Name: Sarcoplasmic retikulum kalsiyum koruma ve hücre içi diyastolik kalsiyum kaldırma izole Ventriküler Cardiomyocytes olarak değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: Öğrenin izole ventriküler kardiyomiyositlerde sarkoplazmik retikulum kalsiyum rezervi ve diyastolik kalsiyum kaldırma fonksiyonlarını değerlendirme yöntemini. Bu teknik diyabet ve kalp yetmezliği gibi patofizyolojik koşullarda hücre içi kalsiyum işleme mekanizmalarını incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser hibe Çin Ulusal doğal Bilim Vakfı tarafından desteklenmiştir (No 81100159, Dongwu Lai; 81401147, Juhong Zhang), tıp ve Sağlık Bilimleri programı, Zhejiang eyaleti (No 201646246, Dongwu Lai) ve Sağlık Bilimleri ve Hangzhou City (No. 2013A28, Ding Lin) teknoloji planı.

tüm hayvan deneyleri kurumsal hayvan bakım ve deneysel Araştırma Merkezi, Çin Çince tıbbi bilim ve Zhejiang Üniversitesi'nde kullanım Komitesi tarafından onaylanmış protokoller uyarınca gerçekleştirilmiştir.
 1. çözüm hazırlık <ol><li>tüm çözümler Tablo 1 ' de açıklandığı şekilde hazırlayın.</li></ol>
 2. yalıtım, sol ventrikül (LV) Cardiomyocytes Not: LV cardiomyocytes enzimatik Langendroff perfüzyon sistemi yukarıda açıklanan 7 olarak kullanarak izole , 8 , 9 , 10 , 11.
<ol><li>Langendroff perfüzyon sistemi ayarlarsınız. Perfüzyon sistemi Normal Tyrode (NT) çözüm ile doldurmak, 36.5 ° C'de sıcaklığı ayarlamak ve tüp herhangi bir hava kabarcıkları ortadan kaldırmak.</li>
	<li>Tartmak ve Sprague-Dawley rat mayi enjeksiyonu (IP) kloral hidrat (400 mg/kg) ile anestezi. 5 dk. sonra kuyruk ya da ayak çimdik yanıt değerlendirerek anestezik durum teyit</li>
	<li>Xiphoid işleminin altında karın boşluğu ile Cerrahi makas açın, xiphoid işlemi kaldırın ve göğüs makas ile açın. Kalp zarını kaldırmak, biraz kalbi eğri Forseps ile kaldırın, aort tanımlamak ve makas aort kök kalp kekemelik.</li>
	<li>60 mm çanak kalp transfer ve NT çözüm ile yıkayın. Aort iki mikro-anatomi Forseps ile tutun ve Langendorff perfüzyon kanül monte ve sıkıca cerrahi dikişler kullanarak kanül üstüne aort ligate. 
	Not: Bu işlem 15 içinde yetenekli bir operatör bitirebilir miyim s.</li>
	<li>Kalp koroner arter dolaşımını kurtarmak için 30 mL NT solüsyonu ile sıvı. Sonra perfusate 30 mL için Ca 2 + geçiş-kalp atışı durdurmak için Tyrode çözüm (10 mM taurin, 1 mg/mL BSA) ücretsiz. Daha sonra perfusate Collagenase A yalıtım çözüm (0.6 mg/mL) enzim sindirim için geçiş. 
	Not: Kullanım Collagenase deneyler için diyabetik sıçan veya Collagenase II ile deneyler için diyabetik sıçan olmadan.</li>
	<li>20-25 dk sindirim sonra hızlı bir şekilde perfüzyon çözüm Ca 2 + için değiştirmek-Tyrode çözüm daha fazla sindirim durdurmak için ücretsiz. Sonra kalp Forseps ile tutun, kanül--dan kesmek ve kalp KB solüsyon içeren bir 35mm tabak yerleştirin (bkz. Tablo 1).</li>
	<li>Makas ve Forseps ile LV duvar incelemek. Atrium, sağ ventrikül ve Atriyoventriküler birleşim alanı kesti. LV kalan dokudur; KB çözüm ile yeni bir 35 mm çanak içine aktarın. LV doku küçük parçalar halinde kıyma.</li>
	<li>Yavaşça filtre uygulanmış bir plastik damlalık taşlarla pipette ve 10 mL KB çözümde yeniden askıya alma.</li>
	<li>150 µm diyafram paslanmaz çelik filtre ve 15 mL santrifüj tüpü aktarmak hücrelerle filtre. 150 x g 30 s ve atma süpernatant için de santrifüj kapasitesi. 10 mL KB çözümünde, ücretsiz miyositler yerleşmek için 6 dk, yeniden askıya süpernatant atmak ve Pelet 10 mL KB çözümde yeniden askıya alma. 
	Not: %100 O 2 ile benzin çözümlerinde 36 ° C'de tüm adımları gerçekleştirilmiştir.</li>
</ol> 3. Kalsiyum tekrar rifampisin <ol><li>20 dk KB çözüm için yerleşme sonra süpernatant atmak ve kalsiyum tekrar rifampisin çözüm A ile miyositler yeniden askıya alma (0.3 mM Ca 2 +, 4.5 mL Ca 2 +-ücretsiz Tyrode çözüm, 1,5 mL NT çözüm) 10 dakika süreyle</li>
	<li>Kalsiyum tekrar rifampisin çözüm B ile yukarıdaki yordamı yineleyin (0.3 mM Ca 2 +, 3 mL Ca 2 +-ücretsiz Tyrode çözümü, 3 mL NT solüsyon).</li>
	<li>Kullanılabilir miyositler arındırmak için NT solüsyonu (1,2 mM Ca 2 +) ile yukarıdaki yordamı yineleyin. Bu çözümde izole LV miyositler depolamak ve onları 4-6 h. içinde çalışma</li>
</ol> 4. Set Up perfüzyon sistemi <ol><li>odası perfüzyon ( şekil 1A) için NT çözüm ile giriş akımı tüp bağlamak.</li>
	<li>Çok namlu manifold ipucu (örneğin, perfüzyon kalem, bundan böyle kalem anılacaktır) için iğne perfüzyon hedef myocyte, bağlanmak, micromanipulator sabit, Vana perfüzyon sistemi kontrol. NT çözüm ve 10 mM kafein çözüm kalem ( şekil 1A) her sütun için eklemek.</li>
	<li>Hava engellenmesini önlemek için tüpler herhangi bir hava kabarcıkları tahliye.</li>
	<li>Kalem 10 mikron ucundan damla sayısını saymak s ve akış hızı 3 damla/10 s. yaklaşık bir hızda tutmak için akım regülatörü değerini el ile ayarlamak</li>
</ol> 5. İntrasellüler Ca 2 + Darbe Gerilimlerinden ve Sarcomere kısalma 7 , 8 , 9 ölçümleri <ol><li>pipet 10 µL hücre süspansiyon slayt mikroskop altında bir hücre sayaç tarafından hücre sayıları saymak ve yoğunluğu hesaplayın. 50. 000 hücre/mL yaklaşık bir konsantrasyon için miyositler sulandırmak.</li>
	<li>Ekle Fura-2 acetoxymethyl (AM) hisse senedi (bir kalsiyum hassas boya) miyositler için 2 µM. nihai toplama getirmek için 1 mL süspansiyon halinde tutmak içinde belgili tanımlık karanlık oda sıcaklığında 20 dk için.</li>
	<li>30 s ve yeniden askıya NT çözüm ile cardiomyocytes 2 kez 150 g, santrifüj.</li>
