Name: Sinonasal karsinom ve koku nöroblastomlar için iki olası moleküler işaretleyici olarak OTX1 ve OTX2 tanımlama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Keşfedin sinonasal karsinom ve koku nöroblastomları için OTX1 ve OTX2 moleküler işaretleyicilerini immunohistokimya ve gerçek zamanlı PCR ile. Bu yöntem altı saat içinde sonuç vererek tanı doğruluğunu artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser tarafından Centro Grandi Strumenti Università dell'Insubria, Fondazione Comunitaria del Varesotto, Fondazione del desteklenmiştir Monte di Lombardia ve Fondazione Anna Villa e Felice Rusconi.

Tüm çalışmaları (1975) Helsinki Bildirgesi ile aydınlatılmış onam yazılı ve Varese Insubria Üniversitesi etik kurul tarafından onaylanmış göre yapıldı.
1. toplama örnekleri
<ol><li>Toplamak ve insan Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) örnekleri WHO sınıflamasına göre baş ve boyun tümörleri14göre farklı alt gruplar bölmek. Not: Aşağıdaki örnekleri burada kullandığımız: Normal sinonasal mukoza kontrolü (10 örnekleri); Ters Papilloma (IP, ICD-O kodu 8121/1); Sinonasal ITAC (ICD-O kodu 8144/3, 32 örnekleri); NITAC (ICD-O kodu 8140/3, 12 örnekleri); Adenoid Kistik Karsinom (ACC, ICD-O kodu 8200/3); Pleomorfik adenom (PA, ICD-O kodu 8941/3); (ICD-O kodu 9522/3, 13 örnekleri); Ayrıştırılan kötü nöroendokrin Karsinomu (PDNEC, ICD-O kodu 8041/3, 19 örnekleri); Nöroendokrin tümör (NET, ICD-O kod 8041/3).</li>
</ol>2. İmmünokimya
<ol><li>
Deparaffinization ve rehydration bölümleri
	<ol>
<li>Örnek slaytlar bir fırında 30 dk 60 ° C'de ısı ve su bir alkol serisi kullanarak 3 µm kalınlığında FFPE bölümleri rehydrate.</li>
		<li>Kısaca slaytları Ksilen 10 dakika yıkayın ve bu adımı yineleyin; 5 min için slaytlar %100 alkol yıkama ve % 95, % 85 ve % 75 alkol seri olarak kullanarak bu adımı yineleyin. 5 dakika içinde distile su slaytlarını durulayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Endojen etkinlik engelleme
	<ol>
<li>Endojen faaliyetleri % 3 sulu hidrojen peroksit 12 dk için slaytları yerleştirerek engellemek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Antijen alma
	<ol>
<li>Antijen alma ile 10 mM bir mikrodalga tedavi 10 min için sitrat arabellek (pH 6) tedavisi ile gerçekleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Kuluçka birincil antikor ile
	<ol>
<li>TBS arabellek (pH 7,4) bölümlerinde yıkayın, sonra 10 dakika için engelleme çözüm ekleyin.</li>
		<li>TBS arabellek (pH 7,4) bölümlerinde yıkayın, sonra %0,2 Triton X ekleyin.</li>
		<li>Gecede keçi Anti-insan OTX2 antikor seyreltilmiş 1: 100 ile 4 ° C'de kuluçkaya.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Kuluçka ikincil antikor ile
	<ol>
<li>Biotinylated tavşan Anti-keçi ikincil antikor seyreltilmiş 1: 200 ABC-peroksidaz kompleksi tarafından takip ile oda sıcaklığında 1 h için bölümleri kuluçkaya ( Malzemeleri tablolarıgörmek).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İmmunoreaction geliştirme
	<ol>
<li>3, 3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride kullanarak immunoreaction geliştirmek ve Harris Hematoksilen ile çekirdeği counterstain.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Montaj ve görüntüleme
	<ol>
<li>Bir Hilal alkol ölçeği kullanarak bölümleri kurutmak ve Terpen kökenli bir takas madde kullanarak bunları açıklamak ( Tablo malzemelerigörmek). Montaj orta bölümleri embed, bölümleri bir mikroskop slaytta yer ve bölümleri bir optik mikroskobu gözlemlemek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. RNA çıkarma ve ters-transkripsiyon
<ol><li>
RNA çıkarma
	<ol>
<li>RNA immunoprecipitation Protokolü (bakınız Bölüm 2.1) ilk adımı uygulayarak bölümleri ayıklamak ve slaytları distile suda tut. Günahı bölümleri ilgili Hematoksilen-parçaları ilgi tanımlamak için bölümler lekeli Eozin ile çakışıyor.</li>
		<li>FFPE örnekleri ( Tablo malzemelerigörmek) ve aşağıdaki prosedürü yerine getirin için ticari bir RNA ekstraksiyon kiti kullanarak RNA ayıklama gerçekleştirmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
RNA ters-transkripsiyon
	<ol>
<li>Retro uyarlamak-RNA cDNA için ticari bir setini kullanın (bkz. Tablo reçetesi) protokol sonrası. Retro-uyarlamak en az 1000 ng birkaç çözümlemesi yapma toplam RNA'ın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. gerçek zamanlı PCR ve veri analizi
<ol><li>
Gerçek zamanlı PCR
	<ol>
<li>Nicel gerçek zamanlı PCR analizleri (qRT-PCR) prob tabanlı teknoloji ile gerçekleştirmek ( Tablo malzemelerigörmek) ve termal cycler.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
PCR reaksiyon karışımı hazırlanması
	<ol>
<li>Sonda tabanlı ana karışımı 12.5 µL PCR reaksiyon karışımının hazırlamak, OTX1, OTX2 ve ACTB her 1,25 µL probları (bkz. Tablo reçetesi) 50 ng cDNA ve nükleaz ücretsiz su toplam hacminin 25 µL.</li>
		<li>Bütün tepkiler nüsha ACTB gen gen ifade düzeyleri normale endojen denetimi olarak kullanarak gerçekleştirin.</li>
		<li>Plaka 1,109 x g 3 dk santrifüj kapasitesi ve deneme kadar ışık 4 ° C'de korunuyorsunuz plaka saklayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Termal cycler ayarlama
	<ol>
<li>40 devredir 15 95 ° c termal cycler profil bir ilk sıcak başlaması ile birlikte döngüsü 50 ° c 2 dakika ve 10 dakika, 95 ° C kümesi ardından s ve bir final çevriminde 60 ° C'de 1 dak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Gen ifade düzey analizleri
	<ol>
<li>ACTB gen endojen denetimini kullanarak karşılaştırmalı döngüsü eşik (ΔCt) yöntemi ile gen ifade düzeyleri normale.</li>
		<li>2-ΔCt yöntemini kullanarak gen ifade düzeyini değerlendirin ve sonuçları arsa.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İstatistiksel analizler
	<ol>
<li>İstatistiksel analizler öğrencinin tkullanarak gerçekleştirmek-testi, p < 0,05 ile istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar göz önüne alındığında.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeobox+genes+in+the+developing+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+genet%22%5BJournal%5D)">Homeobox genes in the developing central nervous system.</a> Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).</li>
