Name: Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Öğrenin, ultrason kılavuzluğunda fare adrenal bezine nöroblastoma hücreleri enjekte ederek ortotopik ksenogreft modelleri oluşturmayı. Bu hasta kaynaklı yöntem, kanser biyolojisi ve ilaç keşfi araştırmalarında güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Robert Wood Johnson Vakfı/Amos tıbbi öğretim geliştirme programı, Taubman Araştırma Enstitüsü ve bölüm, çocuk cerrahisi, The University of Michigan destek aldı. Yazarlar Kimber'la Converso-Baran ve Dr. Marcus Jarboe yardımı ile ultrason enjeksiyon yordamlar ve görüntüleme platformu için teşekkür etmek istiyorum. Paul Trombley şekil grafik ile onun yardım için teşekkür. Ayrıca merkezi kullanım kısmen olarak kapsamlı Kanser Merkezi NIH tarafından desteklenen, tümörü Imaging Core, moleküler görüntüleme ve için için Radyoloji Bölümü, University of Michigan teşekkür P30 CA046592 verin. Üniversitenin NIH (OD016502) ve Frankel dolaşım merkezi hibe fon tarafından kısmen desteklenir Michigan fizyolojisi fenotipleme çekirdek. Hücre satır kimlik doğrulama IDEXX RADIL Bioresearch özellikleri, Columbia, Mo yapıldı Tammy Stoll, Dr Rajen Mody ve Mott Solid tümör Onkoloji Program teşekkür ederim. Bizim hastalar ve aileleri minnetle onların ilham, cesaret ve bizim araştırma devam eden destek için kabul vardır.

