Deformasyon ve kan Ektacytometry tarafından kırmızı hücre heterojenite ölçme

Bu tekniğin genel amacı, ektasitometri ile kırmızı hücre deformabilitesini ve hücresel heterojenliği ölçmektir. Bu yöntem, ektasitometride eritrositlerin ne kadar deforme olabileceği, bir kan örneğinin ne kadar heterojen olduğu ve deneyin hastalığın bir fonksiyonu olarak nasıl değiştiği gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniklerin temel avantajları, kırmızı kan hücresi popülasyonlarının deformasyonunu ve heterojenliğini ölçmede erişilebilirlik, kolaylık ve güvenilirliktir.

Teknikler, orak hücreli anemi hastalarında tedaviye yanıtı izlemek için yararlı olabilir. Çünkü eritrosit deformabilitesi ve heterojenliği hemoglobin bileşimi ve konsantrasyonu ile ilişkilidir. Bu yöntemler, kırmızı hücre deformabilitesinin azalmasının mikrovasküler hastalığa katkıda bulunabileceği diyabet gibi azalmış kırmızı hücre deformabilitesi ile karakterize diğer hastalıklara uygulanabilir.

Sıfır ozmolar tüpü düşük ozmolar PVP çözeltisine ve 500 ozmolar tüpü yüksek ozmolar PVP çözeltisine bağlayarak başlayın. Bobun tamamen bardağa indirildiğinden emin olun. Yazılımı başlatın ve Donanım Kontrolü'nü seçerek makineyi hazırlayın ve ardından IO'yu izleyin. Cihazın hazırlama döngüsünü tamamlamasına izin verin.

Döngü tamamlandığında, bobini bardaktan kaldırın ve bobini ve kabı düşük tüy bırakmayan bir temizleme mendiliyle tamamen kurulayın. Şişeyi birkaç kez ters çevirerek taze çekilmiş bir tam kan örneğini nazikçe karıştırın. Ardından, 25 mikrolitre tam kanı beş mililitre izo-osmolar PVP çözeltisine pipetleyin.

Şişeyi kapattıktan sonra, birkaç kez tekrar ters çevirerek hafifçe karıştırın. Yazılım ana menüsünden deformasyonu seçin, ardından yeni bir analiz oluşturun ve deneysel ayrıntıları ekleyin. Ardından, ektasitometrenin kapağını kaldırın ve bobinin bardağa tam olarak indirildiğini ve kabın döndüğünü doğrulayın.

Bardak ile bob arasındaki boşluğa bir mililitre PVP kan solüsyonu pipetleyin. Ardından numuneyi aşağı indirmek için bobini hafifçe kaldırın. Tüm kabarcıklar çözeltiden çıkana kadar bekleyin, ardından ektasitometrenin kapağını kapatın.

Oku yazılımdaki kaydırma çubuğu boyunca hareket ettirerek kazancı 200'e ayarlayın. Sıcaklık 37 santigrat derecede sabit olduğunda ve kırınım görüntüsü sabit olduğunda, başlat düğmesine basın. Dairesel, eliptik veya baklava şeklinde kaldıklarından emin olmak için veri toplama ilerledikçe kırınım modellerini gözlemleyin.

Veri toplama işlemi tamamlandığında, raporu yazdırın ve temizleyin. Kayma gerilimine yanıt olarak sağlıklı kandan elde edilen bir kırınım modeli, beklenen eliptik modeli gösterir. Uzama indeksi, burada gösterilen denklem kullanılarak hesaplanır.

Numune aspire edildiğinde, cihaz temiz döngüde kalırken boşluğa deiyonize su püskürterek kap ile bobin arasındaki boşluğu durulayın. Temizleme döngüsü tamamlandıktan sonra, bobini bardaktan kaldırın ve bobini ve kabı düşük tüy bırakan bir temizleme mendiliyle tamamen kurulayın. Uygun kurutma çok önemlidir, çünkü artık su kırmızı hücreleri parçalayarak parazite neden olur.

Raporu kaydetmek için dışarı aktar'ı seçin. Son olarak, ana sayfaya dönmek için yazılımdaki ana menü düğmesine tıklayın. Daha önce olduğu gibi ektasitometreye başka bir numune yükledikten sonra, ekranda sabit bir kırınım görüntüsünün bulunduğundan emin olun.

3,8 cm'lik bir kırınım yüksekliği elde edene kadar bir cetveli ekran boyunca hareket ettirerek kamera kazancını ayarlayın. Bilgisayar ekranındaki görüntünün yüksekliğini doğrulamak için bir cetvel kullanın. Ardından, başlat düğmesine basın ve veri alımını daha önce olduğu gibi gözlemleyin.

