Name: Kapsamlı Usulü değerlendirin İn Vivo Kanser Nanomedicines performans (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Öğrenin, kanser nanomediklerinin sistemik, doku, tek hücre ve hücre içi düzeylerdeki davranışlarını değerlendirmek için kapsamlı bir yöntem. Lipozomlar kullanılarak tümör taşıyan immünokompetent farelerde in vivo birikim analizi yapılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, Mount Sinai'deki Icahn Tıp Fakültesi'nden Dr. Helene Salmon ve Miriam Merad'a B16-F10-YFP hücrelerini sağladıkları ve melanom fare modelleri konusundaki uzman tavsiyeleri için teşekkür eder. Yazarlar ayrıca destekleri için Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi'ndeki (MSK) Hayvan Görüntüleme Çekirdek Tesisi, Radyokimya ve Moleküler Görüntüleme Probları Çekirdek Tesisi ve Moleküler Sitoloji Çekirdek Tesisine teşekkür eder. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri hibeleri NIH 1 R01 HL125703 (WJMM), R01CA155432 (WJMM), K25 EB016673 (TR) ve P30 CA008748 (MSK Center Grant) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar ayrıca MSK'daki Moleküler Görüntüleme ve Nanoteknoloji Merkezi'ne (CMINT) finansal destekleri için teşekkür ederler (T.C.).