<li>Omodei, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Brain+Transcription+Factor+OTX1+Occurs+in+a+Subset+of+Normal+Germinal-Center+B+Cells+and+in+Aggressive+Non-Hodgkin+Lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22American+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma.</a> American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).</li>
<li>Levantini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unsuspected+role+of+the+brain+morphogenetic+gene+Otx1+in+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Unsuspected role of the brain morphogenetic gene Otx1 in hematopoiesis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci USA. 100 (18), 10299-10303 (2003).</li>
<li>Larsen, K. B., Lutterodt, M. C., Mollgard, K., Moller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+homeobox+OTX2+and+OTX1+in+the+early+developing+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Expression of the homeobox OTX2 and OTX1 in the early developing human brain.</a> J. Histochem. Cytochem. 58, 669-678 (2010).</li>
<li>Abate-Shen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deregulated+homeobox+gene+expression+in+cancer%3A+cause+or+consequence%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence?</a> Nat. Rev. Cancer. 2, 777-785 (2002).</li>
<li>de Haas, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTX1+and+OTX2+expression+correlates+with+the+clinicopathologic+classification+of+medulloblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">OTX1 and OTX2 expression correlates with the clinicopathologic classification of medulloblastomas.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 65, 176-186 (2006).</li>
<li>Terrinoni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTX1+expression+in+breast+cancer+is+regulated+by+p53%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">OTX1 expression in breast cancer is regulated by p53.</a> Oncogene. 30 (27), 3096-3103 (2001).</li>
<li>Yu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTX1+promotes+colorectal+cancer+progression+through+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">OTX1 promotes colorectal cancer progression through epithelial-mesenchymal transition.</a> Biochem. Biophys Res Commun. 44 (1), 1-5 (2014).</li>
<li>Glubrecht, D. D., Kim, J. H., Russel, L., Bamforth, J. S., Godbout, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+CRX+and+OTX2+expression+in+human+retina+and+retinoblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Differential CRX and OTX2 expression in human retina and retinoblastoma.</a> J. Neurochem. 111 (1), 250-263 (2009).</li>
<li>Coletta, R. D., Jedlicka, P., Gutierrez-Hartamn, A., Ford, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+the+cell+cycle+in+mammary+gland+development+and+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+mammary+gland+Biol.+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of the cell cycle in mammary gland development and tumorigenesis.</a> J. mammary gland Biol. Neoplasia. 9, 39-53 (2004).</li>
<li>Cordes, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+and+phenotypic+analysis+of+poorly+differentiated+sinonasal+neoplasms%3A+an+integrated+approach+for+early+diagnosis+and+classification%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular and phenotypic analysis of poorly differentiated sinonasal neoplasms: an integrated approach for early diagnosis and classification.</a> Hum Pathol. 40, 283-292 (2009).</li>
<li>Stelow, E. B., Bishop, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+from+the+4th+Edition+of+the+World+Health+Organization+Classification+of+Head+and+Neck+Tumours%3A+Tumors+of+the+Nasal+Cavity%2C+Paranasal+Sinuses+and+Skull+Base%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck+Pathol%22%5BJournal%5D)">Update from the 4th Edition of the World Health Organization Classification of Head and Neck Tumours: Tumors of the Nasal Cavity, Paranasal Sinuses and Skull Base.</a> Head Neck Pathol. 11 (1), 3-15 (2017).</li>
<li>Llorente, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinonasal+carcinoma%3A+clinical%2C+pathological%2C+genetic+and+therapeutic+advances%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Sinonasal carcinoma: clinical, pathological, genetic and therapeutic advances.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 11 (8), 460-472 (2014).</li>
<li>Sidransky, D. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/profile/Lester_Thompson/publication/7200778_World_Health_Organization_classification_of_tumours_Pathology_and_genetics_of_head_and_neck_tumours/links/09e415102df86bd4a2000000.pdf">World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of head and neck tumors</a>. 9, WHO Press. (2005).</li>
<li>Radulesku, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+surgery+for+sinonasal+tumors%3A+The+transcribriform+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Stomatol+Oral+Maxillofac+Surg%22%5BJournal%5D)">Endoscopic surgery for sinonasal tumors: The transcribriform approach.</a> J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 118 (4), 248-250 (2017).</li>
<li>Muller, P. A. J., Vousden, K. H. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/ncb2641">p53 mutations in cancer.</a> Nature cell biology. 15 (1), 2-8 (2013).</li>
<li>Holmila, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profile+of+TP53+gene+mutations+in+sinonasal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat+Res%22%5BJournal%5D)">Profile of TP53 gene mutations in sinonasal cancer.</a> Mutat Res. 686 (1-2), 9-14 (2010).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu çalışmada gösterir, mRNA düzeylerine göre ilk defa OTX1 ve OTX2 HB genler ifade normal sinonasal mukoza ve submucosal bezleri, inflamatuar polipler, sinonasal Schneiderian papillomas ve farklı epitel ve nöroektodermal neoplazmlar, Skuamöz Karsinom, bağırsak türü sinonasal Adenokanserine, Tükürük bezi tipi tümörler, nöroendokrin neoplazmlar ve ONs da dahil olmak üzere.
Değişiklikler ve sorun giderme:
RNA yıkımı önlemek için biz patoloji laboratuvar deparaffinization ...

