Name: Kan ve Serum lekeler kanser biyolojik değerlendirmek örnek depolama için yararlı bir araç olarak kurutulmuş (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 44 s
Description: Öğrenin kan ve serum örneklerini dondurmadan saklama yöntemini; bu teknik kanser ve enfeksiyon hastalıkları biyobelirteç analizi için yüksek kaliteli materyal sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gráinne Tierney Editör Yardım için teşekkür etmek istiyorum.

Periferik kan ve serum toplanan ve sağlıklı bağış ve Yazılı onam çalışmaya katılmak için veren hastalar depolanır. Çalışma protokolü 1964 Helsinki Bildirgesi içinde ortaya konan etik standartlarına uygun olarak Yerel Etik Komitesi tarafından kabul edildi.
1. kan depolama DBS
<ol><li>
Kan örneği koleksiyonu
	<ol>
<li>Periferik kan örneği 3 mL tüp içinde 3 mL ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) 5.4 mg ile toplamak. Not: periferik kan olarak en kısa zamanda DBS ve 8 h içinde saklayın.</li>
		<li>Hasta kod numarası koruyucu kartı alt sağ köşede yazmak.</li>
		<li>Dikkatle 5 mL pipet ile kan resuspend.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DBS üzerinde lekelenme kan
	<ol>
<li>Pipet ve kan (50 µL) (Tablo reçetesi) koruyucu kartına bir yerde 50-200 µL bahşiş ile aktarın.</li>
		<li>1.2.1 arasındaki adımları yineleyin. 3-5 kan noktalar toplamda sahip olmak. Yaşlı uç atın ve her kan için yeni bir aliquot alın.</li>
		<li>DBS bir yatay pozisyonda oda sıcaklığında kuru gecede doğrudan güneş ışığından kaçınmak bir açık emici olmayan yüzey üzerinde bırakın. Koruyucu kartı kapağını kan kurutma kolaylaştırmak için açık bırakın. Not: Herhangi bir partikül hava veya toz kurutma bu adımı sırasında aşağı akım uygulamaları etkilemez.</li>
		<li>Kartı oda sıcaklığında nem ile bir plastik torba kullanmak kadar saklamak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. DBS DNA ekstraksiyon kiti veri sayfası (kurumuş kan lekeleri için bölümüne) göre başlayarak DNA ekstraksiyon
<ol><li>
Numune hazırlama
	<ol>
<li>3 kurumuş kan lekeleri kartı kullanın. Her kart kurumuş kan noktalardan biri kesmek veya cımbız ile kartından ayırabilirsiniz. Ayrılmış kurumuş kan lekeleri (çapı 1 mm) küçük parçalar halinde kesin.</li>
		<li>Küçük bir 1,5 mL santrifüj tüpüne alin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Örnek sindirim
	<ol>
<li>180 µL lizis tampon tüp seti (Tablo reçetesi) sağlanan 1 ekleyin. 20 µL İndinavir K. Ekle Lizis arabellek 1 1,5 mL tüp içine kart benekli kanla pipetting önce İndinavir k ile birlikte kullanmayın. Vortexing tarafından mix.</li>
		<li>Bir thermoincubator tüpü yerleştirin ve 60 dk 56 ° C'de kuluçkaya. Thermoincubator girdap örnek bir shaker ile donatılmış değil eğer en azından 10 için her 10-15 dk s, örnek sıcaklığını azaltmak izin vermemeye dikkat çekici. Kısaca damla--dan kapağı kaldırmak için tüpler santrifüj kapasitesi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Yıkama adım
	<ol>
<li>200 µL lizis arabelleğinin 2 (Malzemeler tablo) ve 10 için girdap ekleyin s.</li>
		<li>Bir thermomixer veya ısıtmalı yörünge kuluçka tüpler yerleştirin ve 10 dk 70 ° C'de kuluçkaya. Eğer thermoincubator bir shaker ile donatılmış değil girdap örnekleri bir kez için en az 10 s, örnekleri sıcaklığını azaltmak izin vermemeye dikkat çekici.</li>
		<li>2.3.1 arasındaki adımları yineleyin. Transfer, lysate 400 µL 1,5 mL tüp elüsyon sütun (Malzemeler tablo). 6.000 x g 1 dk. için adresindeki sütun santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Elüsyon sütun yeni bir 2 mL toplama tüp içine yerleştirin ve eski bir atın.</li>
		<li>500 µL yıkama arabelleği 1 (Malzemeler tablo) ve santrifüj 6.000 x g 1 dk. için ekleyin.</li>
		<li>Sütun yeni bir 2 mL toplama tüp içine yerleştirin ve eski bir atın.</li>
		<li>500 µL yıkama arabelleğinin 2 (Malzemeler tablo) ve santrifüj 6.000 x g 1 dk. için ekleyin.</li>
		<li>Sütun yeni bir 2 mL toplama tüp içine yerleştirin ve eski bir atın.</li>
		<li>Membran kuru için 3 dakika için 20.000 x g, santrifüj kapasitesi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Elüsyon adım
	<ol>
<li>Sütun yeni 1,5 mL santrifüj tüpüne yerleştirin ve toplama tüp atın.</li>
		<li>Yer 50 µL distile su membran ortasına üzerine. Oda sıcaklığında 10 dakika için kuluçkaya.</li>
		<li>20.000 x g 1 dk. toplamak, tüp eluate santrifüj kapasitesi ve tekrar membran ortasına yerleştirin.</li>
		<li>1 dakika süreyle santrifüj tüpü 20.000 x g de zar atmak.</li>
		<li>Bir spektrofotometre kullanarak DNA toplama ölçmek.</li>
		<li>Mağaza DNA-20 ° c kadar kullan. Not: DBS çıkarılan DNA SNP değerlendirme gibi birçok analizleri gerçekleştirmek için gerçek zamanlı PCR veya DNA Sanger sıralama tarafından kullanılabilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. serum depolama DSS için
<ol><li>
Kan örneği koleksiyonu
	<ol>
<li>7 mL EDTA olmadan 7 mL tüp periferik kan örneğinde toplamak. Oda sıcaklığında 30 dakika koagüle kan örneği bırakın.</li>
		<li>Hasta kod numarası koruyucu kartı alt sağ köşede yazmak.</li>
		<li>Kan örneği ' 980 x g oda sıcaklığında 15 dakika santrifüj kapasitesi. Not: serum olarak en kısa zamanda DSS ve 8 h içinde saklayın.</li>
		<li>Dikkatle ve yeni bir 15 mL tüp transfer süpernatant tüpünden çıkarın. Dikkatle 5 mL pipet ile kan resuspend.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DSS içinde lekelenme serum
	<ol>
<li>Pipet ve tek bir noktada serum (50 µL) koruyucu kartına aktarmak. 3-5 kan lekeleri bakildi için bu adımı yineleyin. Not: tam olarak 50 µL serum her yerini pipet için dikkatli olun. Serum ötesinde kart kesikli çizgi gitmemeli.</li>
		<li>DSS oda sıcaklığında kuru gecede bırakın. Koruyucu kartı kapağını kan kurutma kolaylaştırmak için açık bırakın.</li>
		<li>Kartı oda sıcaklığında nem ile bir plastik torba kullanmak kadar saklamak. Depolama 14 günden daha uzun olursa, kart-20 ° C'de depolayın</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. ELISA Assay DSS başlayarak
<ol><li>
DSS protein elute.
	<ol>
<li>Gerekirse, her örnek için bir DSS çözülme. DSS (yaklaşık 1 mm çapında) küçük parçalara kesilmiş. Adet 400 µL PBS ile 1,5 mL tüp içine koyun.</li>
		<li>Örnekleri gecede 4 ° C'de sallamak Not: onları düşük yoğunlukta sallamak. PBS tüp kapak sallayarak sırasında ıslak değil.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Protein eluate serum örneği salgılanan protein/büyüme faktör analizine göre ELISA kiti talimatları, sonra uygun dilutions kullanın. Not: Bu yordam de DBP algılama9için çalışır. Diğer ELISA deneyleri için bir en iyi duruma getirme adım gerekli.</li>
</ol>