Tüm iş The University of Michigan Kurumsal değerlendirme Komitesi (HUM 00052430) uygun olarak yapıldığını ve kullanımı ve bakımı hayvanlar (UCUCA) üniversite Komitesi tarafından onaylanmış yordamlar için uygundur. Birim için laboratuvar, hayvan Tıp (ULAM) hayvan bakımı konusunda çalışmalar yaptı.
Tüm çalışma onayı ile University of Michigan kurumsal İnceleme Kurulu (HUM 00052430) yapıldı ve bütün insan Araştırma Etik Komitesi düzenlemeler için uygundur. İnsan hücreleri potansiyel biyolojik bir malzeme olması, bu yüzden tüm özel önlemler ve kurum tarafından gerekli uygun Biyogüvenlik uygulamaları takip için kabul edilir. NSG fareler ağır immün ve yaygın ortamda bulunan bakteriler neden hastalığa duyarlı değildir. Her zaman sıkı steril tekniği malzeme implantasyon ve enjeksiyonları gerçekleştirmek için hazırlanırken kullanın.
1. hücre kültürü
<ol><li>Kurulan insan NB hücre hatları (SH-SY5Y, SK-N-BE2 ve IMR32) en az gerekli ortamı, büyümek % 10 fetal Sığır serum, 2 mM glutamin, 100 adet/mL penisilin ve 100 μg/mL streptomisin ile desteklenmiştir. IMR32 hücreleri daha fazla 1 mM pyruvate ve %0.075 NaHCO3ek. 37 ° C, % 5 CO2 ve % 70-80 izdiham. tüm hücreleri korumak
</li>
	<li>İnsan ES Hücre hatlarında (TC32, A673, CHLA-25 ve A4573) RPMI orta % 10 fetal Sığır serum ve 6 mM L-glutamin ile desteklenmiş büyümek. 37 ° c, % 5 CO%2 70-80 izdiham. , tüm hücreleri korumak
</li>
	<li>Kimlik doğrulama için tüm hücre satırlarını göndermek. Not: Bir dış tesisinde hücre kimlik doğrulaması yapılır, bildirimleri için bakınız.</li>
</ol>2. birincil hasta kaynaklı tümör hücreleri hazırlanması
<ol><li>Hasta izni ve onayı ile hasat insan NB tümör dokusu yerel kontrol ve koruma için doku depolama çözümü laboratuvarda ulaşım için cerrahi rezeksiyon geçiren hastaların atılır. Not: Tüm hasta numuneleri de-tespit ve Kurumsal değerlendirme komitesi kılavuzlarınıza uygun olarak ele.</li>
	<li>Bir tek hasta kaynaklı kanser hücre süspansiyon (UMNBL001, UMNBL002) bir tümör ayrılma kit kullanarak tümör doku oluşturmak. Tümör yaklaşık 0,5 g 5 mL RPMI arabellek, enzim H, enzim R 100 µL 200 µL ve 25 de içeren bir 100 mm hücre kültür yemek için aktarım µL enzim A insan tümör ayrılma Takımı'ndan.</li>
	<li>Küçük parçalar halinde (2-4 mm her) tümör kıyma makas ve doku forseps kullanarak. Bu parçaları adım 2.2 çözümlerinde karıştırın.</li>
	<li>Dissociator tüp içine tümör karışımı pipette ve tüp kapatın. Tüp ters çevir ve doku dissociator kol ekleyin. Program h_tumor_01 üzerinde çalıştırın.</li>
	<li>Aralıklı toz her 15 dk ile dönen bir raf üzerinde 1 h için 37 ° C'de yukarıda elde tümör hücre süspansiyon kuluçkaya.</li>
	<li>Hücre süspansiyon için yeni 50 mL konik tüp aktarmak ve RPMI 10 mL ekleyin. Hücre süspansiyon vasıl 314 x g 5 dk santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Süpernatant kaldırmak ve Pelet 5 mL RPMI askıya alma. Bu çözüm 40 µm hücre süzgeç aracılığıyla geçmek ve gergin çözüm taze 50 mL konik tüp içine toplamak. Bu süzgeç bir kez 5 mL RPMI medya ile yıkayın ve bir Pelet toplamak 5 min için 314 x g karisimin santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Hemacytometer15kullanarak hücre yoğunluğu ölçmek. Yukarıdan RPMI içinde 4 × 105 hücreleri/10 µL son bir konsantrasyon elde etmek için elde edilen Pelet askıya alma. Bu hücre süspansiyon 5 µL alıp her enjeksiyon için hücre çözümü 10 µL yapmak için matrigel 5 µL. Not: Hücre yoğunluğu ölçüm üzerinde kullanılan RPMI bağlıdır. Örneğin, elde edilen Pelet ölçülen hücre yoğunluğu 4 x 105 hücreleri ise, Pelet RPMI 10 µL içinde askıya.</li>
</ol>3. luciferase kanser hücrelerinin etiketleme
<ol><li>10 mL 5 mL de viral süpernatant EF1a-Luc2-DDE'ler-mCherry ve kök hücre medya 5 mL ile iletim ortamının olun. 1 x polybrene 7.5 µL ekleyin.</li>
	<li>5 × 106 kanser hücreleri iletim medya ve plaka 100 mm Ultra düşük ek plaka karıştırın. 37 ° C ve % 5 CO2 adlı gecede kuluçkaya. Not: düşük ek plakaları kullanılan olarak hücreleri plaka için uygun olmaz.</li>
	<li>24 saat sonra doku kültürü başlık altında hücreleri içeren 100 mm tabak getir ve karışımı 15 mL konik tüp içine aktarın. Hücre süspansiyon hücre pelet almak 5 min için 314 x g, santrifüj kapasitesi. Bir kez 1 mL 1 x fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) ile hücre Pelet yıkama ve hücre pelet 1 mL % 1 fetal Sığır serum (FBS) içeren HBSS askıya alma.<ol>