OTX HB genler (otd) Drosophila orthodenticle genlerin omurgalı homologue ve onlar normalde sırasında embriyonik morfogenez ifade edilir transkripsiyon faktörleri için kodlamak, ama onlar da farklı fonksiyonları ile yetişkin canlı ifade edilebilir . Embriyonik gelişim sırasında hücre kimliğini, hücre farklılaşma ve vücut axis¹ konumlandırma belirtimi kontrol ediyorlar. OTX ailesi farklı işlevler görüntülemek OTX1 ve OTX2 gen içerir. OTX1 beyin ve duyu organı geliştirme ilgilenmektedir. Yetişkin canlı duyu organları ifade edilir ve2hipofiz ön LOB düşük seviyelerde sentezlenir; Bu da hematopoiesis, hematopoetik pluripotent ve progenitör hücrelerin3ifade bir rol oynar. OTX2 rostral başından gelişiminde ilgilenmektedir ve onun çevrilmiş protein eylemleri bir morphogen olarak hangi diğer genler yoluyla bir degrade üretir çünkü aktif veya böylece hücreye katkıda spatio-zamansal bir şekilde bastırılmış nükleer silahların yayılmasına karşı ve farklılaşma. Yetişkin organizmada OTX2 sadece choroid plexus ve epifiz bezi4' te bulunur.
OTX genlerdeki mutasyonlar kez insan Konjenital, somatik veya metabolik kusurları görünümünü ilişkilidir. Onlar düzgün hücresel büyüme ve/veya farklılaşma5kontrol etmek mümkün değilse kazanç veya kaybın OTX genlerdeki mutasyonlar tumorigenesis teşvik. Kanserini ve kanserleri de olduğu gibi birçok solid tümör (örn., medulloblastomas6, agresif non-Hodgkin kanserleri2, meme karsinomlar7, kolorektal kanserler8ve Retinoblastom9), kuralsız OTX HB genler iyi belgelenmiş10ifadesidir. Buna ek olarak, OTX2 mutasyonlar anophthalmia ve microphtalmia11 bu gen göz geliştirme kontrolü için çok önemli rolü nedeniyle durumlarında gösterilmiştir.
Katı neoplazmlar bağlamında, moleküler ve fenotipik işaretleri keşfi tanı, sınıflandırma ve tümör11burun ve paranazal köken de dahil olmak üzere, çeşitli tedavi için önemli bir sorun olduğunu. sinüsler. Aslında, bu rağmen bu alanlarda sadece mütevazı bir anatomik alan, Mukozal epitel, bezleri, yumuşak doku, kemik, kıkırdak veya sinirsel/nöroektodermal işgal, ve hematolymphoid hücreleri genellikle karmaşık ve histolojik olarak farklı kökeni için site olabilir tümör grupları. Neoplazmlar sinonasal yolu içeren farklı türde çeşitli ne genellikle üst aerodigestive sistem veya bile vücut12birçok yerinde boyunca görülen üstesinden özellikler mevcut. Sinonasal maligniteler nadirdir ve 1:100,000 nüfuslu bir yıllık insidansı dünya çapında mevcut ve bu yüzden bu çalışmalar ile ilgili tumorigenesis ve alternatif tedavi stratejileri test yolları önler. Buna rağmen teknikleri, Imaging'de gelişmeler cerrahi yaklaşımlar ve radyoterapi sinonasal kanser klinik yönetiminin iyileştirilmiştir. Ayrıca, hücre hatları gibi hayvan modelleri ve kanser genetik profilleme gelişimi şu anda gelecekte hedeflenen antikanser terapiler13temelini oluşturmaktadır. Bugüne kadar neoplazmlar OTX1 ve/veya OTX2 ifadede burun boşluğuna, paranazal sinüsler ve nazofarinksi ilgili hiçbir raporlar vardır. Daha önce meme kanseri7' OTX1 ve OTX2 dahil olan gözlemledim beri bu genler mevcut değil sadece normal nazal mukoza aynı zamanda burun boşluğuna içinde tümörler olup olmadığını merak etti. Biz "Ospedale di Circolo" Varese örneklerinde normal mukoza ve 1985 2012'ye toplanan ve Dünya Sağlık Örgütü (WHO) göre sınıflandırılmış Burun kemiği ve sinonasal Adenokanserine patoloji Bölümü elde edilen bu hedefe ulaşmak için Baş ve boyun tümörleri sınıflandırılması. Gerçek zamanlı PCR ve immünhistokimya analizleri çözümlemek seçtiğimiz ve bu tür tümör moleküler işaretleyiciler düşünülebilir eğer belirlemek için OTX1 ve OTX2 ifade değerlendirilir.

