Name: Immunosurgery İnsan Embriyonik Kök Hücreleri türetilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-13T00:28:00.000+00:00
Duration: 11 min 56 s
Description: Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerinin immuno-cerrahi ile iç hücre kütlesinden izolasyonunu ve besleyici katman hücreleri üzerinde kültürünü. Bu yöntem, gelişim biyolojisi ve rejeneratif tıp araştırmaları için güvenilir bir protokol sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

AEC Tıbbi Araştırma ve Merck Araştırma Laboratuvarları Jane Tabut Childs Memorial Fonu bir adam. Biz deneysel danışma ve tartışma, D. Egli ve C. Cowan teşekkür ederim.

<html> Insan embriyonik kök (HES) hücre derivasyon için kullanılan Dondurulmuş insan embriyolarını uygun bilgilendirilmiş onam, Harvard Üniversitesi&#39;nde komitesi ve insan denekler üzerinde embriyonik kök hücre araştırmaları gözetim komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır araştırma protokol çerçevesinde aşağıdaki araştırma için bağışlandı . Aşağıda yazılı bir protokol Cowan ve arkadaşları tarafından yayınlanan parametreler üzerine dayanır. 2004, hafif değişiklikler. Embriyo Kültürü Quinn Advantage çözülme Kit ve kültürünün geliştirilmesine kadar genişletilmiş blastosist aşamasına kadar,% 15 Plasmanate ile desteklenmiş Küresel orta damla kullanarak insan embriyolarının çözülme. Iç hücre kütlesinden Immunosurgery tabanlı izolasyon Hazırlanması: <ol><li> 10cm plakaları her çözüm damla kurarak, zona pellusida ve immunosurgery kaldırılması plakaları (aşağıya bakın) hazırlayın. Buharlaşmasını önlemek için mineral yağ ile Yerleşimi. Derivasyon için tasarlanmıştır embriyo başına tek bir satır hazırlayın. <ul><li> EmbryoMax Asidik Tyrodes olduğu gibi kullanın. </li><li> embriyonik kök hücre türetme medya: 75% KO-DMEM, 10% KO-Serum Yedek,% 10 Plasmanate,% 2.5 ES hücre test fetal sığır serumu (FBS), 2mm Glutamax-I,% 1 non-esansiyel amino asitler, 50 adet / ml penisilin, 50μg/ml streptomisin, 0.055mM b-merkaptoetanol 5ng/ml bFGF. </li><li> Tavşan anti-insan kırmızı kan hücre birincil antikor, üretici firmanın önerisi, embriyonik kök hücre türetme medya ile 01:10 seyreltilmiş doğrultusunda sulandırılmış. </li><li> Gine domuzu tamamlayıcı serum, üretici firmanın önerisi, embriyonik kök hücre türetme medya ile 01:10 seyreltilmiş doğrultusunda sulandırılmış. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_9_18_6/574_Figure-01.png" alt="574_Figure-01" width="600" height="166" /> </li></ul></li><li> 37 ° C doku kültürü inkübatör kullanmadan önce bütün plakaları dengelenmesi. </li><li> Embriyolar transfer olarak kullanmak için 50μl 100μl kapiller pipetler (VWR) çekin. Elmas kalem ve 0.2μm filtresi ile donatılmış ağız pipet tüp kullanımı ile biter kesin. </li></ol> Immunosurgery Prosedürü: Notlar: <ul><li> Bu prosedürde, trophectoderm hücreleri, kompleman aktivitesi ile tandem insan hücrelerine karşı antikorlar yönettiği kısa maruz kalma yok. Bu nedenle blastosist sadece yapısal bütünlüğünü de immünolojik reaksiyon duyarlı olmaktan ICM engeller olarak, protokol, sağlam bir trophectoderm yüksek kaliteli embriyolar ile en iyi şekilde çalışır. </li><li> Tüm işlemler, ısıtılmış tabla ile donatılmış bir diseksiyon kapsamı kullanılarak yapılan. </li></ul> Adımlar: <ol><li> Embriyoların yapışmasını önlemek için FBS ile embriyo transferi için kullanılan ağız pipet durulayın. </li><li> Kültür çanak çanak AT embriyonik kök tutarak açılan blastokist transferi. </li><li> Embriyonik kök damla damla AT serisi ile blastokist transferi prosedürü başlayın. Üçüncü açılan zona pellusida (genellikle 5-30 saniye) kapatılması için izleyebilirsiniz. Aşırı tedavi veya embriyonun bütünlüğünü değil dikkatli olun bozulabilir. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_2/574_Figure-02.png" alt="574_Figure-02" width="551" height="273" /> </li><li> Embriyonik kök hücre türetme medya dizi transfer blastosist AT durulayın düşer. Medya ile pipet Preloading hemen tepki AT nötralize etmek için tavsiye edilir. Tüm işlenmiş AT kadar blastosist burada tutulabilir. </li><li> 37 30 dakika inkübasyon için üçüncü damla ° C doku kültürü inkübatörde bırakarak, primer antikor damla dizi blastokist transferi. </li><li> Embriyonik kök hücre türetme medya dizi transfer blastosist birincil durulayın düşer. </li><li> Trophectoderm hücrelerinin parçalanması izlemek için üçüncü bir damla bırakarak, tamamlayıcı damla dizi blastokist transferi. Lyse olarak trophectoderm hücrelerinin &quot;köpüren&quot; için sahnede ilk 30 saniye boyunca blastosist uyun. Lizis bu zaman dilimi içinde görülürse, tamamlanıncaya kadar tepki izlemek için mikroskop sahnede çanak tutmak. Ilk 30 saniye boyunca hiçbir köpüren görülürse trophectoderm çoğu parçalanmış kadar her 5 dakikada bir kontrol, inkübatör dönmek. Bu 5-15 dakika alabilir. Reaksiyon zamanı ve iç hücre kütlesi potansiyel zararı en aza indirmek için yakın reaksiyon izleyin. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_3/574_Figure-03.png" alt="574_Figure-03" width="571" height="273" /> </li><li> Transferi blastosist embriyonik kök hücre türetme medya dizi tamamlayıcı faaliyet yıkayın düşer. </li><li> Blastosist (10μl VWR kılcal tüpler çekilmiş) biraz daha küçük bir çapa sahip cam pipet kullanarak, parçalanmış trophectoderm en uzak şerit aşağı blastosist çizmek ve. g &quot;alt =&quot; 574_Figure-0 &quot;width =&quot; 577 &quot;height =&quot; 270 &quot;/&gt; </li><li> Levha ICM mitotik olarak inaktive edilmiş fare embriyo fibroblastlar (MEFS) besleyici hücreler üzerine izole. MEFS türetme bir gün önce hazırlanan ve embriyonik kök hücre türetme medya gün açık olmalıdır. 4-Nunc yemekleri türetme ilk adımlar için iyi çalışır. </li><li> İlk 1-2 gün için tabak Rahatsız etmeyin. Bundan sonra, embriyonik kök hücre kolonileri (1-2 hafta içinde genellikle belirgin) akıbet için günlük olarak kontrol edin. Medya her gün 3 gün başında yarım cilt olarak değiştirilmesi gerekir. </li></ol> ES hücre akıbet ve Pasajlanması Embriyonik kök hücre akıbet yaklaşık 0,5 mm veya daha fazla ulaştığında, mekanik seçerek genişlemesi için hazırdır. <ol><li> Mekanik akıbet yarısı dağıtmak ve taze besleyiciler içeren yeni plakalar transfer. Embriyonik kök hücre kümeleri her biri yaklaşık 30-50 hücreleri olmalıdır. Back-up ilk geçiş (p1) olarak akıbet diğer yarısı bırakın. Genişletmeye devam ediyor akıbet (p0) birkaç kez alınabilir. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_5/574_Figure-05.png" alt="574_Figure" width="639" height="219" /> </li><li> İkincil koloniler benzer dağınık ve yeni hücre hatları enzimatik tripsin ile Pasajlanması adapte edilebilir pasajlar bu süre 3-5 kadar büyük kültür yemekleri arasında açılabilir. ES hücre farklılaşması en aza indirmek için, kültür medya serum içeriği de yavaş yavaş bu ilk geçişleri sırasında% 1 ve% 0 olmalıdır. </li><li> Tüm kurulan embriyonik kök hücre hatları erken pasajların bir kısmı aşağı gelecek genişlemeler için dondurularak banked olmalıdır. </li><li> Buna ek olarak, her bir hücre hattı karyotip analizi ile karakterize edilebilir ve in vitro ve in vivo pluripotency ve farklılaşma çalışmalar tarafından doğrulandığı. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A., Klimanskaya, I., McMahon, J., Atienza, J., Whitmyer, J., Zucker, J. P., Wang, S. P., Morton, C. C., McMahon, A. P., Powers, D., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+embryonic+stem-cell+lines+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22N+ENGL+J+MED%22%5BJournal%5D)">Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts.</a> N ENGL J MED. 350 (13), 1353-1356 (2004).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek bir çıkar çatışması yoktur.