	<li>Dönüş ışık kapalı ve hücreleri karanlıkta bırakın. Miyositler perfüzyon odası 15 dakika yerleştirin. O zaman odası perfüzyon (1,5 mL/dk) NT çözüm ile başlatın. Hızı miyositler için 5 dk. bir uyarıcı (dalga süre 4.0 ms, darbe genlik 8.0 V) kullanarak 1 Hz alan stimülasyon ile</li>
	<li>Bir myocyte iyi şeklinde seçin (çubuk şekli, keskin kenar ve çapraz yivler net) ve istikrarlı uyarılmış seğirme (hiçbir kendiliğinden kasılma) 10 x mikroskobik objektif mercek altında. Ardından, mikroskobik büyütme oranını değiştirmek için 40 x ve myocyte yatay bir konumda tutmak için CCD kamera yönünü döndürmek.</li>
	<li>Çerçeve hücre çerçeveleme bağdaştırıcısı ayarlayarak tek myocyte. Arka plan açık olduğundan emin olun.</li>
	<li>Miyositler 340 veya 380 nm dalga boyu uyarma filtreleriyle, ksenon lamba tarafından yayılan ışığa maruz ve 40 x objektif aracılığıyla miyositler görüntü. Floresans sinyali, 510 nm. Bu arada, sarcomere uzunluğu değişiklikler miyositler, Not ve yumuşak kenar modülü aynı anda kullanarak kayıt.</li>
	<li>Kayıt floresan bir çift-uyarma Floresans photomultiplier sistem tarafından. Görüntüleme sistemi kalsiyum için kayıt programını çalıştırın,'ı tıklatın &#34; dosya/yeni dosya &#34; yeni bir kayıt oluşturarak ve'ı tıklatın &#34; başlangıç &#34; düğmesini zaman uyumlu olarak kayıt Floresans ve sarcomere uzunluğu için.</li>
</ol> 6. Değerlendirilmesi SR Ca 2 + rezerv ve diyastolik Ca 2 + kaldırma işlev 7 , 8 , 9 <ol><li>InterLink &#34; Aux Out &#34; içinde bağlantı noktası uyarıcı ile &#34; Analog içinde &#34; Vana kontrol sistemi üzerinde bağlantı noktası (örneğin, Vana Komutan, bkz: Malzemeler tablo) (TTL sinyal eşitlemek için) bir BNC kablo ile.</li>
	<li>Perfüzyon vanalar yukarıda açıklanan 8 , 9 olarak otomatik olarak geçiş yapmak için bir program hazır ayarı; İşlem için ayrıntılı adımlar olarak aşağıda listelenmiştir.
	<ol><li>Kapak parametrelerinde kontrol yazılım Tablo 2 başına ve tıklatın hazır ayar &#34; Download &#34; sırası karşıdan yüklemek için düğmesini program yüklü. ' I tıklatın &#34; TriggEr &#34; düğme-e doğru olanaklı kılmak tetikleyici görev. 
		Not: Sıra TTL sinyal aldıktan sonra supap kontrol sistemi yürütebilirsiniz.</li>
		<li>Stimülatörü sıra moduna önceden ve küme parametreleri göre Tablo 3.</li>
	</ol></li> <li>Uyarıcı, ayarla &#34; S1 adım &#34; miyositler 1 Hz., LV hızı ile NT çözüm 1.5 mL/dk hızında iğne perfüzyon başlatın. 
	Not: iğne akış hızını odası perfüzyon daha hızlı olduğundan, iğne Stream ışık kırılma odası perfüzyon ışık kırılma farklıdır. Işık kırılma fark hedef myocyte çevreleyen etkili iğne perfüzyon aralığını gösterir.</li>
	Bir hedef myocyte (dizisindeki için ters yönde aşağı akım) düşük güç mikroskobik görünümü altında <li>seçin ve emin olun bu mikro kalem ucunu tarafından ulaşılabilir. Mikroskop büyütme 400 x için değiştirin. CCD kamera yönlendirmeyi myocyte yatay konumda tutun olarak döndürün. Dikdörtgen diyafram altında hücre çerçeveleme bağdaştırıcı ile miyositler doldurur uygun bir pencere için ayarlayın. En az arka plan olduğundan emin olun; diğer miyositler veya ölü hücre artıkları bu pencerede izin vermemek.</li>
	<li>Micromanipulator üzerinde sabit kalem konumunu ayarlamak ve dikkatle mikro ipucu yer görme alanı hedef myocyte için yarıçap mesafeden altında 400 x mikroskop büyütme.</li>
	<li>Çoğunlukla hedef myocyte kapak ve myocyte uzak iğne akış tarafından süpürüldü değil emin olmak için iğne akış aralığı ayarlamak.</li>
	<li>Sonra 60 s temel Stimülatörü imlecine rulo pacing, &#34; D2 adım &#34;. 
	Not: Protokolü geri kalanı otomatik olarak uyarıcı ve supap kontrol sistemi tarafından yürütülür. Yukarıdaki ayarına göre iletişim kuralı otomatik olarak olduğu gibi şekil 2A, 1 Hz 60 için NT çözüm ile pacing temel yürütülebilir s. Pacing ve gecikme 2 için duraklatmak s, 10 mM kafein perfüzyon 15 hızla geçmek s (işlevsel olarak Ca 2 + SR depoda serbest bırakmak için) ve sonra geri NT çözüm anahtarı.</li>
	<li>Kayıt sonunda bireysel miyositler için arka plan Floresans algılamak. ' I tıklatın &#34; Duraklat &#34; yakın boş alana taşımak mikroskobik görünümü düğmesini dosya kayıt, duraklatmak için. ' I tıklatın &#34; Kayıt &#34; Kayıt için birkaç saniye devam düğmesini tıklatın ve kayıt arka plan düzeltme için sayısal 340 ve 380 nm yoğunluk değerleri.</li>
	<li>Açık &#34; işlemi ve sabitler &#34; iletişim kutusunda ve içine değerleri doldurma &#34; arka plan &#34; form, sırasıyla; yazılım arka çıkararak Fura 2 oranı değerleri düzeltebilirsiniz.</li>
</ol> 7. Veri analizi 9 <ol><li>kalsiyum geçişler ve hız ayarlama temel aşamada kısalma sarcomere ölçülerini, seğirme bakliyat ortalama ve kalsiyum geçişler, zaman sabiti gibi dinamik parametreleri analiz Kalsiyum geçici çürüme (Tau-1 Hz), belgili tanımlık bilgisayar yazılımı kullanılarak otomatik olarak. 
	Not: yazılımın çürüme kesimi de uymazsa ihracat düşüş izleme için el ile mono üstel eğri uydurma.</li>
	<li>Kafein kaynaklı kalsiyum atışlar için sadece nabız kalsiyum kaldırma işlevi çözümlenmesi için dik bir dalga ile seçin. Sinyal bozukluğu, anormal darbe ya da o uzakta midway akan içeren hücreleri dışlamak.</li>
	<li>Kafein kaynaklı kalsiyum darbe (Ca-kafein, SRCa 2 + rezerv dizini) genliği ölçmek.</li>
	<li>Mono üstel eğriyi (10 s süresi) el ile ( şekil 2C) bilgisayar yazılımı--dan yaklaştırarak çürümesine zaman sabit kafein kaynaklı kalsiyum darbe (Tau-kafein) elde edilir.</li>
</ol>