<table><tbody><tr><td>RecoverAll Toplam Nükleik Asit İzolasyonu</td><td>Uygulanan Biyosistem</td><td>AM1975</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek Kapasiteli cDNA Ters Transkripsiyon Kiti</td><td>Uygulamalı Biyosistem</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix, AmpErase UNG</td><td>Uygulamalı Biyosistem</td><td>4326614</td><td></td></tr><tr><td>ABI Prism 7000&nbsp;</td><td>Uygulamalı Biyosistem</td><td>270001857</td><td></td></tr><tr><td>ACTB probu</td><td>Uygulamalı Biyosistem</td><td></td><td>Üretim dışı. Dizi, telif hakkı ile korunmaktadır</td></tr>: <tr><td>OTX1 probu,</td><td>Applied Biosystem</td><td></td><td>, Üretim dışı. Dizi, telif hakkı</td></tr><tr><td>OTX2 probu</td> tarafından korunmaktadır <td>Applied Biosystem</td><td></td><td>Üretim dışı. Sekans telif hakkı ile korunmaktadır</td></tr><tr><td>Sulu Hidrojen Peroksit</td><td>Merk</td><td>1072090250</td><td></td></tr><tr><td>Sitrat Tamponu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20276292</td><td></td></tr><tr><td>Triton</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>101473728</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Merk</td><td>108382</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merk</td><td>106404</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Anti-OTX2 Antikor</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td></td><td>Üretim dışı. Katalog numarası mevcut değil</td></tr><tr><td>Tavşan Anti-Keçi Antikoru</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>BA5000</td><td></td></tr><tr><td>ABC-Peroksidaz Kompleks</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>PK6100</td><td></td></tr><tr><td>3,3'-diaminobenzidin tetrahidroklorit (DAB)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5905</td><td></td></tr><tr><td>Harris Hematoksilen</td><td>Bioptica</td><td>0506004/L</td><td></td></tr><tr><td>Pertek</td><td>Kaltek SRL</td><td>1560</td><td></td></tr><tr><td>BioClear</td><td>Bioptica</td><td>W01030799</td><td></td></tr></tbody></table>

