Name: İnsan Retina ve RPE koroid diseksiyon proteomik analizi için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 54 s
Description: Öğrenin, fovea, makula ve periferik retina bölgelerinden doku biyopsisi alma yöntemini. Bu teknik, insan gözünden retina ve RPE-koroid dokularını ayırarak proteomik analiz için örnek hazırlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

VBM olduğunu NIH hibe [K08EY020530, R01EY024665, R01EY025225, R01EY024698 ve R21AG050437], Doris Duke hayırsever Vakfı Hibe desteklenen #: 2013103 ve araştırma için önlemek körlüğü (RPB), New York, NY. MT ve GV NIH tarafından desteklenmektedir T32GM007337 verin.

Bu çalışmada Iowa Üniversitesi tarafından onaylanmıştır &#39; s Kurumsal değerlendirme Komitesi ve Helsinki Deklarasyonu belirtilen ilkelerinin'in.
 1. Foveal ve Maküler biyopsi yumruk <ol><li>açık ve kelebek insan göz, öyle ki bir önceki yayında açıklandığı gibi doku, 4 ayrı flep oluşur. 5</li> <li>bir kabında yerleştirilen bir pirzola insan gözü ile başlayan, bir 4-mm punch biyopsi araç fovea Merkezi aşağı bastırın ve bir kesi fovea yapılana kadar yavaşça rulo.</li>
	<li>Sonra ortalama ve bir 8 mm cilt punch biyopsi aracı makula arcades içinde aşağı tuşuna basarak, hafif basınç uygulayarak ve haddeleme tarafından makula çevresinde kesik oluşturur. Bu bir ikinci, dış halka ilk çevreleyen doku üretecek.</li>
</ol> 2. Periferik retina biyopsi yumruk <ol><li>kullanmak 4-mm cilt punch biyopsi aracı hemen dışında arcade periferik retina yumruk bir dizi yapmak için. Burada, her çeyrekte flap için iki yumruk olun. 
	Not: tüm yumruk yapılır, göz fovea ve makula, temsil eden iki konsantrik yumruklar şehir merkezinde olacak ve iki yumruklar her flep toplam tabanında sonra 8 periferik retina yumruk atıyor.</li>
</ol> 3. Fovea ve makula biyopsi koleksiyonu <ol><li>doku şimdi koleksiyonu için hazır olduğu gibi tüm doku biyopsisi ayrı microfuge tüpler toplamak ve sıvı nitrojen kullanarak aşağı akım işlem için dondurma. -80 ° C'de tüm örneklerini kullanımı kadar mağaza.</li>
	<li>Bir eğri 0,12 Colibri forseps retina fovea yarı saydam doku kenarlarını kapmak için kullanın. Toplamak için yüceltmek ve foveal doku temel RPE koroid ayırın.</li>
	<li>Benzer şekilde, yarı saydam makula dokusunun dış halka kavramak için 0,12 Colibri forseps kullanın. Doku hala temel veya bitişik doku iliştirdiyseniz, sadece retina bileşen yakalama ve uzak yumruk dahil herhangi bir optik sinir dokusu dissekan kenarına dikkatle kırpmaya Westcott makas kullanın.</li>
</ol> 4. Periferik Retina koleksiyonu <ol><li>yavaşça periferik retina doku diskleri temel RPE koroid ve bireysel microfuge tüpler içinde yer ayırmak için eğri 0,12 Colibri forseps kullanın.</li>
	<li>Durumunda kalan vitreus jeli, forseps kullanmak Asansör ve jel uzakta ayrı koleksiyonu retina dokusunun önce mümkün olduğu kadar. Retina kaldırıldıktan sonra Pigmentli RPE koroid aşağıda kalır.</li>
</ol> 5. Foveal ve makula RPE koroid koleksiyonu <ol><li>kaldırılan fovea alan altında yatıyor karanlık RPE koroid doku kenarlarını kavramak için kullanım 0,12 Colibri forseps. Bu doku sklera ve toplamak dikkatle ayrı.</li>
	<li>Aynı forseps kullanarak kaldırıldı makula alanının altında yatan karanlık RPE koroid doku dış halkasındaki kenarlarını kavramak. Dikkatle bu doku sklera halka etrafında farklı noktalarda kenarları açgözlü ve hafifçe çekerek ayırın. Sonunda, RPE koroid doku halka yerinden ve toplanan olabilir. 
	Not: İkincil forseps ters el kaldırma sırasında RPE koroid doku düzenleme yararlı olabilir. Retina doku gibi Wescott makas tam yumruk aracını kullanarak basamağında değil herhangi bir doku giderilmesinde yardımcı olmak için kullanılabilir.</li>
</ol> 6. Periferik Retina RPE koroid koleksiyonu <ol><li>8 periferik yumruk alanlarda RPE koroid peel away için 0,12 Colibri forseps kullanın.</li>
	<li>Daha önce RPE koroid doku microfuge tüplerde yerleştirin ve sıvı nitrojen kullanarak aşağı akım işlem için dondurma. Tüm örneklerini-80 ° C'de kullanımı kadar devam.</li>
</ol> 7. Makas diseksiyon Not: punch biyopsi blade donuk veya punch biyopsi aracı yeterince sert itti değil, olabilir bir çocuğun dokuyu çevreleyen.
<ol><li>Bu gibi durumlarda, doku uzağa çekmek mümkün olduğu kadar ve Westcott makas ve ayırmak için kullanın.</li></ol>