<ol><li>Capel, R. A., Terrar, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+Ca+%282%2B%29-dependent+mechanisms+for+the+initiation+of+the+heartbeat%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">The importance of Ca (2+)-dependent mechanisms for the initiation of the heartbeat.</a> Front Physiol. 6, 80(2015).</li>
<li>Bers, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+cycling+and+signaling+in+cardiac+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium cycling and signaling in cardiac myocytes.</a> Annu Rev Physiol. 70, 23-49 (2008).</li>
<li>Zhao, S. M., Wang, Y. L., Guo, C. Y., Chen, J. L., Wu, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+decay+of+Ca2%2B+homeostasis+in+the+development+of+diabetic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Diabetol%22%5BJournal%5D)">Progressive decay of Ca2+ homeostasis in the development of diabetic cardiomyopathy.</a> Cardiovasc Diabetol. 13, 75(2014).</li>
<li>Pereira, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+in+diabetic+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+calcium%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling in diabetic cardiomyocytes.</a> Cell calcium. 56 (5), 372-380 (2014).</li>
<li>Coppini, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+sodium+current+inhibition+reverses+electromechanical+dysfunction+in+human+hypertrophic+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Late sodium current inhibition reverses electromechanical dysfunction in human hypertrophic cardiomyopathy.</a> Circulation. 127 (5), 575-584 (2013).</li>
<li>Ferrantini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((R4496C+RyR2+mutation+impairs+atrial+and+ventricular+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Physiol%22%5BJournal%5D)">R4496C RyR2 mutation impairs atrial and ventricular contractility.</a> J Gen Physiol. 147 (1), 39-52 (2016).</li>
<li>Li, L., Chu, G., Kranias, E. G., Bers, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+myocyte+calcium+transport+in+phospholamban+knockout+mouse+relaxation+and+endogenous+CaMKII+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac myocyte calcium transport in phospholamban knockout mouse relaxation and endogenous CaMKII effects.</a> Am J Physiol. 274, H1335-H1347 (1998).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CaMKII+inhibition+in+heart+failure%2C+beneficial%2C+harmful%2C+or+both%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">CaMKII inhibition in heart failure, beneficial, harmful, or both.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 302, H1454-H1465 (2012).</li>
<li>Lai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Rho+kinase+inhibitor%2C+fasudil%2C+ameliorates+diabetes-induced+cardiac+dysfunction+by+improving+calcium+clearance+and+actin+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">The Rho kinase inhibitor, fasudil, ameliorates diabetes-induced cardiac dysfunction by improving calcium clearance and actin remodeling.</a> J Mol Med (Berl). 95 (2), 155-165 (2017).</li>
<li>Lai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stretch+Current-Induced+Abnormal+Impulses+in+CaMKII%CE%B4+Knockout+Mouse+Ventricular+Myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Electrophysiol%22%5BJournal%5D)">Stretch Current-Induced Abnormal Impulses in CaMKIIδ Knockout Mouse Ventricular Myocytes.</a> J Cardiovasc Electrophysiol. 24 (4), 457-463 (2013).</li>
<li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+of+L-type+calcium+current+and+cardiac+function+in+CaMKII%7Bdelta%7D+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Alterations of L-type calcium current and cardiac function in CaMKII{delta} knockout mice.</a> Circ Res. 107 (3), 398-407 (2010).</li>
<li>Roussel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitoyl-carnitine+increases+RyR2+oxidation+and+sarcoplasmic+reticulum+Ca2%2B+leak+in+cardiomyocytes%3A+Role+of+adenine+nucleotide+translocase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Palmitoyl-carnitine increases RyR2 oxidation and sarcoplasmic reticulum Ca2+ leak in cardiomyocytes: Role of adenine nucleotide translocase.</a> Biochim Biophys Acta. 1852 (5), 749-758 (2015).</li>
<li>Yaras, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+diabetes+on+ryanodine+receptor+Ca2%2B+release+channel+%28RyR2%29+and+Ca2%2B+homeostasis+in+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Effects of diabetes on ryanodine receptor Ca2+ release channel (RyR2) and Ca2+ homeostasis in rat heart.</a> Diabetes. 54 (11), 3082-3088 (2005).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenovirus-Mediated+Overexpression+of+O-GlcNAcase+Improves+Contractile+Function+in+the+Diabetic+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Adenovirus-Mediated Overexpression of O-GlcNAcase Improves Contractile Function in the Diabetic Heart.</a> Circ Res. 96 (9), 1006-1013 (2005).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Kalsiyum akı SR yayımlanan başlıca Ca2 + Sistol kalbinde için kaynağıdır. Bir ölçüde, SR Ca2 + içerik genliği ve kesirli Ca SR yayımlanan2 + yansıtmak SR Ca2 + rezerv kardiyak kasılma için kullanılabilir. Öte yandan, Ca2 + rezerv SR sırasında diastole12,13,14arasında SR SR Ca2 + geri alım, Ca2 + sızıntı SR ve kendi dengesini yeteneği üzerinde bağlıdır. ...