sinonasal karsinom ve koku nöroblastomlar için iki olası moleküler işaretleyici olarak otx1 ve otx2 tanımlama

Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas

OTX (HB) homeobox genleri embriyonik morfogenez ve yetişkin organizmalarda koku epitel gelişimi sırasında ifade edilir. Bu genlerinde meydana gelen mutasyonlar kez insan tumorigenesis ilgili. Veri ile ilgili OTX genler ve burun boşluğuna tümörler arasındaki olası korelasyon bugün mevcuttur. Bu çalışmanın amacı, OTX1 ve OTX2 olarak nazal tümör gelişiminde moleküler belirteçleri kabul edilebilir eğer anlamaktır. Biz immunohistokimyasal ve gerçek zamanlı PCR analizleri OTX1 ve OTX2 genlerin ifade araştırmak için Burun kemiği ve sinonasal Adenokanserine seçildi. OTX1 ve OTX2 devamsızlık saatlerinizi tüm örneklerinde sinonasal bağırsak tipi Adenokanserine (ITACs). OTX2 mRNA sadece koku nöroblastomlar (ONs) ifade edildi iken OTX1 mRNA sadece sigara-Intestinal tip Adenokanserine içinde (NITACs) tespit edilmiştir. OTX1 ve OTX2 genler için fark gen ekspresyonu sinonasal tümör farklı tür ayırt edilebilmesi için yararlı bir moleküler işaretçisi olabilir göstermiştir.

Normal mukoza OTX genler siliyer pseudostratified türü solunum epitel ve submucosal glandüler hücreler (şekil 1A) için güçlü ve homojen nükleer reaktivite görülmektedir. Bulduk nükleer ifadede tüm NITACs örnekleri (şekil 1B), az ise veya immunoreactivity OTX1 için ITACs (şekil 1 c) vurgulandı. Yoğun immunoreactivity mevcut tüm ONs (şekil 1 d); PDNECs arasında OTX ifade ç...

