Syngeneic fare B hücreli lenfoma manken CD19 araba T hücrelerinin önceden klinik değerlendirme için
16 Ekim 2018
Burada, üretim ve retroviral iletim ve kullanımı karşı kurulan syngeneic A20 B hücreli lenfoma veya lymphodepleting olmadan BALB/c farelerde tedavi olarak fare CD19 araba T hücrelerinin önceden klinik test için bir iletişim kuralı mevcut önceden Klima.
Bu yöntem bize CAR T-hücre immün terapi alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir, CAR T-hücrelerinin genetik modifikasyonu ve diğer bağışıklık tedavileri ile kombinasyon gibi. Bu tekniğin ana avantajı Lenfo dolu ve Lenfo tükenmiş ayarları arasında karşılaştırmalar sağlar. Bu bize hem hastalığın ilerlemesi ve terapötik CAR T-hücreleri ile etkileşiminde endojen bağışıklık hücrelerinin rolünü görmek için izin verir.Bu modelde öğrenilen dersler doğrudan CEA gibi diğer hedefleri ile şeker evine tercüme edilebilir, çünkü katı tümör tanısı nda tedavi için 10 olarak bu tekniğin etkisi. Bu yordamı başlatmak için. İlk olarak, metin protokolünde belirtildiği gibi gerekli tüm ortam ve hücreleri hazırlayın. İlk gün tam DMEM'de 15 santimetre kare lik kültür yemekleri. Tohum 7.5 milyon platin E-Cells bu yemeklerde ve kuluçka gecede 37
Genel Bakış
Bu makale, retroviral transdüksiyon yoluyla murin CD19 CAR T hücreleri üretmek için bir protokol sunmaktadır. Bu hücrelerin, lenfodepleksiyona dayalı ön koşullandırmanın olduğu veya olmadığı durumlar altında, BALB/c farelerde yerleşmiş sinjenik A20 B-hücreli lenfomaya karşı bir tedavi olarak uygulanmasını incelemektedir.
Temel Çalışma Bileşenleri
Bilim Alanı
- İmmünoterapi
- Onkoloji
- Hücre Biyolojisi
Arka Plan
- CAR T-hücre tedavisi, kanser tedavisinde gelecek vaat eden bir yaklaşımdır.
- CAR T-hücreleri ile endojen bağışıklık hücreleri arasındaki etkileşimin anlaşılması kritik öneme sahiptir.
- Çalışma, lenfositce zengin (lympho-replete) ve lenfositce fakir (lympho-depleted) ortamların karşılaştırılmasına odaklanmaktadır.
- Elde edilen bilgiler, solid tümörler ve diğer terapötik hedefler için uygulanabilir olabilir.
Çalışmanın Amacı
- CD19 CAR T hücreleri üretmek için bir protokol geliştirmek.
- Bu hücrelerin lenfoma tedavisindeki etkinliğini değerlendirmek.
- Terapi sonuçlarında immün çevrenin rolünü incelemek.
Kullanılan Yöntemler
- Belirtilen protokole uygun olarak besiyeri ve hücrelerin hazırlanması.
- Platin E-Hücrelerin kültür kaplarına ekilmesi.
- Hücrelerin kontrollü koşullar altında inkübasyonu.
- CAR T-hücresi fonksiyonelliğinin farklı immün ortamlar altında değerlendirilmesi.
Ana Sonuçlar
- Murine CD19 CAR T hücrelerinin başarılı üretimi.
- İmmün koşullanmaya bağlı olarak terapötik etkinlikte ortaya çıkan farklılıkların gösterilmesi.
- Endojen immün hücrelerin tedavi yanıtındaki rolüne dair öngörüler.
- Onkolojideki daha geniş uygulamalar için potansiyel etkiler.
Sonuçlar
- Bu protokol, CAR T-hücresi araştırmaları için değerli bir araç sunmaktadır.
- Bulgular, CAR T-hücresi etkileşimlerinin in vivo ortamdaki işleyişinin anlaşılmasına katkıda bulunmaktadır.
- Gelecekteki çalışmalar, kanser tedavilerini geliştirmek amacıyla bu bulguları genişletebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Sektörel Uygulama ve Önemi
Bu protokol, CD19 CAR T hücrelerinin syngeneik bir fare lenfoma modelinde preklinik değerlendirmesine olanak tanıyarak, immüno-onkoloji süreçlerinde hedef doğrulama ve mekanistik risk azaltma çalışmalarını destekler. Lenforeplete ve lenfodeplete ortamların karşılaştırılması yoluyla, CAR T hücresi etkinliği ve immün mikroçevre etkileşimlerine ilişkin öngörüsel güvene veri sağlar. Bu model, IND öncesi çalışmalardan önce CAR T hücresi konstrüktleri ve kombinasyon tedavileri için erken aşama keşif kararlarını destekler.