Hücre içi kalsiyum ([Ca2 +]ben) geri dönüşüm cardiomyocytes1sistolik ve diyastolik fonksiyon yönetmelikte kritik bir rol oynamaktadır. Bildiğimiz gibi kalsiyum kaynaklı Ca2 + yayın hangi kasılma için elektrik sinyali çevirmek kaplin, uyarma daralma başlatır. Membran depolarizasyon neden Ca2 + 2 + kanal SR ryanodine reseptörleri 2 (RyR2) yolu ile sitoplazma içine serbest bırakmak sarcolemmal L tipi Ca etkinleştirir. Geçici yükseltilmiş sitoplazmik Ca2 + myofibrils daralma başlatır. Diastole sırasında olduğunu sitoplazmik Ca2 + reuptaken içine aracılığıyla SR Ca2 +SR-ATPaz 2 (SERCA2) ve cardiomyocyteNa+-Ca 2 + Eşanjör (NCX)2üzerinden dışarı pompalanır. Bu işlem kasılma-gevşeme içinde cardiomyocyte geri dönüşüm yol açar.
Kardiyak SR contractile makine çevreleyen bir hücre içi membran ağıdır. Bu kasılma için bir Ca2 + rezervuar olarak hizmet vermektedir ve intrasellüler Ca2 + dinlenme sırasında reabsorbs. SR Ca2 + rezerv tempolar için kullanılabilir için kardiyak contractility belirli. Bu arada, intrasellüler Ca2 + kaldırılması için kardiyak diastole önemlidir. Patofizyolojik bazı koşullarda, şeker hastalığı ve kalp yetmezliği, Engelli Ca2 + izni ve depresif SR Ca2 + gibi cardiomyocytes deposunda kardiyak Disfonksiyonun2sürecinde,3 tutulabilir ,4.
SR Ca2 + yayın ve diyastolik Ca2 + kaldırılmasına cardiomyocytes ölçmek için yaygın olarak kullanılan iki yaklaşım vardır: NCX geçerli bütünlüğünü dayalı yama-kelepçe5,6ve kafein kaynaklı Ca CA2 + Floresans görüntüleme7,8,9tarihinde dayalı 2 + darbe. Eski yaklaşım SR yayımlanan Ca2 + büyük ölçüde hücreden NCX tarafından pompalanır ki aslında bağlıdır. Ancak, bu yaklaşım onun şartı gelişmiş ekipman ve usta işlemi tarafından sınırlıdır. Bu da çalışmanın, SR Ca2 + rezerv ve Ca2 + miyositler kaldırılmasına bir Ca2 + Floresans görüntüleme sistemine dayalı bir kafein kaynaklı Ca2 + darbe ölçerek değerlendirmek için uygun bir yaklaşım açıklar. Kısaca, intrasellüler Ca2 + Floresans Fura-2 tarafından belirtilir. Stimülasyon sistemi ve perfüzyon sistemi tarafından ilişkilendirerek, perfüzyon anahtarlama ve sistem otomatik olarak pacing için bir program mevcut. 10 mM kafein hızla toplam Ca2 + sürümde SR. ikna etmek için istihdam edildi Kalsiyum geçişler ve kafein kaynaklı kalsiyum bakliyat üstel çürüme zamanı sabitleri (Tau) mono üstel eğri uydurma, diyastolik Ca2 + kaldırma SERCA ve NCX katkısı uygun şekilde yansıtan elde edilmiştir.

