulayın. </li><li> Primer tümörü çevreleyen cerrahi alanı sterilize etmek için% 70 etanol püskürtün, daha sonra bir steril pamuklu çubuk ile Poli (vinilpirolidon) -İyoden uygulayın. NOT: Cerrahi bölgedeki epilasyon% 5 farelerde deri ekskoriasyonları ve / veya enfeksiyonlarla sonuçlanmıştır ve bu nedenle bu adımdan çıkarılmıştır (veriler gösterilmemiştir). </li><li> Şekil 1C&#39;de gösterildiği gibi, tümörün medial-kaudal künt makas kullanılarak ilk cilt insizyonu yapın. </li><li> Sonra, tümörün medialinde cildin üstün bir eksizyonu yapın ( Şekil 1C ). Herhangi bir vaskülatürü cauterize etme ihtiyacına dikkat edin.Insizyonu uzatmadan önce deride bulunan tümörü düzenleyebilir. </li><li> Deri kesisini lateral olarak (tümörün posterioru) devam edin, daha sonra üstün bir deri eksizyonu (tümöre lateral) ve medial eksizyonu (tümöre üstün) ( Şekil 1C ) yapın. </li><li> Cilt tümör çevresinde çevresel olarak eksize edildikten sonra ( Şekil 1C ), tümörü karın duvar kas sisteminden uzakta keserek ve meme bezlerini sağlam tutarak, forseps kullanarak tümörün üstündeki cildi kaldırın. </li><li> (Künt diseksiyon ile) belirlenmesi ve 4 ve 5. meme bezlerinin içinden geçen büyük gemiler dağlamak. </li><li> Tüketim yaklaşık tümör serbest dağlama sitesinde 4 ve 5. meme bezlerinin yarısı üzerinde bulunan deri ve meme bezleri (Şekil 1C) bölümleri. </li><li> Kanama durumunda, aktif kanamayı tanımlayınGemileri derhal saklayın ve hemen onlara koterleyin. 250 μL&#39;den fazla kan kaybederse, fareyi çalışmadan çıkarın ve euthanize edin. </li><li> Yara klipleri ile yara klipi uygulayıcısı kullanarak eksizyon yerlerini kapatın ( Şekil 1C ). NOT: Ameliyattan 10 gün sonra yara klipslerini bir yara klipsi çıkarıcı ile çıkartın. </li><li> Deri altı (hayvanin vücut ağırlığının% 4&#39;ü) sıcak steril salin uygulayın ve hayvanı bir ısı lambası ile sıcak tutun. Anesteziden kurtulma işlemi sırasında 5-10 dakikada bir hayvanları kontrol edin. NOT: Bupivakain veya lidokain uygulaması post-operatif mortaliteyi artırmıştır (veriler gösterilmemiştir). Ameliyattan 1 saat sonra ağrı belirtileri gösteren (ağrıyan, taşımak istemeyen, damat yapamayan) fareler ötenazi görmüştür. <ol><li> Fareler tamamen kurtarıldıktan sonra, diğer farelerin şirketlerine geri gönderin. </li></ol></li></ol> Akım Sitometri ve Histoloji için Kan Akciğerinin İzolasyonu ve İşlenmesi &lt;ol&gt; <li> Çalışma bitim noktalarında, istenirse fareleri çeşitli histopatolojik değerlendirmeler için hazırlayın. Ötenaziden 90 dakika önce, her fareye, 1x PBS&#39;de 6.25 μg / μL&#39;lik bir konsantrasyonda bromodeoksiüridin (BrdU, 50 μg / g fare ağırlığı) intraperitoneal bir enjeksiyonu yapın. NOT: Dondurulmuş çözünmüş bromodeoksiuridin stokları, hazırlandıktan sonraki 1 ay içerisinde kullanılır. </li><li> Anestezi uygulanan fare ile ötenazi uygulamasının başlamasından 10 dakika önce, heparinize kılcal tüpler kullanarak retroorbital kan (&gt; 500 μL) toplayın ve ardından buz üzerinde tutulan dipotasyum EDTA ile kaplanmış tüplere aktarın. </li><li> Göğüs ve periton boşlukları (Şekil 2A) ortaya çıkarmak için ağza alt karın makas ile orta hat kesi yapmak, akciğerler ve geri kalan meme dokusu kaldırmak ve deri soyma için yanal olarak da meme inci kalan sağ 4. ve 5. ortaya çıkarmak için bezleri. </li><li> Geriye kalan meme bezi dokusunu tüketim yapın ve i(FFPE) dokusunu, hematoksilen ve eozin (H &amp; E) boyama ile değerlendirerek birincil tümör büyümesini göz önüne almamaktadır ( Ek Şekil 1 ). </li><li> Akciğerleri çıkarmak için abdominal duvarı makasla diyaframa açın, akciğerlerin perfüzyonundan önce kan boşaltmak için karın aortunu keserek hayvanını euthanize edin ( Şekil 2B -2C ). </li><li> Diyaframı, akciğer ve kalpten kaçınmayı sağlayan abdominal bir yaklaşımla kaburga kafesi boyunca kesin. Daha sonra, göğüs kafesini, göğüs kafesinin yan kenarlarını keserek maruz bırakın ( Şekil 2D ). </li><li> 20 mL şırınga üzerinde 23 gauge iğne kullanarak akciğerler tamamen beyaza dönüşene kadar kalp sağ ventrikülünden ~ 5.0 mL DPBS (~ 10 mL / dakika) ile akciğerleri boşaltın ( Şekil 2E -2F ). Ana gemiden kalbi derhal kesYani kan akciğerine yeniden nüfuz etmez. </li><li> Akciğer dokusunun histopatolojik değerlendirmeler için işlenmesi için, 23 gauge iğne ( Şekil 2G - 2H ) kullanarak maruz kalmış trakea şişkin tarafı yukarı doğru akciğerlere doğru ~ 1.0 mL% 10 formalin 4 ° C&#39;de enjekte edin. Akciğerler tamamen genişletilir ve fiksatif ile dolduğunda enjeksiyon kesilir ( Şekil 2I ). </li><li> Trakeadan akciğer loblarını ayırın ve standart histopatolojik prosedürlere göre akupunktur akciğer dokusunu nötral tamponlu formalinde, sonraki parafin yerleştirme veya OCT-dondurucu ortam için düzeltin. </li><li> Akciğerlerdeki metastatik yükü FFPE akciğer dokusunun kesit bölümlemesi ile nicel olarak değerlendırın ve mikrotom kesitlerini (100 μm, on üç bölüm) H &amp; E boyama ile değerlendirin ( Şekil 1B ). </li></ol>