Prosedür nanopartiküllerin ikili radyoaktif ve floresan etiketleme, in vivo PET-BT görüntüleme, ex vivo biyolojik dağılım ölçümleri ve ex vivo immün oluşur ve analiz akım sitometri. Tüm hayvan deneyleri Memorial Sloan Kettering Kanser Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. Çift etiketli lipozomların hazırlanması 1. Not: singenik B16 melanoma tümörleri% 2 -isoflurane içeren oksijen teneffüs anestezi altında C57BL / 6 farelerinin arka yanları halinde 300.000 B16-F10 hücreleri enjekte edilerek uyarılabilir. Ameliyat sırasında steril bir çalışma alanında steril reaktifler ve araçları kullanın. Ameliyattan sonra, dikkatlice anesteziden kendi kurtarma kadar hayvanları gözlemlemek. onlar tam bilinç ve hareketlilik yeniden sadece geri hayvanları kafeslerinde koyun. ksenogreflenmiş tümörü olan hayvanlar için steril odalarda onlara ev. boyutta tümörler300 mm 3 bağlı nanopartikül birikimini artırmak bunların belirgin gelişmiş geçirgenlik ve tutma etkileri (EPR) &#39;e nanopartikül karakterizasyonu için idealdir. Ayrıntılı protokoller aşağıda verilmiştir. <ol><li> Yuvarlak tabanlı bir şişe içinde içeren kloroform, 1,2-dipalmitoyl- sn -glisero-3-phophocholine (DPPC), kolesterol, 1,2-disearoyl- sn -glycero- 2 mL lipidlerin 20 mg karışımı çözülür 3-fosfoetanolamin-poli (etilen glikol) 2000 (DSPE-PEG2000) DSPE-deferoksamin (DSPE-DFO) 8 ve 1,1-diododecyl-3,3,3,3-tetramethylindodicarbocyanine-5,5-disülfonik asit ( diIC12 [5], sırasıyla% 61.3,% 33.4, 5,% 0.2 ve% 0.1, molar oranlarda) -ds. NOT: Bu lipit kompozisyonu, şu anda klinik 2&#39;de kullanılan doksorubisin lipozom formülasyonuna benzemektedir. Bizim prosedüründen elde edilen lipozomlar, yakın klinik nanomedic in vivo performansını taklit edecekine. </li><li> organik çözücünün çıkması ve oda sıcaklığında ince bir lipid film oluşturmak için bir döner buharlaştırıcı kullanarak. PBS ile 20 ml ilave edilir ve 30 dakika boyunca ses dalgalarına maruz buz üzerinde yeterli bir soğutma ile, bir 3.8 mm sonikasyon ucu ve 30 W arasında bir genliğe kullanarak lipozomal nano-tanecikleri oluşturmak için. </li><li> Santrifüj agrega kaldırmak ve yıkama PBS santrifüj filtrasyon (molekül ağırlıklı bir kesim (MWCO kullanarak nano-tanecikleri, 10 dakika boyunca 4000 x g&#39;de lipozom solüsyonu: ki olacak, lipozomlar bilgilerini lipidler ve çökelen maddelerin giderilmesi için 100 kDa) konsantre edin. üst bölmede kalır ve yeni bir tüpe aktarın. lipozomlar için sonraki basamaklardan önce 1 hafta kadar PBS içinde buzdolabında saklanır. </li><li> Kalite kontrolü için, dinamik ışık saçılımı (DLS) lipozomlar karakterize etmektedir. Özellikle, PBS 950 uL ile lipozomlar 50 mcL karıştırın ve ardından boyutlandırma küvet içine karışımı aktarın. analizör küvet koyun ve parçacık ölçmekboyutları ve boyut dağılımı. sırasıyla, 0.2, - 120 nm ve 0.1 - parçacık boyutları ve boyut dağılımı (polidispersite indeksi (PDI)) 90 olması beklenmektedir. </li><li> Radyoaktif, (1.5 ml bir tüp içinde, 2 saat boyunca 37 ° C &#39;de 1 mCi 89, Zr-oksalat ile 6.9 ve 7.1 arasında bir pH değerinde toplam hacim PBS lipidlerin 2 mg eşdeğer saflaştırılmış lipozomlar, karışımı: ~ 100 uL). 1.3 adıma benzer santrifüj filtrasyon (MWCO = 100 kDa), serbest, reaksiyona girmemiş 89 Zr çıkarın. steril PBS ile bakiyenin yıkayın ve istenilen hacme seyreltin. % 95 - radyokimyasal verim 80 olmalıdır. DİKKAT! Radyoaktif maddeler ile çalışılırken yüksek düzenlenir. Kurumlar belgeli ve gerekli tesisleri, personel eğitimi ve radyoaktivite kullanımı sıkı izleme sağlıyor olması gerekir. Araştırmacılar yeterli eğitimi almış ve radyoaktivite işlerken kişisel koruyucu donanım ve dozimetre halkaları / rozetleri giymek gerekir. </li><li&gt; Tipik% 98 üzerinde 10 olmalıdır boyut dışlama radyo-HPLC ile radyo etiketli lipozom radyokimyasal saflığı belirleyin. % 95 daha düşük Radyokimyasal saflık adım 1.5 yetersiz yıkama göstergesidir. </li><li> radyo-etiketlenmesi sonra, dinamik ışık saçılımı ile nanopartiküller boyutunu belirler. Büyüklüğü ve PDI 1.4 adım 10&#39;da ölçümleri ile aynı aralıkta olması beklenir. Not: Radyoaktif örnekleri akış sitometresi veya floresan mikroskobu izin verilmez ise, radyoaktif olmayan Alan kulüp Zr-oksalat adım 1.5 lipozomlar etiketlemek için kullanılabilir. Bu radyoaktif olmayan lipozomlar, radyoaktif analoglanna özdeş özelliklere sahiptir. Bu prosedürün bir tasviri, Şekil 2&#39;de sağlanmıştır. </li></ol> Çift etiketli lipozomlar Vivo PET-BT Görüntüleme ve biodistribution 2. <ol><li> W bir ikili-etiketli lipozomların, yaklaşık 100 ul enjektei ölçülü melanom farelere radyoaktivitenin yaklaşık 300 uCi - yaklaşık 10 mCi 89 Zr / kg vücut ağırlığı kendi kuyruk damarlar yoluyla (C57BL / 6 kadın, 10 16 haftalık). </li><li> yarılanma ömrü belirlemek için, 28-G insülin şırınga kullanarak% 2 izofluran içeren oksijen altında anestezi hayvanlardan kuyruk damarından kan çizin. 2 dakika, 15 dakika, 1 saat, 4 saat, 8 saat, 24 saat, ve enjeksiyondan sonra 48 saat daha önceden tartılmış tüplerde - (20 uL 10) kan toplamak. , Farkla kan tartılır, bir gama sayacı kullanılarak radyoaktivite içeriğini belirlemek ve başına enjekte edilen dozun (% ID / g) yüzdesi olarak radyoaktivite konsantrasyonunu hesaplamak. NOT: Bir anestezi sistemi, kurtarma kafesleri, ısıtma ve biyolojik tehlike kaput ile donatılmış bir odada yordamı gerçekleştirin. hayvanlar tamamen iyileşir ve kafesleri tutan kurtarma kafeslerden aktarmadan önce işlem sonrası normal bir hareketlilik kazandırmak emin olun. Ev uygulandığı hayvanlar için belirlenmiş oda tümör taşıyan hayvanlarradyoaktif maddeler. </li><li> 24 veya 48 saat sonra, enjeksiyon Küçük hayvan MicroPET-BT tarayıcısında 10 lipozomlar, görüntü fareler. karnı yatay anestezi hayvan koyun ve anestezi tutmak. Bir burun konisi ile% 2 izofluran-oksijen verin. kurumasını önlemek için taramadan önce gözlerinin oftalmik merhem sürün. </li><li> 15 dakika yaklaşık bir süresi olan bir tüm vücut PET statik tarama kayıt en az 50 milyon tesadüf olaylar gerçekleştirin. sırasıyla 350-700 keV ve 6 ns enerji ve tesadüf zamanlama aralığı ayarlayın. Daha sonra, 5 dk bilgisayarlı tomografi (BT) taraması gerçekleştirin. 