Name: Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Öğrenin floresans moleküler tomografi kullanarak glioblastoma ksenograftlarını canlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik beyin tümörü biyolojisi ve tedavi yanıtlarını invaziv olmayan şekilde izlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Frederick Lang, MD Anderson Kanser Merkezi GBM-PDX neurospheres için teşekkür ederim. Bu eser yenilgi GBM araştırma işbirliği tarafından Ulusal beyin tümörü toplum (Frank Furnari), R01-NS080939 (Frank Furnari), James S. McDonnell Vakfı (Frank Furnari); bir iştiraki desteklenmiştir Jorge Benitez bir ödülü Amerikan beyin tümörü Derneği (ABTA) üzerinden tarafından desteklenen; Ciro Zanca kısmen bir Amerikan-İtalyan kanser Vakfı doktora sonrası araştırma bursu tarafından desteklenmiştir. Frank Furnari maaş ve ek destek Ludwig Enstitüsü'nden kanser araştırmaları için alır.

Deneysel araştırma hayvanlar ve lentivirus kanser hücrelerinin transduce gibi bulaşıcı hayvan Kurulusları program tarafından ve kurumsal Biyogüvenlik Kurulu tarafından önceden onay gerektirir. Bu iletişim kuralı (UCSD) University of California San Diego hayvan bakımı kuralları izler.
1. FP635 veya FP720 yapı Glioblastoma hücrelerle etiketlerine göre
<ol><li>Üretmek ve lentivirus Tiscornia vd tarafından açıklanan protokolüne göre arındırmak 12
</li>
	<li>Kültür yaklaşık 2.0 x 106 DMEM artı % 10 fetal sığır serum (FBS) 15 cm tabak içinde insan gliyom hücre satırıyla hücrelerden; ya da kültür 2.0 x 106 insan glioblastoma hasta kaynaklı (GBM-PDX) yuvar DMEM ile/B27 ile F12 1:1 orta takviyesi plus insan rekombinant epidermal büyüme faktörü (EGF; 20 ng/mL) ve FGF (10 ng/mL) bir T75 şişesi içinde.</li>
	<li>37 ° C, % 5 CO2ve %100 bağıl nem tüm hücreleri korumak.</li>
	<li>Hücreleri ayırmak.<ol>
<li>Tümörü hücreler için: süpernatant plakalar kaldır ve tripsin 1 X 3-5 mL gliyom hücrelere ekleme.</li>
		<li>GBM için yuvar: 15 mL tüp içine hücreleri pipetting tarafından hücreleri toplamak.<ol>
<li>Spin aşağı GBM küreler 200 x g masa üstü bir santrifüj oda sıcaklığında kullanarak 5 min için de.</li>
			<li>Süpernatant kaldırın ve 3-5 mL hücre dekolmanı çözeltisi ekleyin.</li>
		</ol>
</li>
		<li>10-15 dk 37 ° C'de tüm hücreleri kuluçkaya.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hücreleri yukarı ve aşağı birkaç kez pipetting tarafından özenle ayırmak (küreler ve tümörü hücreleri tamamlandığından emin olun Disosiye) ve 5 min için 200 x g aşağı spin.</li>
	<li>Süpernatant kaldırın ve yukarı ve aşağı birkaç kez pipetting tarafından orta 5 mL hücrelerle resuspend. Hücre canlılığı trypan mavi dışlama tarafından belirler.</li>
	<li>Plaka 1.0 x 106 hedef hücre 10 cm tabak ile 5 mL pipetting tarafından orta de.</li>
	<li>Hücreleri enfeksiyon (MOI) Tiscornia vd tarafından açıklandığı gibi 5 çokluğu, floresan proteinler ifade lentivirus ile transduce 12 ve 37 ° C'de kuluçkaya</li>
	<li>24 saat sonra orta transduced hücrelerden kaldırma, taze orta 5 mL ekleyin ve ek 48 h 37 ° C'de için kuluçkaya</li>
	<li>Enfekte hücreleri tek hücre süspansiyon adımlarda 1.4-1.6 açıklandığı içine ayırmak. Hücreleri 200 x g 5 min için de aşağı spin ve 500 µL çözüm sıralama resuspend (fosfat tamponlu tuz (PBS) % 1 FBS).</li>
	<li>Hücre süspansiyon FACS tüpler içine pipette. 1 µL/mL 4', ölü hücreleri dışlamak için 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) dihydrochloride hücrelerle birlikte leke. Negatif denetimleri Akış Sitometresi kapıları ayarlamak için gerekli (sigara transduced hücreleri ve sigara transduced hücreleri / DAPI lekeli).</li>