<ol><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Res. 8, 212(2006).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22SEER+Cancer+Statistics+Review+1975-2008%22">SEER Cancer Statistics Review 1975-2008</a>. Howlader, N. N. A., Krapcho, M. , National Cancer Institute. Bethesda, MD. based on November 2010 SEER data submission, posted to the SEER web site. 
 <a target="_blank" href="http://seer.cancer.gov/csr/1975_2008/">http://seer.cancer.gov/csr/1975_2008/</a> (2011).</li>
<li>National Comprehensive Cancer Network. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Breast+Cancer+%28Version+3.2014%29%22">Breast Cancer (Version 3.2014)</a>. , Accessed November 25.
 <a target="_blank" href="http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf">http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/breast.pdf</a> (2016).</li>
<li>Kataja, V., Castiglione, M., Group, E. G. W. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/annonc/article/23/suppl_7/vii11/144433/Locally-recurrent-or-metastatic-breast-cancer-ESMO">Locally recurrent or metastatic breast cancer: ESMO clinical recommendations for diagnosis, treatment and follow-up.</a> Ann Oncol. 19 Suppl 2, 11-13 (2008).</li>
<li>Margolese, R. G., Hortobagyi, G. N., Buchholz, T. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK13196/">Management of Metastatic Breast Cancer. Holland-Frei Cancer Medicine</a>. Kufe, D. W., Pollock, R. E., Weichselbaum, R. R., et al. , 6th, BC Decker. Hamilton (ON). (2003).</li>
<li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene%3A+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).</li>
<li>Kouros-Mehr, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GATA-3+links+tumor+differentiation+and+dissemination+in+a+luminal+breast+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">GATA-3 links tumor differentiation and dissemination in a luminal breast cancer model.</a> Cancer Cell. 13, 141-152 (2008).</li>
<li>Minn, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genes+that+mediate+breast+cancer+metastasis+to+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Genes that mediate breast cancer metastasis to the lung.</a> Nature. 436, 518-524 (2005).</li>
<li>Qian, B. Z., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4548055/">FLT1 signalling in metastasis-associated macrophages activates an inflammatory signature that promotes breast cancer metastasis.</a> J Exp Med. 212 (9), 1433-1448 (2015).</li>
<li>Verkooijen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patients%27+refusal+of+surgery+strongly+impairs+cancer+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Patients' refusal of surgery strongly impairs cancer survival.</a> Ann Surg. 242 (2), 276-280 (2005).</li>
<li>Peinado, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28303905">Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastasis.</a> Nat Rev Cancer. 17 (5), 302-317 (2017).</li>
</ol>