<table><tbody><tr><td>NaCl</td><td>Alfa Aesar</td><td>012314</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Alfa Aesar</td><td>012315</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Alfa Aesar</td><td>11595</td><td></td></tr><tr><td>HEPEs</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>D-Glikoz</td><td>Alfa Aesar</td><td>A16828</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Alfa Aesar</td><td>A18395</td><td></td></tr><tr><td>KOH</td><td>Alfa Aesar</td><td>A18854</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Alfa Aesar</td><td>011594</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Alfa Aesar</td><td>3337</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamik</td><td>Alfa Aesar</td><td>A15031</td><td></td></tr><tr><td>Taurin</td><td>Alfa Aesar</td><td>A12403</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz A</td><td>Roche</td><td>10103586001</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz Tip II</td><td>Worthington</td><td>LS004177</td><td></td></tr><tr><td></td><td>BSA Roche</td><td>735094</td><td></td></tr><tr><td>kafein</td><td>Sigma</td><td>C0750</td><td></td></tr><tr><td>Fura-2</td><td>Invitrogen</td><td>F1201</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>Olympus IX 71</td><td></td></tr><tr><td>Langendorff sistemi</td><td>Pekin Syutime Technology Co</td><td>PlexiThermo-S-LANGC</td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Marchauser</td><td>MM33 bağlantıları</td><td></td></tr><tr><td>Perfüzyon odası</td><td>IonOptix</td><td>FHD</td><td></td></tr><tr><td>Valf Kontrollü Yerçekimi Perfüzyon Sistemi</td><td>ALA</td><td>VC 3-8</td><td></td></tr><tr><td>valf komutanı yazılımı</td><td>ALA</td><td>VC 3 1.0.1.2</td><td></td></tr><tr><td>Hassas akış regülatörü</td><td>Delta Med</td><td>3204315</td><td></td></tr><tr><td>Çok Namlulu Manifold Perfüzyon Kalemi</td><td>AutoMate Scientific</td><td>04-08-[360]</td><td></td></tr><tr><td>Mikron Çıkarılabilir Uç</td><td>AutoMate Scientific</td><td>360um kimlik</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Ölçüm ve Hücre Boyutlandırma Sistemleri</td><td>IonOptix</td><td>Hyperswitch</td><td></td></tr><tr><td>Kayıt yazılımı</td><td>IonOptix</td><td>IonWizard 6.2.59</td><td></td></tr><tr><td>Stimülatör</td><td>IonOptix</td><td>MyoPacer EP</td><td></td></tr><tr><td>Sprague-dawley sıçanları</td><td>Beijing Vital River Laboratuvar Hayvanları Teknolojisi A.Ş.</td><td>SCXK 2016-01-007436</td><td></td></tr></tbody></table>

sarcoplasmic retikulum kalsiyum koruma ve hücre içi diyastolik kalsiyum kaldırma izole ventriküler cardiomyocytes olarak değerlendirilmesi

Assessment of Sarcoplasmic Reticulum Calcium Reserve and Intracellular Diastolic Calcium Removal in Isolated Ventricular Cardiomyocytes

Hücre içi kalsiyum geri dönüşüm cardiomyocytes sistolik ve diyastolik fonksiyon yönetmelikte kritik bir rol oynamaktadır. Kardiyak sarcoplasmic retikulum (SR) kasılma, hangi reuptakes intrasellüler Ca2 + dinlenme sırasında için bir Ca2 + rezervuar olarak hizmet vermektedir. SR Ca2 + rezerv tempolar için kullanılabilir için kardiyak contractibility belirli ve intrasellüler Ca2 + kaldırılması kardiyak diyastolik fonksiyonları için önemlidir. Şeker hastalığı ve kalp yetmezliği gibi patofizyolojik bazı koşullar altında Engelli kalsiyum Gümrükleme ve SR Ca2 + cardiomyocytes deposunda kardiyak Disfonksiyonun sürüyor tutulabilir. Burada, SRCa2 + rezerv ve diyastolik Ca2 + kaldırma değerlendirmek için bir protokol açıklayın. Kısaca, bir tek cardiomyocyte enzimatik izole edildi ve Fura-2 tarafından belirtilen hücre içi Ca2 + floresan bir kalsiyum görüntüleme sistemi tarafından kaydedildi. Kafein toplam SR Ca2 + yayın inducing için istihdam için biz stimülasyon ve perfüzyon sistemleri bağlantı tarafından bir otomatik perfüzyon geçiş programı önceden. O zaman, mono-üstel eğri uydurma çürüme zamanı sabitleri kalsiyum geçişler ve kafein kaynaklı kalsiyum bakliyat analiz etmek için kullanıldı. Buna göre katkısını SR Ca2 +-ATPaz (SERCA) ve Na+-Ca2 + Eşanjör (NCX) diyastolik kalsiyum kaldırma için değerlendirilir.

Burada, - diyabetik sıçan (DM) indüklenen ve yaş eşleşti Sprague'ı - streptozotocin (STZ) göstermek Dawley (SD) fareler gibi. 8-hafta-yaşlı erkek SD rats (200 ± 20 g) kontrol grubu için DM grup veya sitrat arabellek STZ (70 mg/kg, IP) tek bir mayi enjeksiyon aldı. Bir hafta sonra STZ yönetim, sıçanlar kan şekeri ile &#62; 16,7 mmol/L diyabetik kabul. 8 hafta sonra LV miyositler enzimatik izole edildi. Kalsiyum tekrar rifampisin sonra hayatta kalma durumunda kalır miyositler yaklaşık % 70-...

Hücre içi kalsiyum geri dönüşüm cardiomyocytes sistolik ve diyastolik fonksiyon yönetmelikte kritik bir rol oynamaktadır. Burada, sarcoplasmic retikulum Ca2 + rezerv ve diyastolik kalsiyum kaldırma cardiomyocytes işlevinde bir kalsiyum görüntüleme sistemi tarafından değerlendirmek için bir protokol açıklayın.

Sarcoplasmic retikulum kalsiyum koruma ve hücre içi diyastolik kalsiyum kaldırma izole Ventriküler Cardiomyocytes olarak değerlendirilmesi

Intracellular calcium recycling plays a critical role in regulation of systolic and diastolic function in cardiomyocytes. Cardiac sarcoplasmic reticulum ...

