Name: Hücre kültür manken direnç arter (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 54 s
Description: Keşfedin, direnç arterlerindeki miyoendotelyal bağlantıları incelemek için endotelyal ve düz kas hücrelerinin birlikte kültürlenmesi yöntemini. Bu teknik, kardiyovasküler sinyal yollarını izole ederek detaylı analiz imkanı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Ulusal kalp tarafından desteklenmiştir, akciğer ve kan Enstitüsü R01088554, T32HL007284 ve Amerikan Kalp Derneği HGUGM bursu 14PRE20420024 verir. Biz özellikle St. Jude hücresel görüntüleme paylaşılan araştırma Randall Wakefield ve Linda Horner elektron mikroskobu görüntüler için Adam Straub temsilcisi ayirt görüntüleri hakkında yardım almak için ve onun için Pooneh Bagher dahil olmak üzere çekirdek, teşekkür el yazması Protokolü değerli geribildirim.

1. kaplama hücre VCCC <ol><li>kültür büyük 225 cm 2 şişeler EC ve SMC % 70-90 birleşmesi kadar 37 ° C'de steril koşullarda. SMC daha daha fazla EC kullanılan sağlamak; birincil insan EC ve SMC, EC genellikle 3 büyük şişeler SMC 1 büyük şişesi için kullanıyorsanız.
	<ol><li>Alt geçitler Primer hücre kullanın ve geçit 10 kullanmayın. Co kültürlü olmak alan kültür ortamı seçin. Birincil insan koroner arter için EC, EBM-2 EC Bazal medya EGM2 MV büyüme faktörleri ile kullanın. İçin birincil insan koroner SMC, SmBM SMC Bazal medya SmGM-2 büyüme faktörleri ile kullanın. Önce kültürlü hücrelerle, büyüme faktörleri medyaya ekle.</li>
	</ol></li> <li>VCCC gün 1 inşaatı: sprey büyük (150 mm) Petri yemekler ve kapakları dezenfektan ile (örneğin, Cavicide) ve uzak bir kağıt havlu veya hav bırakmayan mendil ile silin. O zaman Petri yemekler % 70 etanol (alkol) ile sprey ve mahallede hava kuru koyun.</li>
	<li>(Tablo reçetesi görmek) filtre ekler tabak steril koşullarda açın ve (filtre alt tarafı) SMC tarafında ekleme fibronektin çözüm ile kat. INSERT sağlanan 6-şey plaka tutarak, damlalıklı fibronektin çözüm yan aracılığıyla filtre yarısı alt (en fazla 1 mL) kaplı emin plaka, altına kesmiş.</li>
	<li>Sonra 30 dk fibronektin çözüm, oda sıcaklığında hücre kültür Hood ile tedavinin ekler plaka dışında al, herhangi bir fazla çözüm ve ters çevir'i temiz Petri kabına yarısı altına yerleştirerek, vakum. Bir kenara koyun. Filtre Ekle membran aşırı çözüm emme olduğunda bozmamaya dikkat edin; Bu yavaşça plaka devirme ve çözüm ekleme kenarına kapalı vakumlama önlenebilir.</li>
	<li>Trypsinize 225 cm 2 şişeye SMC, 3 mL Önceden ısıtılmış 2 X tripsin-EDTA çözüm, ve bir kez hücreleri plaka kaldırdı ile 9 mL SMC medya tripsin (3:1, medya: tripsin) nötralize etmek için ekleyin. Aktarım için konik bir tüp, mix iyi ve damlalıklı 10 µL üzerine cep numarasını belirlemek için bir hemasitometre.
	<ol><li>Sayısı 5 x 5 hücre sayısı kutuları (Yani, 18), bu hücre sayısı 1 mL (180.000) almak için 10.000 çarpmak. O zaman 12 mL (toplam hacmi hücre süspansiyon, 2.16 milyon SMC) tarafından çarpın. Wells için istediğiniz sayıyı plaka için yeterli SMC olduğundan emin olun. 
		Not: Örneğin, 1 de 75.000 SMC olmalı ve böylece 18 wells 1.35 milyon toplam SMC olurdu. 1 mL başına 180.000 hücreleri tarafından gerekli 1.35 milyon Hücre Böl ve kaplama için gerekli olacak hücre süspansiyon 7.5 mL sonuçlanır. Sonra gerekli son hacim hesaplamak (18 kuyu x 750 µL 13.5 mL =). Böylece, hücre süspansiyon 7.5 mL al, ses getirmek Önceden ısıtılmış SMC medya ve mix iyi ile ilâ 13,5 mL.</li>
	</ol></li> <li>Plaka 750 µL yaklaşık her süzgeç, alt tarafında üzerine 75.000 SMC bir medya ve hücre çözüm bile ziyan değil dikkatli içeren hücre süspansiyon. Kapağı üstüne yerleştirin ve dikkatle Petri kabına ekler ile 37 ° C'de kuluçka makinesi içine gecede transfer. 
	Not: Diğer hücre tipleri için optimum hücre yoğunluğu ampirik olarak belirlenmesi gerekir.</li>
	<li>2 günde temiz 6 iyi yemekler taze, Önceden ısıtılmış SMC medya 2 mL ile doldurulması. Tabakları da kuluçka kaldırın. Ekler tek tek dışarı almak ve medya tarafından emme kaldırmak sonra yer SMC medya ile 6-iyi çanak içine.</li>