Yazarlar burada sunulan verilerle çelişen herhangi bir açıklama yapmamıştır.

Değişiklikler ve sorun giderme: Tümör karın duvarından uzak künt diseksiyon yaparken, tümör karın duvarına yapışmış kalabilir. Bu, tümör enjekte edilen farelerin &lt;% 5&#39;inde gözlenmiştir (veriler gösterilmemiştir). Karın duvarına yapışık tümörleri olan fareler için, fare, birincil tümör yeniden büyümesi olmaksızın rezeksiyon zor olduğu için ötenazi yapılmalıdır. Model / teknik sınırlamaları: Diğe...

Kuzey Amerika&#39;daki kadınların yaşam boyu% 12 oranında meme kanseri riski 2 vardır ; Bu kişilerin çoğunluğunun ameliyat yoluyla primer tümörler çıkarılacağı ve kanser alt tipine bağlı olarak adjuvan ortamında hedefe bağlı, endokrin, kemo ve / veya radyoterapi alacağı 3 . Örnekler, anti-östrojen terapileri alan hormon reseptörü pozitif kanserler tanısı konan kadınlar ve radyasyon / kemoterapi ile HER2 hedefli terapiler alan HER2 pozitif tümörleri olan kadınlar olmakla birlikte, üçlü negatif tümörler için henüz hedeflenmiş tedaviler mevcut değildir 3 . Radyasyon, kemoterapi, kişiselleştirilmiş ve hormonal esaslı cerrahi rezeksiyon eklemelerindeki ilerlemelere rağmen, evre II veya III hastalık 4 olarak teşhis edilen kadınların% 30-70&#39;inde hastalık tekrar eder; çünkü terapiler uzak organlarda metastatik hastalığın ortadan kaldırılmasında büyük ölçüde etkisizdir; Akciğer, kemik, bYağmur ve / veya karaciğer 5 . Metastatik hastalık primer tümör yeniden büyümesinin olmaması durumunda ortaya çıktığı zaman bu, özellikle önemli bir konudur; bu da, kesin ameliyat sırasında, dissemine malign hücrelerin muhtemelen ikincil organlarda zaten mevcut olduğunu ima eder. Bu nedenle, metastatik tümörlerin yok olmasını veya yavaş büyümesini sağlayabilen terapilere acilen ihtiyaç vardır. Meme karsinogenezisin de novo fare modelleri, neoplastik ilerlemesinin 1 düzenleyen mekanizmaların açığa dikkat çekecek derecede bilgilendirici olmuş olmakla mevcut modeller ayrıca çeşitli sınırlamalara sahiptir. Bunlardan biri, de novo transgenik modellerin tipik olarak birden fazla meme bezi içerisinde primer tümörler geliştirdiği gerçeğidir; burada primer tümör yükü çalışma sürelerini sınırlar. Primer tümör hücresi kaçışı ve metastatik tohumlama, muhtemelen bu modellerde neoplastik progresyonun erken döneminde ortaya çıkarken, metastatik tümörlerin açık gelişimi geç ortaya çıkar veFare modeli ve gerinim arka planı, çoğunlukla kısmen penetrantır 1 . Bu ayrıca, ikincil organlarda metastazı düzenleyen moleküllerin keşfi için de novo modellerin kullanımını sınırlar ve adjuvan ortamında önleyici etkinliğin değerlendirilmesi için sınırlandırılır. Bu kısıtlamaları ortadan kaldırmak için, akciğerlere yönelik meme kanseri metastazının de novo otonom modeli geliştirdik. Son evre de novo meme tümörleri taşıyan ebeveyn transgenik dişiler (diğer bir deyişle , burada açıklanan çalışmalar için FVB / n suşu zemininde MMTV-PyMT) yaklaşık 100 gün 6 yaşlandırılır ve bu noktada primer tümörler cerrahi olarak rezeke edilir ve enzimatik olarak Tek hücreli süspansiyonlar. Süspansiyonlar (1 x 10 6 hücre) sırayla ortotopik olarak 6-7 haftalık alıcı eş merkezli dişi farelere eksplane edilir ve burada tekli primer meme tümörleri 38 ila 60 günlük süre boyunca gelişir ( 3 mm), alıcı farelere anestezi yapılır ve primer tümörler cerrahi cerrahi alanda tümörün yeniden büyüdüğü kadınlarda cerrahi (Ek Şekil 1) ile uyumlu, en aza inecek şekildedir çıkartılmaktadır. Fareler, FVB / n suşu zemininde, ameliyat sonrası ~ 115 gün boyunca% 45 penetransli akciğerlerde histolojik olarak saptanabilir metastatik odak gelişir ( Şekil 1B ). Metastatik tümör büyümesinin uzatılmış gecikmesi ile model, adjuvan tedavi sunumu için ve primer tümörlerin cerrahi olarak çıkarılmasını takiben metastatik ilerlemeyi etkileyen biyolojiyi aydınlatmak ve değerlendirmek için benzersiz bir şekilde konumlandırılmıştır.