Burada sunulan protokol ile araştırmacılar sağlar, özlü, kolay iç hücre kütlesinden immunosurgical izolasyonu insan embriyonik kök hücre hatları elde etmek için nasıl ana hatları takip edin.

<table><tbody><tr><td>Quinn&amp;rsquo;s Advantage Çözme Kiti</td><td>Sage</td><td>ART-8016</td><td></td></tr><tr><td>Global ortam</td><td>Life Global</td><td>GMGB-050</td><td></td></tr><tr><td>Plasmanate</td><td>Talecris</td><td>61325</td><td></td></tr><tr><td>EmbryoMax Acidic Tyrodes</td><td>Chemicon International</td><td>MR-004-D</td><td></td></tr><tr><td>KO-DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>10829-018</td><td></td></tr><tr><td>KO-Serum Replasmanı</td><td>Invitrogen</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>ES hücre testi yapılmış fetal bovine serum, Tanımlanmış</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.03</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax-I</td><td>Invitrogen</td><td>35050-079</td><td></td></tr><tr><td>Esansiyel olmayan amino asitler</td><td>Invitrogen</td><td>11140-076</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant insan bazik fibroblast büyüme faktörü</td><td>Invitrogen</td><td>13256-029</td><td></td></tr><tr><td>Beta-merkapto&amp;#8211;etanol</td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan anti-insan eritrosit primer antikoru</td><td>Rockland Immunochemicals</td><td>109-4139</td><td></td></tr><tr><td>Gine domuzu kompleman serumu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-1639</td><td></td></tr><tr><td>10 µL, 50 µL, 100 µL boyutlarında kapiler pipetler</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hortumlu ağız pipetleri</td><td>VWR international</td><td></td><td>VWR kapiler pipetleri ile birlikte sağlanmıştır</td></tr><tr><td>0.2 µm Acrodisc şırınga filtresi</td><td>Pall Corporation</td><td>PN4192</td><td></td></tr><tr><td>0.5% Trypsin-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25300-120</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü kapları</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü kapları</td><td>Nalge Nunc international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Tokai Hit ThermoPlate ısıtma tablası ile donatılmış Nikon SMZ1500 diseksiyon mikroskobu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fare embriyonik fibroblastları (E12.5)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

immunosurgery İnsan embriyonik kök hücreleri türetilmesi

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Insan embriyonik kök hücrelerin kendi kendini yenilemek ve vücudun tüm hücre tipleri içine ayırt yeteneği ve geliştirme ve hastalık temel sorulara yanıt için bir araştırma aracı olarak hem tıbbi uygulamalar için çok ümit vericidir. Burada, embriyoların iç hücre kütlesinden immunosurgical izolasyonu ile insan embriyonik kök hücrelerin derivasyon için bir özlü, adım adım protokolü sağlar.

Immunosurgery İnsan Embriyonik Kök Hücreleri türetilmesi

İnsan embriyonik kök hücrelerinin kendilerini yenileme ve vücudun tüm hücre tiplerine farklılaşma yeteneği, hem ... hem de ... için büyük bir potansiyele sahip olduklarını göstermektedir.