Bu prosedürün genel amacı, izole kardiyomiyositlerde sarkoplazmik retikulum kalsiyum rezervini ve hücre içi diyastolik kalsiyum uzaklaştırma fonksiyonunu değerlendirmektir. Bu yöntem, diyabet ve kalp yetmezliği gibi bazı patofizyolojik koşullar altında hücre içi kalsiyum yönetimi mekanizmasıyla ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı kullanım kolaylığıdır ve teknik ile ekipman açısından daha az sınırlayıcıdır.Bu prosedüre başlamak için Langendorff perfüzyon sistemini kurun. Perfüzyon sistemini NT solüsyonu ile doldurun, sıcaklığı 36.5 °C'ye ayarlayın ve tüpteki tüm hava kabarcıklarını giderin. Ardından, ksifoid çıkıntının altındaki abdominal boşluğu açın, ksifoid çıkıntıyı kaldırın ve göğüs kafesini bir makasla açın.Ardından perikardı çıkarın, kalbi kavisli penslerle hafifçe kaldırın, aortik arkı belirleyin ve kalbi aort kökünden kesin. Bundan sonra kalbi 60 milimetrelik bir kaba aktarın ve NT solüsyonu ile yıkayın. Aortayı iki mikro diseksiyon pensi ile tutun ve Langendorff perfüzyon kanülüne yerleştirin.Ardından, cerrahi sütürler kullanarak aortayı kanüle sıkıca bağlayın. Sonrasında, koroner arterlerin dolaşımını yeniden sağlamak için kalbi 30 milliliters NT solüsyonu ile perfüze edin. Daha sonra, kalp atışını durdurmak için perfüzyon sıvısını 30 milliliters kalsiyumsuz Tyrode solüsyonu ile değiştirin.Ardından, enzim sindirimi için perfüzyon sıvısını kollajenaz A izolasyon çözeltisi ile değiştirin. 20 ila 25 dakikalık sindirimin ardından, sindirimi durdurmak için perfüzyon çözeltisini hızla kalsiyumsuz Tyrode çözeltisi ile değiştirin. Daha sonra kalbi pensle tutun, kanülden kesin ve kalbi KB çözeltisi içeren 35 milimetrelik bir kaba yerleştirin.Ardından, sol ventrikül alanını bulun. Atriyumu, sağ ventrikülü ve atriyoventriküler bağlantı bölgesini kesin. Daha sonra sol ventrikülü, KB çözeltisi içeren yeni bir 35 milimetrelik kaba aktarın ve dokuyu küçük parçalar halinde ince ince doğrayın.Parçaları filtreli plastik bir damlalıkla nazikçe pipetleyin. Ardından, hücreleri 150 mikron açıklıklı paslanmaz çelik bir filtreden süzün ve 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın. Sonrasında, örneği 150 ×g kuvvetinde 30 saniye boyunca santrifüjleyin ve süpernatantı atın.Miyositleri 10 mililitre KB solüsyonu içinde yeniden süspande edin ve altı dakika boyunca çökmeye bırakın. Ardından, süpernatantı uzaklaştırın ve peleti 10 mililitre KB solüsyonu içinde 20 dakika boyunca yeniden süspande edin. KB solüsyonunda 20 dakika çöktükten sonra, süpernatantı uzaklaştırın ve miyositleri kalsiyum yeniden tanıtma solüsyonu A ile yeniden süspande edin. Yukarıdaki işlemi kalsiyum tanıtma solüsyonu B ile tekrarlayın. Daha sonra, mevcut miyositleri saflaştırmak için yukarıdaki işlemi NT solüsyonu ile tekrarlayın.İzole edilen LV miyositlerini bu çözeltide saklayın ve dört ila altı saat içinde inceleyin. Ardından, kalemin her bir kolonuna NT çözeltisi ve 10 millimolar kafein çözeltisi ekleyin. Hava tıkanıklığını önlemek için tüplerdeki hava kabarcıklarını tahliye edin.Şimdi, oda perfüzyonu için giriş tüpünü NT çözeltisine bağlayın. Hedef miyositin iğne perfüzyonu için, çok kanallı manifold ucunu valf kontrollü perfüzyon sistemine bağlayın. Ardından, kalemle benzeri uçtan (micron tip) 10 saniye boyunca damla sayısını sayın ve akış hızını yaklaşık 10 saniyede üç damla olacak şekilde ayarlamak için akış regülatörünü manuel olarak düzenleyin.Bu prosedürde, final konsantrasyonu iki mikromolar seviyesine getirmek için fura-2-asetoksimetil stok çözeltisini bir mililitre miyosit süspansiyonuna ekleyin. Bunları oda sıcaklığında 20 dakika boyunca karanlıkta bekletin. Ardından, süpernatantı uzaklaştırın ve kardiyomiyositleri NT çözeltisi ile iki kez yeniden süspanse edin.Ardından ışığı kapatın ve hücreleri karanlıkta tutun. Miyositleri, NT çözeltisi ile perfüzyon yapmadan önce 15 dakika boyunca perfüzyon odasına yerleştirin. Bir stimülatör kullanarak miyositleri beş dakika boyunca bir hertz alan stimülasyonu ile pace edin.