<table><tbody><tr><td>İzofloran</td><td>Piramal Healthcare</td><td>N/A</td><td>Reçeteli sipariş</td></tr><tr><td>Kollajenaz A</td><td>Roche</td><td>11088793001</td><td></td></tr><tr><td>DNaz I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>ThermoFisher</td><td>12634010</td><td></td></tr><tr><td>25 mL Pyrex şişe</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS139525</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Atlanta Bio&nbsp;</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>0.7 ve mikro; m naylon süzgeç&nbsp;</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>50 mL konik boru&nbsp;</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Büyüme faktörü azaltılmış Matrigel&nbsp;</td><td>BD</td><td>354230</td><td>Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) fare sarkomundan ekstrakte edilen büyüme faktörü azaltılmış çözünmüş bazal membran preparatı</td></tr><tr><td>Poli (vinilpirolidon) &ndash; İyot kompleksi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PVP1</td><td></td></tr><tr><td>29 gauge 0.3 mL insülin şırınga</td><td>BD</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Damar Koterizatör Kiti</td><td>FST</td><td>18000-00</td><td></td></tr><tr><td>Yara klipsleri</td><td>Texas Scientific</td><td>205016</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip yara klipsi uygulayıcısı&nbsp;</td><td>BD</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip yara klipsi sökücü&nbsp;</td><td>BD</td><td>427637</td><td></td></tr><tr><td>Bromodeoksiüridin</td><td>Roche</td><td>10280879</td><td></td></tr><tr><td>Heparinize kılcal borular&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>22362566</td><td></td></tr><tr><td>Dipotasyum EDTA&nbsp;</td><td>BD</td><td>365974</td><td></td></tr><tr><td>20 mL şırınga&nbsp;</td><td>BD</td><td>309661</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo-Fisher</td><td>14190-250</td><td></td></tr><tr><td>OCT dondurma ortamı&nbsp;</td><td>VWR</td><td>25608930</td><td></td></tr><tr><td>Formalin, Tamponlu, %10 (Fosfat Tampon)</td><td>Fisher</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>23g iğne</td><td>Fisher</td><td>14-826-6B</td><td></td></tr><tr><td>FVB/n fare</td><td>Jackson Laboratuvarları</td><td>001800</td><td></td></tr></tbody></table>

klinik Öncesi bir murin modeli İçin cerrahi prosedürler ve metodoloji<emde novo</emmeme kanseri metastazı