<ol><li>Bertagnolio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+drug+resistance+surveillance+using+dried+whole+blood+spots%5BTitle%5D)+AND+%22Antivir+Ther%22%5BJournal%5D)">HIV-1 drug resistance surveillance using dried whole blood spots.</a> Antivir Ther. 12 (1), 107-113 (2007).</li>
<li>Mei, J. V., Alexander, J. R., Adam, B. W., Hannon, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+filter+paper+for+the+collection+and+analysis+of+human+whole+blood+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nutr%22%5BJournal%5D)">Use of filter paper for the collection and analysis of human whole blood specimens.</a> J Nutr. 131 (5), 1631S-1636S (2001).</li>
<li>Garrido, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtype+variability%2C+virological+response+and+drug+resistance+assessed+on+dried+blood+spots+collected+from+HIV+patients+on+antiretroviral+therapy+in+Angola%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemoth%22%5BJournal%5D)">Subtype variability, virological response and drug resistance assessed on dried blood spots collected from HIV patients on antiretroviral therapy in Angola.</a> J Antimicrob Chemoth. 61 (3), 694-698 (2008).</li>
<li>Steegen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feasibility+of+detecting+human+immunodeficiency+virus+type+1+drug+resistance+in+DNA+extracted+from+whole+blood+or+dried+blood+spots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Feasibility of detecting human immunodeficiency virus type 1 drug resistance in DNA extracted from whole blood or dried blood spots.</a> J Clin Microbiol. 45 (10), 3342-3351 (2007).</li>
<li>Costenaro, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+load+detection+using+dried+blood+spots+in+a+cohort+of+HIV-1-infected+children+in+Uganda%3A+correlations+with+clinical+and+immunological+criteria+for+treatment+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Viral load detection using dried blood spots in a cohort of HIV-1-infected children in Uganda: correlations with clinical and immunological criteria for treatment failure.</a> J Clin Microbiol. 52 (7), 2665-2667 (2014).</li>
<li>Gong, Z. H., Tian, G. L., Huang, Q. W., Wang, Y. M., Xu, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+glutathione+and+glutathione+disulfide+in+the+blood+of+glucose-6-phosphate+dehydrogenase-deficient+newborns%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Reduced glutathione and glutathione disulfide in the blood of glucose-6-phosphate dehydrogenase-deficient newborns.</a> BMC Pediatr. 20 (17), 172(2017).</li>
<li>Lukacs, Z., Barr, M., Hamilton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Best+practice+in+the+measurement+and+interpretation+of+lysosomal+acid+lipase+in+dried+blood+spots+using+the+inhibitor+Lalistat+2%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">Best practice in the measurement and interpretation of lysosomal acid lipase in dried blood spots using the inhibitor Lalistat 2.</a> Clin Chim Acta. 471, 201-205 (2017).</li>
<li>Skogstrand, P. T., Bent, N. P., Schendel, D. E., Sørensen, L. C., Hougaard, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+measurement+of+25+inflammatory+markers+and+neurotrophins+in+neonatal+dried+blood+spots+by+immunoassay+with+xMAP+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous measurement of 25 inflammatory markers and neurotrophins in neonatal dried blood spots by immunoassay with xMAP technology.</a> Clin Chem. 51 (10), 1854-1866 (2005).</li>
<li>Amadori, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D+receptor+polymorphisms+or+serum+levels+as+key+drivers+of+breast+cancer+development%3F+The+question+of+the+vitamin+D+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Vitamin D receptor polymorphisms or serum levels as key drivers of breast cancer development? The question of the vitamin D pathway.</a> Oncotarget. 8 (8), 13142-13156 (2017).</li>
<li>Gupta, B. P., Jayasuryan, N., Jameel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+detection+of+hepatitis+B+virus+from+dried+blood+spots+by+polymerase+chain+reaction+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Direct detection of hepatitis B virus from dried blood spots by polymerase chain reaction amplification.</a> J Clin Microbiol. 30 (8), 1913-1916 (1992).</li>
<li>Colson, K. E., Potter, A., Conde-Glez, C., Hernandez, B., RíosZertuche, D., Zúñiga-Brenes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+commercial+ELISA+for+the+detection+of+measles-specific+immunoglobulin+G+%28IgG%29+in+dried+blood+spots+collected+from+children+living+in+low-resource+settings%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Use of a commercial ELISA for the detection of measles-specific immunoglobulin G (IgG) in dried blood spots collected from children living in low-resource settings.</a> J Med Virol. 87 (9), 1491-1499 (2015).</li>
<li>Drabe, C. H., Blauenfeldt, T., Ruhwald, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ELISA-based+assay+for+IP-10+detection+from+filter+paper+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">ELISA-based assay for IP-10 detection from filter paper samples.</a> Methods Mol Biol. 1172, 27-37 (2014).</li>
<li>St Julien, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+quality+genome-wide+genotyping+from+archived+dried+blood+spots+without+DNA+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High quality genome-wide genotyping from archived dried blood spots without DNA amplification.</a> PLoS One. 8 (5), e64710(2013).</li>
<li>Shaner, R. L., Schulze, N. D., Seymour, C., Hamelin, E. I., Thomas, J. D., Johnson, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+fentanyl+analogs+in+dried+blood+spots+by+flow-through+desorption+coupled+to+online+solid+phase+extraction+tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitation of fentanyl analogs in dried blood spots by flow-through desorption coupled to online solid phase extraction tandem mass spectrometry.</a> Anal Methods. 9, 3876-3883 (2017).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Bu iletişim kuralı laboratuarlar personel ya da kan örnekleri doğru kullanımı için gerekli altyapı var mı ne zaman kan ve serum filtre kağıt üzerinde depolamak için potansiyel inceler. Özellikle, tam kan veya serum standart tüpler veya parmak-hıyar tarafından toplanan bu yöntem kullanılarak depolanabilir ve hemen sonra kan toplama örnekleri-20 ° C veya-80 ° C dondurmak için gerek yoktur. DBS/DSS oda sıcaklığında kan/serum bütünlük içinde herhangi bir değişiklik olmaksızın 14 güne kadar kalabilir. Depolama birimi için kri...