	<li>Filtre (EC yan) karşı tarafına 1 mL için en az 30 dk. %37 0.5 sığır jelatin çözeltisi ile kat ° C.</li>
	<li>EC 225 cm 2 flask(s) Önceden ısıtılmış 2 3 mL ile trypsinize X tripsin-EDTA (10 x seyreltilmiş steril Dulbecco &#39; s PBS) hücreleri plaka dışına Asansör için balonun nazik dokunarak ile çözüm. 
	Not: Şişeye geri 37 ° C'de kuluçka 1-3 dakika içine yerleştirmek için gerekli olabilir.
	<ol>Bir kez <li>hücreleri plaka kaldırdı tripsin (3:1) nötralize etmek için 9 mL EC medya ekleyin. Konik bir tüp, havuzu birlikte transfer, mix iyi ve damlalıklı 10 µL üzerine cep numarasını belirlemek için bir hemasitometre.
		<ol><li>Sayısı 5 x 5 hücre sayısı kutuları (Yani, 60), bu hücre sayısı 1 mL (600.000) almak için 10.000 çarpmak. O zaman 12 mL (toplam hacmi hücre süspansiyon, 7.2 milyon EC) tarafından çarpın. Wells için istediğiniz sayıyı plaka için yeterli EC olduğundan emin olun. 
			Not: İyi yaklaşık 360.000 EC gereklidir. Örneğin, 18 wells 6.48 milyon EC gerektirir 600.000 EC 1 mL başına gerekli 6.48 milyon Hücre Böl ve kaplama için gerekli olacak hücre süspansiyon 10.8 mL sonuçlanır. Sonra gerekli son hacim hesaplamak (18 kuyu 1 mL = 18 mL x). Böylece, hücre süspansiyon 10.8 mL al, birim kadar getirmek ile 18 mL önceden EC medya ısıttı ve yavaşça resuspend.</li>
		</ol></li></ol></li> <li>1 mL her INSERT filtre üst kısmı üzerine 360.000 EC plaka. 24 h yerine orta gün 4'te 37 ° C'de rahatsız edilmeden kuluçkaya hücreleri izin. Hasat günde 5.</li>
</ol> 2. VCCC gelen kesirler hasat <ol><li>4 ° C Oda izolasyonda gerçekleştirmek ve tüm aletleri buz üzerinde tutmak</li>
	<li>İzole bireysel ekleme sayısı göz önünde bulundurun ve lizis arabellek MEJ (için izole filtreler) etiketli bir 50 mL tüp ekleyin. O zaman etiket iki 10 mm tabağı; bir at, bir SMC için.</li>
	<li>Bağlı olarak nasıl konsantre lysate olması gerekiyor; 15 için ekler lizis arabellek hacmi, 500 µL lizis arabelleği MEJ tüpü ve Petri kabına başına 250 µL tavsiye edilir ayarlama.</li>
	<li>İş ekler bir seferde bir 6-şey plakalı. Hücre kültür hood ve buz soğuk bir odaya ışınlamaya ortamda kapalı emme 
	Not: Aşağıdaki talimatlar 1 yalıtım eklemek için geçerlidir.</li>
	<li>1 x PBS SMC yan ucun üzerine damlalıklı 10 µL.</li>
	<li>Ekleme, bir ucunu hücrelere aşağı kazımak için hücre kaldırıcı kullanmak ve onu arabellekte lizis var SMC Petri kabına için hırsızı hücrelerden transfer</li>
	Hücre lifter çanak lizis arabellekte dokundu bir kez <li>Bu kadar edilmiş tamamen sildi ve kağıt havlu üzerinde kurutulur Ekle filtresi dokunmak izin vermez. Kalan SMC hücre artıkları tamamen kaldırmak için kazıma SMC filtre en az bir iki kez yineleyin.</li>
	<li>Üzerinde ekleme ve damlalıklı 10 µL 1 x PBS, INSERT filtre üst/EC yan içine açın. 2.6 ve 2.7 hücre kazıyıcı ve EC Petri kapları ile yineleyin.</li>
	<li>Kalan hücre ve PBS Bulamaç için lizis arabelleği ile EC Petri kabına pipet ve transfer filtresiyle EC tarafındaki toplanır. Hücreleri her iki tarafında en az EC/SMC kirlenme MEJ kesir terk olarak filtre dışına kazıma çok kapsamlı olması.</li>
	<li>Neşteri plastik eklemek filtresinden kesmek için dikkatli kullanın. Kesme 70-80 %'plastik uzak bunu ve forseps tamamen kapalı plastik eklemek yapı filtresi çekmek için kullanın. Filtre ile lizis tampon MEJ etiketli 50 mL konik tüp içine koyun ve lizis arabellekte oturur ve ıslak kalır olun.</li>
	<li>Tüm ekler iþlenene kadar gruplar halinde 6, yalıtım adımları yineleyin.</li>
	<li>Farklı tedavi grupları ayrı tüpler ve yemekleri tutulmasını sağlamak.</li>
	<li>Girdap 50 mL MEJ konik tüp 15 tam güçte s veya iyi kadar karışık. En fazla protein ve sıvı tüp terk olarak tüp yan duvarlar boyunca sürükleyerek Forseps ile MEJ konik filtreleri kaldırın. Bu noktadan sonra filtreleri atın.</li>
	Bir kez tüm filtreleri MEJ konik tüp sizden çıkarmak <li>yapmak bir tüm sıvı ve proteinler tüp altına çekmek için bir santrifüj hızlı spin (10-15 s max hız ~ 16.000 x g). MEJ tüp ve EC ve SMC Petri yemekler içeriğini ayrı, daha küçük santrifüj tüpler içine aktarmak.</li>