Bu görüntü, orak hücreli anemi hastasından alınan kandan elde edilen 3,8 cm'lik bir kırınım modelini göstermektedir. Ektasitometreyi daha önce gösterildiği gibi temizledikten sonra, 4,5 cm ve 5,4 cm yüksekliklerde kırınım desenleri elde etmek için prosedürü tekrarlayın. Kırınım paterni distorsiyonu, heterojen bir kan örneklerinde meydana gelir, çünkü sert kırmızı hücreler deforme olabilen hücrelerle düzgün bir şekilde hizalanmaz ve bu da elmas şeklinde bir kırınım paterni ile sonuçlanır.

Kamera kazancı daha büyük kırınım desenleri oluşturacak şekilde ayarlandıkça bu bozulma deseni giderek daha fazla algılanabilir. Ozmotik gradyan ektasitometri için, beş mililitre izo-osmolar PVP içeren bir şişeye 250 mikrolitre tam kan ekleyerek başlayın ve hafifçe karıştırın. Yazılımdaki ana menüden Osmoscan'ı seçin.

Ardından, kan PVP solüsyonunu içeren şişeyi makinenin sol tarafındaki iğnenin altına yerleştirin. İğneyi şişenin dibine değene kadar indirin. Borunun gradyan üretimi için düşük ve yüksek ozmolar çözeltilere düzgün şekilde bağlandığından emin olun.

Ektasitometrenin kapağını kapatın ve tüpe giren kanın görülebilmesi için alt yarıdaki kapıyı açın. Yeni Analiz'e basın ve deneysel ayrıntıları yazın. Kamera kazancını 200'e ayarladıktan sonra, aletin altındaki borudan bardağa kan girene kadar makinenin çalışmasına izin verin.

Bilgisayar ekranı sabit bir kırınım modeli gösterdiğinde, iletişim kutusundaki Şimdi Başlat düğmesine basarak veri toplamaya başlayın. Ektasitometrenin kilogram başına yaklaşık 500 miliozole kadar veri almasına izin verin ve ardından cihazı durdurun. Raporu yazdırın.

Ardından, eski PVP kan şişesini çıkarın ve deiyonize su içeren temiz bir şişeyle değiştirin. İğneyi şişenin altına değecek şekilde aşağı indirin, ardından gradyan sistemini durulamak için diyalog kutusundaki durulama düğmesine basın. Durulama tamamlandıktan sonra, bilgisayar monitöründeki iletişim kutusundaki temizle seçeneğine basın ve raporu kaydetmek için dışa aktar'ı seçin.

Bob ve bardağı daha önce olduğu gibi kurulayın. Sağlıklı gönüllülerde bulunan homojen kan popülasyonları, kırınım boyutları ölçüldüğünde farklı deformasyon eğrileri üretmezler. Buna karşılık, orak hücreli anemisi olan hastalardan alınan kan gibi heterojen kan popülasyonları, kırınım paterni boyutunun bir fonksiyonu olarak deformasyon ölçümlerinde önemli düşüşler göstermektedir.

Orak kanda, kırınım paterni distorsiyonunun derecesi EI max'ın bir fonksiyonu olarak ölçüldüğünde, hemoglobin S ve yetişkin hemoglobin varyantı olan hemoglobin A2 ile ilişkilidir. Transfüzyon, kandaki normal yetişkin hemoglobin yüzdesi ile ters ilişkisi ile gösterildiği gibi distorsiyonu düzeltir. Kırınım paterni distorsiyonunun derecesinin, yarı maksimal deformasyon elde etmek için gereken kesme geriliminin bir fonksiyonu olarak mı yoksa EI max'ın bir fonksiyonu olarak mı ölçüldüğü, fetal hemoglobin ile ilişkilidir. EI max, EI min ve O min gibi temel ozmotik gradyan ektasitometri parametreleri, sırasıyla hücresel hidrasyon, yüzey-hacim oranları ve ozmotik kırılganlık hakkında ek bilgi sağlar.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknikler uygun şekilde yapılırsa yaklaşık bir saat içinde yapılabilir. Bu prosedürü takiben, bireysel eritrositlerin deformasyonu ile ilgili ek soruları yanıtlamak için mikroskopi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, kan örneklerinde deformasyon ve serum heterojenliğinin nasıl ölçüleceğini iyi anlamış olmalısınız.