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Meme adenokarsinomunun transgenik fare modellerinin hız sınırlayıcı bir yönü, meme dokusundaki primer tümör yükünün tipik olarak çalışma son noktalarını tanımlamasıdır. Bu nedenle, geç evre de novo metastaz mekanizmalarını aydınlatmaya odaklanan çalışmalar ve adjuvan ortamda metastaz mediatörlerini hedef alan anti-kanser tedavilerinin etkinliğini inceleyen çalışmalar tehlikeye girmektedir. Baskın onkoproteinlerin meme epitel hücrelerine hedefli ekspresyonu yoluyla çok sayıda murin meme kanseri modeli geliştirilmiştir ve kadınlarda yaygın olan histopatolojik ve transkriptom tanımlı meme kanseri alt tiplerini değişken olarak taklit eden modeller elde edilmiştir1. Bu modellerle meme karsinogenezinin biyolojisi hakkında çok şey öğrenilmiş olsa da, fareler tipik olarak önemli primer tümör yükü nedeniyle daha erken zaman noktalarında ötenazi yapıldığından, geç evre metastazın büyümesini düzenleyen molekülleri tanımlamadaki faydaları tehlikeye girmektedir. Ayrıca, meme kanseri tanısı alan kadınların önemli bir yüzdesi primer tümörlerin cerrahi rezeksiyonundan sonra ve saptanabilir metastatik hastalık varlığından önce adjuvan tedavi aldığından, metastatik odakları hedeflemeyi amaçlayan yeni tedavileri değerlendirmek için preklinik de novo metastaz modellerine acilen ihtiyaç duyulmaktadır. Bu eksiklikleri gidermek için, primer meme tümörlerinin cerrahi olarak rezeke edildiği ve daha sonra cerrahi sonrası 115 günlük bir süre boyunca metastatik odakların geliştiği de novo meme kanseri metastazı için bir murin modeli geliştirdik. Bu uzun gecikme, primer tümörü olmayan farelerde metastatik ilerlemenin fonksiyonel olarak önemli düzenleyicilerini tanımlamak için izlenebilir bir model ve ayrıca metastatik tümör sağkalımına ve büyümesine yardımcı olan fonksiyonel olarak önemli molekülleri bloke etmeyi amaçlayan ajanların klinik öncesi terapötik etkinliğini değerlendirmek için bir model sağlar.

Daha MMTV PyMT farelerden türetilen primer meme tümörlerinden, 1 x 10 6 hücre alan alıcı farelerin% 75, daha 172 ila 450 mm3 38-60 içinde gün arasında değişen tek bir meme adenokarsinomu geliştirmek (veriler gösterilmemiştir). Daha sonra randomize edilmeye uygun olan fareler, gösterildiği gibi primer tümörlerin cerrahi rezeksiyonunu takiben çalışma gruplarına alınır ( Şekil 1C ). Primer tümör yeniden büyümesi, primer tümörün cerrahi rez...

Meme kanseri metastazını hedef alan adjuvan tedaviyi değerlendiren klinik öncesi modeller eksiktir. Buna değinmek için, de novo pulmoner meme adenokarsinom metastazına ait bir fare modeli geliştirdik, burada adjuvan ortamında (primer tümörlerin cerrahi sonrası rezeksiyonu) uygulanan terapiler önceden tohumlanmış pulmoner metastazları etkilemek için etkinlik açısından değerlendirilebilir.

Klinik Öncesi Bir Murin Modeli İçin Cerrahi Prosedürler ve Metodoloji<emDe Novo</emMeme Kanseri Metastazı