<li>Luciferase hücreleri floresan aktif hücre (FACS) analiz sıralama GFP pozitif sinyal dayalı sıralama. 100 mm doku kültürü tedavi sıralanmış hücrelerdeyse çanağı ve % 70-80 izdiham, 37 ° C ve gerekli kadar % 5 CO2 korumak plaka.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Luciferase sinyal luciferase tahlil kiti ile onaylayın. Bir illuminometer uyumlu 96 bir kuyu başına plaka 10 x 104 sıralı hücre plaka iyi ve hücreleri gecede saat 37 ° C ve % 5 CO2kuluçkaya. 24 saat sonra 96 iyi plaka oda sıcaklığına getirmek ve sabit-Glo reaktif Wells 1:1 oranında kültürlü medya ekleyin. Hücreleri 5 min için koşullar ve ışıldama spektrofotometre içinde okumak için izin.</li>
	<li>100 mm çanak doku kültürü başlık altında getir. Süpernatant medya atmak. Hücreler 2 mL 1 x PBS ile yıkayın.</li>
	<li>2 mL % 0.25 tripsin ekleyin ve 100 mm bulaşık kuluçka makinesi 2-3 dakika için geri dönün. 2-3 dk sonra mikroskop altında yerinden çıkar hücreleri denetleyin ve tripsin devre dışı bırakmak için RPMI 8 mL ekleyin.</li>
	<li>15 mL konik tüp ve santrifüj 314 x g bir pelet almak 5 min için de hücre süspansiyon toplamak. Süpernatant atmak. 1 mL 1 x PBS ile hücre Pelet yıkama, Pelet 5 mL RPMI askıya alma ve hemacytometer15kullanarak hücre yoğunluğu belirlemek. Hücre çözümü 314 x g bir Pelet elde etmek 5 min için de kalan yhe santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Pelet 4 x 105 hücreleri/10 µL bir konsantrasyon elde etmek için RPMI içinde askıya alma. Hücre süspansiyon 5 µL alıp her enjeksiyon için hücre çözümü 10 µL yapmak için matrigel 5 µL.</li>
</ol>4. böbrek üstü bezi (NB) veya böbrek alt Kapsülü (ES) implantasyon ultrason destekli
Not: Tüm ultrason yordamları kullanarak görüntüleme sistemi bir yüksek çözünürlüklü vivo içinde gerçekleştirilir. Açıklanan yordamları için 40 MHz merkezi sıklığını ve 22-55 MHz bant genişliği vardır dönüştürücü kullanıldı.
<ol><li>6-8-hafta-yaşlı bağışıklık eksikliği NSG fareler tüm enjeksiyon yordamları için kullanmaktadır.</li>
	<li>Matrigel ve autoclaved Hamilton şırınga 27 G iğne ile (1,25") ile donatılmış ve 22G kateterler (0.9 mm dış çapı, 25 mm uzunluk) 4 ° C'de gece</li>
	<li>Adım 3 buz üzerinde hazırlanan hücre çözümü yerleştirin.</li>
	<li>2 L/dak teslim O%2 2 isoflurane kullanılarak bir indüksiyon odası farelerde anestezi. Not: Yeterli anestezi etkin hareket eksikliği ve spontan solunum Bakımı ile belirlenir.</li>
	<li>Bir kez anestezi, sırt ve kanat saç Temizleme losyonu (örneğin Nair) ve bir tıraş makinesi kullanarak hayvanların depilate.</li>
	<li>Hayvan görüntüleme platformu ile karın yan aşağı, burada hayvan burun bir nosecone yerleştirilir ve isoflurane teneffüs edilmesi sırasında güvenli aktarın.</li>
	<li>Optik merhem kurutma önlemek için hayvanın gözlerinin içine yerleştirin. Fare yerine yanlışlıkla herhangi bir hareketi engellemek için teyp.</li>
	<li>Fare karaciğer, vena cava, dalak, sol böbrek ve bitişik sol böbreküstü bezi ultrason görselleştirme kullanarak tanımlayın.</li>
	<li>Steril eldiven, maske ve kap kişisel koruma ve bakım Steril koşullar için kullanın. Ultrason rehberliği altında yavaşça deri yoluyla 22 G kateter takın ve hücresel enjeksiyon için bir kanal sağlamak için sol böbreküstü bezi içine doğrudan kas geri. İğneyi çıkarın ve kateter yerde bırakın.</li>
	<li>Yük bir soğutulmuş Hamilton şırınga hücre çözümü 10 µL ile küçük bir iğne ile donatılmış, sonra şırınga stereotactically böbreküstü bezi ortasına konumlandırılmış kateter aracılığıyla rehberlik.</li>
	<li>Hücreleri hedeflenen adrenal dokusu içine enjekte. İğne matrigel ayarlamak izin vermek 1-2 min için bir yerde bırakın. Yavaş yavaş iğne kateterin kaldırma tarafından takip, kaldırın.</li>
	<li>Fareler onların kafes yerleştirin ve fare sternal recumbency korumak için yeterli bilincinin tekrar yerine geleceğinden emin olun. Not: Bu teknik minimal invaziv doğası gereği, en az, ama hala günlük ile fareler sağlık kontrolleri. izlenen sonrası yordam ağrı "bir cümle ile takip edilmelidir:"beklenmeyen belirtileri ağrı veya acı sırasında belirlenen Eğer bir deney, senin hayvan hastalıklarıyla ilgili kurumsal destek birimi analjezi veya diğer tıbbi bakım ile ilgili bilgi için başvurun. 
</li>
</ol>