	<li>Floresan-pozitif/DAPI-negatif hücreleri çözüm, sıralama içine Basu vd tarafından açıklandığı gibi sıralama 13ve 15 mL konik tüp içine sıralanmış hücreleri toplamak.</li>
	<li>Spin aşağı 200 x g 5 min için de sıralanmış hücreleri, süpernatant kaldırmak ve kültür orta 5 mL resuspend. Tohum pipetting tarafından bir 10 cm çanak sıralanmış hücrelerde. En az 48-72 saat için 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
	<li>Hücreleri dissociating tarafından sıralanmış hücreleri genişletin aşağıdaki adımları 1.4-1.6 ve içine birden çok yemekler vivo deneyler için kaplama. Not: hücre hazırlık ve arıtma sıralama hakkında daha fazla bilgi için bkz: Basu vd. 13
</li>
</ol>2. immünyetmezligi fareler içine iRFP öğesini Glioblastoma hücre kafa içi enjeksiyon
Not: ameliyat başlamadan önce Araçlar ve cerrahi Oda yordamı için temiz olduğundan emin olun. İmmünyetmezligi korele çıplak (Foxn1nu) erkek ya da dişi fareler, 4-5 hafta yaşlı ve kafa içi enjeksiyonlar için 17-19 g arasında kullanın. Hayvanlar en az 3 gün boyunca geldikten sonra ve ameliyattan önce yer.
<ol><li>Hücre hazırlık<ol>
<li>Hasat ve floresan pozitif tümörü hücreleri tek hücre süspansiyon (Adım 1.4-1.6) ayırmak ve 2-5 µL PBS enjeksiyon hayvan başına ücret, 0,5 veya 1.0 x 106 hücrelerde resuspend. 1.5 mL microcentrifuge tüp ve buz üzerinde yer içine hücre süspansiyon pipette.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Anestezi hazırlama ve yönetim<ol>
<li>200 µL serum fizyolojik çözüm ketamin (100 mg/kg) ve xylazine fare vücut ağırlığının 20 gram (10 mg/kg) içeren hazır olun. Hayvanlar tartmak ve anestezi uygun doz hesaplayın.</li>
		<li>Mayi iğne anestezi sağlamak ve oftalmik merhem su kaybı önlemek için gözler için geçerlidir. Bu adım hakkında daha fazla bilgi için bkz: Kathleen vd. 14 Place bir Önceden ısıtılmış su termal yastık 37 ° C'de üzerinde hayvan</li>
		<li>Hayvanların ayak çimdik yanıt (pedal refleks), izleme tarafından genellikle 5-10 dk içinde anestezi ki kontrol edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kafa içi enjeksiyon<ol>
<li>5 µL yük Hamilton şırınga (künt ucu iğne) hücre süspansiyon ve sonda tutucu bağlama ile.</li>
		<li>Fareyi bir küçük hayvan stereotaksik çerçevesine yerleştirin ve kulak Bar ve çetin vd tarafından açıklanan detayları takip kesici bağdaştırıcısı kullanarak kafa tamir 15
</li>
		<li>Başından % 70 etanol ve betadine solüsyonu ile dezenfekte. Cerrahi sitesi olduğunu tamamlamak steril emin. Küçük bir neşter ile orta bir kesi gerçekleştirmek ve cilt ve bağ dokusu ayrı.</li>
		<li>Hamilton şırınga micromanipulator kullanarak bregma noktasına yerleştirin.</li>
		<li>Sonda tutucu 1.0 mm hastanın ve 2.0 mm yanal bregma noktasından hareket. Bu konumunu bir kalemle işaretlemek.</li>
		<li>Bu konumda dikkatle kan damarları görünür olana kadar aşağı doğru hafif basınç uygulayarak bir micromotor el matkapla kafatası içinde bir delik açın. Araknoid mater ve beyin parankimi bozmak değil.</li>
		<li>İğne burr deliğe tanıtmak ve pial yüzeyinin altında 3,0 mm ilerlemek.</li>
		<li>Birim (2-5 µL) ve akış hızı (1 µL/dak) motorlu stereotaksik enjektör kullanarak enjeksiyon ayarlamak veya el ile enjeksiyon gerçekleştirir.</li>
		<li>Enjeksiyon sonra iğne yavaş yavaş 1.0 mm her 1dk artan tarafından çıkarın ve % 70 etanol ile enjeksiyon yeri temizleyin.</li>
		<li>Yakın cilt cerrahi zımba ile veya cerrahi dikiş (genellikle dikiş anılacaktır) yaparak yara ve Kathleen ve ark. görmek 14 daha fazla ayrıntı için.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hayvan Kurtarma<ol>
<li>Hayvan su termal pad (37 ° C) için aktarım ve vücut ısısı, solunum hızı ve kalp hızı, tam kurtarma kadar izlemek. Analjezi başına standart iletişim kuralları yönetmek. Not: diğer raporları5,14,15cerrahi ve koordinatları, stereotaktik yordam hakkında daha fazla bilgi için bkz:.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. FMT görüntüleme
Not: deneysel amacı göre iRFP öğesini glioblastoma hücreler olabilir önce sırasında veya tedaviden sonra vivo içinde izlenen. İçin amaç düşsel, hayvanlar isoflurane indüksiyon odası kullanarak anestezi, tarama ve görüntü FMT Imager yerleştirme istasyonundaki sırasında görüntüleme bir kasete koru.
<ol><li>Kafes ve isoflurane indüksiyon odası yerde hayvan kaldırın. Odası kapatın ve oksijen akışı ve % 3-5 için Buharlaştırıcı açın.</li>
	<li>Hayvan izlemek kadar tamamen anestezi, genellikle 1-2 dk. baygın içinde hayvanlar dış uyaranlara yanıt.</li>
	<li>İmzalat hayvan odasından kaldırın ve hayvan görüntüleme kasete ilk olarak, baş adaptör yerleştirerek koymak aşağı bakacak şekilde hayvan yerleştirerek takip ettim. Baş kaset ortasına bulunduğundan emin olun.</li>
	<li>Kaset üst plaka üstüne yerleştirin ve ayar düğmeleri 17 mm kadar sıkın.</li>
	<li>Bir kez bu hayvan görüntüleme kasete güvenlidir, görüntüleme için kaset nerede isoflurane pompalanır anestezi hayvan tutmak için iç Dok FMT Imager ekleyerek devam edin.</li>
	<li>Imager ve analyzer yazılımı yazılım simgesini çift tıklatarak çalıştırın.</li>
	<li>"Deneysel sekmesi" penceresinde, "Veritabanı" ve "çalışma grubu" seçin.</li>
	<li>"Tarama sekmesini" pencereye git ve görüntü konuya "konu seçin" tıklatarak seçin. Ayrıca, "Lazer kanal" panelinde lazer kanalını seçin. FP635 etiketli hücreleri için "lazer kanal 635 nm" seçin ve "Kanal 680 nm lazer" FP720 etiketli hücreleri için seçin.</li>
	<li>Bir görüntü elde etmek "Tarama sekme" penceresinde "Yakalama" seçeneğini tıklatarak. Sonra tarama alanını tıklatıp kaynak konumları, genellikle içinde 20-25 kaynakları Ipsilateral tarafı için kararlı bir dizi için yakaladığınız görüntüyü tarama alanına sürükleyerek ayarlayın.</li>
	<li>"Yeniden yapılanma Kuyruğa Ekle" seçeneğini işaretleyin ve "Tarama" "Tarama sekmesini" penceresinde vurmak.</li>
	<li>Tarama tamamlanana kadar bekleyin ve ardından görüntüleme kaset takma biriminden çıkarma.</li>
	<li>Kaset üst plaka çıkarın ve hayvan arka kafesin içine yerleştirin.</li>
	<li>Tekrarlamak belgili tanımlık merdiven 3.1-3.12 hayvanları geri kalanı için.</li>
</ol>4. görüntü analizi
<ol><li>Imager ve analyzer yazılımı, "Analiz sekmesi" pencereyi seçin.</li>
	<li>Veri kümesi ve konu "Analiz sekmesi" penceresinin "Veri kümesi seçimi" panelinde "+" düğmesini tıklatarak analiz etmek için yükleyin.</li>
	<li>"Analiz sekmesi" penceresinde görüntü yüklendikten sonra "Analiz sekmesi" penceresinin sol üst köşesinde bulunan elips simgesini seçerek bölgesi faiz (ROI) analizi gerçekleştirin.</li>
	<li>Eşik "istatistik veri" panelinde yanında doğru tıkırtı "Analiz sekmesi" penceresinde "eşik" sütun sıfır olarak ayarlayın.</li>
	<li>Toplam değer "İstatistik veri" Masası'ndaki fare beyninde implante floresan öğesini glioblastoma hücrelerden sinyali temsil eder.</li>
	<li>4.2-4.4 hayvanları geri kalanı için yineleyin. Yüklemek veya yeni bir konu kaldırmak "+" veya "−" düğmesini, sırasıyla, "Analiz sekmesi" pencere "Veri kümesi seçimi" panelinde. Not: FMT görüntüleme ve yazılım işlemi hakkında daha fazla bilgi için bkz:20.
</li>
</ol>

<ol><li>Ostrom, Q. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CBTRUS+Statistical+Report%3A+Primary+Brain+and+Other+Central+Nervous+System+Tumors+Diagnosed+in+the+United+States+in+2009-2013%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">CBTRUS Statistical Report: Primary Brain and Other Central Nervous System Tumors Diagnosed in the United States in 2009-2013.</a> Neuro-Oncology. 18 (suppl_5), v1-v75 (2016).</li>
<li>Pauli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Personalized+In+Vitro+and+In+Vivo+Cancer+Models+to+Guide+Precision+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine.</a> Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).</li>
<li>Stewart, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Utility+of+Patient-Derived+Xenografts+to+Determine+Biomarkers+of+Prognosis+and+Map+Resistance+Pathways+in+EGFR-Mutant+Lung+Adenocarcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Clinical Utility of Patient-Derived Xenografts to Determine Biomarkers of Prognosis and Map Resistance Pathways in EGFR-Mutant Lung Adenocarcinoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (22), 2472-2480 (2015).</li>
<li>Gao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+using+patient-derived+tumor+xenografts+to+predict+clinical+trial+drug+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening using patient-derived tumor xenografts to predict clinical trial drug response.</a> Nat Med. 21 (11), 1318-1325 (2015).</li>
<li>Ozawa, T., James, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+Intracranial+Brain+Tumor+Xenografts+With+Subsequent+Analysis+of+Tumor+Growth+and+Response+to+Therapy+using+Bioluminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishing Intracranial Brain Tumor Xenografts With Subsequent Analysis of Tumor Growth and Response to Therapy using Bioluminescence Imaging.</a> J. Vis. Exp. (41), e1986(2010).</li>
<li>Kondo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+brainstem+tumor+model+using+in+vivo+bioluminescence+imaging+in+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Child%27s+Nervous+System%22%5BJournal%5D)">An experimental brainstem tumor model using in vivo bioluminescence imaging in rat.</a> Child's Nervous System. 25 (5), 527-533 (2009).</li>
<li>Nyati, S., Young, G., Ross, B. D., Rehemtulla, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNyati%2C+S+%22ATM+Kinase%3A+Methods+and+Protocols%22">ATM Kinase: Methods and Protocols</a>. Kozlov, S. V. , Springer. New York. 97-111 (2017).</li>
<li>Kondo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+assessment+of+regional+directed+delivery+in+a+rodent+malignant+glioma+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Longitudinal assessment of regional directed delivery in a rodent malignant glioma model.</a> J Neurosurg Pediatr. 4 (6), 592-598 (2009).</li>
<li>Badr, C. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBadr%2C+CE+%22Bioluminescent+Imaging%3A+Methods+and+Protocols%22">Bioluminescent Imaging: Methods and Protocols</a>. Badr, C. E. , Humana Press. 1-18 (2014).</li>
<li>Shcherbakova, D. M., Verkhusha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+fluorescent+proteins+for+multicolor+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Meth%22%5BJournal%5D)">Near-infrared fluorescent proteins for multicolor in vivo imaging.</a> Nat Meth. 10 (8), 751-754 (2013).</li>
<li>Filonov, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bright+and+stable+near-infrared+fluorescent+protein+for+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotech%22%5BJournal%5D)">Bright and stable near-infrared fluorescent protein for in vivo imaging.</a> Nat Biotech. 29 (8), 757-761 (2011).</li>
<li>Tiscornia, G., Singer, O., Verma, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+and+purification+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protocols%22%5BJournal%5D)">Production and purification of lentiviral vectors.</a> Nat. Protocols. 1 (1), 241-245 (2006).</li>
<li>Basu, S., Campbell, H. M., Dittel, B. N., Ray, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+Specific+Cell+Population+by+Fluorescence+Activated+Cell+Sorting+%28FACS%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Purification of Specific Cell Population by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS).</a> J. Vis. Exp. (41), e1546(2010).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li>
<li>Cetin, A., Komai, S., Eliava, M., Seeburg, P. H., Osten, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+gene+delivery+in+the+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protocols%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic gene delivery in the rodent brain.</a> Nat. Protocols. 1 (6), 3166-3173 (2007).</li>
<li>Benitez, J. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/ncomms15223">PTEN regulates glioblastoma oncogenesis through chromatin-associated complexes of DAXX and histone H3.3.</a> Nature Communications. 8, 15223(2017).</li>
<li>Kirschner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+Orthotopic+Glioblastoma+Xenografts+in+Mice+Using+a+Clinical+CT+Scanner%3A+Comparison+with+Micro-CT+and+Histology%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Imaging of Orthotopic Glioblastoma Xenografts in Mice Using a Clinical CT Scanner: Comparison with Micro-CT and Histology.</a> PLOS ONE. 11 (11), e0165994(2016).</li>
<li>Mannheim, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+Small+Animal+Imaging-Current+Status+and+Future+Prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Imaging+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Standardization of Small Animal Imaging-Current Status and Future Prospects.</a> Molecular Imaging and Biology. , (2017).</li>
<li>Engblom, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblasts+remotely+supply+lung+tumors+with+cancer-promoting+SiglecFhigh+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Osteoblasts remotely supply lung tumors with cancer-promoting SiglecFhigh neutrophils.</a> Science. 358 (6367), (2017).</li>
<li>Lauber, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State+of+the+art+in+vivo+imaging+techniques+for+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">State of the art in vivo imaging techniques for laboratory animals.</a> Laboratory Animals. 51 (5), 465-478 (2017).</li>
<li>Zanca, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+cellular+cross-talk+converges+on+NF-%CE%BAB+to+attenuate+EGFR+inhibitor+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%26+Development%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma cellular cross-talk converges on NF-κB to attenuate EGFR inhibitor sensitivity.</a> Genes & Development. 31 (12), 1212-1227 (2017).</li>
<li>Villa, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+LXR-Cholesterol+Axis+Creates+a+Metabolic+Co-Dependency+for+Brain+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">An LXR-Cholesterol Axis Creates a Metabolic Co-Dependency for Brain Cancers.</a> Cancer Cell. 30 (5), 683-693 (2016).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGFR+Mutation+Promotes+Glioblastoma+through+Epigenome+and+Transcription+Factor+Network+Remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cell%22%5BJournal%5D)">EGFR Mutation Promotes Glioblastoma through Epigenome and Transcription Factor Network Remodeling.</a> Molecular Cell. 60 (2), 307-318 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar çakışma çıkarlarının bildirin.

Tümör xenografts kapsamlı kanser araştırmalarında hem de bir dizi köklü görüntüleme teknikleri geliştirilmiştir: BLI; Manyetik rezonans görüntüleme (MRG); Pozitron emisyon tomografisi (PET), bilgisayarlı tomografi (CT); FMT. Her bu yaklaşımların artıları ve eksileri ile gelir, ama sonuçta birbirini tamamlayıcı bilgiler türü ile. Görüntü teknolojisi en sık kullanılan vivo içinde biridir BLI5,6,7,<sup class="xr...

Kanser sanayileşmiş dünya insanlarda hastalık ile ilgili ölümlerin önde gelen nedenlerinden biridir. Son derece yüksek bir ölü sayısı ile yeni tedaviler şiddetle ihtiyaç vardır. Glioblastoma multiforme (GBM) beyin kanseri, beyin tümörü, stromal ve bağışıklık hücrelerinin türdeş olmayan nüfus oluşan son derece öldürücü bir türüdür. Merkezi beyin tümörü ABD göre birincil kötü huylu ve kötü huylu olmayan beyin tümörü insidansı yaklaşık 100.000 başına 22 vaka olması. Yaklaşık 11.000 yeni vaka 20171ABD'de tanısı için bekleniyor.
Preklinik çalışmaları, uyuşturucu, yordam veya insanlarda test önce etkili olduğu için tedavi olasılığını araştırmak. Preklinik çalışmalarda erken laboratuvar adımlardan biri ilaç tedavisi için potansiyel moleküler hedef insan xenograft model olarak tanımlanan ana bilgisayar canlı, implante kanser hücrelerini kullanarak tanımlayan iş. Bu bağlamda, kafa içi Beyin tümör xenograft modelleri hasta elde edilen xenografts (PDXs) kullanarak beyin tümör biyolojisi, ilerleme, evrim ve terapötik yanıt çalışma ve son zamanlarda biyolojik gelişimi için ilaç yaygın olarak kullanılmıştır Eleme ve kişiselleştirilmiş tıp2,3,4.
Görüntüleme yöntemleri intrakranial xenografts izlemek için en uygun fiyatlı ve non-invaziv vivo içinde biridir bioluminescence görüntüleme (BLI)5,6,7,8. Ancak, bazı BLI sınırlamalar substrat yönetim ve kullanılabilirlik, enzim istikrar ve ışık Şoklama ve edinme9görüntüleme sırasında saçılma sayılabilir. Burada preklinik glioblastoma modelleri izlenecek yöntem Imaging alternatif olarak kızılötesi FMT raporu. Bu yöntem, sinyal Alım ve intracranially implant PDXs miktar, (bundan sonra FP720 adlandırılan) bir yakın kızılötesi floresan protein iRFP72010,11 ifade ya da (bundan böyle FP635 adlandırılan), turboFP635 bir FMT görüntüleme sistemi ile gerçekleştirilir. FMT teknolojisini kullanarak, tümör olabilir orthotopic vivo içinde önce sırasında veya tedaviden sonra preklinik gözlemler için non-invaziv, substrat-Alerjik ve nicel bir şekilde izlenir.

<table><tbody><tr><td>DMEM / Yüksek Glikoz&nbsp;</td><td>HyClone / GE</td><td>SH30022.1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM / F12 1: 1 &nbsp;</td><td>Gibco</td><td>11320-082</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>HyClone / GE</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Yenilikçi hücre teknolojileri</td><td>AT-104</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>HyClone / GE</td><td>SH30236.01</td><td></td></tr><tr><td>B27 takviyesi</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>insan rekombinant EGF&nbsp;</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>2633</td><td></td></tr><tr><td>insan rekombinant FGF</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>2634</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Corning</td><td>21-031-00</td><td></td></tr><tr><td>FACS tüpleri</td><td>Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62248</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A1113903</td><td></td></tr><tr><td>p24 ELISA&nbsp;</td><td>Clontech</td><td>632200</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-110-20</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Zoetis</td><td>NADA 043-403</td><td>Kontrollü madde</td></tr><tr><td>Merhem</td><td>Dechron</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Emilebilir sütür</td><td>CpMedical</td><td>VQ392</td><td></td></tr><tr><td>5 ul şırınga</td><td>Hamilton</td><td>26200-U</td><td>Tarafından satılan katalog numarası Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Hücre Sıralayıcısı</td><td>Sony</td><td>SH8007</td><td></td></tr><tr><td>Fare stereotaksik çerçeve&nbsp;</td><td>Çalma</td><td>51730</td><td></td></tr><tr><td>Motorlu stereotaksik enjektör</td><td>Çalma</td><td>53311</td><td></td></tr><tr><td>Mikromotor el tipi matkap</td><td>Foredom</td><td>K1070</td><td></td></tr><tr><td>Fare ısıtma pedi&nbsp;</td><td>Ken Scientific Corporation</td><td>TP-22G</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Tomografi Sistemi&nbsp;</td><td>PerkinElmer</td><td>FMT 2500 XL</td><td></td></tr><tr><td>TrueQuant Görüntüleme Yazılımı&nbsp;</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td></td><td></td>7005319</tr><tr><td>Ultra-santrifüj Optima L-80 XP</td><td>Beckman Coulter</td><td>392049</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültürü 100mm</td><td>Tabaklar Olympus Plastics</td><td>25-202</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültürü 150mm Tabaklar</td><td>Olympus Plastics</td><td>25-203</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültürü Şişeleri T75</td><td>Corning</td><td>430720U</td><td></td></tr><tr><td>50 mL konik tüpler</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>15 mL konik tüpler</td><td>Olympus Plastics</td><td>28-101</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj Avanti J-20</td><td>Beckman Coulter</td><td>J320XP-IM-5</td><td></td></tr><tr><td>Tüp, Polipropilen, İnce Duvar, 5.0 mL</td><td>Beckman Coulter</td><td>326819</td><td></td></tr><tr><td>Tüp, İnce Duvar, Polipropilen, 38,5 mL, 25 x 89 mm</td><td>Beckman Coulter</td><td>326823</td><td></td></tr><tr><td>Atimik çıplak fareler</td><td>Charles Nehri Laboratuvarları</td><td>Suş Kodu&nbsp; 490 (Homozigot)</td><td>Kurumsal Hayvan Bakım Programı ve Kurumsal Biyogüvenlik Komitesi tarafından önceden onay alınması gerekmektedir. &nbsp; &nbsp;</td></tr></tbody></table>

floresans moleküler tomografi glioblastoma xenografts in vivo içinde görüntüleme için

Fluorescence Molecular Tomography for In Vivo Imaging of Glioblastoma Xenografts

Tumorigenicity olan bir tümör oluşturmak için yetenek kanser hücrelerinin kitle. İmmünyetmezligi fareler, subkutan kanseri hücreleri enjekte ve görünür ve elle tutulur olduktan sonra tümör kitle ölçüm hücreleri tumorigenic olup olmadığını belirlemek için yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım olacaktır. Orthotopic enjeksiyonu kanser hücrelerinin en çok benzeyen menşe okudu tümör doku microenvironment xenograft tanıtmak amaçlanmaktadır. Beyin kanser araştırma kanser hücrelerinin tümör oluşumu ve analiz içinde beyin microenvironment benzersiz izin vermek için kafa içi enjeksiyon gerektirir. Kafa içi xenografts vivo içinde görüntüleme anında engrafted orthotopically farelerde tümör kitle izler. Burada Beyin tümör xenografts, Floresans moleküler tomografi (FMT) kullanımı raporu Kanser hücreleri ilk kızılötesi floresan proteinler ile transduced ve immün farelerin beyninde enjekte. Hayvanlar o zaman zaman uzun süre tümör kitle hakkında kantitatif bilgi edinmek için taranır. Hücre önceden etiketleme, tekrarlanabilir, uygun maliyetli ve güvenilir miktar her fare içinde tümör yükü için izin verir. Biz görüntüleme yüzeylerde enjekte için ihtiyaç ortadan kaldırılmıştır ve böylece hayvanlar üzerinde stres azalır. Bu yaklaşımın bir sınırlama çok küçük kitlelerin algılamak için yetersizlik tarafından temsil edilir; Ancak, diğer teknikleri daha büyük kitleler için daha iyi çözünürlüğe sahip. Bir uyuşturucu tedavisinin etkinliği veya genetik değişiklikler gliyom hücre satırları ve hasta elde edilen örnekler değerlendirmek için uygulanabilir.

Glioblastoma U87EGFRvIII hücreleri (EGF reseptör değişken III aşırı ifade U87 hücreleri) adım 1.2 göre kültürlü. Lentivirus üretilen ve adım 1.1 göre saf. Viral konsantrasyon p24 tarafından belirlendi ELISA analiz. Hücreleri adım 1.8 göre kızılötesi floresan protein taşıyan lentivirus ile transduced. FP72010,11 kodlama plazmid lütfen Dr V.V. Verkhusha tarafından sağlanan ve FP635 vektör ticari bir satıcıdan satın alınmıştır. Hedef...

Orthotopic kafa içi enjeksiyon tümör hücrelerinin Beyin tümör biyolojisi, ilerleme, evrim ve terapötik yanıt çalışmaya kanser araştırmalarında kullanılmıştır. Burada gerçek zamanlı intravital görüntüleme ve miktar tümör preklinik glioblastoma modellerinde kitle sağlayan Floresans moleküler tomografi, tümör xenografts, mevcut.

Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için

Tumorigenicity is the capability of cancer cells to form a tumor mass. A widely used approach to determine if the cells are tumorigenic is by injecting ...

Bu deneysel prosedürün genel amacı, floresan moleküler tomografi veya FMT kullanarak klinik öncesi bir beyin tümörü görüntüleme modeli oluşturmaktır. Bu yöntem, beyin tümörü biyolojisi, kanser araştırmaları ve tümör agresifliği, heterojenliği ve tedaviye yanıt verebilirliği ile ilgili ilaç keşfi alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, tümörlerin tedavi öncesinde, sırasında veya sonrasında non-invaziv, dikişsiz ve kantitatif bir şekilde in vivo olarak izlenebilmesidir.Bu tekniğin bir başka avantajı, hayvanın farklı organlarına implante edilen diğer ksenogreft modellerine uygulama imkanıdır. Bir hücre kültürü inkübatöründe 24 saatlik inkübasyon için 10 santimetrelik bir tabağa beş mililitre ortamda altıncı glioblastoma hücrelerini bir kez 10 kez tohumlayarak başlayın. Ertesi sabah, hücreleri lentivirüs ile transdüksiyon yapın, beşli bir enfeksiyon çokluğunda uygun bir floresan proteini ifade edin ve hücreleri inkübatöre geri koyun.24 saat sonra, süpernatanı beş mililitre taze ortamla değiştirin ve kültürü 48 saat daha inkübe edin. İnkübasyonun sonunda, ortamı 37 santigrat derecede 10 ila 15 dakika boyunca üç ila beş mililitre tripso

fluorescence-molecular-tomography-for-vivo-imaging-glioblastoma

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Lusiferaz modifiye insan beyin tümörü xenografts atimik farelerde tümör büyümesi ve biyoparlaklık görüntüleme kullanarak tedaviye yanıt daha sonraki izleme ile intrakranyal kurulmuş olabilir. Sağkalım analizi ile birlikte, biyoparlaklık izleme, beyin tümörlerinin tedavisi için düşünülen tedavilerin klinik öncesi test için önemli bir araştırma aracı.

Biyoparlaklık Görüntüleme kullanarak Tümör Büyüme ve Terapi yanıt sonraki Analizi ile İntrakranial Beyin Tümörü Xenografts kurulması

İntrakraniyal GL261 hücrelerin içine C57BL / 6 farelerin implantasyon birçok insan glioblastoma multiforme işaretlerinden özetlemek malign gliomlar üretir. Biz bizi kullanmasına izin stably lusiferaz ifade GL261 hücreleri...

Müteakip 3D ile İntrakranial İmplantasyonu In Vivo Murin Gliomlar Bioluminescent Görüntüleme

Diffüz floresans tomografi preklinik için yüksek boyunca nispeten düşük maliyetli ve potansiyel bir yaklaşım...

Kanser BİYOMARKÖRLERİN Yerelleştirme Küçük Hayvanlarda Bilgisayarlı Tomografi eşliğinde Zaman alanı Diffüz Floresans Tomografi

Biz çıplak farelerin ve sonraki seri beyinlerine insan glioblastoma multiforme hücrelerinin hassas, stereotaktik implantasyon için tümleşik bir yöntem...

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Bu videoda, glioma hücrelerinin kızılötesi floresan proteini veya iRFP'yi eksprese etmek için genetik mühendislik protokolü açıklıyoruz. Bu floresan etiketli glioma hücreleri, beyin tümörlerinin gelişimini anlamak için derin doku görüntülemede yardımcı olur.

Glioma Hücrelerinin Floresan Etiketlemesi: Derin Doku Görüntüleme için Floresan Protein İfade Eden Glioma Hücreleri Elde Etmek İçin Lentiviral Vektör Tabanlı Bir Transfeksiyon Yöntemi

Bu videoda, fare modellerinde floresan protein etiketli glioblastoma ksenogreftlerinin in vivo görüntülenmesi için floresan moleküler tomografi veya FMT'yi açıklıyoruz. Teknik, anti-tümör terapötiklerinin moleküler düzeyde etkilerini aydınlatmak için yararlıdır.

Floresan Moleküler Tomografi: Fare Modelinde Floresan Protein Etiketli Glioblastoma Ksenogreftlerinin İn Vivo Görüntülenmesi İçin Bir Görüntüleme Tekniği

Kaynak: Clark, A.J., et al. Glioblastoma için İmmün Yetmezliği Olan Bir Hayvan Modelinin Biyolüminesans Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, tümör büyümesini non-invaziv olarak ölçmek için lusiferaz eksprese eden tümör hücreleri ve lusiferin kullanarak, immün yetmezliği olan bir fare modelinde glioblastoma ilerlemesini izlemek için biyolüminesans görüntülemeyi göstermektedir.

Glioblastoma için İmmünkompetan Bir Fare Modelinin Biyolüminesans Görüntülemesi

Biz, tümörün büyüme sırasında oynayan normal biyo-fiziksel kısıtlamalar tekrarıdır intravital iki foton mikroskopi için farelerde kortikal glioblastoma ortotopik bir model oluşturduk. Tümörün yukarıdaki kafatasını yerine bir kronik cam pencere, iki-foton mikroskobu ile zamanla tümörün ilerlemesinin takibini sağlar.

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

GL261 glioma hücreleri, glioblastomun yararlı bir immünokompetan hayvan modelini sağlar. Bu protokolün amaçları, in vivo biyolüminesans görüntüleme kullanarak intrakraniyal tümör büyümesini izlemek için uygun teknikleri göstermek ve glioblastom tedavisi için tümör immünolojisi ve immünoterapötik yaklaşımları incelemek için lusiferaz ile modifiye edilmiş GL261 hücrelerinin faydasını doğrulamaktır.

Glioblastoma&#39;nın için bir Immünkompetan Hayvan Modeli Biyoparlaklık Görüntüleme

Burada kollarındaki kullandığımız, x-ışını nasıl inhibe mTOR etkinlik çalışmaya ve pozitron emisyon tomografi/bilgisayarlı tomografi Imaging etkileri myeloma kemik iliği engrafted tümörler bir xenograft modeli. Bu myeloma kemik iliği engrafted tümör vivo içindehedefleme terapiler Anti-miyelom etkisini fizyolojik ilgili, non-invaziv ve multimodal analizleri için sağlar.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Bir fare modelinde floresan etiketli demir oksit nanopartiküllerinin glioblastoma tümör iletiminin iki foton mikroskobu için yeni bir yaklaşım sunuyoruz.

Bir Murin Modelinde Glioblastomun İki Fotonlu İntravital Mikroskobu

Öğrenin floresans moleküler tomografi kullanarak glioblastoma ksenograftlarını canlı görüntüleme yöntemini. Bu teknik beyin tümörü biyolojisi ve tedavi yanıtlarını invaziv olmayan şekilde izlemeyi sağlar.

Floresans moleküler tomografi Glioblastoma Xenografts in Vivo içinde görüntüleme için

Daha fazla video keşfet