Şimdi, 10X mikroskop objektif lensle şekli düzgün ve stimüle edilmiş seğirmesi stabil olan bir miyosit seçin. Yeni bir kayıt dosyası oluşturmak için File New File seçeneğine tıklayın. Ardından, mikroskop büyütmesini 40X'e getirin ve miyositi yatay konumda tutmak için CCD kamera yönünü döndürün.Ardından, hücre çerçeveleme adaptörünü ayarlayarak tek bir miyositi çerçeveleyin ve arka planın net olduğundan emin olun. Sonrasında, miyositleri 340 veya 380 nanometre dalga boyu eksitasyon filtrelerine sahip bir Xenon lambasının yaydığı ışığa maruz bırakın ve miyositleri 40X objektif aracılığıyla görüntüleyin. 510 nanometredeki floresan sinyalini tespit edin.Çift uyarım floresan fotomultiplier sistemini kullanarak floresans ve sarkomer uzunluğunu eş zamanlı olarak kaydetmek için Başlat düğmesine tıklayın. Miyositlerin sarkomer uzunluklarındaki değişimleri gözlemleyin ve eş zamanlı olarak yumuşak kenar (soft edge) modülünü kullanarak kaydedin. Bu işlemde, stimülatördeki aux çıkış portunu bir BNC kablosu ile valf kontrol sistemindeki analog girişine bağlayın.Ardından, valf kontrol yazılımındaki parametreleri önceden ayarlayın, programda yüklü olan diziyi indirmek için indirme düğmesine tıklayın ve tetikleme işlevini etkinleştirmek için tetik düğmesine tıklayın. Daha sonra stimülatörü dizi moduna getirin ve parametreleri ayarlayın. Sonrasında, LV miyositlerini 1 Hz hızında uyarmak için stimülatörü S1 adımına ayarlayın.NT solüsyonu ile iğne perfüzyonuna dakikada 1,5 mililitre hızla başlayın. Düşük büyütmeli mikroskop altında hedef bir miyosit seçin ve kalem ucunun mikropucuyla oraya ulaşılabildiğinden emin olun. Ardından, mikroskop büyütmesini 400X olarak değiştirin.Miyositi yatay konumda tutmak için CCD kamera yönünü döndürün. Ardından, hücre çerçeveleme adaptörünün altındaki dikdörtgen açıklığı, miyositlerle dolan uygun bir pencereye göre ayarlayın. Sonrasında, mikro manipülatöre sabitlenmiş kalem konumunu ayarlayın ve mikro ucu, hedef miyosite görüş alanı yarıçapı kadar uzaklıkta olacak şekilde dikkatlice yerleştirin.Ardından, iğne akış aralığını temel olarak hedef miyositi kapsayacak şekilde ayarlayın ve miyositin iğne akımıyla sürüklenmediğinden emin olun. 60 saniyelik temel stimülasyondan sonra, stimülatör imlecini D2 adımına getirin. Protokolün geri kalanı stimülatör ve valf komutası tarafından otomatik olarak yürütülecektir.Dosya kaydını durdurmak için Duraklat düğmesine tıklayın ve mikroskobik görünümü yakındaki boş bir alana taşıyın. Ardından, birkaç saniye boyunca kayda devam etmek için Kaydet düğmesine tıklayın ve arka plan düzeltmesi için sayısal 340 ve 380 nanometre yoğunluk değerlerini kaydedin. Bundan sonra, Operasyon Sabiti iletişim kutusunu açın ve değerleri arka plan formuna girin.Yazılım, arka planı çıkararak fura-2 oran değerlerini düzeltebilir. Burada, perfüzyon valflerinin ve pacing sisteminin otomatik olarak değiştirilmesine yönelik protokolün bir örneği gösterilmektedir. Bu şekil, diyabetik ve Sprague Dawley gruplarında bir hertz ile stimüle edilen seyirmeler için sarkoplazmik retikulum kalsiyum rezervi ve fraksiyonel kalsiyum salınımının istatistiksel değerlerini göstermektedir.Diyabetik grup, Sprague Dawley grubuna kıyasla anlamlı düzeyde azalmış SR kalsiyum rezervi ve SR fraksiyonal kalsiyum salınımı göstermiştir. Burada, yazılım paneli, kafeinle indüklenen kalsiyum darbesinin sönümleme zaman sabitine yönelik manuel tek eksponansiyel eğri uydurmasını göstermektedir. Bu sütun grafikleri, diyabetik ve Sprague Dawley grupları arasındaki Tau-kafein ve Tau-1Hz/Tau-kafein değerlerini karşılaştırmaktadır.Diyabetik grup, Sprague Dawley grubuna kıyasla Tau-kafein ve Tau-1Hz/Tau-kafein değerlerinde anlamlı bir artış göstermiştir. Bu prosedür, kardiyak disfonksiyonun hücre içi kalsiyum yönetimi mekanizmasını incelemek için uygulanabilir ve uygun bir araç sunmaktadır. Bu prosedür uygulanırken; miyositlerin kaba stabil yapışması, kanal anahtarının sarılması, iğne perfüzyonunun akış hızının kontrol edilmesi ve iğne ucu ile hedef miyosit arasındaki uygun mesafe gibi dikkat edilmesi gereken bazı temel noktalar bulunmaktadır.