<ol><li>Sanmamed, M. F., Chester, C., Melero, I., Kohrt, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+optimal+murine+models+to+investigate+immune+checkpoint+blockers+and+their+combination+with+other+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Defining the optimal murine models to investigate immune checkpoint blockers and their combination with other immunotherapies.</a> Ann Oncol. 27 (7), 1190-1198 (2016).</li>
<li>Fidler, I. J., Hart, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+diversity+in+metastatic+neoplasms%3A+origins+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Biological diversity in metastatic neoplasms: origins and implications.</a> Science. 217 (4564), 998-1003 (1982).</li>
<li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation.</a> Eur J Cancer. 40 (6), 852-857 (2004).</li>
<li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+Models+are+Necessary+to+Predict+Therapy+of+Transplantable+Tumors+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic Models are Necessary to Predict Therapy of Transplantable Tumors in Mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17 (3), 279-284 (1998).</li>
<li>Daniel, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primary+xenograft+model+of+small-cell+lung+cancer+reveals+irreversible+changes+in+gene+expression+imposed+by+culture+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A primary xenograft model of small-cell lung cancer reveals irreversible changes in gene expression imposed by culture in vitro.</a> Cancer Res. 69 (8), 3364-3373 (2009).</li>
<li>Khanna, C., Jaboin, J. J., Drakos, E., Tsokos, M., Thiele, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologically+relevant+orthotopic+neuroblastoma+xenograft+models%3A+Primary+adrenal+tumor+growth+and+spontaneous+distant+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo%22%5BJournal%5D)">Biologically relevant orthotopic neuroblastoma xenograft models: Primary adrenal tumor growth and spontaneous distant metastasis.</a> In Vivo. 16 (2), 77-85 (2002).</li>
<li>Stewart, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+human+orthotopic+neuroblastoma+xenograft%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a human orthotopic neuroblastoma xenograft.</a> Dev Biol. 407, 344-355 (2015).</li>
<li>Jäger, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+Invasive+Establishment+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Minimally Invasive Establishment of Murine Orthotopic Bladder Xenografts.</a> J. Vis. Exp. (84), e51123(2014).</li>
<li>Teitz, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Models+for+Neuroblastoma%3A+Establishing+a+Baseline+for+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Preclinical Models for Neuroblastoma: Establishing a Baseline for Treatment.</a> PLoS ONE. 6 (4), e19133(2011).</li>
<li>Braekeveldt, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma+patient-derived+orthotopic+xenografts+retain+metastatic+patterns+and+geno-+and+phenotypes+of+patient+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma patient-derived orthotopic xenografts retain metastatic patterns and geno- and phenotypes of patient tumours.</a> International Journal of Cancer. 136 (5), 252-261 (2015).</li>
<li>Van Noord, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-directed+Implantation+Using+Ultrasound+Visualization+for+Development+of+Biologically+Relevant+Metastatic+Tumor+Xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo%22%5BJournal%5D)">Tissue-directed Implantation Using Ultrasound Visualization for Development of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts.</a> In Vivo. 31 (5), 779-791 (2017).</li>
<li>Vormoor, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+Preclinical+Orthotopic+Xenograft+Model+of+Ewing+Sarcoma+and+Other+Human+Malignant+Bone+Disease+Using+Advanced+In+Vivo+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Development of a Preclinical Orthotopic Xenograft Model of Ewing Sarcoma and Other Human Malignant Bone Disease Using Advanced In Vivo Imaging.</a> PLoS ONE. 9 (1), e85128(2014).</li>
<li>Hakky, T. S., Gonzalvo, A. A., Lockhart, J. L., Rodriguez, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+Ewing+sarcoma+of+the+kidney%3A+a+symptomatic+presentation+and+review+of+the+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Ther+Adv+Urol%22%5BJournal%5D)">Primary Ewing sarcoma of the kidney: a symptomatic presentation and review of the literature.</a> Ther Adv Urol. 5 (3), 153-159 (2013).</li>
<li>Cheng, H., Clarkson, P. W., Gao, D., Pacheco, M., Wang, Y., Nielsen, T. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+Antibodies+Targeting+CSF1+Impede+Macrophage+Recruitment+in+a+Xenograft+Model+of+Tenosynovial+Giant+Cell+Tumor%5BTitle%5D)+AND+%22Sarcoma%22%5BJournal%5D)">Therapeutic Antibodies Targeting CSF1 Impede Macrophage Recruitment in a Xenograft Model of Tenosynovial Giant Cell Tumor.</a> Sarcoma. 2010, 174528(2010).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Using a Hemacytometer to Count Cells. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Basic+Methods+in+Cellular+and+Molecular+Biology%22">Basic Methods in Cellular and Molecular Biology</a>. , JoVE. Cambridge, MA. (2018).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir açıklamalar var.