80 kV ve 500 uA bir akımının bir voltaj X-ışını tüpü ayarlayın; CT taraması çerçeve 10 için yaklaşık 145 ms, 220 derecelik bir toplam 120 dönme adımları kullanır. </li><li> PET-BT taramadan sonra, hemen Karbondioksit boğulma fareler kurban ve Pinchi tarafından ölümleri onaylamakHayvanların pençeleri ng. teyit sonra, servikal çıkıkları gerçekleştirin. </li><li> Önce, sol ventrikül içine 20 ml PBS enjekte sağ atriyum, açık kesme ve fare dokuları içinde kan çıkarın ve daha sonra, tümör, karaciğer, dalak, akciğer, böbrek, kas ve diğer 16 alakalı dokuların toplar. </li><li> , Doku tartılır 8, 9 sayma gama bunların radyoaktivite içerikleri, ölçebilir ve gramı başına enjekte edilen doz (% ID / g) bir yüzdesi olarak, doku radyoaktivite birikimini hesaplayabilir. </li></ol> 3. Ex Vivo Sitometrisi ve immün Not: vücut ağırlığının her bir kg&#39;ı başına boya, 0.5 mg bir dozda kuyruk damarı yoluyla farelere melanom flüoresan lipozomların, yaklaşık 100 ul enjekte edilir. Radyoaktif örnekleri akış sitometresi ve flöresanlı mikroskop izin verilmez ise, radyoaktif olmayan lipozomlar, kullanılmalıdır. <ol><li> Aşama 2.5 gibi, fareler 24 saat sonra enjeksiyon Kurban ve soğuk PBS depolanmalıdır tümörleri, toplar. </li><li> Flow sitometri için aşağıdaki adımları 17 izleyin: <ol><li> % 0.5 BSA ve 1 (PBS tampon akış sitometrisi saflaştırıldı kolajenaz I ve II (4 U / ml), hiyaluronidaz (60 U / ml) ve DNase I (60 U / mL) içindeki bir karışımından oluşan bir enzim kokteyli elde mM EDTA). </li><li> 1.5 ml bir tüp içinde, enzim kokteyli tamponu 200 uL tümör dokusu, 100 mg karıştırılır ve ince makasla küçük parçalar için doku zar. tüp içine enzim kokteyli bir 1.3 ml ilave edilir ve 6 oyuklu plaka içeriğini aktarın. </li><li> 60 rpm&#39;de, 60 dakika boyunca 37 ° C fırın içine yerleştirilmiştir yatay çalkalayıcı üzerinde 6 oyuklu plaka çalkalayın. </li><li> tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için akış sitometrisi tampon ile 3 kez doku Homojenat yıkayın. </li><li> Belirli CD45, CD11b, LY6C, CD11c dahil biyomarkerların antikorların bir kokteyl ile hücreleri leke,CD64, CD3, MHC II ve CD31 (1: Tüm antikorlar için 200 seyreltme, klon bilgi materyalleri elektronik tablodaki sağlanır). İlgili hücre tiplerini belirlemek ve (5) analiz yazılımı sitometri uygun bir akış ile her bir hücre popülasyonunda -ds diIC12 bunların ortalama floresan yoğunluğu (MFI) belirler. </li></ol></li><li> immün için, şu adımları izleyin: <ol><li> Optimal kesme ortamı (OCT) ile dolu bir kaset içine bir tümör yerleştirin ve kuru buz üzerinde dondurma. </li><li> Tümör dokusu 6 mikron dondurulmuş bölümleri yapmak ve histoloji cam slaytlar üzerine koyun; Bölümler doku üzerinde en iyi temsil eden bilgi tümörün en kesitlere kapsamalıdır. </li><li> Biyobelirteçlerini Leke (örneğin, endotel hücreleri için CD31) karşılık gelen antikorların (örneğin anti-CD31, klon MEC13.3) ile ilgi. paraformaldehid ile bölümleri düzeltmek; Serum sekonder antikor türlerinin kökeni eşleşen onları engellemek; inkubasyon4 ° C&#39;de 12 saat süre ile primer antikorlar ile yedi ve daha sonra 2 saat boyunca sekonder antikor ile; ve nihayet, PBS ile yıkayın ve kapak slipleri ile kaplayın. Görüntü Leica dik konfokal SP5 mikroskop 13, 16 ile boyanmış slaytlar. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Peer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanocarriers+as+an+emerging+platform+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Nanotechnol%22%5BJournal%5D)">Nanocarriers as an emerging platform for cancer therapy.</a> Nat Nanotechnol. 2, 751-760 (2007).</li>
<li>Barenholz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doxil%28R%29--the+first+FDA-approved+nano-drug%3A+lessons+learned%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Doxil(R)--the first FDA-approved nano-drug: lessons learned.</a> J Control Release. 160, 117-134 (2012).</li>
<li>Green, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abraxane%2C+a+novel+Cremophor-free%2C+albumin-bound+particle+form+of+paclitaxel+for+the+treatment+of+advanced+non-small-cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Abraxane, a novel Cremophor-free, albumin-bound particle form of paclitaxel for the treatment of advanced non-small-cell lung cancer.</a> Ann Oncol. 17, 1263-1268 (2006).</li>
<li>Juliano, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanomedicine%3A+is+the+wave+cresting%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Nanomedicine: is the wave cresting?</a> Nat Rev Drug Discov. 12, 171-172 (2013).</li>
<li>Ledford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bankruptcy+filing+worries+developers+of+nanoparticle+cancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Bankruptcy filing worries developers of nanoparticle cancer drugs.</a> Nature. 533, 304-305 (2016).</li>