Düzenleme çoğu yetişkin organizmalarda tümörleri ile ilgili genler Homeobox genleri bulunmaktadır. Biz onların karşılaştırmalı ifade immunohistokimyasal ve gerçek zamanlı PCR analizleri, normal ve inflamatuar burun mucosae ve onlara olası tanı ve tedavi hedefleri kullanmak için sinonasal neoplazmlar tarafından araştırdık.

Sinonasal karsinom ve koku nöroblastomlar için iki olası moleküler işaretleyici olarak OTX1 ve OTX2 tanımlama

OTX homeobox (HB) genes are expressed during embryonic morphogenesis and during the development of olfactory epithelium in adult organisms. Mutations ...

Bu deneyin genel amacı basit ve verimli bir şekilde sinonazal karsinomlar ve koku nöroblastomlar için yararlı moleküler belirteçleri belirlemektir. Bu yöntem koku nöroblastomu ve sinonazal karsinom alanında anahtar soruya cevap yardımcı olabilir, tümör alt tipi ayırt etmek için moleküler belirteçlerin belirlenmesi gibi. Bu tekniğin en büyük avantajı, altı saatten az bir sürede veya hastane raporu için bir gün içinde sonuç elde edebilmektir.RNA çıkarma ve gerçek zamanlı PCR prosedürünü gösteren Dr.Giorgia Millefanti, benim laboratuvar bir doktora öğrencisi olacaktır. Ve immünohistokimya prosedürünü gösteren Giovanni Micheloni, aynı zamanda benim laboratuvardan doktora öğrencisi olacak. İşleme başlamak için, baş ve boyun tümörlerinin WHO sınıflandırmasına göre, tüm insan FFPE örneklerini farklı alt gruplara ayırın ve bölün.Numuneleri 60 derecede 30 dakika boyunca ısıtın. Daha sonra, üç mikrometre kalınlığındaki FFPE kesitlerini ksilenin içinde 10 dakika boyunca kısa bir süre yıkayarak yeniden sulayın. Daha sonra, her yıkamada beş dakika boyunca slaytları %100 %95 %85 ve %75 alkolle seri olarak yıkayın.Damıtılmış suda beş dakika slaytları durulayın. Daha sonra, 12 dakika boyunca% 3 su

identification-otx1-otx2-as-two-possible-molecular-markers-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Biz burada, sıçan ve insan burun boşlukları olfaktör mukoza biyopsi için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu biyopsiler, beyin hastalıkları moleküler anomaliler tespit edilmesi ya da beyin travması / hastalık hayvan modellerinde hücre nakli için kullanılabilir multipotent yetişkin kök hücreleri izole ya için de kullanılabilir.

Kemirgenler ve İnsanlar Burun Koku Kök Hücreler Yalıtımlı

Bu çalışmada, yeni bir platformu geliştirdi ve valide edilmiş bipolar bozukluk (BD) tedavi yanıtının intranöronal moleküler imzaları araştırmak. BD hastaların Koku epitel burun biyopsi ile elde edildi. Sonra lazer yakalama mikrodiseksiyon BD lityum yanıt moleküler imza araştırmak için Gerçek Zamanlı RT PCR ile kombine edilmiştir.

Lazer Yakalama Mikrodisseksiyon ile Burun Biyopsi Kombine yoluyla elde Koku Nöronlar: Mental Bozuklukların Tedavi Tepki Eğitim Bir Potansiyel Yaklaşım

Koku duyu nöronları, uygun sinirsel devreleri oluşturmak için çok çeşitli akson sıralama moleküllerini ifade eder. Bu protokol, olfaktör duyu nöronlarının akson ucunda akson sıralama moleküllerinin kombinatoryal ifadelerini görselleştirmek için bir immünohistokimyasal boyama yöntemi tarif eder.

Koku Meşfatının Olfaktör Duyusal Akson Moleküler Kimlik Kodlarının Görselleştirilmesi İçin Dörtlü İmmün Sulanması

Bu yazıda, özellikle digoxigenin (DIG) etiketli veya biotin etiketli problar kullanılarak böcek antenlerinde, düşük seviyeli Odorant Reseptör (OR) genleri ve diğer genler için yerinde hibridizasyon protokolünde ayrıntılı ve etkili bir RNA açıklanmaktadır.