Ultrason destekli implantasyon NB ve ES hücre kanser biyolojide preklinik çalışmaları için güvenilir fare xenografts kurmak için verimli ve güvenli bir yöntemdir. Ultrason destekli başarısı için kritik doku hedefli implantasyon varlığı ve uzmanlık anatomik olarak faiz organı yerelleştirme ve tümör hücrelerinin stereotaksik enjeksiyon ile eğitimli personel durumu olduğunu.
Tümör dokusunun ayrılma açıklanan hasta kaynaklı xenograft modeli geliştirmek çok önemli bir adım olduğu ortaya çıktı. Yere...

Hayvan xenograft modelleri roman antikanser terapiler preklinik çalışmaları için gerekli araçları vardır. Subkutan kanat implantasyon hücrelerinin tümör büyümesini izlemek için bir verimli ve kolay erişilebilir sitesi sağlayan standart fare xenografts güveniyor. Subkutan modelleri1metastaz potansiyellerini sınırlayabilir tümör özgü biyolojik özellikleri onların eksikliği dezavantajdır. Gibi sınırlamalar tarafından hangi tümör hücreleri metastatik potansiyel2ile ilgili bir microenvironment sağlayan yerel doku sitelerdeki engrafted orthotopic xenografts kullanımı üstesinden vardır. Orthotopic xenograft modelleri orijinal biyolojik özellikleri korumak ve güvenilir modelleri preklinik ilaç bulma3,4için sağlar. Doku yönetmen implantasyon için kullanılan kanser hücrelerinin kurulan hücre hatları veya hasta kaynaklı hücrelerden hasta tümör vardır. Xenografts kanser hücre satırlarından kurulan hasta türetilmiş xenografts5' e göre birincil tümör üzerinden yüksek genetik sapma sergileyebilirler. Bu göz önüne alındığında, hasta kaynaklı orthotopic xenografts kurulması roman tedavi kanser ilaç bulma gelen test etmek için tercih edilen standart haline gelmiştir.
Pediatrik kanser Nöroblastom (NB), orthotopic xenograft modelleri birincil tümör biyolojisi özetlemek ve metastaz yaymak NB6,7tipik sitelere geliştirmek. NB böbreküstü bezi veya paravertebral sempatik zinciri boyunca gelişir. Orthotopic implantasyonu en yaygın yöntem açık trans-abdominal cerrahi işlemler gerektirir. Tür yöntemler genellikle sıkıcı, yüksek hayvan hastalık ve karmaşık kurtarma dönemleri yoktur. Yüksek çözünürlüklü ultrason son zamanlarda doku yönetmen implantasyonu tümör hücreleri kanser araştırma8,9için birkaç fare modelleri geliştirilmesi için kullanılmıştır. Güvenilir, tekrarlanabilir, verimli ve güvenli ilgili metastatik tümör xenografts10,11kurulması için tekniğidir.
Pediatrik kanser xenografts ultrason destekli hedef organ yerelleştirme ve iğne implantasyon hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri tarafından kurulması gösterdiği11olduğunu. Teknik fare böbreküstü bezinin hedef NB için kullanılmıştır. Ewing sarkomu (ES) ağırlıklı olarak uyluk kemiği ve pelvik kemik12gibi uzun kemiklerde yaygın olarak görülen bir kemik kanseri var. Olgu sunumları büyüme ağırlıklı olarak kemik kanseri böbrek dokusunda uygulanabilir olup olmadığını belirlemek için bir böbrek alt kapsüler yerde orthotopic implantasyon13için seçildi olduğunu göstermiştir. Tümör hücreleri böbrek alt kapsüler hücre implantasyonu spontan Metastazlari ES14için çalışmaya gelecek vaat eden bir model olarak kullanılmıştır.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Fareler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NOD-SCID</td><td>Charles Nehri</td><td>394</td><td></td></tr><tr><td>NSG</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Hücre Hattı&nbsp; < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > NB < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>IMR-32</td><td>ATCC</td><td>CCL-127</td><td>Kurulmuş insan nöroblastom hücre hattı</td></tr><tr><td>SH-SY5Y</td><td>ATCC</td><td>CRL-2266</td><td>Kurulmuş insan nöroblastom hücre hattı</td></tr><tr><td>SK-N-Be2</td><td>ATCC</td><td>CRL-2271</td><td>Kurulmuş insan nöroblastom hücre hattı</td></tr><tr><td>< güçlü>ES</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TC32&nbsp;</td><td></td><td></td> COGcell.ORG <td>İnsan Ewing Sarkom hücre hattı</td></tr><tr><td>A673</td><td>kuruldu COGcell.ORG</td><td></td><td>İnsan Ewing Sarkom hücre hattı</td></tr><tr><td>CHLA-25</td> kuruldu <td>COGcell.ORG</td><td></td><td>İnsan Ewing Sarkom hücre hattı</td></tr><tr><td>kuruldu A4573</td><td>COGcell.ORG</td><td></td><td>İnsan Ewing Sarkom hücre hattı</td></tr> kuruldu<tr><td>Cell Line media </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD BioSciences</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Dissociation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Araçları</td><td>KentScientific</td><td>INSMOUSEKIT</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Tümörü Dissosiyasyon Kiti&nbsp;</td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-095-929</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS ayrıştırıcı</td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS C tüpleri</td><td>MACS Miltenyi Biotec</td><td>130-096-334</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci</td><td>Corning</td><td>431751</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>lusiferaz Etiketleme</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lenti-GFP1 virüsü</td><td>Üniversite Michigan, Vektör Çekirdek</td><td></td><td>Luciferaz Virüsü</td></tr><tr><td>Sabit Glo-Luciferase Test Kiti</td><td>Promega</td><td>E2510</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Biyolüminesans Görüntüleme< / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ivis Spektrum Görüntüleme Sistemi</td><td>PerkinElmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Promega</td><td>E160X</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>anestezik< / güçlü> </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solunan İzofluran&nbsp;</td><td>Piramal Critical Care Inc</td><td>66794-0017-25</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Ultrason Kılavuzlu Enjeksiyon< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vevo 2100 Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme</td><td>Vevo</td><td>2100</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton Şırıngalar (27 gauge iğne)</td><td>Hamilton</td><td>80000</td><td></td></tr><tr><td>22 Gauge Anjiyokateter</td><td>BD Biosciences</td><td>381423</td><td></td></tr><tr><td>Optik merhem</td><td>Başlıca İlaç</td><td>301909</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td>Kilisesi & Dwight Co</td><td></td><td>Epilasyon ajanı</td></tr><tr><td>Aquasonic 100 Ultrason İletim jeli</td><td>Parker</td><td></td><td>Ultrason</td></tr> <tr><td>jeli<güçlü > histoloji< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD99</td><td>DAKO</td><td>M3601</td><td>Birincil Antikor</td></tr><tr><td>Tirozin Hidroksilaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T2928</td><td>Birincil Antikor</td></tr><tr><td>İkincil HRP-Polimer antikoru</td><td>Biocare</td><td>BRR4056KG</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Çeşitli</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 mL Pipetler</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-676-10J</td><td></td></tr><tr><td>5 mL Pipetler</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-676-10H</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>P1000 pipet</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3120000062 P200 pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3120000054</td><td></td></tr><tr><td>P1000 pipet uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-375E</td><td></td></tr><tr><td>P200 pipet uçları</td><td>Fisher Scientific</td><td>21-375D</td><td></td></tr><tr><td>Taşınabilir pipet yardımcısı</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>dijital hayvan Tartısı&nbsp;</td><td>KentScientific</td><td>SCL-1015</td><td></td></tr><tr><td>Kaliperler</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-664-16</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyulu alçak bağlantı plakaları</td><td>Corning</td><td>07-200-601</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Doku Kültürü İşlem Görmüş Yemekler</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012924</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>TR-1003-G</td><td></td></tr></tbody></table>

ultrason kullanımı doku yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör xenografts kurulması için güdümlü

Utilization of Ultrasound Guided Tissue-directed Cellular Implantation for the Establishment of Biologically Relevant Metastatic Tumor Xenografts

Preklinik antikanser terapiler test kanser doğuştan gelen eğilimleri taklit ilgili xenograft modellerde dayanır. Yordam kolaylığı ve yeteneği monitör tümör ilerleme ve yanıt invaziv görüntüleme olmadan standart subkutan kanat modelleri avantajları şunlardır. Modelleri gibi çoğu kez translasyonel klinik deneylere tutarsız ve yerel bir microenvironment eksikliği olduğu biyolojik ilgili özellikleri metastaz, üretmek için düşük meyil ile sınırlı. Buna karşılık, orthotopic xenograft modelleri yerli tümör sitelerdeki tümör microenvironment taklit ve uzak metastatik yaymak gibi önemli hastalık özellikleri çoğaltmak için gösterilmiştir. Bu modeller genellikle sıkıcı cerrahi anestezik zaman ve kurtarma takmaktan ile gerektirir. Bu sorunu çözmek için kanser araştırmacılar son zamanlarda kanser xenograft modeller için doku Yönetmen: fare modelleri hızlı ve güvenilir kurulması için sağlar preklinik deneyler kurmak için ultrason destekli enjeksiyon teknikleri kullanılan. Ultrason görselleştirme de boyuna değerlendirme tümör engraftment ve büyüme için invaziv bir yöntem sağlar. Burada, böbreküstü bezi NB ve böbrek alt kapsülü kullanmak için ES için kanser hücrelerinin ultrason destekli enjeksiyon yöntemi açıklanmaktadır. Bu minimal invaziv yaklaşım sıkıcı açık cerrahi implantasyon kanser hücrelerinin büyüme ve metastaz doku özel konumlarda üstesinden gelir ve marazi kurtarma dönemleri azaliyor. Biz kurulan hücre satırları ve hasta türetilmiş hücre satırları orthotopic enjeksiyon için kullanımını açıklar. Tümör ayrılma ve luciferase hücrelerinin etiketleme için önceden hazırlanmış ticari kitleri mevcuttur. Görüntü Kılavuzu kullanarak hücre süspansiyon enjeksiyon preklinik modellerinin oluşturulması için minimal invaziv ve tekrarlanabilir bir platform sağlar. Bu yöntem, mesane, karaciğer ve pankreas delinmemiş potansiyeline çok sayıda kanser modelleri için örnekli gibi diğer kanserler için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için kullanılmaktadır.

Sunulan yordamları kullanarak, ultrason destekli implantasyon NB hücrelerinin böbrek üstü bezi içine ısıtılmış bir cerrahi tablo ile donatılmış bir özel yordamın Oda yapıldı. Kol ve ayak pedleri fare kalp etkinlik (Şekil 1A) izlemek için yerleştirildi. Hayvan imzalat burun konisi inhalasyon kullanarak isoflurane altında kaldı. Bir yüksek çözünürlüklü ultrason sonda kullanarak, sol böbrek böbrek (Şekil 1B) sadece kafatası böbreküs...

Burada, biyolojik ilgili sitelerdeki kanser için güvenilir preklinik modelleri oluşturmak için bir protokol ultrason destekli enjeksiyon Nöroblastom (NB) ve Ewing sarkomu (ES) hücre yararlanmak için (hücre satırları ve hasta kaynaklı tümör hücreleri kurulu) mevcut araştırma.

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Preclinical testing of anticancer therapies relies on relevant xenograft models that mimic the innate tendencies of cancer. Advantages of standard ...

Bu yöntemin amacı, klinik öncesi çalışmalar için biyolojik olarak ilgili kanser ortotopik ksenogreftleri oluşturmaktır. Hasta kaynaklı nöroblastom hücreleri, açık cerrahi veya uzun süreli iyileşme olmaksızın ultrason rehberliğinde murin adrenal bezine enjekte edilir. Bu yöntem, kanser biyolojisinde ve tümör evrimi çalışmaları, doğal mikro çevredeki terapötik yanıtlar ve metastazlar gibi translasyonel araştırmalarda kritik soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Böyle bir bilgi, klinik öncesi çalışmaların güvenilirliğini büyük ölçüde artıracak ve ilaç keşfini kolaylaştıracaktır. Bu tekniğin temel avantajı, kanser tedavisi araştırmaları için ortotopik ksenograflı bir model üretmede hastadan türetilmiş, dokuya yönelik, verimli ve güvenilir olmasıdır. Prosedürdeki kritik adımları gösteren, kıdemli bir teknisyen ve laboratuvar yöneticimiz olan Sahiti Chukkapalli ile laboratuvarımızda araştırma görevlisi olan Tina Thomas olacaktır.Bir tümör ayrışma kiti kullanarak tümör dokusundan hastadan türetilmiş tek bir kanser hücresi süspansiyonu oluşturun. Yaklaşık yarım gram tümör dokusunu, beş mililitre enzim takviyeli RPMI tamponu içeren 100 milimetrelik bir hücre kültürü kabına aktararak ba

utilization-ultrasound-guided-tissue-directed-cellular-implantation

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu videoda, insan kaynaklı melanom hücreleri, bağışıklığı baskılanmış bir farenin yan bölgesine deri altından implante ediliyor. PDX modeli, in vivo koşullarda gözlenen tümör heterojenliğini ve melanom agresifliğini daha iyi özetleyen melanom hücrelerinin klinik öncesi araştırmasına izin verir.

Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellemesi: Melanom Fare Modelleri Oluşturmak İçin Bir Teknik

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Bu protokol, yüksek dereceli ürosityal Hücre Karsinomu hücrelerinin intra-vesically instilling veya intra-rektal enjekte kolorektal kanser hücreleri olmayan obez diyabetik/şiddetli kombine tarafından hasta türeyen ortootopik xenograft modellerinin oluşturulması açıklanmaktadır immüneksikliği (NOD/SCıD) primer tümör büyümesi için fareler ve lenf nodu stromal hücrelerin etkisi altında spontan metastaz, hangi insan metastatik hastalıkların ilerlemesini taklit.

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Ortotopik insan karaciğeri metastatik uveal melanom ksenogreft fare modelleri, hasta kaynaklı tümör öbek ve kültürlü insan uveal melanom hücre hatları ile iğne enjeksiyon teknikleri ile cerrahi ortotopik implantasyon teknikleri kullanılarak oluşturulmuştur.

İmmünficient Farelerde Karaciğer Ortotopik İnsan Uveal Melanom Xenograft Platformu Üretimi

Biz doğrudan yerli tümör bölgesine mürin türetilmiş pankreas duktal adenokarsinom hücre hatlarının ultrason güdümlü implantasyonu için bir protokol açıklar. Bu yaklaşım, enjeksiyondan sonraki 2-4 hafta içinde ultrason taraması ile saptanabilen pankreas tümörlerinin saptanmasıyla sonuçlandı ve cerrahi ortotopik implantasyona kıyasla periton duvarındaki tümör hücre tohumlama oranını önemli ölçüde azalttı.

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

Burada bir tümörün genomik yapısına dayalı olarak seçilen hedefe yönelik tedavilerin etkinliğini test etmek için bir protokol sayılacağız. Protokol, yapısal DNA düzenlemelerinin tanımlanması ve doğrulanması, hastaların tümörlerinin farelere engraftasyonu ve ilgili ilaçlara verilen yanıtların test edilmesi olarak tanımlanmaktadır.

Yapısal DNA Alterasyon Analizi ve Hasta Kaynaklı Ksenogreftler Kullanılarak Kanserde Hedefli Tedavilerin Test Edilmesi

Kemik metastazı modellerinde metastaz düzgün bir şekilde veya %100 insidansla gelişmez. Doğrudan intraosseöz tümör hücresi enjeksiyonu akciğerin embolizasyonu ile sonuçlanabilir. Primer kemik tümörlerini ve kemik metastazlarını, kemik içine solid tümör grefti implantasyonu kullanılarak modelleyen, tekrarlanabilir engraftman ve büyümeye yol açan tekniğimizi sunuyoruz.

Primer Kemik Tümörleri ve Kemik Metastazlarının Solid Tümör Grefti İmplantasyonu ile Modellenmesi

Santral sinir sistemi metastazı PDX modelleri, insan metastazının fenotipik ve moleküler özelliklerini temsil eder ve bu da onları klinik öncesi çalışmalar için mükemmel modeller haline getirir. Burada PDX modellerinin nasıl oluşturulacağı ve klinik öncesi çalışmalar için en iyi kullanılan aşılama yolları açıklanmaktadır.

Santral Sinir Sistemi Metastazının Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Kurulması ve Kullanılması

İnsan pankreas kanseri hücrelerinin ultrason eşliğinde enjeksiyonu ve ardından ultrason görüntüleme ile tümör büyümesinin in vivo olarak izlenmesi ile minimal invaziv bir ortopik pankreas kanseri modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Ultrason Eşliğinde Enjeksiyon ile Pankreas Kanseri Hücrelerinin Ortotopik Ksenograftının Oluşturulması

Bu protokol, farelerde meme kanseri hastasından türetilen ksenogreftlerin ortotopik implantasyonu için etkili, cerrahi olmayan bir yöntemi tanımlar. Teknik, enzimatik tümör ayrışmasını ve ardından meme yağ yastıkçıklarına doğrudan enjeksiyonu içerir ve yüksek verimli implantasyonu mümkün kılar. Kapsamlı doğrulama, çeşitli meme kanseri alt tiplerinde titiz çalışmaları kolaylaştırarak model aslına uygunluğunu sağlar.

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

Bu protokolün amacı, araştırmacılara intrakraniyal implantasyonlar için son derece tekrarlanabilir bir teknik sunmaktır.

Farelerde glioblastoma hasta kaynaklı ksenograft hücre hatlarının stereotaktik intrakranial implantasyonu

Öğrenin, ultrason kılavuzluğunda fare adrenal bezine nöroblastoma hücreleri enjekte ederek ortotopik ksenogreft modelleri oluşturmayı. Bu hasta kaynaklı yöntem, kanser biyolojisi ve ilaç keşfi araştırmalarında güvenilir sonuçlar sağlar.

Ultrason kullanımı doku Yönetmen: hücresel implantasyon biyolojik ilgili metastatik tümör Xenografts kurulması için güdümlü

Daha fazla video keşfet