Merhaba, benim adım Alice Chen. Melting laboratuvarında doktora sonrası araştırmacıyım ve bugün size insan embriyolarından embriyonik kök hücreleri nasıl elde ettiğimizi göstereceğim. Gelişimin farklı aşamalarındaki embriyoları teslim alıyoruz ve uygun genişlemiş blastokist aşamasına gelene kadar in vitro kültürleme işlemini gerçekleştiriyoruz.Bunlar, embriyonun ilk tek hücreli aşamadan erken blastosist evresine ve ardından insan embriyonik kök hücrelerini elde ettiğimiz genişlemiş blastosist evresine kadar nasıl geliştiğinin örnekleridir. Türetme için seçilen yüksek kaliteli embriyolar, ardından üç damla ACE çözeltisinden geçirilerek aktarılır; burada embriyoyu bırakıp zona pellucida'nın çözünmesini beklersiniz. Zonoliz işlemi, tavşan anti-insan antikorunun hücrelerin dış katmanına bağlanacağı spesifik olmayan bir işlemdir.Bu durumda, söz konusu olan trifecta derm'dir. Gine domuzu serum komplemanı uygulandığında, antikorla bağlanmış olan tüm bu hücreler lizize olacaktır. Başlamak için, üç plaka hazırlamak istiyoruz.İlk plak, zita'yı uzaklaştırmak için kullandığımız ACE tyros içindir. İkinci ve üçüncü plaklar immünosürjeri içindir. İlk olarak, asit tyros damlalarını ve insan embriyonik kök hücre derivasyonunu yerleştireceğimiz plağı hazırlayarak başlayacağım.Besiyeri damlaları. Plakanın sol tarafına üç damla asit tyros hazırlayın ve plakanın sağ tarafına üç damla insan ES kültür besiyeri hazırlayın. İkinci plaka, tavşan anti-insan RBC olan primer antikordan oluşur.Yine, plakanın sol tarafı birincil antikor için (embriyo başına üç damla) ve plakanın sağ tarafı insan ES kültürü için ayrılacaktır. Tamamlayıcı plaka için yine embriyo başına üç damla besiyeri damlatılacaktır. Tekrar belirtmek gerekirse, plakanın sol tarafına üç damla tamamlayıcı ve ardından plakanın sağ tarafına üç damla insan ES kültürü besiyeri yerleştireceğiz.Yine, her bir sıra bir embriyo için ayrılmıştır. Buharlaşmayı önlemek amacıyla her üç plaka da mineral yağ ile kaplanır ve dengeleme için inkübatöre yerleştirilir. Burası, doku kültüründe olduğu gibi laminar akışın bulunduğu bir toplama alanı içindeki diseksiyon mikroskobudur ve insan embriyosu manipülasyonlarının çoğunu burada gerçekleştiriyoruz.Embriyolarla çalışmaya başlamadan önce hazırlamanız gereken ilk şey ağız pipetleridir. Bu, ağzınız ile pipetin yerleştirileceği nokta arasına 0,2 mikronluk bir filtre yerleştirilmiş standart ağız pipeti tüpüdür. Bu işlem sadece steriliteyi sağlamak içindir.Ağız pipetlerinin nasıl çekildiğini göstereyim. Çeşitli boyutlarda çekmeyi tercih ediyorum. Bunların tamamını VWR'den temin edebilirsiniz; ben 10 µL, 50 µL ve 100 µL çaplarında çekmeyi tercih ediyorum.