<li>Venditto, V. J., Szoka, F. C. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+nanomedicines%3A+so+many+papers+and+so+few+drugs%21%5BTitle%5D)+AND+%22+Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Cancer nanomedicines: so many papers and so few drugs!</a> Adv Drug Deliv Rev. 65, 80-88 (2013).</li>
<li>Dunphy, M. P., Lewis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiopharmaceuticals+in+preclinical+and+clinical+development+for+monitoring+of+therapy+with+PET%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Radiopharmaceuticals in preclinical and clinical development for monitoring of therapy with PET.</a> J Nucl Med. (50 Suppl 1), (2009).</li>
<li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+Imaging+of+Tumor-Associated+Macrophages+with+89Zr-Labeled+High-Density+Lipoprotein+Nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">PET Imaging of Tumor-Associated Macrophages with 89Zr-Labeled High-Density Lipoprotein Nanoparticles.</a> J Nucl Med. 56, 1272-1277 (2015).</li>
<li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modular+labeling+strategy+for+in+vivo+PET+and+near-infrared+fluorescence+imaging+of+nanoparticle+tumor+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">A modular labeling strategy for in vivo PET and near-infrared fluorescence imaging of nanoparticle tumor targeting.</a> J Nucl Med. 55, 1706-1711 (2014).</li>
<li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.nature.com/articles/ncomms11838">Nanoreporter PET predicts the efficacy of anti-cancer therapy.</a> Nature communications. , (2016).</li>
<li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibiting+macrophage+proliferation+suppresses+atherosclerotic+plaque+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+advances%22%5BJournal%5D)">Inhibiting macrophage proliferation suppresses atherosclerotic plaque inflammation.</a> Science advances. , (2015).</li>
<li>Priem, B., Tian, C., Tang, J., Zhao, Y., Mulder, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+nanoparticles+for+the+accurate+detection+of+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Fluorescent nanoparticles for the accurate detection of drug delivery.</a> Expert Opin Drug Deliv. 12, 1881-1894 (2015).</li>
<li>Gianella, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifunctional+nanoemulsion+platform+for+imaging+guided+therapy+evaluated+in+experimental+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Multifunctional nanoemulsion platform for imaging guided therapy evaluated in experimental cancer.</a> ACS Nano. 5, 4422-4433 (2011).</li>
<li>Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+with+liposomes+as+pharmaceutical+carriers%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers.</a> Nat Rev Drug Discov. 4, 145-160 (2005).</li>
<li>Salmon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+and+Activation+of+CD103%28%2B%29+Dendritic+Cell+Progenitors+at+the+Tumor+Site+Enhances+Tumor+Responses+to+Therapeutic+PD-L1+and+BRAF+Inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Expansion and Activation of CD103(+) Dendritic Cell Progenitors at the Tumor Site Enhances Tumor Responses to Therapeutic PD-L1 and BRAF Inhibition.</a> Immunity. 44, 924-938 (2016).</li>
<li>Perez-Medina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+PET+Imaging+of+HDL+in+Multiple+Atherosclerosis+Models%5BTitle%5D)+AND+%22JACC+Cardiovasc+Imaging%22%5BJournal%5D)">In Vivo PET Imaging of HDL in Multiple Atherosclerosis Models.</a> JACC Cardiovasc Imaging. 9, 950-961 (2016).</li>
<li>Duivenvoorden, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+statin-loaded+reconstituted+high-density+lipoprotein+nanoparticle+inhibits+atherosclerotic+plaque+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+communications%22%5BJournal%5D)">A statin-loaded reconstituted high-density lipoprotein nanoparticle inhibits atherosclerotic plaque inflammation.</a> Nature communications. 5, 3065(2014).</li>
<li>Carney, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+PET+Imaging+of+PARP1+Expression+in+Glioblastoma+Models%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Non-invasive PET Imaging of PARP1 Expression in Glioblastoma Models.</a> Mol Imaging Biol. , (2015).</li>
<li>Salinas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioiodinated+PARP1+tracers+for+glioblastoma+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Res%22%5BJournal%5D)">Radioiodinated PARP1 tracers for glioblastoma imaging.</a> EJNMMI Res. 5, 123(2015).</li>
<li>Carlucci, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual-Modality+Optical%2FPET+Imaging+of+PARP1+in+Glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Dual-Modality Optical/PET Imaging of PARP1 in Glioblastoma.</a> Mol Imaging Biol. 17, 848-855 (2015).</li>
<li>Tang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cell+screening+of+a+nanoparticle+library+improves+atherosclerosis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Immune cell screening of a nanoparticle library improves atherosclerosis therapy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , (2016).</li>
<li>Scott, A. M., Wolchok, J. D., Old, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibody+therapy+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Antibody therapy of cancer.</a> Nat Rev Cancer. 12, 278-287 (2012).</li>
<li>Goodwill, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-space+MPI%3A+magnetic+nanoparticles+for+safe+medical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mater%22%5BJournal%5D)">X-space MPI: magnetic nanoparticles for safe medical imaging.</a> Adv Mater. 24, 3870-3877 (2012).</li>
</ol>