<ol><li>Chirco, K. R., Sohn, E. H., Stone, E. M., Tucker, B. A., Mullins, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+molecular+changes+in+the+aging+choroid%3A+implications+for+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Structural and molecular changes in the aging choroid: implications for age-related macular degeneration.</a> Eye (Lond). , (2016).</li>
<li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+proteome+of+human+iris%2C+ciliary+body%2C+retinal+pigment+epithelium%2C+and+choroid%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Defining the proteome of human iris, ciliary body, retinal pigment epithelium, and choroid.</a> Proteomics. 16 (7), 1146-1153 (2016).</li>
<li>Funke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glaucoma+related+Proteomic+Alterations+in+Human+Retina+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Glaucoma related Proteomic Alterations in Human Retina Samples.</a> Sci Rep. 6, 29759(2016).</li>
<li>Decanini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+retinal+pigment+epithelium+proteome+changes+in+early+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Human retinal pigment epithelium proteome changes in early diabetes.</a> Diabetologia. 51 (6), 1051-1061 (2008).</li>
<li>Skeie, J. M., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+human+vitreous+body+elements+for+proteomic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection of human vitreous body elements for proteomic analysis.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li>
<li>Skeie, J. M., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+landscape+of+the+human+choroid-retinal+pigment+epithelial+complex%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Proteomic landscape of the human choroid-retinal pigment epithelial complex.</a> JAMA Ophthalmol. 132 (11), 1271-1281 (2014).</li>
<li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evisceration+of+mouse+vitreous+and+retina+for+proteomic+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Evisceration of mouse vitreous and retina for proteomic analyses.</a> J Vis Exp. (50), (2011).</li>
<li>Skeie, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+vitreous+biopsy+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of vitreous biopsy techniques.</a> Retina. 32 (10), 2141-2149 (2012).</li>
<li>Skeie, J. M., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+interactions+in+the+mouse+vitreous-retina+complex%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Proteomic interactions in the mouse vitreous-retina complex.</a> PLoS One. 8 (11), e82140(2013).</li>
<li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+vitreous+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics+Clin+Appl%22%5BJournal%5D)">Translational vitreous proteomics.</a> Proteomics Clin Appl. 8 (3-4), 204-208 (2014).</li>
<li>Skeie, J. M., Roybal, C. N., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+insight+into+the+molecular+function+of+the+vitreous%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Proteomic insight into the molecular function of the vitreous.</a> PLoS One. 10 (5), e0127567(2015).</li>
<li>Velez, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precision+Medicine%3A+Personalized+Proteomics+for+the+Diagnosis+and+Treatment+of+Idiopathic+Inflammatory+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Precision Medicine: Personalized Proteomics for the Diagnosis and Treatment of Idiopathic Inflammatory Disease.</a> JAMA Ophthalmol. 134 (4), 444-448 (2016).</li>
<li>Velez, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+elevated+intraocular+pressure+with+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of elevated intraocular pressure with retinal detachment.</a> Am J Ophthalmol Case Rep. 5, 107-110 (2017).</li>
<li>Skeie, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+biorepository+for+ophthalmic+surgical+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics+Clin+Appl%22%5BJournal%5D)">A biorepository for ophthalmic surgical specimens.</a> Proteomics Clin Appl. 8 (3-4), 209-217 (2014).</li>
<li>Ferrer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+protein+preservation+largely+depends+on+the+postmortem+storage+temperature%3A+implications+for+study+of+proteins+in+human+neurologic+diseases+and+management+of+brain+banks%3A+a+BrainNet+Europe+Study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Brain protein preservation largely depends on the postmortem storage temperature: implications for study of proteins in human neurologic diseases and management of brain banks: a BrainNet Europe Study.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 66 (1), 35-46 (2007).</li>
<li>Ahmed, M. M., Gardiner, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preserving+protein+profiles+in+tissue+samples%3A+differing+outcomes+with+and+without+heat+stabilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Preserving protein profiles in tissue samples: differing outcomes with and without heat stabilization.</a> J Neurosci Methods. 196 (1), 99-106 (2011).</li>
<li>Kanshin, E., Tyers, M., Thibault, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sample+Collection+Method+Bias+Effects+in+Quantitative+Phosphoproteomics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Sample Collection Method Bias Effects in Quantitative Phosphoproteomics.</a> J Proteome Res. 14 (7), 2998-3004 (2015).</li>
<li>Crecelius, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+quantitative+post-mortem+changes+in+the+gray+matter+of+the+human+frontal+cortex+proteome+by+2-D+DIGE%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Assessing quantitative post-mortem changes in the gray matter of the human frontal cortex proteome by 2-D DIGE.</a> Proteomics. 8 (6), 1276-1291 (2008).</li>
<li>Oka, T., Tagawa, K., Ito, H., Okazawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+of+the+phosphoproteome+in+postmortem+mouse+brains%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes of the phosphoproteome in postmortem mouse brains.</a> PLoS One. 6 (6), e21405(2011).</li>
<li>Nagy, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+postmortem+interval+on+biomolecule+integrity+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Effects of postmortem interval on biomolecule integrity in the brain.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 74 (5), 459-469 (2015).</li>
<li>Mukherjee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+analysis+of+frozen+tissue+samples+using+laser+capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Proteomic analysis of frozen tissue samples using laser capture microdissection.</a> Methods Mol Biol. 1002, 71-83 (2013).</li>
</ol>

Hiçbir çıkar çatışmaları ilan etti.

Sonra doku toplanması, örnek işleme ve tedavisi çok önemli konuları14vardır. Koruma sıvı azot ikinci aşağı akım analizi çarpık protein yapısına zarar görmesine neden kimyasal fiksasyonu tercih edilir. Ayrıca, sıvı nitrojen koruma örnekleri dondurulması içermeyen yöntemleri için tercih edilir. 4 ° C veya oda sıcaklığında, bu 0 ° C15, depolanan karşılaştırıldığında korunmuş beyin örnekleri arasında protein düzeyleri önemli farklılıklar gösterdi en belirgin Ferrer vd ...

Retina, RPE ve koroid protein ifade, fizyolojik fonksiyon ve patolojik duyarlılıkları1,2önemli bölgesel farklılıklar gösteren karmaşık dokuları vardır. Örneğin, Age-Related yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD), retinitis pigmentosa ve merkezi seröz retinopati her gibi hastalıkların karakteristik yerelleştirme fovea, makula veya retina çevre1,3içinde göstermek, 4,6. Burada, nasıl farklı retina bölgeleri bağımsız olarak tatmak mümkündür gösteren bir yöntem mevcut. Bu yöntem genel amacı insan retina ve RPE koroid foveal, maküler ve çevre bölgelerdeki proteomik analiz için doku örnekleri topluluğu için güvenilir bir kılavuz sağlamaktır. Geliştirme ve bu tekniğin kullanımı için gerekçe proteomik analizi, bu özel retina bölgelerin, moleküler bilgiler bu bölgeler fizyolojik ve patofizyolojik görev içine elde etti önemli ile o.
Bu yaklaşım göreli bölgesel hastalık duyarlılıkları proteomik temeli ortaya çıkarmak ve yeni belirli tedavi hedefleri tanımlaması kolaylaştırmak için vaat ediyor. Nitekim, proteomik araştırmalar Vitre ve retina ile olan etkileşimleri işlevini sağlıklı ve hastalıklı doku5,7,8 ve moleküler kompozisyon içine anahtar anlayışlar hazırladık , 9 , 10 , 11 , 12 , 13. ancak, net karşılaştırmalı proteomik analizleri farklı retina bölgeler eksik vardır. Teknik avantajları diğer yöntemler üzerinde bir güvenilir ve tekrarlanabilir doku toplama yaklaşım göstererek sağlayan bu çok ihtiyaç duyulan çalışmaları desteklemek için yardımcı olacaktır. Daha çok, çok kolay, standart boyutlu ve hazır doku punch biyopsi araçları yararlanan bir yaklaşımdır. Bizim teknik uygun toplama ve depolama için işleme, protein istikrar ve yıkımı için önemli konuları yapma proteomik dokuların vurgular. Bu nedenle, bu yöntem en aşağı akım moleküler analiz proteomik faktörlerin göz önünde bulundurarak müfettişler için uygundur.