	<li>İsteğe bağlı: MEJ/SMC/EC tüpler içeriğini solüsyon içeren temizleyicide 4 üç 10 s bakliyat için buza ayarlamak veya hafifçe el ile homojenize.</li>
	<li>Maksimum hızda (~ 16.000 x g) 15 dk santrifüj kapasitesi 4'te ° C. damlalıklı süpernatant dışarı ve lysate bicinchoninic tahlil yöntemi kullanarak protein içeriği için tahlil.</li>
</ol> 3. VCCC Tr yüz ayirt için hasat <ol><li>üzerinde gün 5 in VCCC kuluçka kuluçka makinesi ekler kaldırmak. Hücre kültür mahallede çalışma, SMC medya her INSERT filtre ve durulama 1 x PBS ile iki kez daha düşük Wells kapalı emme gerek. Tekrar EC yüzü.</li>
	<li>Ekler bozulmadan ve plaka tutarak, nazik bir shaker bir yürüyüş 4 ° C Oda %4 paraformaldehyde (PFA) 10-20 dk için ekleyin. 1 x PBS Ekle filtresiyle 5 min için her iki yıkama ve iki kere tekrar edin. 
	Dikkat: PFA toksik ve dikkatle ele alınması gerekir.</li>
	<li>Engelleme, birincil ve ikincil antikor incubations plaka, her iki taraf için filtre antikor içinde tutulur sağlanması + çözüm engelleme gerçekleştirmek (9 mL PBS, 25 µL Triton X100, 50 mg sığır serum albümin, 500 µL normal serum)</li>
	<li>Bir slaytta bir neşter ile plastik eklemek dışında geçiren filtre filtre takmak için monte edilmiş kolu ve montaj orta ile mikroskop Slayttaki yer.</li>
</ol> 4. VCCC için enine ayirt hasat <ol><li>üzerinde gün 5 in VCCC kuluçka kuluçka makinesi ekler kaldırmak. Hücre kültür başlık Ekle filtrede her iki medya kapalı emme ve her iki tarafında iki kez 1 x PBS ile filtre durulayın.</li>
	<li>Ekler koruma sağlam ve 6-şey plaka eklemek %4 PFA ve gecede bir yürüyüş 4 ° C odada nazik bir shaker üzerinde kuluçkaya. 
	Dikkat: PFA toksik ve dikkatle ele alınması gerekir.</li>
</ol> 5. VCCC enine ayirt için gömme <ol><li>sonra filtre ekler yaklaşık %4 24 h için düzeltilen PFA, transfer % 70 alkol en az 24 saat, ancak birkaç hafta kadar.</li>
	<li>(Gece) bir otomatik doku işlemcisindeki gerçekleştirmek uzun tarih filtreleri işlemek. Program aşağıdaki gibi kullanın: % 70 alkol 30 dk, % 85 alkol 30 dk, % 95 alkol 30 dk, %100 alkol 30 dk, %100 alkol 45 dk, %100 alkol 45 dk, Ksilen 30 dk, Ksilen 30 dk, Ksilen 45 min, 60 ° C için alkol 30 dk, 30 dk alkol 60 ° C , 60 ° C alkol 45 dk.</li>
	<li>İşlendikten sonra hasat filtreleri Sıvı parafin, filtre kasete tutmak içine gömme istasyona transfer.</li>
	<li>Dikkatle arasındaki sınırda tutmak için forseps kullanarak kaset, filtreyi kaldırın. Filtre, yarıya makasla yarım şeklinde iki yarı dairesel şekillendirme. Her 2 yarıya gömme istasyonu uzun gömme doldurmak için yeterli Sıvı parafin ile kalıp sadece soğuk plaka parçasındaki yatıyordu.</li>
	Bir kez <li>Sıvı parafin ile dolu çok kısa bir süre soğuk plaka gömme kalıp touch, sonra her biri için filtre (yan kısmak) kalıp katıştırma içine embed; bu kesit sırasında bir kenarına doğru filtre ortasından doğraması ki sağlar .</li>
	<li>Gömme sırasında forseps yerine parafin onları tek başına yeterince soğuk olana düşmesini içine yarım önlemek için filtre tutmak için kullanın. Tamamen katılaşmış kadar soğuk bir tabak için gömme kalıp taşımak. 
	Not: blok buz tepsiler üzerinde soğutma yardımcı olur buruşuk bölümleri önlemek için.</li>
</ol> 6. Kesit ve enine ayirt VCCC boyama <ol><li>parafin blok için kesit ve montaj slayt: 5 µm bölümleri kesmek, Bölüm 42 ° C su banyosu yerleştirin ve pozitif yüklü kullanarak bölümleri Seç slaytlar. Sonra slaytlar gecede kurumaya 42 ° C fırında tutun.</li>
	<li>Rehidrasyon adımları başlamadan önce slaytlar parafin eritmek için 60 ° c fırında ve slayt VCCC bölümlerine uygun yardım. Kısaca serin, o zaman slaytlar arasında Ksilen, % 100 iki değişiklik rehydrate alkol, % 95 alkol, bir değişim % 70 alkol ve iki değişiklikler distile su.</li>
	<li>Mikrodalga veya bölümler slaytın dışına düşebilir gibi Isıtma dahil antijen alma yöntemleri kaçının.</li>
	<li>Gerçekleştir, oda sıcaklığında, sonra gece kuluçka 4 ° C'de birincil antikor ile 1 h için standart engelleme adımları ve 1 h için ikincil antikor oda sıcaklığında yıkayarak takip ettim. Montaj montaj medya ve coverslip.</li>
</ol>

<ol><li>Isakson, B. E., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterocellular+contact+at+the+myoendothelial+junction+influences+gap+junction+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Heterocellular contact at the myoendothelial junction influences gap junction organization.</a> Circ Res. 97 (1), 44-51 (2005).</li>
<li>Little, T. L., Xia, J., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dye+tracers+define+differential+endothelial+and+smooth+muscle+coupling+patterns+within+the+arteriolar+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Dye tracers define differential endothelial and smooth muscle coupling patterns within the arteriolar wall.</a> Circ Res. 76 (3), 498-504 (1995).</li>
<li>Heberlein, K. R., Straub, A. C., Isakson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myoendothelial+junction%3A+breaking+through+the+matrix%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">The myoendothelial junction: breaking through the matrix?</a> Microcirculation. 16 (4), 307-322 (2009).</li>
<li>Straub, A. C., Zeigler, A. C., Isakson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myoendothelial+junction%3A+connections+that+deliver+the+message%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">The myoendothelial junction: connections that deliver the message.</a> Physiology (Bethesda). 29 (4), 242-249 (2014).</li>
<li>Isakson, B. E., Ramos, S. I., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ca2%2B+and+inositol+1%2C4%2C5-trisphosphate-mediated+signaling+across+the+myoendothelial+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Ca2+ and inositol 1,4,5-trisphosphate-mediated signaling across the myoendothelial junction.</a> Circ Res. 100 (2), 246-254 (2007).</li>
<li>Dora, K. A., Doyle, M. P., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevation+of+intracellular+calcium+in+smooth+muscle+causes+endothelial+cell+generation+of+NO+in+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Elevation of intracellular calcium in smooth muscle causes endothelial cell generation of NO in arterioles.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (12), 6529-6534 (1997).</li>
<li>Sonkusare, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elementary+Ca2%2B+signals+through+endothelial+TRPV4+channels+regulate+vascular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Elementary Ca2+ signals through endothelial TRPV4 channels regulate vascular function.</a> Science. 336 (6081), 597-601 (2012).</li>
<li>Ledoux, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+architecture+of+inositol+1%2C4%2C5-trisphosphate+signaling+in+restricted+spaces+of+myoendothelial+projections%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Functional architecture of inositol 1,4,5-trisphosphate signaling in restricted spaces of myoendothelial projections.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (28), 9627-9632 (2008).</li>
<li>Boerman, E. M., Everhart, J. E., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+age+decreases+local+calcium+signaling+in+endothelium+of+mouse+mesenteric+arteries+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Advanced age decreases local calcium signaling in endothelium of mouse mesenteric arteries in vivo.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310 (9), H1091-H1096 (2016).</li>
<li>Toussaint, F., Charbel, C., Blanchette, A., Ledoux, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CaMKII+regulates+intracellular+Ca%282%29%28%2B%29+dynamics+in+native+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Calcium%22%5BJournal%5D)">CaMKII regulates intracellular Ca(2)(+) dynamics in native endothelial cells.</a> Cell Calcium. 58 (3), 275-285 (2015).</li>
<li>Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Cell+Vascular+Smooth+Muscle+Cell+Co-Culture+Assay+For+High+Throughput+Screening+Assays+For+Discovery+of+Anti-Angiogenesis+Agents+and+Other+Therapeutic+Molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+High+Throughput+Screen%22%5BJournal%5D)">Endothelial Cell Vascular Smooth Muscle Cell Co-Culture Assay For High Throughput Screening Assays For Discovery of Anti-Angiogenesis Agents and Other Therapeutic Molecules.</a> Int J High Throughput Screen. 2010 (1), 171-181 (2010).</li>
<li>Biwer, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+functionally+distinct+pools+of+eNOS+in+endothelium+are+facilitated+by+myoendothelial+junction+lipid+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Two functionally distinct pools of eNOS in endothelium are facilitated by myoendothelial junction lipid composition.</a> Biochim Biophys Acta. 1861 (7), 671-679 (2016).</li>
<li>Straub, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+expression+of+haemoglobin+alpha+regulates+nitric+oxide+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell expression of haemoglobin alpha regulates nitric oxide signalling.</a> Nature. 491 (7424), 473-477 (2012).</li>
<li>Isakson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+expression+of+an+Ins%281%2C4%2C5%29P3+receptor+at+the+myoendothelial+junction+selectively+regulates+heterocellular+Ca2%2B+communication%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Localized expression of an Ins(1,4,5)P3 receptor at the myoendothelial junction selectively regulates heterocellular Ca2+ communication.</a> J Cell Sci. 121 (Pt 21), 3664-3673 (2008).</li>
<li>Axel, D. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+cell-rich+and+lipid-rich+plaques+in+a+transfilter+coculture+system+with+human+vascular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">Induction of cell-rich and lipid-rich plaques in a transfilter coculture system with human vascular cells.</a> J Vasc Res. 33 (4), 327-339 (1996).</li>
<li>Hastings, N. E., Simmers, M. B., McDonald, O. G., Wamhoff, B. R., Blackman, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis-prone+hemodynamics+differentially+regulates+endothelial+and+smooth+muscle+cell+phenotypes+and+promotes+pro-inflammatory+priming%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis-prone hemodynamics differentially regulates endothelial and smooth muscle cell phenotypes and promotes pro-inflammatory priming.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 293 (6), C1824-C1833 (2007).</li>
<li>Herzog, D. P., Dohle, E., Bischoff, I., Kirkpatrick, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+communication+in+a+coculture+system+consisting+of+outgrowth+endothelial+cells+and+primary+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Cell communication in a coculture system consisting of outgrowth endothelial cells and primary osteoblasts.</a> Biomed Res Int. , 320123(2014).</li>
<li>Jacot, J. G., Wong, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+injury+induces+vascular+smooth+muscle+cell+proliferation+in+highly+localized+regions+of+a+direct+contact+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Endothelial injury induces vascular smooth muscle cell proliferation in highly localized regions of a direct contact co-culture system.</a> Cell Biochem Biophys. 52 (1), 37-46 (2008).</li>
<li>Scott-Drechsel, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+flow+co-culture+system+for+studying+mechanobiology+effects+of+pulse+flow+waves%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">A new flow co-culture system for studying mechanobiology effects of pulse flow waves.</a> Cytotechnology. 64 (6), 649-666 (2012).</li>
<li>van Buul-Wortelboer, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+the+vascular+wall+in+vitro.+A+novel+model+to+study+interactions+between+endothelial+and+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of the vascular wall in vitro. A novel model to study interactions between endothelial and smooth muscle cells.</a> Exp Cell Res. 162 (1), 151-158 (1986).</li>
<li>Wilhelm, I., Fazakas, C., Krizbai, I. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21499332">In vitro models of the blood-brain barrier.</a> Acta Neurobiol Exp (Wars). 71 (1), 113-128 (2011).</li>
<li>Heberlein, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mRNA+binding+protein+complex+promotes+localized+plasminogen+activator+inhibitor-1+accumulation+at+the+myoendothelial+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">A novel mRNA binding protein complex promotes localized plasminogen activator inhibitor-1 accumulation at the myoendothelial junction.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (5), 1271-1279 (2012).</li>
<li>Straub, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartmentalized+connexin+43+s-nitrosylation%2Fdenitrosylation+regulates+heterocellular+communication+in+the+vessel+wall%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Compartmentalized connexin 43 s-nitrosylation/denitrosylation regulates heterocellular communication in the vessel wall.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (2), 399-407 (2011).</li>
<li>Cucina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+increases+the+migration+and+proliferation+of+smooth+muscle+cells+through+the+mediation+of+growth+factors+released+by+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor increases the migration and proliferation of smooth muscle cells through the mediation of growth factors released by endothelial cells.</a> J Surg Res. 109 (1), 16-23 (2003).</li>
<li>Heberlein, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasminogen+activator+inhibitor-1+regulates+myoendothelial+junction+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Plasminogen activator inhibitor-1 regulates myoendothelial junction formation.</a> Circ Res. 106 (6), 1092-1102 (2010).</li>
<li>Isakson, B. E., Best, A. K., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+of+protein+on+actin+bridges+between+endothelium+and+smooth+muscle+in+arterioles+demonstrates+heterogeneous+connexin+expression+and+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Incidence of protein on actin bridges between endothelium and smooth muscle in arterioles demonstrates heterogeneous connexin expression and phosphorylation.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 294 (6), H2898-H2904 (2008).</li>
<li>Biwer, L. A., Isakson, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoplasmic+reticulum-mediated+signalling+in+cellular+microdomains%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">Endoplasmic reticulum-mediated signalling in cellular microdomains.</a> Acta Physiol (Oxf). 219 (1), 162-175 (2017).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

VCCC MEJs vitrorecapitulating açısından avantajları vardır, ama eğer VCCC-ebilmek var olmak kullanmak için belirli uygulama belirlerken tartışma noktaları vardır. Örneğin, farklı hücre türleri bu model ile kullanılmak üzere olduğunda optimize gerekir. Biz birincil insan hücreleri kullandık ama sığır aortas24veya wildtype ya da nakavt fareler hücreleri izole ve VCCC1,5,14' te kullanmak mümkündür.<...

Küçük çaplı direnç arterlerde endotel (EC) ve düz kas hücreleri (SMC) bir ince iç elastik lamina (IEL) ayırır. Hücreler bu elastik matris deliklerden proje ve doğrudan sitoplazmik bağlantı yolu ile gap junction kanal1,2. Bu eşsiz yapının myoendothelial Kavşağı (MEJ) olarak adlandırılır. MEJ küçük (yaklaşık 0.5 µm vasküler yatağın bağlı olarak 0.5 µm x), hücresel projeksiyon ağırlıklı olarak endotel hücreleri oluşur fakat düz kas de3,4kaynaklı. Müfettişler bir dizi seçmeli olarak endotel ve düz kas5 arasında çift yönlü sinyal kolaylaştırmak için özellikle önemli bir konuma işleme MEJ oluşan ağlar sinyal büyük karmaşıklığı göstermiştir ,6,7,8,9,10.
Ancak, sinyal yolları MEJ, mekanik bir diseksiyon sağlam bir arter zordur. MEJ hücresel bir projeksiyon olduğundan, şu anda bir vivo içinde MEJ damar duvarından izole etmek mümkün değil. Bu nedenle, VCCC model1 geliştirilmiştir. Önemlisi, VCCC fizyolojik endotel Morfoloji11 ve apikal arasında sinyal polarizasyon çoğaltır ve hücre12MEJ bölümleri. Endotel hücre, MEJ için polarize olan alfa hemoglobin keşif kolaylaştırdı bu benzersiz model oldu. Alfa hemoglobin13ifade değil geleneksel kültürlü endotel hücreleri aksine bu. Araştırmacılar mikrovasküler endotel baktılar, özellikle niyet küçük çaplı direnç arterlerde oluşan sinyal yolları incelemek için ise VCCC, kültürlü endotel hücreleri kullanmak daha uygun olabilir.
Sağlam bir plastik eklemek küçük çaplı gözenekleri (çapı 0.4 µm) olan bir filtre içeren ortak kültür iki farklı hücre tipleri için kullanarak hücrelerin katmanlar arasında geçiş engeller. 10 µm mesafe içinde vivoönemli ölçüde daha uzun, ama hala MEJs protein Yerelleştirme ve ikinci haberci1 sinyal de dahil olmak üzere, in vivo özelliklerinin çoğunu çoğaltır hücreleri arasındaki sonuçlar , 14. Ayrıca, hücre türüne özgü bir agonist veya antagonisti belirli hücresel yuvası eklenmesi ile sinyal hedefleme için VCCC sağlar. Örneğin, EC kalsiyum şelasyon yapın için BAPTA-AM ile yükleme ve SMC phenylephrine14ile uyarıcı. Aksine diğer açıklamalar ortak kültür modelleri15,16,17,18,19,20,21, bu sağlar mRNA ve protein, filtre gözenekleri içinde farklı MEJ kesir dahil olmak üzere farklı kesirler yalıtma hakkında talimatlar. MRNA yerelleştirme veya transkripsiyon22, protein fosforilasyon12,23ve protein etkinlik12değişiklikler belirli incelenmesi için bu teknik için VCCC eklenmesini sağlar. İki hücre tipleri farklı biçimler11,18,24yılında kültür mümkündür ancak bu makalede EC filtre ve SMC üstünde tepe-in alt kaplama anlatacağız.

<table><tbody><tr><td>24 mm çap, 0,4 & m Transwell Polyester membran filtre eki</td><td>Corning</td><td>3450</td><td>Bu bir adet 6 oyuklu 225</td></tr><tr><td>cm'lik şişe</td><td>Corning</td><td>431082</td><td></td></tr><tr><td>6 oyuklu plakalar (filtre ekleri olmadan)</td><td>Corning</td><td>3506</td><td></td></tr><tr><td>Birincil insan koroner arter endotel hücreleri</td><td>Lonza</td><td>CC-2585</td><td></td></tr><tr><td>Birincil insan koroner arter düz kas hücreleri</td><td>Lonza</td><td>CC-2583</td><td></td></tr><tr><td>EBM-2 EC Bazal medya</td><td>Lonza</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>EC büyüme faktörleri (EGM2 MV Tek quots)</td><td>Lonza</td><td>CC-4147</td><td>Kullanmadan önce bazal ortama ekleyin</td></tr><tr><td>SmBM SMC bazal medya</td><td>Lonza</td><td>CC-3181</td><td></td></tr><tr><td>SMC büyüme faktörleri (SmGM-2 SingleQuot)</td><td>Lonza</td><td>CC-4149</td><td>Kullanmadan önce bazal ortama ekleyin</td></tr><tr><td>%0,5 Tripsin-EDTA 10X</td><td>Gibco</td><td>15400-054</td><td>Steril dPBS</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>VWR</td><td>15170-208</td><td></td></tr><tr><td>SMC Kaplama (150mm) için büyük petri kapları</td> ile 2X'e seyreltin <td>Corning</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>Sığır jelatini</td><td>Sigma</td><td>G-9382</td><td></td></tr><tr><td>İnsan fibronektini</td><td>Corning</td><td>356008</td><td>5 & mikro; g / ml fibronektin ve -20'de saklayın</td></tr><tr><td>10x Hanks'in Tamponlu tuz çözeltisi (HBSS)</td><td>Gibco</td><td>14065-056</td><td>Steril su ile 1x'e seyreltin</td></tr><tr><td>10x Dulbecco'nun Fosfat tamponlu salin (dPBS)</td><td>Gibco</td><td>14200-075</td><td>Steril su ile 1x'e seyreltin</td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Kavisli Neşter (30 mm kesme kenarı)</td><td>saplı Amazon</td><td>MDS15210</td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td>Fisher</td><td>17-467-201</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kaldırıcı</td><td>Corning</td><td>3008</td><td></td></tr><tr><td>Hücre sıyırıcı</td><td>BD Falcon</td><td>353085</td><td></td></tr><tr><td>50 mL konik tüp</td><td>Corning</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>10 mm petri kapları</td><td>Falcon</td><td>35-1008</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>RNA lizis reaktifi</td><td>Qiagen</td><td>79306</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma</td><td>158127</td><td>dPBS% 70 etanol ile% 4 çözelti yapın</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>04-355-305</td><td></td></tr><tr><td>Havsit dezenfektan</td><td>Fisher</td><td>131000</td><td></td></tr><tr><td>RIPA protein lizis tamponu</td><td>Sigma</td><td>R0278</td><td></td></tr><tr><td>Sonik ayırıcı</td><td>Fisher</td><td>Model 50</td><td></td></tr><tr><td>EC / SMC hasadı için 1x PBS ve immünositokimya</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>steril olmasına gerek yoktur</td></tr><tr><td><güçlü>İsim</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Gömme/Bölümleme/Boyama</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafin</td><td>Fisher</td><td>P31-500</td><td></td></tr><tr><td>Otomatik doku işleyici</td><td>Excelsior</td><td>ES</td><td></td></tr><tr><td>Gömme istasyonu + soğuk plaka</td><td>Leica</td><td>HistoCore Arcadia</td><td></td></tr><tr><td>Doku Tek Accu-Edge Mikrotom bıçağı</td><td>VWR</td><td>25608-961 veya 25608-964</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>Thermo Fisher</td><td>22-230-900</td><td></td></tr><tr><td>Lameller</td><td>Thermo Fisher</td><td>12-548-5E</td><td></td></tr><tr><td>Prolong Gold montaj ortamı</td><td>Thermo Fisher</td><td>P36931</td><td></td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Diğer Çözümler</td><td></td><td></td><td>**Solüsyonu canlı hücrelerde kullanıyorsanız tüm adımları steril koşullarda gerçekleştirin</td></tr><tr><td>Steril dPBS</td><td></td><td></td><td>Sterilize etmek için otoklav suyu. Steril su kullanarak DPBS (450 mL steril su: 50 mL 10X DPBS) yapın, karıştırın ve filtreleyin sterilize edin (0.2 & mikro; m filtre). Nihai konsantrasyon: Sterilize etmek için 1X</td></tr><tr><td>steril HBSS</td><td></td><td></td><td>Otoklav suyu. Steril su kullanarak HBSS (450 mL steril su: 50 mL 10X HBSS) yapın, karıştırın ve filtreleyin sterilize edin (0.2 & mikro; m filtre). Nihai konsantrasyon: 1X</td></tr><tr><td>Fibronektin stok çözeltisi</td><td></td><td></td><td>1 mL alikot stoğu yapmak için fibronektin için 50 mL steril su kullanın, ardından gerekene kadar dondurun Nihai konsantrasyon: 100 & g/mL</td></tr><tr><td>Fibronektin, VCCC'nin</td><td></td><td></td> SMC tarafını kaplamak<td>, bir alikotu çözdürmek ve 1 mL fibronektin (100 & mikro; g / mL) 5 & mikro'luk bir nihai konsantrasyona ulaşmak için 1X HBSS'nin 19 mL'sine; g / mL. Nihai konsantrasyon: 5 & mikro; g / mL</td></tr><tr><td>2x Tripsin EDTA çözeltisi</td><td></td><td></td><td>10X 0.5% Tripsin-EDTA'yı 1X dPBS ile 2X'e seyreltin (40 mL DPBS: 10 mL 10X Tripsin) . Nihai konsantrasyon: 2X</td></tr><tr><td>Engelleme / antikor çözeltisi</td><td></td><td></td> <td>(9 mL 1X PBS, 25 mL Triton X100, 50 mg sığır serum albümini, 500 mL normal serum)</td></tr> <tr><td>EC VCCC'yi</td><td></td><td></td> <td>kaplamak için sığır jelatini0.5 g sığır jelatinini 100 mL damıtılmış suya karıştırın. İlk kullanımdan önce otoklavlayın ve oda sıcaklığında saklayın. Steril koşullarda saklayın. Nihai konsantrasyon: %0,50</td></tr> <tr>Hücrelerin <td></td><td></td><td>toplanması için 1x PBS'nin</td><td>steril olması gerekmez</td></tr></tbody></table>

hücre kültür manken direnç arter

A Cell Culture Model of Resistance Arteries 

Myoendothelial kavşak (MEJ), küçük çaplı direnç arterler içinde benzersiz bir sinyal microdomain yerelleştirme spesifik proteinlerin ve vasküler sesi ve kan basıncı kontrol edebilirsiniz sinyal süreçlerin sergiler. Bu da bir projeksiyon endotel veya düz kas hücresi ve küçük nedeniyle (ortalama olarak, bir alan ~ 1 µm2), MEJ boyutu gibi yalıtım modunda çalışmaya zordur. Ancak, vitro MEJ oluşumu, endotel hücre polarizasyon ve proteinler ve süreçleri direnç damar duvarındaki sinyalizasyon disseksiyonu sağlar vasküler hücre ortak kültürü (VCCC) denilen bir hücre kültür modeli geliştirdik arterler. VCCC uygulamalar vardır ve farklı hücre türleri uygun şekilde uyarlanabilir. Model içinde vitro MEJs oluşabilir 0.4 µm gözenekli filtre karşı taraflarında yetiştirilen iki hücre tipleri oluşur. Burada VCCC yolu ile endotel, izolasyon ve kaplama hücre oluşturmak nasıl açıklamak MEJ ve daha sonra protein yalıtım veya etkinlik için kullanılabilir düz kas kesirler deneyleri. Katıştırılmış ve kesitli immünfloresan analiz için filtre sağlam hücre katmanları ile düzeltilebilir. Önemlisi, birçok buluşlar bu modelden sağlam direnç arterler, fizyolojik önemini vurgulamış kullanarak teyit edilmiştir.

VCCC için kullanılan filtre ekler var küçük, 0.4 µm delik. Şekil 1A, VCCC filtre ilave bir tr yüz görünümünü MEJ vitrooluşabilir gözenekler gösterir. Şematik filtre alt tarafında bir gün önce endotel hücreleri karşı tarafta (şekil 1B) kaplama kaplama düz kas hücreleri gösterir. Sonra hücreleri kaplama, EC, MEJ ve SMC kesirler izole üç gün sonra olabilir. Bunun bir örneği şekil 2Aner...

Hücre kültür manken direnç arter yollar endotel, düz kas, veya endotel ve düz kas (myoendothelial junction) arasında sinyal diseksiyon için izin açıklanmıştır. Bu hücre kültür model kullanarak agonistler veya protein yalıtım, elektron mikroskopi veya ayirt seçici uygulama yararlı olabilir.

Hücre kültür manken direnç arter

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Bu tekniğin genel amacı, küçük çaplı direnç arterlerinde meydana gelen miyoendotelyal bağlantıları oluşturmak için endotel ve düz kas hücrelerini in-vitro ortamda birlikte kültüre etmektir. Bu yöntem; arter duvarındaki protein lokalizasyonu ve sinyal yolaklarının aktivasyonu gibi kardiyovasküler alandaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, gerçek bir arter kullanarak yapılması imkansız olan, miyoendotelyal bağlantı fraksiyonlarının endotelden ve düz kastan spesifik olarak izole edilebilmesidir.Parafin gömme işleminin görselle gösterilmesi özellikle kritiktir, çünkü gömme basamaklarını süreci görmeden öğrenmek zor olabilir. 150 milimetrelik petri kaplarını ve kapaklarını dezenfektanla püskürterek ve ardından bir kağıt havlu veya tüy bırakmayan mendillerle silerek vasküler hücre ko-kültürü veya VCCC kurulumuna başlayın. Ardından, petri kaplarına %70 etanol püskürtün ve havada kurumaları için çeker ocak içine yerleştirin.Filtre insert plakasını steril koşullar altında açın. Plakanın yan yarıklarından tabanına bir mililitreye kadar fiberactin çözeltisi pipetleyerek filtrelerin alt kısmını kaplayın. Filtrenin alt yarısının kaplandığından emin ol

a-cell-culture-model-of-resistance-arteries

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Vasküler hücre fonksiyonu, hücre içi habercilerin aktivitesine bağlıdır.  Burada tarif edilen, izole bir aortun bireysel endotel ve düz kas hücrelerinde fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak hücre içi kalsiyum ve nitrik oksit seviyelerinin ölçülmesine izin veren bir ex vivo iki foton görüntüleme yöntemidir.

Hücre içi Ca İki foton Görüntüleme<sup&gt; 2+</sup&gt; Bir İzole Sıçan Aort Kullanım ve Endotel Nitrik Oksit Üretimi ve düz kas hücreleri

Vasküler endotel hücreleri birçok önemli kardiyovasküler hastalıkta önemli rol oynamaktadır. Bu makale, herhangi bir özel ekipman kullanmadan fare aortundan endotel hücrelerini izole etmek ve genişletmek için basit bir yöntemi açıklamaktadır. Protokolümüz, endotel hücre fizyopatolojisindeki mekanizmaları tanımlamak için etkili bir yol sağlar.

İzolasyon ve Fare aort endotel hücreleri İlköğretim Kültür

Bu protokol, hastalık patolojilerinde hücre yanıtını belirlenmesinde yardımcı olmak için, in vitro olarak fizyolojik veya patolojik kan akışını çoğaltır. Kan pompası alt bölmeyi sönümleme bir basınç katılmasıyla, damar boyunca kan akımı değinmeyecek edilebilir ve vasküler endotelyum, ya da taklit eden ko-kültür, bir tek tabaka üzerine koydu.

Vasküler Hücre Remodeling Soruşturma Fizyolojik in vitro Modeli ve Uygulaması ile Patolojik Kan Akış

Vasküler kalsifikasyon, insan kardiyovasküler hastalığının önemli bir belirleyicisi ve katkıda bulunan bir faktördür. Bu protokol, kültürlenmiş primer vasküler düz kas hücrelerinin kalsifikasyonunu indüklemek ve yakın kızılötesi floresan görüntüleme kullanarak hayvan aortlarında kalsifikasyon ve makrofaj yükünü ölçmek için yöntemleri açıklar.

Aort Kalsifikasyon ve Enflamasyon Vasküler düz kas hücrelerinin ve Görüntüleme Kalsifikasyon

Kardiyovasküler prosedürleri takiben yapılan restenoz (baypas cerrahisi, anjiyoplasti veya stentleme) bu prosedürlerin dayanıklılığını azaltmakta önemli bir sorundur. İdeal bir terapi düz kas hücresi (VSMC) proliferasyonunu inhibe ederken endotelin rejenerasyonunu teşvik eder. VSMC çoğalması ve endotel fonksiyonunun in vivo olarak eşzamanlı olarak değerlendirilmesi için bir model tanımlıyoruz.

Murin Aort Kırma Yaralanması: Verimli<emIn vivo</em&gt; Düz Kas Hücresi çoğalması ve Endotel Fonksiyon Modeli

Burada, prelabelled Mezenkimal hücrelerin sıçan aort kaynaklı endotel ağları ile birlikte kültürlü nerede aort yüzük testin yeni bir uygulama mevcut. Bu roman yöntemi görselleştirme Mezenkimal Stromal hücre (MSCs) posta ve endotel ağları ile entegrasyon, miktar ağ özellikleri ve MSC immunophenotypes ve gen ifade değerlendirme sağlar.

Aort yüzük ortak kültür tahlil: Mezenkimal Stromal hücre Vitro anjiogenik potansiyelini değerlendirmek için uygun bir araç

Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

Koroner anjiyogenezin in vitro modelleri koroner anjiyogenezin hücresel ve moleküler mekanizmalarının keşfinde kullanılabilir. Sinüs venöz ve endkard dokularının in vitro eksplant kültürleri VEGF-A'ya yanıt olarak sağlam bir büyüme gösterir ve in vivo olarak coup-TFII ekspresyonunun benzer bir modelini gösterir.

Koroner Anjiyogenezin In Vitro Modeli

Burada, fizyolojik akış altında imal edilmiş, gerçek boyutlu, üç boyutlu insan arter modellerinde ilaç taşıyıcılarının hedeflenen birikimini incelemek ve endotel hücreleriyle haritalamak için yeni bir protokol sunuyoruz. Sunulan yöntem, damar sistemi içindeki ilaç taşıyıcılarını hedeflemek için yeni bir platform görevi görebilebilir.

Akış Altında Damar İlacı Hedeflemesi Üzerinde Çalışmak için In Vitro 3D Hücre Kültürlü Arteriyel Modeller

Burada, insan aort duvarındaki düz kas hücrelerinin in vivo biyomekanik suşunu çoğaltmak için bir insan aort düz kas hücresi organı-on-a-chip modeli geliştirdik.

Aort Duvarındaki Biyomekanik Suşu Özetlemek İçin İnsan Aort Düz Kas Hücresi Organ-On-A-Chip Modelinin Yapımı

Burada, moleküler veya histopatolojik analiz için kesit almadan önce doku stabilize edici jeli damar lümenine infüze ederek insan arteriyel mimarisini korumak için bir protokol sunuyoruz.

In Vitro İntraluminal Jel İnfüzyonu: İnsan Dirençli Arterlerin Mikroskobik Analizi İçin İleri Bir Yaklaşım

Keşfedin, direnç arterlerindeki miyoendotelyal bağlantıları incelemek için endotelyal ve düz kas hücrelerinin birlikte kültürlenmesi yöntemini. Bu teknik, kardiyovasküler sinyal yollarını izole ederek detaylı analiz imkanı sunar.

Hücre kültür manken direnç arter

Daha fazla video keşfet