Yazarların yapacak herhangi bir açıklaması yoktur.

Protokol çerçevesinde kritik Adımlar: Çift etiketli lipozomların, yüksek kaliteli, uzun bir süre boyunca tutarlı sonuçlar üretmek için bir anahtardır. Free floresan boyalar ya da 89 Zr iyonları tamamen farklı hedefleme desen oluşturabilir tamamen saflaştırma adımı sırasında uzaklaştırılmalıdır. bağışıklık sistemi önemli ölçüde deney kanseri Nanomedicine performansını etkiler, buna ek olarak, bağışıklık sistemi fare modelleri kullanılması, bu protokol boyunca kullanılan C57BL / 6 fare...

Nanotıp kanser tedavisi geliştirme 1 paradigmasını değiştiriyor. Böyle lipozom ve albümin-temelli nanotherapies 2, 3 olarak önceki kanser nanomedicines, muazzam bir klinik etkisi esinlenerek, birçok yeni formülasyonlar geçtiğimiz on yıl içinde üretildi. Ancak, bu kanser nanomedicines klinik çeviri başarı son analizler bunlardan sadece bir kaç klinik kullanım 4, 5 için onaylanmış olduğunu göstermektedir. Yeni kanser nanomedicines klinik çeviri biri büyük engel ücretsiz terapötik bileşikler 6 doğrudan yönetimi ile karşılaştırıldığında terapötik indeksi sınırlı bir gelişmedir. Klinik öncesi hayvan modellerinde sistemik dokuda nanomedicines ve hücresel seviyelerinin in vivo performans gibi, doğru bir değerlendirme olarak kimliklendirmek esastıry gelecekteki klinik çeviri için optimal terapötik endeksleri olanlar. Nanomalzemeler tüm klinik görüntüleme yöntemleri 7 arasında mükemmel hassasiyet ve tekrarlanabilirlik vardır pozitron emisyon tomografisi (PET) görüntüleme ile yaşayan hayvanlar kantitatif karakterizasyonu için radyoaktif işaretli olabilir. Örneğin, 89 nanomedicines kanser 8, 9, 10, hem de diğer hastalık modellerinde 11 fare modellerinde karakterize edilmiştir uzun sirkülasyon Zr etiketli. Buna ek olarak, nanomedicines kan yarı ömrü ve biyolojik dağılım yoğun Bireysel dokular 8 ex vivo radyoaktivite ölçümü ile değerlendirilebilir. Bu nedenle, radyo-etiketlenmesi, sistemik ve doku düzeylerinde nanomedicines nicel değerlendirilmesi yapılır. Önemli olarak, Radyoizotopund nanomedicines nedeniyle genellikle radyoaktif sinyalin sınırlı uzaysal çözünürlük tek hücre ya da hücre içi düzeyde analiz edilemez. Bu nedenle, floresan etiketleme gibi flow sitometri ve floresan mikroskobu 12 optik görüntüleme teknikleri ile nanopartiküllerin değerlendirilmesi için tamamlayıcı bir yöntem olduğunu kanıtlamaktadır. Bu amaçla, radyoizotoplar floresan etiketler ile etiketlenmiş nanopartiküller kantitatif nükleer görüntüleme ile in vivo değerlendirilebilir ve ex vivo radyoaktivite sayımı ile ve aynı zamanda geniş bir optik görüntüleme hücresel düzeyde karakterize edilebilir. Daha önce, yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL), 11, lipozomlar 9, 10, polimerik nano partiküllerin, antikor fragmanları ve nanoemu dahil olmak üzere çeşitli nanopartiküller, radyoaktif ya da floresan etiketleri dahil modüler prosedürler geliştirdiklsions 10, 13. Bu etiketli nanopartiküller kendi özel uygulamalar için bu nanomateryallerin optimizasyonu güdümlü farklı düzeylerde ilgili hayvan modellerinde, kantitatif karakterizasyonu için izin vermiş. Bu çalışmada amaç, en köklü nanotıp platformu 14 çift etiketli nanoparçacık oluşturmak için kapsamlı prosedürleri göstermek için bir örnek gibi- ve iyice klasik singeneik melanom B16-F10 fare modelinde 15 bunu karakterize lipozomal-nanopartiküller kullanmaktır . sonuçlardan, bu nanopartikül karakterizasyonu yaklaşım ilgili fare modellerinde diğer kanser nanomedicines değerlendirmek için adapte edilebilir inanıyoruz.