<table><tbody><tr><td>4 mm cilt punch biyopsi aleti</td><td>Miltex</td><td>REF 33-34</td><td></td></tr><tr><td>8 mm skin punch biyopsi aleti</td><td>Miltex</td><td>REF 33-37</td><td></td></tr><tr><td>0.12 Colibri Forseps</td><td>Stephens Aletleri</td><td>S5-1145</td><td></td></tr><tr><td>Wescott Makas</td><td>Sklar Cerrahi Aletler</td><td>64-3146</td><td></td></tr><tr><td>Mikrofüj tüpleri</td><td>Eppendorf</td><td>#022364111</td><td>1.5 mL</td></tr><tr><td>Sıvı Nitrojen</td><td>Praxair, Inc.</td><td>7727-37-9 [R]</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan retina ve rpe koroid diseksiyon proteomik analizi için

Dissection of Human Retina and RPE-Choroid for Proteomic Analysis

İnsan retinanın duyusal neuroretina ve temel retina Pigmentli epitel (RPE), hangi vasküler choroid katmana sıkıca complexed oluşmaktadır. Retina farklı bölgelerinde benzersiz işlevleri kolaylaştırmak ve hastalık fark duyarlılık gösteren anatomik ve tatlı, farklıdır. Bu bölgeler ve Katmanlar proteomik analizi Age-Related yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD), diyabet ve glokom da dahil olmak üzere birçok hastalığın moleküler sürecinin hayati kazandırabileceğini. Ancak, nicel proteomik analizi gerçekleştirilebilir önce retina bölgeler ve katmanları ayrılması önemlidir. Burada, diseksiyon ve foveal, maküler ve periferik retina bölgeler ve RPE koroid kompleks altında yatan, bölgesel punch biyopsi ve doku katmanları bir insan gözünün üzerinden el ile kaldırılmasını içeren koleksiyon için bir yöntem açıklanmaktadır. Tek boyutlu SDS-sayfa hem hem aşağı akım proteomik analizi, sıvı Kromatografi-tandem kütle spektrometresi (LC-MS/MS), gibi retina hastalığı için moleküler biyolojik açığa proteinler disseke her retina tabakasında tanımlamak için kullanılabilir.

Retina ve RPE koroid doku bireysel soruşturma uygun olarak çeşitli şekillerde işlenebilir. Toplandıktan sonra araştırmacı retina ve RPE koroid dokudan foveal bölge, dış makula ve periferik retina (şekil 1) sahip olacak. Özellikle, foveal bölgede yumruk fovea, parafovea ve bitişik perifovea az miktarda içerir. Yaşa bağlı makula yumruk perifoveal bölge hem de bitişik periferik yakınındaki bölgesinin küçük bir miktar geri kalanı içerir. Son olarak, periferik yum...

İnsan retina fovea, makula ve periferik retina gibi işlevsel ve tatlı farklı bölgelerinde oluşur. Burada, incelemek ve bu farklı retina bölgeler aşağı akım proteomik analiz için toplamak için punch biyopsi ve doku katmanları bir insan gözünün üzerinden el ile kaldırılması kullanarak bir yöntemi açıklanmaktadır.

İnsan Retina ve RPE koroid diseksiyon proteomik analizi için

The human retina is composed of the sensory neuroretina and the underlying retinal pigmented epithelium (RPE), which is firmly complexed to the vascular ...

Bu video; proteomik araştırmalar için fovea, makula ve periferik retinadan doku biyopsilerinin nasıl alınacağını gösterecektir. Birkaç adımda, dört milimetrelik bir deri punch biyopsi aleti kullanacağız. İnsan gözü, kelebek şeklinde açıldıktan sonra bir petri kabına yerleştirilir.Punch biyopsi aleti foveanın tam üzerine ortalanır, aşağı doğru bastırılır ve fovea çevresinde bir insizyon oluşana kadar hafifçe döndürülür. Sekiz milimetrelik punch biyopsi aleti, hafif bir baskı ve döndürme hareketiyle makula arkadlarının içine ortalanarak bastırılır. Ardından, arkadın hemen dışındaki periferik retinada bir dizi punch işlemi yapmak için dört milimetrelik punch biyopsi aleti kullanılır.Her flep için iki adet punch işlemi uyguluyoruz. Tüm punch işlemleri tamamlandıktan sonra göz yaklaşık olarak bu şekilde görünecektir. Artık doku toplama işlemine başlamaya hazırız.Dokunun kenarlarını tutmak için kavisli 0.12 colibri pens kullanılır. Burada foveal retinanın kenarını tutuyoruz. Maküler doku halkasını tutmak için de aynı pens kullanılır.Bu durumda, dokunun diske yapışmış olduğu görülür. Bir çift Westcott makası kullanarak, sadece retinayı almak için kenarları kırpabilirsiniz. Ardından, perif

dissection-of-human-retina-and-rpe-choroid-for-proteomic-analysis

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu makalede, retina pigment epitel birini üç gün postfertilization embriyolar bağlı olan ve olmayan zebrafish retina microdissect bir yaklaşım açıklanmıştır.