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

İnsan meme kanserinin seyrini yakından taklit eden, hastalığın biyolojisini, altta yatan metastatik ilerlemesini ve adjuvan ortamda verilen tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için klinik öncesi bir platform sağlayan, de novo meme kanseri metastazı için yeni bir fare modeli geliştirdik. Hayvan deneklerini içeren prosedürler, Oregon Sağlık ve Bilim Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Murin modelimiz, transgenik 100 günlük fare meme tümörü virüsü, polyoma, orta T veya MMTV-PyMT farelerinden enzimatik olarak ayrışmış primer tümörlerin toplanmasıyla oluşturulmuştur.Bir kez 10 ila altıncı tümör hücresi ortatopik olarak sinjeneik alıcı dişi farelere enjekte edilir ve birincil tümörler 38 ila 60 günlük bir süre içinde gelişir. 170 ila 450 milimetre küp büyüklüğünde tümörler taşıyan fareler, primer tümörün cerrahi rezeksiyonu için kaydedilir. Ameliyattan 115 gün sonra yapılan analiz, akciğerlerde histolojik olarak saptanabilir metastatik odaklara sahip farelerde% 45 penetrasyon ile sonuçlandı.Bu video, preklinik murin modelinin çok önemli bir bileşeni olan primer meme tümörünün cerrahi rezeksiyonunu göstermektedir. Farelere% 2 izofluran uygulanır ve ayak sıkışma refleksi olmadığında ameliyat başlayabilir. Primer tümörün üzerindeki cilde% 70 etanol püskürtün.Betadin daha sonra cerrahi alana, tümörün üzerindeki deriden başlayarak, ardından steril bir pamuklu çubuk kullanılarak primer tümörü çevreleyen alana uygulanır. Künt uçlu makas kullanılarak, primer tümöre giden cilt medial kaudalinde ilk kesi yapılır. Kesi, primer tümörün medialinde üstün bir yönde uzatılır.Üstteki deriden tümörü besleyen potansiyel damarları belirleyin ve koterize edin. Kanama meydana gelirse, daha fazla koterizasyon yapılmalıdır. Primer tümörden daha düşük bir lateral cilt kesisi yaparken, damarlar mevcut olabileceğinden alttaki meme bezini kesmekten kaçındığınızdan emin olun.Deri kesisi daha sonra primer tümörün etrafında çevresel olarak uzatılır. Tümörün medialindeki meme bezindeki ince yapışıklıklar daha sonra tümörü karın duvarından ayırarak dikkatlice diseke edilir. Bu yapışıklıklar içinde kan damarları bulunabilir.Kesmeden önce yapışmalar içinde tanımlanan tüm kapları koterize edin. Oklar, tümörün üstünde ve altında gösterilen dördüncü ve beşinci sağ meme bezlerini gösterir. Beşinci meme bezi daha sonra koterize edilir ve görüntülenmesi zor olan küçük damarlar içerebileceğinden eksize edilir.Tümör karın duvarından ayrıldıktan sonra daha büyük damarlar tanımlanabilir. Dördüncü meme bezinden geçen damar üst okla gösterilir. Altta yatan femoral arter orta okla gösterilir.Ve dördüncü ve beşinci meme bezi arasındaki tümörü besleyen büyük damar alt okla gösterilir. Daha sonra, dördüncü ve beşinci meme bezi arasında uzanan büyük damar boyunca koterizasyon yapılır ve bacaktaki altta yatan femoral arterin koterizasyonunu önlemek için emin olunur. Büyük damarın koterizasyonu tamamlandıktan sonra, damarı dördüncü meme bezine kadar kesin.Dördüncü meme bezinden geçen ikinci büyük damarı bulun ve koterize edin. Tüm meme bezini kesmeden damarı kesin, böylece kanama meydana gelirse, damar kolayca tanımlanabilir ve daha fazla koterize edilebilir. Dördüncü meme bezinin geri kalanı daha sonra eksize edilir.Üstteki cilt daha sonra bir AutoClip yara klipsi aplikatörü kullanılarak yara klipsleri ile kapatılır. Altta yatan kasın kırpılmasını önlemek için üstteki derinin karın duvarından yeterince ayrıldığından emin olun. Yaranın lateral ve medial kenarlarını bir araya getirin, yara klipsini uygulamak için cildi ön yönde kaldırın.Sağ bacağın ürogenital yolunu veya altta yatan kasını kırpmaktan kaçındığınızdan emin olun. Bandı çıkararak sağ bacağın mobilize edilmesi, yara klipslerinin daha kolay uygulanmasını sağlayabilir. Yara klipsleri ameliyattan 10 gün sonra çıkarılmalıdır.Bu videoda gösterilen primer tümörün cerrahi rezeksiyonu, ameliyattan 115 gün sonra akciğerdeki metastatik odaklarda yayılmış kanser hücrelerinin gelişmesine izin verir ve burada metastatik odakların görüntüsünde her birinin bir temsilcisi gösterilir. Meme kanseri teşhisi konan kadınların büyük bir yüzdesinin tümörün cerrahi olarak çıkarılmasına maruz kaldığı ve ameliyat sonrası metastatik hastalığa yenik düşebildiği göz önüne alındığında, hasta hastalığının ve tedavisinin seyrini taklit eden bir klinik öncesi murin modeli oluşturduk. Primer meme tümörünün cerrahi olarak çıkarılması için metodolojiyi kaydederek, de novo meme kanseri metastazı murin modelimizin bu temel bileşeni, tümör rezeksiyonu sonrası metastatik hastalık biyolojisi ve adjuvan tedavi etkinliğini değerlendirmek için kolayca çoğaltılabilir.

surgical-procedures-methodology-for-preclinical-murine-model-de-novo

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Time-lapse görüntüleme özgü davranışsal parametreler ve farklı genetik lezyonlar arasında bir korelasyon olup olmadığını belirlemek için meme kanseri riskinin genetik fare modelleri türetilmiştir birincil preneoplastic meme epitel hücrelerinin davranışlarını değerlendirmek için kullanılır.