Araştırmanın temel amacı kanser biyolojik içine tanı, predicting hasta prognoz ve bir hasta belirli bir tedaviye yanıt olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir yeni biyolojik parametreler tanımlamasıdır. Bu araştırma alanı yenilikçi kanser tedavileri keşfi için temel ve özel tedavisinde önemli bir rol oynar.
Her adımında biyomarker tanımlama ve doğrulama sırasında yürütülen yordamlar güvenilir ve tekrarlanabilir olmalıdır. Kan ve serum gibi biyolojik örneklerin doğru depolama translasyonel araştırma başarısı için bir taşıdır. Moleküler biyoloji deneyleri veya protein testleri gerçekleştirmek için kullanılan yüksek kaliteli biyolojik malzeme elde etme yolunda ilk adım bu.
Kadınlarında çalışmalar kez sağlam veri elde etmek için yeterli hasta işe almak için ihtiyaç vardır. Tüm kurumları örnekleri-80 ° C'de veya kuru buz içinde uluslararası diğer merkezlere örnekler göndermek için edebiliyoruz. Filtre kağıdı kullanımı kan koleksiyonu için kan ve serum depolamak için basit bir yöntemdir ve örnekleri1,2hemen dondurulması gerektirmez. Bir damla kan veya serum kuru gecede yaptı ve sonra 14 gün oda sıcaklığında1,2için depolanan kağıt üzerine lekeli olabilir. Bu araştırmacılar örnekleri diğer laboratuvarlar için göndermek için zaman verir. Kurumuş kan kullanımı (DBS) noktalar ve kurutulmuş serum noktalar (DSS) böylece gelişmiş ve gelişmekte olan ülkelerde kurumları arasındaki işbirliğini kolaylaştırmak.
Kullanım kolaylığı göz önüne alındığında, DBS örnekleme yaygın serolojik veya genetik aşağı akım analizleri için çeşitli deneyleri içinde kullanılır. Örneğin, geçmişte, DBS sık gelişmekte olan ülkelerde1,2,3,4,5' te eleme HIV için kullanılmıştır. Bu depolama yöntemi bir diğer avantajı kan örnekleri parmak-pislikler, böylece tarama testleri 6,7,8yenidoğan için kullanımı etkinleştirilmesi toplanan olduğunu. Kolay örnek kullanım ve taşıma vardır daha fazla DBS, avantajları özellikle uzak sitelerdeki toplanan örnekleri için olduğu yerde yok Labaratuar donanımları. Bir önceki yayın biz DBS ve DSS D vitamini ve D vitamini bağlayıcı protein (DBP) beyaz ve Afrika hastaların9bir dizi sınamak için kullanılır. Afrikalı meslektaşlarımıza Kuru buz elde etmek mümkün değildi. D vitamini yolu iki etnik nüfus arasındaki farklılıkları anlamak için biyolojik veri işaretleyicilerini karşılaştırmak için daha fazla eşleşen örnekler standart koşullar altında ve filtre kağıdı depolanmış yordam geliştirilmiş. DBS/DSS yordamı optimize sonra biz DBP ve her iki tabur hasta serumda D vitamini çözümlemek başardık. Biz de DNA ekstraksiyon işgal için tam kan ve DBS Afrikalılar9dan sonra bir dizi tek nükleotid polimorfizmleri (SNPs) değerlendirildi. Mevcut Protokolü kaliteli kan örnekleri karşıdan akış analizleri moleküler biyoloji ELISA deneyleri için arasında değişen farklı türde etkilemeden oda sıcaklığında saklanmasına izin verir. Bu Biyolojik materyallerde kadınlarında çalışmalarda yönetmek kullanmak veya standart depolama koşulları için imkanlar var mı merkezleri için tavsiye edilir. Aşağıdaki iletişim kuralı en iyi duruma getirilmiş bu yordamları doruk temsil eder.