Zebra balığı Embriyonik Göz Dokular, Mikrodisseksiyon

Biz insan fetal retina pigment epitel hücreleri (hfRPE) hücrelerin kültür konfluent mono tabakaları, morfoloji, fizyoloji, polarite, ve yetişkin doğal doku protein ve gen ekspresyonu sergilediği için tekrarlanabilir bir yöntem sağlar. Bu çalışma, çeşitli göz hastalıkları bir hayvan modeli uzatıldı.

Retina Pigment Epitel Fizyoloji ve Patofizyoloji Çalışma Deneysel Modeller

Bu video post-mortem gözünde, insan vitreus vücudunun çeşitli yarı saydam yapıların ayrılması ve diseksiyon için etkili bir teknik gösterir.

Proteomik Analizi İnsan Vitreus Gövde Elemanları diseksiyonu

Bir fare göz diseksiyon resmi bir gösteri, retinal pigment epitel bir bütün montaj.

Retina pigment epiteli Tüm Mount Fare Göz Diseksiyon

Diseksiyon tekniği vitreus, retina ve lens gelen fare göz, santrifüj yoluyla ayrılması ve protein deneyleri ile karakterizasyonu eviserasyon göstermektedir.

Proteomik Analizleri Fare Vitreus ve Retina eviserasyon

Tek retina hücreleri ve bunların cDNAlann sonraki amplifikasyon izolasyonu için bir yöntem tarif edilmiştir. Tek hücreli transkriptomik bir dokusunda hücresel heterojenite mevcut derecesini ortaya koymaktadır ve nadir hücre popülasyonu için yeni belirteç genlerin ortaya çıkarır. Beraberindeki protokol birçok farklı hücre tiplerine uyacak şekilde ayarlanabilir.

Gelişen ve Olgun Retina Nöronlar Tek hücreli Profilleme

Bu protokol, protein analizi için murin çubuk fotoreseptörlerinin hücre altı bölmelerini izole etmek için iki teknik sunar. İlk yöntem, çubuk dış segmentlerini ayırmak için canlı retina ve selüloz filtre kağıdı kullanırken, ikincisi çubuk iç ve dış segment katmanlarını soymak için liyofilize retina ve yapışkan bant kullanır.

Protein Analizi için Fare Retinasındaki Fotoreseptör Hücre Bölmelerinin İzolasyonu İçin İki Peeling Yöntemi

İnsan gözünde retinal pigment epitelini (RPE) retinadan etkin bir şekilde ayırmak ve RPE'nin histolojik ve morfometrik analizleri için tüm RPE / koroid düzlüklerini üretmek için bir yöntem tanımladık.

Histolojik Analiz için İnsan Gözünden Retinal Pigment Epitel/Koroid Flatmount'larının Verimli ve Tutarlı Üretimi

Fare modelleri, retinal pigmentli epitelin (RPE) biyolojisini araştırmak için yararlı araçlar olabilir. Farelerin bir dizi RPE patolojisi geliştirebileceği tespit edilmiştir. Burada, ışık, iletim elektronu ve konfokal mikroskopi kullanarak farelerde RPE patolojilerini aydınlatmak ve ölçmek için bir fenotipleme protokolü tarif ediyoruz.

Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonunun Fare Modellerinde Retinal Pigmentli Epitel Patolojilerini Değerlendirme ve Ölçme Protokolü

Bu çalışma, fotoreseptör hücre gövdelerinin çıkarılmasının daha hızlı antikor difüzyonu ve immünohistokimya, in situ hibridizasyon ve elektrofizyoloji deneyleri için iç retinal nöronlara gelişmiş yama pipet erişimi sağladığı alternatif bir düz montajlı retina preparatı sunmaktadır.

Omurgalı Retinasında İç Nükleer Tabaka Nöronlarını İncelemek için Geliştirilmiş Bir Düz Montaj Preparatı Olarak Bölünmüş Retina

Öğrenin, fovea, makula ve periferik retina bölgelerinden doku biyopsisi alma yöntemini. Bu teknik, insan gözünden retina ve RPE-koroid dokularını ayırarak proteomik analiz için örnek hazırlar.

İnsan Retina ve RPE koroid diseksiyon proteomik analizi için

Daha fazla video keşfet