Birincil Preneoplastic Meme Epitel Hücrelerinin Time-lapse görüntüleme Meme Kanseri Genetik Fare Modelleri türetilen

Bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli MDA-MB231/Br-GFP hücreleri ultrason görüntüleme kılavuzluğunda intrakardiyak enjeksiyonu ile kurulmuştur. Multifokal intrakranial metastaz gelişimi, yüksek çözünürlüklü 9.4 T MR kullanılarak uzunlamasına izlenir olmuştur.

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

Klinik açıdan uygun bir metastatik meme kanseri duktal meme sistemi sonuçları içine adenovirüs-Cre ile gizli mutasyonlar aktivasyonu. YFP bir promoter dahil edilmesi uzak metastatik tümör hücrelerinin izleme sağlar. Bu model, latent metastazı, anti-tümör bağışıklık ve meme kanseri tedavisi için yeni immünoterapiler tasarımı için incelemek için yararlı olan.

Meme Kanseri Bir Roman Transgenik Fare Modeli: Adenovirüs-Kretasedekine ile epiteli Hedefleme ile Metastatik Meme Kanseri Başlatma

Karaciğer metastazlarının klinik öncesi bir sıçangil modeli, hemispleen enjeksiyon tekniği ile gerçekleştirilir.

Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Bu protokolün amacı meme tümörigenezini incelemektir. Bu teknikle, fare meme tümörleri çıkarılır ve tümörlerden birincil hücreler hazırlanır. Akciğer metastazını incelemek için bir akciğer ekstraksiyon protokolü dahildir. Ayrıca, fare embriyosundan fare embriyonik fibroblastlarını analiz etmek için başka bir protokol dahil edilmiştir.

Primer Tümör ve Akciğer Metastazı Eğitim için MEF Hücre İzolasyonu

over kanseri periton yayılması çok adımlı süreci açıklamak için, mevcut çalışma bu tümör hücreleri ile ortotopik aşılamadan yoluyla orijinal tümör gelişimi ve periton metastazı bir fare deneysel modeli sunar.

Orijinal Tümör Geliştirme Murin Deneysel Modeli ve Periton Metastaz<em&gt; yoluyla</emYumurtalık Kanseri Hücreleri ile&gt; Ortotopik aşılama

Biz bir fare orthotopic meme kanseri modeli ve radikal mastektomi modeli insan meme kanseri ilerleme taklit etmek için tümör yükünü ölçmek için bioluminescence teknolojisi ile tanıtmak.

Fare Orthotopic metastatik meme kanseri Model oluşturma ve fare radikal mastektomi gerçekleştirme

Bu protokolde, yumuşak doku sarkomunun (neo) adjuvan tedavileri test etmek için tamamlanmamış cerrahi rezeksiyonunun fare modelini tanımladık.

Test (Neo) adjuvan Tedaviler için İntam Rezeke Yumuşak Doku Sarkomu Bir Fare Modeli

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

İntrakraniyal beyin metastazı modellemesi, tümör boyutunun izlenememe ve tedaviye tam ve zamanında yanıt verilememesi ile karmaşıktır. Sunulan metodoloji çiftler manyetik rezonans görüntüleme analizi ile intrakranial tümör enjeksiyonu, kombine edildiğinde, hassas ve tutarlı enjeksiyonlar, gelişmiş hayvan izleme ve doğru tümör hacmi ölçümleri yetiştirir.

İntrakraniyal Enjeksiyon ve Manyetik Rezonans Görüntüleme Ile Beyin Metastazlarının Modellenmesi

El yazması, ortotopik olarak enjekte edilen meme tümörlerinden spontan akciğer metastazının kurulması ve uzunlamasına büyüme izlemesi için metastatik kaskadının tüm aşamalarında müdahaleye uygun bir metodolojiyi açıklamaktadır.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Öğrenin, meme kanseri metastazını araştırmak için MMTV-PyMT transgenik farelerde primer tümörün cerrahi rezeksiyonunu. Bu yöntem, adjuvan tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için klinik öncesi bir model sunar.

Klinik Öncesi Bir Murin Modeli İçin Cerrahi Prosedürler ve Metodoloji

Daha fazla video keşfet