<table><tbody><tr><td>Whatman protein koruyucu kartlar 903 Protein koruyucu kart, 100/pk&lrm;</td><td>Sigma</td><td>Z761575</td><td>Aşağı akış analizleri için numuneleri oda sıcaklığında saklamak için kullanışlıdır</td></tr><tr><td>Falcon Serolojik Pipetler, 5 mL</td><td>Kök hücre</td> <td># 38003</td><td></td></tr><tr><td>50-200 & mikro; L ipuçları</td><td>Star-Lab</td><td>S1120-8810</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL santrifüj tüpü</td><td>Eppendorf</td><td>4036-3204</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA mikrokiti</td><td>Qiagen</td><td>56304</td><td>Bu, küçük miktarlarda DNA'yı izole etmek için tasarlanmış bir DNA ekstraksiyon kitidir. &nbsp;</td></tr><tr><td>Tampon ATL (QIAamp DNA mikrokitinde bulunur)</td><td>Qiagen</td><td></td><td>Bu, metinde Lizis Tamponu 1 olarak bildirilir</td></tr><tr><td>Tampon AL (QIAamp DNA mikrokitinde bulunur)</td><td>Qiagen</td><td></td><td>Bu, metinde Lysis Tamponu 2 olarak bildirilir</td></tr><tr><td>QIAamp mini elute sütunu</td><td>Qiagen</td><td></td><td>Bu, metinde sütun olarak bildirilir</td></tr><tr><td>AW1&nbsp; (QIAamp DNA mikrokitine dahildir)</td><td>Qiagen</td><td></td> Bu, AW2&nbsp <td>METNINDE Yıkama Tamponu 1 olarak bildirilir</td></tr><tr><td>; (QIAamp DNA mikrokitine dahildir)</td><td>Qiagen</td><td></td> Bu, İnsan D Vitamini BP Kuantikin ELISA Kiti R& <td>metninde Yıkama Tamponu 2 olarak bildirilmiştir</td></tr><tr><td></td><td>. D sistemleri</td><td>DVDBP0</td><td></td></tr></tbody></table>