<table><tbody><tr><td>DPPC</td><td>Avantilipidler</td><td>850355</td><td></td></tr><tr><td>Kolesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000</td><td>Avantilipidler</td><td>880120P</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-DFO</td><td>Ev yapımı</td><td>110634</td><td>Perez-Medina et al., JNM, 2014</td></tr><tr><td>DiIC12[5]-DS</td><td>AAT Bioquest</td><td>22051</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj filtre</td><td>Vivaproducts</td><td>VS2061</td><td></td></tr><tr><td>Döner buharlaştırıcı</td><td>Buchi</td><td>R-100</td><td></td></tr><tr><td>Radyo-HPLC</td><td>Shimadzu HPLC, 2 LC-10AT pompalı</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>89Zr-oksalat</td><td>MSKCC</td><td>Evde sentezlenen</td><td>TR19/9 değişken ışınlı siklotron (Ebco Industries, Inc.)</td></tr><tr><td>Mikro PET-CT</td><td>Siemens</td><td>Inveon Mikro-PET/CT</td><td></td></tr><tr><td>Gama sayacı</td><td>PerkinElmer</td><td>2470-0150</td><td></td></tr><tr><td>Akış sitometrisi</td><td>BD Biosciences</td><td>Fortessa</td><td>Herhangi bir çoklu parametrik akış sitometrisi analizörü yeterli olacaktır</td></tr><tr><td>C57BL / 6 fare</td><td>Jackson Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B16-YFP melanom hücreleri</td><td>Ev yapımı</td><td>Yok</td><td>Somon et al., Bağışıklık, 2016</td></tr><tr><td>Ly6C (klon HK1.4) - APC-Cy7</td><td>128025</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>MHCII (M5 / 114/152) - APC</td><td>107613</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD45 (30-F11) - BV510</td><td>103137</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD64 (X54-5 / 7.1) - PE-CY7</td><td>139313</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD11b (M1 / 70) - BV605</td><td>101237</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD3 (17A2) - BV711</td><td>100241</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD31 (13.3) - PE</td><td>561073</td><td>Biolegend</td><td></td></tr><tr><td>CD11c (M418) - PerCP-Cy5.5</td><td>117327</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr><tr><td>CD31 (13.3) florofor yok</td><td>550274</td><td>BD Biosciences</td><td></td></tr></tbody></table>

kapsamlı usulü değerlendirin<em&gt; İn vivo</em&gt; kanser nanomedicines performans