Şimdi montaj borusunu kesmek için elmas uçlu bir pin kullanıyorum. Bu ilk adımda, embriyonun tamamını yönettiğiniz için oldukça geniş bir çap istersiniz. Türetme için seçilen yüksek kaliteli embriyolar daha sonra üç damla üzerinden aktarılır.Sırasıyla birinci, ikinci ve üçüncü damlaya geçerek zap palitanın çözünmesini bekleyin. Bu işlem genellikle 30 saniyeden kısa sürer ve zap palitanın çözündüğünü aslında görebilirsiniz. Zap palita tamamen çözündüğünde.Embriyolar daha sonra, birinci, ikinci ve üçüncü yıkama damlalarından geçerek insan Es kültür medyumunun üç yıkama damlası aracılığıyla aktarılır. Ardından embriyo, yine birinci damladan ikinciye ve oradan üçüncüye geçerek primer antikor damlalarına aktarılır ve burada doku kültürü inkübatöründe yarım saat boyunca inkübasyona bırakılır. Trofektoderm lizizi, embriyonun dış kısmındaki hücrelerin kabarcıklanması görüldüğünde belirginleşir. Bu, trofektoderm hücrelerinin lizis olmaya başladığının göstergesidir.Lizis embriyonun tüm dış kenarı boyunca belirginleştiğinde, embriyo üç damla humanus kültür medyumu ile yıkanmaya hazır hale gelir. İmmünsürjiden sonra, embriyolar daha dar ağızlı bir pipet kullanılarak mekanik olarak tritüre edilir. Bu ağızlı pipet, liz trifektasını tıraşlama işlemini daha verimli hale getirebilmek için ilk pipetten daha küçük bir çapta olmalıdır.Dermal hücreler. Mekanik işlemin sonunda, merkezde bir hücre kümesi kalır. Burada, bozulmamış olan iç hücre kitlesi bulunmaktadır.Bunun çevresinde, bazı sağlam trifecta dermal hücrelerin yanı sıra birçok liz trifecta dermal hücre bulunmaktadır. Bu iç hücre kütlesi izolatı daha sonra, fare embriyonik besleyici tabaka hücreleri ile hazırlanmış bir kuyucuğa yerleştirilir. Besleyici tabaka hücreleri plakası bir önceki gece hazırlanmış olup, bu sabah besiyerini fare embriyonik fibroblast besiyerinden insan es derivasyon besiyerine değiştirdim.Ardından, tamamlamadan sonra yıkama damlalarındaki iç hücre kütlesi izolatı, besleyici tabaka hücrelerini içeren bu kuyucuğa aktarılır. Bu kap daha sonra inkübatöre geri yerleştirilir ve iç hücre kütlesi izolatının tutunmasına izin vermek için birkaç gün boyunca dokunulmadan bırakılır. Bu, dışa büyümenin nasıl geliştiğine dair bir örnektir.Outgrowth yeterince büyüdüğünde, bu outgrowth'ü ikiye bölerek ilk pasajı başlatabiliriz. Orijinal türevlemeden bu yana 14 gün geçmiştir ve burada türevlemelerimizden birine ait bir outgrowth örneği yer almaktadır.Bu, bugün büyümenin yarısını koparacağım örnek bir büyümedir. Bu büyüme ikiye bölünecek ve ardından kare parçalar halinde kesilecek; bu parçaların her biri, besleyici hücreler içeren yeni bir kuyucuğa aktarılacaktır. Hücrelerinizi çoğaltmak ve gerçekleştirdiğiniz pasajları yedeklemek için geri dönebileceğiniz sürekli bir hücre kaynağına sahip olmak adına, büyümenin yarısını el değmemiş bırakmak iyi bir fikirdir.İlk iki ila üç pasaj için. Bu şekilde mekanik pasajlama yapmak ve hücreleri daha verimli pasajlama için nihayetinde enzimatik disosiyasyona adapte etmek iyi bir fikirdir. Laboratuvarımız, gelişimi ve farklılaşmayı kullanmak ve anlamak amacıyla tutarlı bir şekilde insan embriyonik kök hücre hatları türetmektedir.Bu hatlar ayrıca dünya genelindeki kök hücre araştırmacılarına da dağıtılmaktadır. Türetme işleminin başarısını etkileyen dört temel faktör olduğunu düşünüyorum. Birincisi, genetik arka plana, embriyoların ne kadar iyi dondurulduğuna ve çözdürüldüğüne ve ayrıca blastokist aşamasındaki türetme aşamasına kadar olan in vitro kültür kalitesine bağlı olan embriyo kalitesiyle ilgilidir.İkinci faktör muhtemelen izolasyon sonrası iç hücre kitlesinin kalite bütünlüğüdür; bu durum, iç hücre kitlesini izole etmek için kullanılan tekniğe ve ayrıca deneyim ile beceriye bağlı olabilir. Üçüncü faktör, izole edilen iç hücre kitlesinin besleyici tabakalara ne kadar iyi tutunduğudur ve dördüncü faktör ise bu ICM izolatının büyümesidir. Bunun teknik olarak zor bir süreç olduğunu düşünmüyorum.Sadece biraz pratik gerektiriyor. Aslında her adım oldukça basit, bu nedenle protokole sadık kaldığınız ve biraz pratik yaptığınız sürece herkesin bunu yapabileceğini düşünüyorum. Laboratuvarda tespit ettiğimiz şey, tam olarak nedenini anlamadığımız sebeplerle her hücre hattının biraz farklı olduğudur.Örneğin, 10 hattın farklılaşma potansiyelini test edecek olursanız, belki bu hatların ikisi veya üçü, ilgilendiğiniz hücre tipine dönüşmeye daha yatkın olabilir. Bu farklılıkların, embriyonik kök hücre hatlarının türetildiği embriyo evresiyle ve bu hücrelerin manuel işlemleriyle ilgili olduğunu düşünüyorum. Hücre hatlarının heterojenliğinin ve potansiyellerinin bazen değiştiği kanaatindeyim ve bu durum, her kök hücre araştırmacısının aklında tutması gereken bir konudur.Yine belirtmek isterim ki, buna neyin sebep olduğunu bilmiyorum ancak araştırmamdan bir örnek verecek olursam, nihai hedefimiz pankreasın insülin üreten beta hücrelerini oluşturmaktır. Bu tip bir hücre hattı oluşturmaya yönelik ilk adım, embriyonik kök hücrelerden endoderm üretmektir ve 10 ila 20 hat arasında yaptığımız karşılaştırmada gördük ki, bu hatların bir veya ikisi verimli bir şekilde endoderm üretebilirken, yarısı belki daha az verimli endoderm üretebiliyor ve bazıları ise endodermi hiç iyi üretemiyor. Dolayısıyla, bu ilk tarama süreci aracılığıyla, ilgilenilen hücre tipini oluşturmaya daha yatkın olan hücreleri seçiyoruz ve geri kalan diferansiyasyonu bu hücre tiplerini kullanarak gerçekleştiriyoruz.İnsan embriyonik kök hücrelerinin ilk türetilmesi 1998 yılında Thompson ve arkadaşları tarafından rapor edilmiş ve 2004 yılında laboratuvarımız 17 yeni insan embriyonik kök hücre hattının türetildiğini bildirmiştir. Yayınlanmış olan bu protokollerde, türetme sürecini daha verimli hale getirmek amacıyla bazı modifikasyonlar yapılmıştır. Bu modifikasyonlar; medya kompozisyonundaki değişiklikleri, hücrelerin pasajlanma yöntemini ve dondurulup çözülme biçimini kapsamaktadır.O zamandan beri, her türetme işleminde, protokolü ve türetme hızını iyileştirmek için yeni yollar arıyoruz. Örneğin, laboratuvarımız; tavşan antikoru veya Gine dombezi serum komplemanı gibi kseno reaktifler kullanmak yerine, iç hücre kitlesini daha mekanik olarak disseke ederek izole etmenin alternatif yollarını araştırıyor. Umuyoruz ki bu yöntemler, iç hücre kütlesini izole etmek için en azından benzer, hatta daha iyi bir yola olanak sağlayacaktır.

derivation-of-human-embryonic-stem-cells-by-immunosurgery

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol detayları fare embriyonik kök hücreler (ESC) ve ölümcül ışınlanmış alıcı farelere sonraki enjeksiyon transplante hematopoietik kök hücre türetme. Kısaca ESC embriyoid organları, sonra retroviral HoxB4 ve OP9 stromal hücreler ve hematopoetik sitokinlerin birlikte kültürlü ile enfekte olarak ayırt edilirler.

Murin Embriyonik Kök Hücre Hematopoetik Kök Hücre türetilmesi

Bu video indüklenebilir lentivirüs kullanarak bağlı pluripotent kök hücreleri üretmek için prosedürü ifade Oct4, Sox2, c-Myc ve Klf4 gösterir.

Sox-2 Zorla İfade yoluyla MEFS iPS Hücreler oluşturma, Eki 4, c-Myc ve Klf4

Ilkel germinal hücrelerin ayırt etmek için erken geliştirme aşamasında, embriyonik germinal hücreler, kanser ve kısırlık hakkındaki hipotezi adresine yeteneği mükemmel bir model. Bu protokol, 10,5-11,5 gün coitum fare embriyoları, gelişmekte olan gonadlar ilkel germinal hücreleri izole etmek için nasıl gösterir.

Fare Embriyonik Germinal Hücreleri İzolasyon ve türetilmesi

Belirli hücrelerin içine hESC Yönetmen farklılaşma, rejeneratif tıp alanında büyük ilgi yarattı. Biz belirlemek için bir özlü, adım-adım...

Teratom Oluşumu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kader Haritalama

Fare embriyonik kök hücreleri, OP9-DL1 ko-kültür sistemi kullanılarak in vitro olarak T hücrelerine farklılaştırılabilir. Bu prosedürde başarı, reaktif/hücre bakımına ve tekniğe duyarlı temel adımlara dikkat edilmesini gerektirir. Burada bu kritik parametreleri tartışıyor ve bu teknolojinin benimsenmesini teşvik etmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

T hücrelerinin türetilmesi İn Vitro Fare Embriyonik Kök Hücreleri

Uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi otolog nakli türetilmesi için ilginç umutları sağlar. Ancak, pluripotent devlet ve zahmetli yeniden farklılaşma yoluyla ilerleme hala klinik çeviri engellemektedir. Burada erişkin insan fibroblast türetme ve uyarılmış nöral progenitör hücrelerin içine doğrudan dönüşüm ve nöral soy içine sonradan farklılaşmayı açıklar.

Yetişkin İnsan Fibroblastları türetilmesi ve Genişletilebilir Sinir Progenitör Hücreler içine Doğrudan Dönüşüm

İnsan pluripotent kök hücrelerinin (hPSC'ler) genom düzenlemesi hızlı ve verimli bir şekilde yapılabilir. Burada, EGFP'yi eksprese etmek ve antibiyotik direncini ortaya çıkarmak için AAVS1 güvenli liman lokusunun düzenlenmesiyle örneklendiği gibi, hPSC'leri genetik olarak tasarlamak için sağlam bir deneysel prosedür sunulmaktadır.

Genom düzenlenmiş İnsan Pluripotent Kök Hücre Hatları oluşturulması: İzolasyon hedefleyen Gönderen

Burada, alt uygulamalar ve diğer farklılıklar iyileştirilmesi için kesin endoderm doğru kararlı farklılaştırılmış insan embriyonik kök hücrelerinin saflaştırılması için bir yöntem açıklanmaktadır.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Yaratılan Endoderm Hücrelerinin Saflaştırılması Hızlı ve Etkin Yöntem

Bu protokol, HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre tabanlı tasarlanmış bağışıklığa sahip insanlaştırılmış bir kemik iliği/karaciğer/timus fare modeli oluşturma yöntemlerini açıklar.

Insanlaşmış Fare Modelinde HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre Tabanlı Engineered Bağışıklık

Bu makalede, verimli bir şekilde elde ve pluripotent kök hücre satırlarından fare embriyoların blastosist aşamasında kültür için bir protokol.

Fare Preimplantasyon embriyo kök hücre satırlarından türetme

Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerinin immuno-cerrahi ile iç hücre kütlesinden izolasyonunu ve besleyici katman hücreleri üzerinde kültürünü. Bu yöntem, gelişim biyolojisi ve rejeneratif tıp araştırmaları için güvenilir bir protokol sunar.

Immunosurgery İnsan Embriyonik Kök Hücreleri türetilmesi

Daha fazla video keşfet