kan ve serum lekeler kanser biyolojik değerlendirmek örnek depolama için yararlı bir araç olarak kurutulmuş

Dried Blood and Serum Spots As A Useful Tool for Sample Storage to Evaluate Cancer Biomarkers

Kan örnek kalite gerçek zamanlı PCR veya ELISA gibi doğru aşağı akım analizleri sağlamak çok önemlidir. Biyolojik malzeme doğru depolama tekrarlanabilir ve güvenilir sonuçlar elde etmek için başlangıç noktasıdır. Tüm örneklerini aynı şekilde depolama birimine kan koleksiyonundan değerlendirilmelidir. Analizler yapılması için bağlı olarak, tam kan ve serum numuneleri-20 ° C veya-80 ° C kadar kullanmak saklanmalıdır. Kan/serum numuneleri de birden çok donma-çözülme önlemek için bölünmemeli olmalıdır. Bir başka önemli konu bir laboratuvar Sevikiyatta başka bir örnek koşullar bulunuyor. Kuru buz kullanılamaz veya sevk irsaliyesi birkaç günden daha uzun sürer, alternatif yaklaşımlar ihtiyaç vardır. Filtre kağıdı kan toplanması için kullanılmasını bir seçenektir. Burada, bir yöntem kan için önerdiğimiz ve yararlanır serum örnek toplama kan lekeleri (DBS) kurutulmuş ve serum noktalar (DSS) kurutulmuş. Biz DNA DBS bazı tek nükleotid polimorfizmleri (SNPs) aşağı akım değerlendirme için gerçek zamanlı PCR ayıklamak için prosedür geliştirilmiştir. Biz de DSS eluted proteinler başlayarak bir ELISA tahlil optimize. Bu yöntem diğer ELISA testleri veya yordamlar proteinler değerlendirilmesi ile kullanılabilir.

Biyolojik malzeme kalitesini etkilemeden kan ve serum oda sıcaklığında saklamak için DBS ve DSS yordamlar yararlandı. Şekil 1 protein kart koruyucu olmadan kan ve kan toplama sonra bir örneği gösterilir. Filtre kağıdı üzerindeki depolama ve kan elute yordamına örnek kalite ile karışmayın onaylamak için biz standart depolama yöntemleri ile bir karşılaştırma yapılacak. Biz DNA tam bir 2 mL tüp içinde toplanan veya DBS depolanan kan 3 eşleşen örnekleri olarak Pr...

Bu iletişim kuralı periferik kan ve serum/plazma tek nükleotit polimorfizmi (SNP) değerlendirme ve ELISA tahlil gibi aşağı akım analizleri için saklamak için basit ve kullanışlı bir yöntem açıklanır.

Kan ve Serum lekeler kanser biyolojik değerlendirmek örnek depolama için yararlı bir araç olarak kurutulmuş

Blood sample quality is crucial to ensure accurate downstream analyses such as real-time PCR or ELISA. Correct storage of biological materials is the ...

Bu yöntem, gelişmekte olan ülkelerden gelen hastalarda biyobelirteçleri inceleme şansı gibi translasyonel araştırmalardaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, kan ve serum örneklerini donmadan en az iki hafta saklama ve qPCR ve ELISA gibi sonraki analizler için yüksek kaliteli materyal sağlama imkanıdır. Bu tekniğin etkileri, kanser ve bulaşıcı hastalıklar gibi hastalıkların teşhisine kadar uzanır.Bu yöntem aynı zamanda doğum öncesi hastalıkların incelenmesi veya HIV gibi bulaşıcı patolojilerin analizi gibi tanı veya araştırma alanlarına da uygulanabilir. Bu yöntem için ilk olarak, donmuş örneklerin mevcut olmadığı bir Kafkas ve Afrika vaka serileri arasındaki biyobelirteçleri karşılaştırmaya başladığımızda aklımıza geldi. Kan lekeleme adımlarının öğrenilmesi zor olduğu için bu yöntemin görsel gösterimi çok önemlidir.Bu prosedürde, üç mililitre kan örneği, 5.4 miligram EDTA içeren üç mililitrelik bir tüpte toplanır. Koruyucu kartın sağ alt köşesine hasta kod numarasını yazın. Kanı beş mililitrelik bir pipetle dikkatlice tekrar askıya alın.Ardından, pipetleyin ve bir nokta kanı koruyucu karta aktarın. Her kan alikotu için yeni bir uç kullanarak, toplam üç ila beş kan lekesi elde etmek için lekelemeyi tekrarlayın. Kurumuş kan lekelerini veya DBS'yi, koruyucu kartın kapağı açık, emici olmayan bir yüzey üzerinde yatay konumda açık ve doğrudan güneş ışığından kaçınarak oda sıcaklığında gece boyunca kurumaya bırakın.Ertesi gün, kartı kullanana kadar oda sıcaklığında kurutucu madde içeren plastik bir torbada saklayın. Koruyucu karttan üç kurumuş kan lekesinden DNA çıkarılacaktır. DBS'nin her birini karttan keserek ve karttan ayırarak başlayın.Ayrılmış DBS'yi yaklaşık bir milimetre çapında küçük parçalar halinde kesin. Bir DBS'den küçük parçaları 1,5 mililitrelik bir santrifüj tüpüne yerleştirin. Numuneleri sindirmek için, tüpe ticari olarak temin edilebilen bir DNA ekstraksiyon kitinden 180 mikrolitre lizis tamponu ekleyin, ardından girdaplama yoluyla 20 mikrolitre proteinaz K.Mix ekleyin.Tüpü bir termo-inkübatöre yerleştirin ve 60 dakika boyunca 56 santigrat derecede çalkalayarak inkübe edin. Kuluçka işleminin sonunda, kapaktan damlaları çıkarmak için tüpü kısaca santrifüjleyin. 200 mikrolitre lizis tamponu iki ekleyerek ve 10 saniye boyunca girdaplayarak yıkamaya başlayın.Tüpü bir termo-karıştırıcıya yerleştirin ve 70 santigrat derecede 10 dakika inkübe edin. Elusion sütununu iki mililitrelik yeni bir toplama tüpüne yerleştirin ve eskisini atın. 500 mikrolitre yıkama tamponu ekleyin ve bir dakika boyunca yerçekiminin 6000 katında santrifüjleyin.Sütunu iki mililitrelik yeni bir toplama tüpüne yerleştirin ve eskisini atın. 500 mikrolitre yıkama tamponu iki ekleyin ve bir dakika boyunca yerçekiminin 6000 katında santrifüjleyin. Sütunu iki mililitrelik yeni bir toplama tüpüne yerleştirin ve eskisini atın.Membranı kurutmak için üç dakika boyunca yerçekiminin 20.000 katı sıcaklıkta santrifüjleyin. DNA'yı elüte etmek için, sütunu yeni bir 1.5 mililitrelik santrifüj tüpüne yerleştirin ve toplama tüpünü atın. Zarın ortasına 50 mikrolitre damıtılmış su koyun ve oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin.Tüpü bir dakika boyunca 20.000 kez yerçekiminde santrifüjleyin. Elute'u toplayın ve tekrar zarın ortasına yerleştirin. Tüpü bir dakika boyunca yerçekiminin 20.000 katında tekrar santrifüjleyin.Membranı atın. DNA konsantrasyonunu bir spektrofotometre kullanarak ölçtükten sonra, DNA'yı kullanılana kadar eksi 20 santigrat derecede saklayın. Bu prosedür için, yedi mililitre periferik kan örneği önce EDTA'sız yedi mililitrelik bir tüpte toplanır.Kan örneğini oda sıcaklığında 30 dakika pıhtılaşmaya bırakın. Koruyucu kartın sağ alt köşesine hasta kod numarasını yazın. Kan örneğini oda sıcaklığında yerçekiminin 1100 katı sıcaklıkta 15 dakika santrifüjleyin.Süpernatanı tüpten çıkarın ve 15 mililitrelik yeni bir tüpe aktarın. Kanı beş mililitrelik bir pipetle dikkatlice tekrar askıya alın. Pipetleyin ve bir nokta serumu koruyucu karta aktarın.Toplam üç ila beş kan lekesine sahip olmak için lekelemeyi tekrarlayın. Kurumuş sero lekelerini, koruyucu kartın kapağı açıkken oda sıcaklığında gece boyunca kurumaya bırakın. Ertesi gün, kartı kullanana kadar oda sıcaklığında kurutucu madde içeren plastik bir torbada saklayın.Depolama 14 günden uzunsa, eksi 20 santigrat derecede saklayın. Gerekirse her numune için DSS'yi çözerek ELISA testine hazırlanın. Proteini DSS'den çıkarmak için, bir DSS'yi yaklaşık bir milimetre çapında küçük parçalara kesin ve parçaları 1.5 mililitrelik bir tüpe koyun.Ardından, dört mikrolitre PBS ekleyin. Numuneleri gece boyunca dört santigrat derecede düşük hızda çalkalayın. Ertesi gün, ticari olarak temin edilebilen bir kit kullanılarak salgılanan protein veya büyüme faktörü analizi için serum örneği olarak protein elutun uygun bir seyreltmesini kullanın.Bu protokolde kan ve serum örnekleri oda sıcaklığında filtre kağıdı üzerinde kurumuş lekeler halinde saklanmıştır. Kan örneklemesinden önce ve sonra temsili bir protein koruyucu kart gösterilir. Filtre kağıdı üzerindeki depolamanın ve kan alma prosedürünün numune kalitesini etkilemediğini doğrulamak için, D vitamini bağlayıcı protein veya DBP seviyeleri için ELISA testleri, iki mililitrelik bir tüpte toplanan sekiz serum numunesi üzerinde gerçekleştirildi ve hemen eksi 80 santigrat derecede saklandı veya kurutulmuş serum lekeleri olarak toplandı.Eşleşen numuneler arasındaki varyasyon katsayısı veya CV %2 ile %24 arasında değişmekteydi ve ortalama CV %9.6 idi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 10, 15 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürü takiben, moleküler biyoloji veya protein analizinin sonraki yöntemleri gerçekleştirilebilir. Geliştirildikten sonra, bu teknik, translasyonel araştırma ve biyobelirteç analizi alanındaki araştırmaların, biyolojik numuneleri standart koşullarda saklayacak laboratuvar ekipmanına sahip olmayan dünyanın her yerinden enstitülerle işbirliği yapmasını sağlar.Bu videoyu izledikten sonra, kan örneklerinin kurumuş kan ve serum lekelerinde nasıl doğru bir şekilde saklanacağını iyi anlamış olmalısınız. Kan ve kimyasal reaktifle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman eldiven ve laboratuvar önlüğü giymek gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

dried-blood-serum-spots-as-useful-tool-for-sample-storage-to-evaluate

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Biyomarkerler hastalık veya sağlık direkt ölçülen biyolojik göstergelerdir. Nüfus ve sosyal bilimlerde, biyolojik belirteçler, taşıma elde etmek kolay, ve analiz etmek gerekir. Kurutulmuş Kan Noktası (DBS) koleksiyonu bu ihtiyacını karşılayan, yüksek yanıt oranları ile alanda toplanan ve biyomarkerler çeşitli analiz edilebilir.

Sağlık Biyomarkörler Kan Toplama Noktası Nüfus Etütleri Katılımını özdeyiş Kurutulmuş

Burada, basit bir manuel protein çökeltme adımı ve çevrimiçi kolon ekstraksiyonu kullanarak kurutulmuş kan lekelerinde immünosupresan takrolimusun miktarını belirlemek için yüksek performanslı bir sıvı kromatografisi-tandem kütle spektrometresi (HPLC-MS/MS) testini açıklıyoruz.

LC-MS / MS kullanarak Kurutulmuş Kan Spotlar Immünosupresan Tacrolimus Niceleme

Hazırlama ve işleme için onların son tahlilde kurumuş kan noktalar (DBS) hala kötü çoğu tanılama uygulaması standardize edilmiştir. Bu eksiklik üstesinden gelmek için kapsamlı adım adım iletişim kuralı önerdi ve daha sonra işaretleri viral enfeksiyonların algılama etkinliği ile ilgili olarak değerlendirildi.

Kurumuş kan lekeleri - hazırlanması ve uzun ve moleküler teknikleri kullanmak için işleme

Kutanöz tümörler genellikle Mohs mikrografik ameliyattan sonra atılır. Klinik destek personelinin klinik operasyonlara müdahale etmeden, aşağısındaki laboratuvar uygulamaları için kutanöz tümörün ( örn., Skuamöz hücreli karsinoma, bazal hücreli karsinoma ve melanom) örneklerini etkili bir şekilde işleyip saklayabilmesini sağlayan bir protokol açıklanmaktadır.

Kliniğe Dayalı Biyorepositoryum Kurulması

Burada, hastanın biyolojik sıvılarında (biyoluidler) bulunan DNA 'Yı dolaşarak tümör somatik mutasyonları tespit etmek için bir protokol sunuyoruz. Damlacık dijital polimeraz zincir reaksiyonu (dPCR) tabanlı yöntem, tümör mutasyonu allelik frekansının (MAF) ölçülmesini sağlar ve tümör yanıtının tanı ve temporal izlenmesi için minimal invaziv bir tamamlayıcı kolaylaştırır.

Hasta Biofluidinde tümör Ilişkili sirkülasyon DNA 'Sı tespiti ve Izlenmesi

Biyobankalar biyomedikal araştırmalar için çok önemli kaynaklardır ve Avrupa Onkoloji Enstitüsü'ndeki Translasyonel ve Dijital Tıp Birimi için Biyobanka bu alanda bir modeldir. Burada, biyobankaların farklı insan biyolojik numunelerinin yönetimi için standart çalışma prosedürlerinin ayrıntılı bir açıklamasını sunuyoruz.

Translasyonel Tıp için Biyobanka: Optimal Numune Yönetimi için Standart Çalışma Prosedürleri

Sıvı biyopsi, onkoloji translasyonel çalışmalarına yaklaşımımızda devrim yarattı ve örnek toplama, kalite ve depolama, başarılı klinik uygulaması için çok önemli adımlardı. Burada, çoğu translasyonel araştırma laboratuvarında uygulanabilecek aşağı akış dolaşımsız DNA uygulamaları için standartlaştırılmış ve doğrulanmış bir protokolü açıklıyoruz.

Aşağı Akış Dolaşımsız DNA Uygulamaları için Standartlaştırılmış Bir Sıvı Biyopsi Preanalitik Protokolü

Bu makalede, hücresiz DNA ve dolaşımdaki tümör hücreleri gibi maddeleri tam kandan kolayca ve verimli bir şekilde ayırmak ve toplamak için otomatik ekipmanın uygulanması açıklanmaktadır.

Kanserle İlgili Maddelerin Klinik Örneklerden Otomatik Olarak Ayrılması ve Toplanması

Biyobelirteç progastrin salgılayan peptid (ProGRP) ile örneklenen kurutulmuş serum örneklerinden düşük bollukta biyobelirteçlerin belirlenmesi için bir protokol sunulmuştur. Antikor kaplı manyetik boncuklar, proteotipik bir ProGRP peptidinin seçici temizliği ve zenginleştirilmesi için kullanılır. Yakalanan peptit daha sonra sıvı kromatografi-tandem kütle spektrometrisi ile analiz edilir.

Düşük Bolluktaki Proteinlerin Hedeflenen Kütle Spektrometrisine Dayalı Protein Analizinde Mikro Örnekleme

Bu protokol, radikal prostatektomi örneklerinden örneklerin toplanmasını kolaylaştırmak için bir yöntemi tanımlar. Amaç, örneklerden alınan doku örneklerini bir Biyobankada saklamadan önce anatomopatolojik kriterlere dayalı olarak haritalamak, karakterize etmek ve mikro-makro diseksiyon yapmaktır.

Geliştirilmiş Örnekleme Tekniği ve Histolojik Karakterizasyon ile Prostat Tümörü Biyobankacılık Güvenilirliğinin Artırılması

Bu protokol, nanopartiküller üzerinde kişiselleştirilmiş protein korona profili için SDS-PAGE analizini standartlaştırır ve kansere özgü imzaların tekrarlanabilir, ölçeklenebilir ve düşük maliyetli tespitini sağlar. Pankreas kanaltel adenokarsinomunun erken teşhisi için tasarlanmış olan bu cihaz, hem araştırma hem de klinik ortamlarda karmaşık proteomik yöntemlere pratik, GÜVEN uyumlu bir alternatif sunar.

Erken Kanser Tespitinde Kişiselleştirilmiş Protein Korona Profilleme için Standartlaştırılmış SDS-PAGE İş Akışı

Öğrenin kan ve serum örneklerini dondurmadan saklama yöntemini; bu teknik kanser ve enfeksiyon hastalıkları biyobelirteç analizi için yüksek kaliteli materyal sağlar.

Kan ve Serum lekeler kanser biyolojik değerlendirmek örnek depolama için yararlı bir araç olarak kurutulmuş

Daha fazla video keşfet