Intracarotid Kanser Hücre Enjeksiyon Beyin metastaz Fare modelleri üretmek için

tedavi seçenekleri palyatif kalmıştır ise görülme sıklığı artmıştır olarak beyin metastazı acil karşılanmamış tıbbi ihtiyaç haline gelmiştir. Kanser hücrelerinin intracarotid arteriyel enjeksiyon yoluyla beyin metastazı deneysel hayvan modelleri oluşturma yeni müdahale rejimlerinin hastalığın biyolojisi ve değerlendirilmesi mekanik çalışmaları kolaylaştırır.

Kanser hücrelerinin karotis arter yoluyla bu mikrocerrahi enjeksiyonunun genel amacı, farelerde tutarlı in vivo deneysel beyin metastazı modelleri üretmektir. Dolayısıyla bu yöntem, yeni bir terapötiğin beyin metastazı tedavisinde etkinlik gösterip gösteremeyeceği gibi beyin metastazı alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Dolayısıyla bu tekniğin temel avantajı, yüksek tekrarlanabilirlik ve düşük değişkenlik ile in vivo deneysel beyin metastazı üretimine izin vermesidir.

Genel olarak, bu tekniğe yeni olan bireyler başlangıçta mücadele edeceklerdir, çünkü kanser hücrelerini mikroskop altında bu farelerin karotis arterine enjekte etmek için sabit bir el tutmak için makul miktarda pratik yapılması gerekmektedir. Bu prosedüre, kanser hücrelerini %10 FPS ile desteklenmiş DMEM F12 ortamı ile tohumlayarak ve enjeksiyondan önce bir ila iki gün boyunca kültürleyerek başlayın. Cerrahi operasyon günü, hücreleri inkübatörden çıkarın ve serumsuz besiyeri ile yıkayarak %70 ila %80 arasında birleşim noktasına geldiklerinde hasat edin.

Daha sonra, hücreleri 37 santigrat derecede bir ila iki dakika boyunca% 0.25 tripsin ile inkübe edin. Daha sonra, bunları inkübatörden çıkarın ve chipsenasyonu söndürmek için hücrelere DMEM F12 ortamı içeren% 10 FBS ekleyin. Hücreleri üç dakika boyunca 80 kez G'de santrifüjleyin.

Ardından, ortamı çıkarın ve kalan serumu çıkarmak için hücreleri serumsuz olarak iki kez yıkayın. Daha sonra, hücreleri bir hemositometre ile sayın ve HBSS'de yeniden süspanse edin. Ardından, hücreleri enjeksiyon zamanına kadar buz üzerinde tutun.

Bu prosedürde, fareyi intraperitoneal enjeksiyon ile ketamin / ksilazin kokteyli ile uyuşturun. Hayvanın ayaklarını sıkıştırarak tam anesteziyi onaylayın ve yanıt eksikliğini gözlemleyin. Daha sonra, tıraş ederek veya az miktarda epilasyon ürünü kullanarak boyun kıllarını alın.

Ardından, fareyi bir cam plakanın üzerine yerleştirin ve lastik bantlarla sabitleyin. Povidon iyot içerisinde% 70 alkol uygulayarak cildi temizleyin. Şimdi, cerrahi bir neşter ile ciltte yaklaşık bir santimetre uzunluğunda bir kesi yapın.

Ardından, altındaki karotis arteri ortaya çıkarmak için kası cerrahi forseps ile künt bir şekilde inceleyin. Karotis arteri cerrahi forseps ile bitişik vagus sinirinden ayırın. Daha sonra iki dikiş yerleştirin.

Bir distal ve pamuğun proksimalini toplayın ve gevşek düğümler yapın. Enjeksiyon bölgesine kan akışını engellemek için proksimal düğümü sıkın. Bundan sonra, küçük bir pamuğu tamponla nemlendirin ve amaçlanan enjeksiyon bölgesinin karotis arterinin altına yerleştirin.

Ardından, pamuk topunun üzerindeki karotis arter taze kırmızı kanla tamamen basınçlı görünüyorsa kanser hücresi enjeksiyonuna devam edin. Bu adımda, 100 mikrolitre kanser hücresini girdap haline getirin ve şırıngaya çekin. Diseksiyon mikroskobu altında, eğimli 31 gauge iğneyi, pamuğun üzerine oturacak şekilde karotis arterin lümenine yavaşça sokun.

Hücreleri şırıngadan yavaşça karotis artere enjekte edin. Başarılı enjeksiyon, tamponlanmış kanser hücreleri dolaşıma itildiğinde yakındaki kan damarlarının ve kas sisteminin değişen rengiyle gözlemlenebilir. Enjeksiyon tamamlandığında, yetersizliği önlemek için distal ligatürü hafifçe kaldırın.

Ardından, enjeksiyon işlemini tamamlamak için distal düğümü hızla sıkın. Enjeksiyonu tamamladıktan sonra bağları sıkın ve fazla ipek ipliği mikro makasla kesin. Yara bölgesini kaplamak için ayrılan kası geri hareket ettirin ve cildi iki zımba ile kapatın.

Kurtarma için, hayvanı bir ısıtma yastığına aktarın. Daha sonra, cerrahi sonrası analjezi olarak deri altı enjeksiyon yoluyla buprenorfin uygulayın. Bilincini geri kazandığında ve normal davranışına geri döndüğünde, fareyi bulunduğu yere geri koyun.

Hayvana ameliyattan sonraki birkaç gün boyunca jel yiyecek sağlayın. Bu görüntüler, modifiye edilmiş MDA MB231 meme kanseri hücrelerinin, ex-vivo gevşek foraise raportör geni ile etiketlendiğini göstermektedir. Karotis arter enjeksiyonundan 24 saat sonrasından itibaren beyin metastazı gelişimi non-invaziv olarak tekrarlanan in vivo görüntüleme sistemi görüntülemesi ile izlendi.

Görüntüleme verilerinin nicelleştirilmesi, karotis arter enjeksiyonu sonrası tümör yükünün başlangıçta azaldığını, ardından hayvanın daha fazla fazlalığına kadar beyin metastazının üstel bir şekilde büyüdüğünü gösterir. Yani ustalaşılan şey, bu teknik, düzgün bir şekilde yapılırsa her fare enjeksiyonu için 10 dakikadan daha kısa sürede yapılabilir. Bu nedenle, bu prosedürü gerçekleştirirken hatırlanması gereken en önemli şey, kanser hücrelerinin enjeksiyonuna devam etmeden önce karotis arterin pamuk topunun üzerine yerleştirilmesini sağlamak, incelemek ve güvenli bir şekilde yerleştirmek zorunda olmanızdır.

Bu prosedürü takiben, diğer soruları cevaplamak için terapötik tedaviler gibi başka yöntemler de yapılabilir. Örneğin, yeni bir ilacın beyin metastazı önlemede etkili olup olmayacağı daha da artar. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, beyin metastazı alanındaki araştırmacıların, farelerde in vivo deneysel modelde temel veya translasyonel soruları keşfetmelerinin yolunu açtı.

Bu nedenle, bu videoyu izledikten sonra, in vivo deneysel bir beyin metastazı modeli üretmek için kanser hücrelerinin farelerin karotis arterine nasıl enjekte edileceğini iyi anlamış olmalısınız.