Locust Antenlerinde Odorant Reseptör Genlerinin RNA ile Lokalizasyonu<em&gt; Yerinde</em&gt; Hibridizasyon

Biyoinformatik, büyük ölçekli veri kümelerini işlemek için yararlı bir yoldur. Biyoinformatik yaklaşımlarının uygulanması sayesinde, araştırmacılar hızlı, güvenilir ve verimli bir şekilde anlayışlı uygulamalar ve bilimsel keşifler elde edebilirsiniz. Bu makale, yumurtalık kanseri araştırmalarında biyoinformatik kullanımını göstermektedir. Ayrıca başarıyla deneme yoluyla biyoinformatik bulguları doğrular.

Yumurtalık Kanserinde Çentik Sinyalizasyonunun Rolünü Anlamak İçin Biyoinformatik Yaklaşımların ve Deneysel Doğrulamaların Entegrasyonu

Genetiği değiştirilmiş farelerdeki sinir sistemi neoplazmlarının insan meslektaşlarının patolojisini doğru bir şekilde özetleyip özetlemediğini değerlendirmek için bir metodoloji geliştirdik. Burada, bu histolojik teknikleri, tanımlanmış patolojik kriterleri ve kültür metodolojilerini P 0-GGFβ3 fare modelinde ortaya çıkan nörofibromlara ve malign periferik sinir kılıfı tümörlerine uyguluyoruz.

Genetiği Değiştirilmiş Fare Modellerinde Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörlerinin Tanımlanması, Teşhis Edilmesi ve Derecelendirilmesi

Başlangıçta slaytlar üzerinde sabitlenmiş olan meme dokusunu histopatolojik değerlendirme için başarıyla çıkarmak, işlemek, kesmek ve lekelenmek için bir yöntem geliştirdik. Bu yöntem, üreme ve gelişimsel test kılavuz çalışmalarında meme bezlerinin tümünün monte edilmesini ve değerlendirilmesini teşvik edebilir.

Lezyon Tanımlaması için Meme Bandı Bütün Dağılımları

Genetik fareler prostat kanseri mekanizmaları araştıran için yararlı modellerdir. Burada bir fare ürogenital sistemden prostat loblar incelemek, Histoloji üzerinde göre ayırt etmek ve yalıtmak ve pulcuklarının aşağı akım analizleri için olarak birincil Prostat hücreleri vitro kültür için bir iletişim kuralı mevcut.

Kimlik, histolojik karakterizasyonu ve için fare Vitro 3D küresel kültür modelleri prostat lob diseksiyonu

Bu protokol, ev sahibi olarak larva zebra balığı kullanarak virüs tabanlı çift floresan etiketli tümör xenograft modelinde optimizasyon prosedürlerini açıklar. Bu heterojen xenograft modeli Pankreatik kanser mikroçevre in vivo doku bileşimi taklit ve kişiselleştirilmiş zPDX içinde ilaç yanıtlarını değerlendirmek için daha hassas bir araç olarak hizmet vermektedir (zebrafish hasta tarafından türetilen xenograft) modelleri.

Karşılaştırmalı Ilaç değerlendirmesi için ev sahipleri olarak zebrafish larvaları kullanarak pankreas kanserinin hasta türevi heterojen xenograft modeli

Burada, sirkülasyon tümör hücrelerini (CTCs) karakterize eden fenotifik ve moleküler özellikleri tanımlamak için entegre bir iş akışı sunuyoruz. Tek ve kümelenmiş CTCs 'lerin canlı immünostasyon ve robotik mikromanipülasyonunu, alt analiz ve metasrin-tohumlama yeteneğinin değerlendirilmesi için tek hücre bazlı tekniklerle birleştiriyoruz.

Akım moleküler Analizi ve metastatik potansiyel değerlendirme için sirkülasyon tümör hücrelerinin mikromanipülasyon

Keşfedin sinonasal karsinom ve koku nöroblastomları için OTX1 ve OTX2 moleküler işaretleyicilerini immunohistokimya ve gerçek zamanlı PCR ile. Bu yöntem altı saat içinde sonuç vererek tanı doğruluğunu artırır.

Sinonasal karsinom ve koku nöroblastomlar için iki olası moleküler işaretleyici olarak OTX1 ve OTX2 tanımlama

Daha fazla video keşfet