A Comprehensive Procedure to Evaluate the In Vivo Performance of Cancer Nanomedicines

Klinikte önceki kanser nanomedicines başarısı esinlenerek, araştırmacılar son on yıl içinde yeni formülasyonların çok sayıda yarattı. tıbbi gelişim altındadır nanomedicines çoğunluğu hayal kırıklığı yaratan sonuçlar vermiştir ise Ancak nanomedicines yalnızca az sayıda, klinik kullanım için onaylanmıştır. Yeni kanser nanomedicines başarılı klinik çeviri için bir büyük engel in vivo performansını doğru anlama olmaması. Bu makalede, pozitron emisyon tomografisi-bilgisayarlı tomografi (PET-BT), radyoaktivite ölçümü yöntemleri entegrasyonu yoluyla sistemik, doku, tek hücre ve hücre içi seviyede tümör taşıyan farelerdeki nanomedicines in vivo hareketinin karakterize edilmesi sıkı bir prosedürle , flow sitometri ve floresan mikroskobu. Bu yaklaşımı kullanarak, araştırmacılar doğru önemsizdir ilgili fare modellerinde yeni nano formülasyonlan değerlendirebilirr. Bu protokoller yüksek öteleme potansiyeli en umut verici kanser nanomedicines belirlemek ya da gelecekteki çeviri için kanser nanomedicines optimizasyonuna yardımcı becerisine sahip olabilir.

Şekil 1 prosedürün bir özetini göstermektedir. Şekil 2, 1. adımda 10&#39;da tarif edilen bir ikili-etiketli lipozomların şematik sentez prosedürü göstermektedir. Şekil aşama 2&#39;de tarif edildiği gibi 3 görüntüleyen Örnek PET BT görüntüsünde (Şekil 3a), PET görüntülemesi (Şekil 3b), kan yarı-ömür (Şekil 3C) ve radyoaktif nanopartiküllerin biyolo...

Nanoilaçların in vivo performansının zayıf anlaşılması, klinik translasyonlarını engellemektedir. Tümör taşıyan immünokompetan farelerde kanser nanoilaçlarının sistemik, doku, tek hücreli ve subselüler düzeylerde in vivo davranışını değerlendirme prosedürleri burada açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, araştırmacıların klinik çeviri için umut verici kanser nanoilaçlarını tanımlamalarına yardımcı olabilir.

Kapsamlı Usulü değerlendirin<em&gt; İn Vivo</em&gt; Kanser Nanomedicines performans

Inspired by the success of previous cancer nanomedicines in the clinic, researchers have generated a large number of novel formulations in the past ...

Bu prosedürün genel amacı, tümör taşıyan, immünokompetan farelerde kanser nanonomedisinlerinin sistemik, doku, tek hücre ve hücre altı düzeylerdeki in vivo davranışlarını değerlendirmektir. Bu yöntem, kanser nanomedisini alanındaki temel sorunun yanıtlanmasına yardımcı olabilir: Nanomedisinler, canlı hayvanların farklı dokularında zaman içinde kantitatif olarak nasıl birikmektedir?Bu tekniğin temel avantajı, bu çift etiketleme yaklaşımının nanovakum ilaçların in vivo karakterizasyonuna makroskobik düzeyden mikroskobik düzeye kadar olanak tanımasıdır. Prosedürümüzü göstermek için örnek olarak lipozomları seçtik çünkü lipozomlar şu an klinik kullanımda olan ve aynı zamanda deneysel nanovakum ilaçlar için yaygın bir platform teşkil eden yapılardır. Prosedüre başlamak için, %0,1 mol oranında lipofilik katyonik floresan boya içeren 20 miligram lipid karışımını, iki mililitre kloroform içerisinde çözün.Ardından, lipidleri döner evaporatör ile kurutun. Kurutulmuş lipidlere 20 mililitre fosfat tamponlu salin ekleyin. Karışımı, işlem boyunca dört ile 20 derece santigrat arasında tutarak, 3,8 milimetrelik bir prob sonikatör ile buz üzerinde 30 watt gücünde 30 dakika boyunca sonikasyona tabi

a-comprehensive-procedure-to-evaluate-vivo-performance-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Nanoparçacıkların hücre biodistribution değerlendirmek için kullanılan bio-görüntüleme yöntemleri, nanoformulated bileşikler tedavi ve teşhis izleme için geçerlidir. Burada açıklanan yöntemler, histolojik coregistration tarafından değerlendirilir, hassas ve özeldir. Metodolojileri kemirgen insan uygulamaları bir translasyonel yol sağlar.