assessment-sarcoplasmic-reticulum-calcium-reserve-intracellular

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Yabani tip ve mutant farelerden alınan bireysel kardiyomiyositler, kasılmalarını ve kalsiyum geçişlerini incelemek için kalpten izole edilebilir. Bu, hücresel disfonksiyonun herhangi bir nedenden dolayı kalp disfonksiyonuna katkısının karakterizasyonuna izin verir.

Fare kardiyomiyositlerde İzolasyon ve Fizyolojik Analizi

Bu makalede, Langendorff-perfüze tavşan kalbinde ayrıntılı protokol ve transmembran potansiyeli (V m) ikili optik haritalama ve ücretsiz içi sarkoplazmik retikulum (SR) için gerekli donanımın Ca 2+ açıklanır. Bu yöntem, sağlam kalbinde, doğrudan gözlem ve V m ölçümü ve SR Ca 2 + dinamikleri sağlar.

Intra-Sarkoplazmik Retikulum Ca Optik Haritalama<sup&gt; 2+</sup&gt; Ve Langendorff-perfüze Tavşan Heart Transmembran Potansiyeli

Şu anda, mevcut kalsiyum indikatörlerinin çoğu, kültürlenmiş düz kas hücrelerinde sarkoplazmik retikulumdan salınan kalsiyumun dolaylı ölçümleri olarak sitoplazmik kalsiyum geçişlerini ölçmek için kullanılmaktadır. Bu protokol, sarkoplazmik retikulum lümeni içindeki kalsiyum sinyallerinin doğrudan ölçülmesine izin veren spesifik bir FRET tabanlı göstergenin kullanımını açıklar.

Kullanımı Kültür düz kas hücrelerinin sarkoplazmik retikulum içinde Kalsiyum Değişiminin Ölçülmesi FRET tabanlı Konfokal Görüntüleme

Bu makale, sıçan kalbinden izole edilen kardiyak miyositlerde kasılma sırasında miyofilament Ca2+ duyarlılığındaki değişiklikleri değerlendiren bir protokolü açıklamaktadır. Kardiyak elektrofizyoloji, sistolik/diyastolik sitozol Ca2+ seviyeleri ve kasılma/gevşeme ile birlikte bu ölçüm, sağlıklı ve hastalıklı kalplerde kardiyak uyarılma-kasılma eşleşmesine aracılık eden mekanizmaların desteklenmesinde zorunludur.

Myofilament Ca Değerlendirilmesi<sup&gt; 2+</sup&gt; Duyarlılık temelinde Kardiyak Uyarma-kasılma Kaplin

Burada, biz bir en iyi duruma getirilmiş, Langendorff tabanlı bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu tek hücreli atriyal cardiomyocytes yalıtım için açıklayınız. El ile düzenleme intraluminal basınç kalp boşlukları, işlevsel olarak sağlam miyositler uyarma-kasılma-kaplin çalışmaları için uygun verim için uygulanır.

Bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal Cardiomyocytes izolasyonu

Murine miyositlerin izolasyonu ve aynı anda gerilim veya kalsiyum izlerinin nasıl elde edilecegini, eşzamanlı dijital hücre geometrisi ölçümleri ile floresan fotometri kullanarak sarcomere kısaltma izleriyle birlikte saglamak için metodolojiyi savuruyoruz.

İzole Murine Ventriküler Miyositlerin Optik Görüntülemesi

Bu protokol, derili kardiyomiyositler kullanılarak kardiyak fonksiyonun ekstraksiyon ve değerlendirilmesi tekniğini adım adım tanımlamayı amaçlamaktadır. Bu metodoloji, farelerden erkeklere kadar farklı kardiyak yerlerden toplanabilen küçük dondurulmuş biyopsiler kullanarak miyofilament fonksiyonunun ölçülmesine ve akut modülasyonuna olanak sağlar.

Derili Kardiyomiyositler Kullanarak Kardiyak Fonksiyonun İn Vitro Değerlendirilmesi

Sunulan vibratome kesilmiş miyokardiyal dilimlerden insan ve hayvan ventriküler kardiyomiyosit izolasyon için bir protokoldür. Kalsiyuma dayanıklı hücrelerin yüksek verimi (200 hücre/mg'a kadar) az miktarda dokudan (&lt;50 mg) elde edilebilir. Protokol soğuk iskemiye maruz kalan miyokardiyum için 36 saate kadar geçerlidir.

Vibratome-Cut Miyokardiyal Dilimlerden İnsan Ventriküler Kardiyomiyositlerin İzolasyon

Fare modelleri, aritmogenezin temel mekanizmalarının incelenmesine izin verir. Bu amaçla, yama-kelepçe ölçümleri yapmak için yüksek kaliteli kardiyomiyositler gereklidir. Burada, kalsiyum geçicilerinin ve L-tipi kalsiyum akımının eşzamanlı ölçümlerine izin veren retrograd enzim bazlı Langendorff perfüzyonu yoluyla murin atriyal ve ventriküler miyositleri izole etmek için bir yöntem tanımlanmıştır.

Ca2+ geçici ve L-tipi kalsiyum akımının eşzamanlı ölçümleri için yüksek kaliteli murin atriyal ve ventriküler miyositlerin izolasyonu

İzole sıçan miyositlerinde kalsiyum (Ca2+) geçici ölçümü ile birlikte sarkomer uzunluğu tespiti yoluyla kontraktil fonksiyonun ölçümünü tanımlayan bir dizi protokol sunulmaktadır. Bu yaklaşımın kalp yetmezliğinin hayvan modellerindeki çalışmalar için uygulanması da dahil edilmiştir.

Kemirgen Miyositlerde Kardiyak Kasılma Disfonksiyonu ve Ca2+ Geçicilerinin Analizi

Bu protokol, kasılan lenf damarlarında sitosolik, serbest kalsiyum [Ca2 +] i ve damar çapını gerçek zamanlı olarak ölçmek ve ardından mutlak Ca2+ konsantrasyonlarının yanı sıra kasılma / ritmiklik parametrelerini hesaplamak için bir yöntemi tanımlar. Bu protokol, çeşitli deneysel koşullarda Ca2+ ve kasılma dinamiklerini incelemek için kullanılabilir.

İzole, Basınçlı Lenf Damarlarında Mutlak, Sitosolik, Serbest Ca2+ ve Karşılık Gelen Kontraktilitenin Gerçek Zamanlı Değerlendirmesi

Öğrenin izole ventriküler kardiyomiyositlerde sarkoplazmik retikulum kalsiyum rezervi ve diyastolik kalsiyum kaldırma fonksiyonlarını değerlendirme yöntemini. Bu teknik diyabet ve kalp yetmezliği gibi patofizyolojik koşullarda hücre içi kalsiyum işleme mekanizmalarını incelemek için kullanılır.

Sarcoplasmic retikulum kalsiyum koruma ve hücre içi diyastolik kalsiyum kaldırma izole Ventriküler Cardiomyocytes olarak değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal

Sarcoplasmic retikulum kalsiyum koruma ve hücre içi diyastolik kalsiyum kaldırma izole Ventriküler Cardiomyocytes olarak değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet