Farelerde AmfizemIn Değerlendirilmesi İçin Sabit Basınç Altında Akciğer Fiksasyonu
26 Eylül 2019
Burada sunulan amfizem bir fare modeli akciğer örneklerinin histolojik değerlendirilmesi için istikrarlı bir durum oluşturur akciğer fiksasyonu için yararlı bir protokoldür. Bu modelin ana avantajı akciğer çökmesi veya deflasyon olmadan aynı sabit basınç ile birçok akciğer düzeltebilirsiniz.
Fiksasyon cihazı içinde sabit basınç hafif sigara dumanı amfizem değerlendirmek için uygun bir histolojik akciğer örneği üreten makul şişirilmiş durumda akciğerler tutar. Bu modelin ana avantajı akciğer çökmesi veya deflasyon olmadan aynı sabit basınç kullanarak aynı anda birçok akciğer düzeltebilirsiniz. Prosedürü gösteren Naoko Arano benim laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi olacak.
Refleks hareketine yanıt eksikliği doğruladıktan sonra farenin medial hattı boyunca deri ve kas dokusunda bir kesi yapmak, sefalik bölge hedefleyen, ve yanal daha geniş bir çalışma alanı oluşturmak için kesti. Diyafram tabakası ortaya çıktıktan sonra forceps ile doku delin ve torasik boşluk açın. Akciğerlerin ve kalbin görüntülenebilmesi için göğüs kafesini kesin.
Ve sol atriyumu ve sağ ventrikülü kes. Sağ ventrikül bölgesine perfüzyon pompasına bağlı 24 gauge kanül yerleştirin ve kanüli pulmoner artere ulaşana kadar sefalik bölgeye yönlendirin. Daha sonra, pompa yı açın ve tüm akciğer dokusu beyaz bir renge dönüşene kadar bir saat boyunca pbs yaklaşık 200 mililitre ile doku perfuse.
Perfüzyon sonunda trakea, akciğerler ve kalp çevreleyen bağ dokusu kesti ve sağ ana bronş bağlamak için bir dikiş kullanın. Sonra, sağ akciğerin tüm bireysel lobları hasat ve uygun bir fiksatif içeren bireysel 10 mililitreşile şırıngaiçine sol akciğer kalp ve loblar yerleştirin. Akciğerleri şişirmek ve akciğeri şırıngadan çıkarmak için şırıngada vakum oluşturarak pistonu geri çekin.
Nefes borusuna 20 gauge kanül yerleştirin ve kanülü yerinde sabitlemek için bir dikiş kullanın. Kanül fiksatif dolu bir mililitreşşon bağlayın ve sızıntıları kontrol etmek için ek fiksatif ile akciğer doldurun. Yerleştirme bölgesinin, akciğer örneğinin fiksasyon sırasında akciğer tahtasından ayrılmasını önlemek için güvenli olduğundan emin olun.
Daha sonra dokuyu akciğer fiksasyon basınç ekipmanına aktarın, numuneyi alın ve trakeayı fiksasyon periyodunun sonunda düğümle bağlayın. Akciğer numunesinin yerleştirildiği akciğer fiksasyon basınç ekipmanının alt bileşeni, formalin akışının ucuna 20 gauge kanül ile üç yönlü stopcock ile bağlanır. Basınç alt ve üst bölmeleri arasında fiksatif farklı yüzey düzeylerinde oluşturulur.
Basınç farkı 25 santimetre sudur ancak yükseklik ayar kolu basıncı 25 ila 30 santimetre suya ayarlamak için kullanılabilir. Bir pompa, fiksatif yüzey yüksekliğinde 25 santimetrelik bir fark koruyarak alt ve üst kapları bağlar ve ajanın akışını yönlendirir. 48 saatlik fiksasyondan sonra ortam havasına maruz kalan SMP30 nakavt farelerinin akciğerleri belirgin bir hava sahası genişlemesi göstermez.
Önemli hava sahası genişleme ve alveoler duvar imha, ancak, Kronik sigara dumanına maruz SMP30 nakavt farelerde görülmektedir. Buna ek olarak, akciğer örneklerinin ortalama lineer kesişme ve yıkıcı indeksi dumanmaruz SMP30 nakavt farelerde önemli ölçüde hava maruz kalan hayvanlara göre daha büyüktür. Laboratuvarımız %10 formalin kullanır ancak araştırmacılar deneysel ihtiyaçlarına göre diğer fiksasyon ajanlarını kullanabilirler.
Biz gösterdi fiksasyon sistemi akciğer örnekleri kullanarak rapor gibi onların morfometrik değerlendirme için çeşitli fare amfizem modellerinden hasat edilebilir. Sabitleme ajanları tehlikeli olabileceğinden, her zaman uygun personel koruyucu ekipmanını giyin ve iyi havalandırılan bir odada çalışın.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu protokol, amfizem fare modelinden elde edilen akciğer örneklerinin histolojik değerlendirmesi için stabil koşullar sağlayan bir akciğer fiksasyon yöntemini özetlemektedir. Bu teknik, birden fazla akciğerin sönme veya deflasyon olmadan aynı anda fikse edilmesine olanak tanır.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Biyoloji
- Histoloji
Arka Plan
- Amfizem, genellikle sigara dumanı nedeniyle oluşan bir akciğer hastalığıdır.
- Akciğer patolojisini anlamak için histolojik değerlendirme kritik öneme sahiptir.
- Doğru bir değerlendirme için fiksasyon sırasında akciğer şişkinliğinin korunması esastır.
- Bu protokol, akciğer fiksasyon tekniklerindeki zorlukları ele almaktadır.
Çalışmanın Amacı
- Akciğer fiksasyonu için güvenilir bir yöntem sunmak.
- Araştırmalarda akciğer örneklerinin değerlendirilmesini kolaylaştırmak.
- Amfizem modellerinin histolojik analizindeki tutarlılığı artırmak.
Kullanılan Yöntemler
- Sabit basınç sağlayan bir fiksasyon cihazının kullanımı.
- Torasik boşluğa erişmek için farenin medial hattı boyunca insizyon yapılması.
- Torasik alanı açmak için diyaframın delinmesi.
- Numune toplama işlemi için akciğerlerin ve kalbin görüntülenmesi.
Ana Sonuçlar
- Fiksasyon sırasında akciğer şişkinliğinin başarılı bir şekilde korunması.
- Birden fazla akciğerin aynı anda fikse edilebilme kapasitesi.
- Değerlendirmeye uygun, stabil histolojik örnekler.
- Prosedürün bir lisansüstü öğrencisi tarafından gösterimi.
Sonuçlar
- Protokol, akciğer fiksasyonu için güvenilir bir yöntem sunmaktadır.
- Araştırmalardaki histolojik değerlendirmelerin kalitesini artırır.
- Bu teknik, akciğer patolojisini içeren çeşitli çalışmalara uygulanabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama Alanları
Sabit basınç altında tutarlı akciğer fiksasyonu, farelerde amfizemin tekrarlanabilir histolojik değerlendirmesine olanak tanıyarak preklinik solunum yolu hastalığı modellerindeki kritik bir zorluğu giderir. Bu yöntem, değişkenliği azaltarak ve KOAH araştırmaları için erken aşama hedef doğrulamada öngörülebilir güveni artırarak güvenilir morfometrik analizi destekler. Birden fazla örneği eş zamanlı olarak işleme yeteneği, karşılaştırmalı çalışmaları kolaylaştırır ve güçlü portföy önceliklendirme kararlarını destekler.
Biyofarma Ar-Ge'de Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Fare modellerinde amfizem şiddetinin standardize morfometrik değerlendirmesine olanak tanır.
- Yeniden üretilebilir doku mimarisi sağlayarak aday hedeflerin fonksiyonel validasyonunu destekler.
- Fiksasyon kaynaklı artefaktları minimize ederek biyolojik risk azaltmayı kolaylaştırır.
- Histolojik son noktaların mekanistik hipotezlerle ilişkilendirilmesindeki öngörü güvenini artırır.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Alt akıştaki kantitatif histolojik analizler için valide edilmiş akciğer örneklerini hazırlar.
- Deneysel kohortlar arasında tekrarlanabilirliği ve karşılaştırılabilirliği sağlar.
- Birden fazla örneğin özdeş koşullar altında ölçeklenebilir şekilde işlenmesini destekler.
- Tarama kampanyalarında bileşiklerin akciğer yapısı üzerindeki etkilerinin güvenilir şekilde değerlendirilmesine olanak tanır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Preklinik akciğer patoloji modellerini, translasyonel çalışmalar için hastalıkla ilgili uç noktalarla uyumlu hale getirir.
- Doku hazırlama sürecini standartlaştırarak, keşif aşamasından preklinik doğrulamaya kadar sürekliliği sağlar.
- Biyobelirteç veya etkinlik değerlendirmelerini yanıltabilecek artefakt bulguların riskini azaltır.
- Güçlü histolojik verilere dayalı, riski ayarlanmış ilerleme kararlarını destekler.
İşleme Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu sabit basınçlı fiksasyon yöntemi, solunum yolu hastalığı modellerinde hem hedef doğrulamayı hem de öncü bileşik tanımlamasını destekleyerek, erken keşif ve preklinik doğrulama sürecine entegre olur.
- Keşif Biyolojisi: Amfizem modellerinde hipotez testi ve yolak analizi için güvenilir doku mimarisi sağlar.
- Tarama: Bileşik değerlendirmesi için tekrarlanabilir, kantitatif histolojik çıktılar sunar.
- Analitik: Karşılaştırmalı analiz için ortalama doğrusal kesişim ve yıkım indeksi gibi morfometrik ölçümlere olanak tanır.
- Translasyonel Araştırma: İlgili olduğunda, preklinik bulguların klinik amfizem patolojisi ile uyumlu hale getirilmesini destekler.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: Çeşitli fare akciğer hastalığı modellerine uyarlanabilen standart bir fiksasyon kapasitesi sunar.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Fiksasyon değişkenliğini minimize ederek öngörü güvenini ve hedef doğrulamayı artırır.
- Operasyonel Değer: Birden fazla örneğin eş zamanlı fiksasyonuna olanak sağlayarak işlem hacmini ve standardizasyonu artırır.
- Stratejik Değer: Güçlü histolojik son noktaları destekleyerek devam/tamamla kararlarının kalitesini ve sermaye verimliliğini geliştirir.
- Portföy Etkisi: Güvenilir doku verilerine dayanarak solunum yolu hastalığı programlarının riskle uyumlu önceliklendirilmesini kolaylaştırır.
Uygulama Hususları
- Fare cerrahi prosedürleri ve akciğer dokusu işlemleri konusunda uzmanlık gerektirir.
- Sabit basıncı koruyabilen özel fiksasyon ekipmanına ihtiyaç duyar.
- Tekrarlanabilirlik için fiksasyon parametrelerinin ekipler arası standardizasyonunu gerektirir.
- Deneysel gereksinimlere göre farklı fiksatiflere uyarlanabilir.
- Tehlikeli fiksasyon ajanlarının kullanımıyla ilgili güvenlik protokollerini kapsamalıdır.