Teşhis ve Tedavi İzleme Nanomalzemelerin Kayıtlı bio

Biz bir kuş embriyo modeli dinamik, gerçek zamanlı intravital görüntüleme kullanarak insan xenografted tümörlerin vasküler nanoparçacık yerelleştirme ölçmek için yeni bir yaklaşım sunuyoruz.

Intravital Görüntüleme Gerçek Zamanlı tümörler Nanopartikül Alımı Değerlendirme

Bitki viral nanopartiküller (VNPs) biyomedikal uygulamalar için platformlar umut vericidir. Burada, biz bitki VNP yayılımı, saflaştırma, karakterizasyon ve bioconjugation ilişkin prosedürler anlatılmaktadır. Son olarak, biz bir fare ksenogreft model ve floresan görüntüleme kullanılarak tümör homing ve görüntüleme için VNPs uygulama göstermektedir.

Viral Nanopartiküller<em&gt; In vivo</em&gt; Tümör Görüntüleme

Polymalic asit bazlı bir nano ilacın bir örnek kanser için de geçerlidir kişiye tıp rasyonel tasarım karşı sunulmuştur. Bu, bir çıplak fare Her2-pozitif insan meme kanseri tedavisi için bir nano ilacın sentezini tarif eder.

Çoklu Tümör Belirteçleri Hedefleme için Polymalic Asit bazlı Nano Biopolymers: Kişiselleştirilmiş Tıp için Bir Fırsat?

Burada, tümör hücresi metabolizmasının gerçek zamanlı izlenmesi, in vivo tavuk embriyosu koryo-allantoik membran (CAM) metastaz modeli ile birleştirildiğinde, tümör hücrelerini DNA'ya zarar veren kemoterapötiklere duyarlı hale getirme yetenekleri açısından yeni anti-kanser hedeflerini/ajanlarını değerlendirmek için kullanılır.

Kanser İlaç Duyarlılık Etkinliğinin Değerlendirilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; İn Vivo</em

Bu protokol, florofor etiketli nanokorlar ve geleneksel antikorlar kullanan farelerde in vivo yakın kızılötesi floresan ksenogreft görüntüleme deneylerinin ex vivo doğrulamasını gerçekleştirmek için gereken adımları ana hatlarıyla belirtir.

Nanobody ve Antikor Temelli Doğrulama<em&gt; İn Vivo</emFarelerde&gt; Tümör Xenograftlarında NIRF-görüntüleme Deneyler kullanma<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sitometrisi ve Mikroskopi

Bu protokol, sofistike bir dağıtım ve izleme sistemi kullanarak manyetik nanopartikül hipertermisinin doğru bir şekilde verilmesi için gerekli teknikleri ve metodolojiyi sunar.

Özel Yapım Bir Dağıtım Sistemi Kullanarak Manyetik Nanopartikül Hipertermisinin In Vitro ve In Vivo Teslimatı

HNSCC'nin sinjenik fare modelinde IL-1α'nın antitümör aktivitesini ve ilişkili toksisitesini incelemek için standart bir protokol tanımlanmıştır.

Polianhidrit IL-1α Nanopartiküllerinin In vivo Antitümör Aktivitesinin Değerlendirilmesi

Burada, nazal kendiliğinden monte edilmiş nanoemülsiyon tümör aşısının in vitro ve in vivo olarak hazırlanması ve değerlendirilmesi için ayrıntılı yöntemler sunuyoruz.

Nazal Kendi Kendine Toplanan Nanoemülsiyon Tümör Aşısının İn Vitro ve İn Vivo Hazırlanması, Özellikleri, Toksisitesi ve Etkinliğinin Değerlendirilmesi

Burada, onkojenik nükleik asitlerin terapötik susturulması için klinik olarak uygulanabilir bir yaklaşım sağlayarak, RNA oligomerlerini taşıyan manyetik demir oksit nanopartiküllerinin hayvan modellerinde metastatik meme kanserine in vivo olarak verilmesi için protokolü açıklıyoruz.

Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi

Öğrenin, kanser nanomediklerinin sistemik, doku, tek hücre ve hücre içi düzeylerdeki davranışlarını değerlendirmek için kapsamlı bir yöntem. Lipozomlar kullanılarak tümör taşıyan immünokompetent farelerde in vivo birikim analizi yapılır.

Kapsamlı Usulü değerlendirin

Daha fazla video keşfet