Biyofarma Ar-Ge'sinde Stratejik Uygulamalar
Erken Keşif ve Hedef Doğrulama
- Bilimsel Değer: Hedef etkileşimini ve antijen spesifikliğini doğrulamak amacıyla, yerleşik B hücreli lenfomaya karşı CAR T hücresi konstrüktlarının sorgulanmasına olanak tanır.
- Operasyonel Değer: Akış sitometrisi, lüminometri ve ELISA kullanılarak CAR T hücresi fonksiyonelliğinin ex vivo değerlendirilmesi için tekrarlanabilir bir sistem sunar.
Tarama ve Analiz Geliştirme
- Bilimsel Değer: Genetik modifikasyonların ve sitokin silahlandırmanın (örneğin, IL-12) alt akış taramaları için valide edilmiş murin CAR T hücreleri üretir.
- Operasyonel Değer: Plat-E hücreleri, MP71 konstrüktları ve fibronektin destekli santrifüjasyon kullanarak retroviral üretim ve transdüksiyon iş akışlarını standartlaştırır.
Translasyonel ve Preklinik Araştırmalar
- Bilimsel Değer: Sistemik lenfoma modellerinde biyolüminesans görüntüleme ve hastalık progresyonu takibi yoluyla CAR T-hücre aktivitesini in vivo olarak test eder.
- Operasyonel Değer: Terapötik mekanizmaları riskten arındırmak ve kombinasyon stratejilerini belirlemek için lenforeplet ve lenfodeple tüme koşulların karşılaştırılmasına olanak tanır.
Boru Hattı ve İş Akışı Entegrasyonu
Bu yöntem, CAR T-hücresi tasarımlarının öncü adaylarının belirlenmesini destekleyerek ve immün bağlam modellemesi yoluyla preklinik doğrulamaya veri sağlayarak, keşiften preklinik aşamaya kadar uzanan sürece uyum sağlar.
- Keşif Biyolojisi: Lenfomadaki CAR T-hücresi mekanizmalarının ve endojen bağışıklık hücresi etkileşimlerinin hipotez testlerini destekler.
- Tarama: Tekrarlanabilir analiz koşulları için standartlaştırılmış, nicelendirilebilir CAR T-hücresi ürünleri sağlar.
- Analitik: Deneysel gruplar arasında karşılaştırmalı sonuçlar üretmek için biyolüminesans, akış sitometrisi ve ELISA kullanır.
- Translasyonel Araştırma: Keşif ve preklinik etkinlik değerlendirmesi arasında köprü kurmak için sinjenik konaklarda hastalık ilişkisini modeller.
- Kurumsal Yeniden Kullanım: CAR T-hücresi iterasyonlarını, sitokin kombinasyonlarını ve yardımcı tedavileri değerlendirmek için yeniden kullanılabilir bir platform oluşturur.
Operasyonel ve Kurumsal Etki
- Bilimsel Değer: Hedef doğrulamada öngörücü güven ve CAR T-hücresi/immün mikroçevre dinamiklerine dair mekanistik içgörü.
- Operasyonel Değer: Ex vivo ve in vivo okumalar genelinde tekrarlanabilir CAR T-hücresi üretimi ve fonksiyonel doğrulama.
- Stratejik Değer: Lenfodepleksyona bağımlı etkinliği ve kombinasyon tedavisi potansiyelini ortaya çıkararak devam/durdur (go/no-go) kararlarına veri sağlar.
- Portföy Etkisi: İmmün bağlam yanıtlılığına göre CAR T-hücresi adaylarının riskle uyumlu önceliklendirmesine olanak tanır.
Uygulama Hususları
- Retroviral vektör üretimi, hücre kültürü ve immünolojik analizlerde uzmanlık.
- Platin E-Hücrelerine, rekombinant fibronektin fragmanlarına ve biyogüvenlik seviyesi 2 altyapısına erişim.
- Transdüksiyon verimliliğinin standartlaştırılması ve partiler arası CAR ekspresyon doğrulaması.
- Farklı CAR konstrüktleri, hedef antijenler ve murin lenfoma modelleri için adaptasyon hususları.
- Pratik kısıtlamalar arasında modele özgü antijen ekspresyonu ve murin bağışıklık sistemi ile insan fizyolojisi arasındaki farklar yer almaktadır.
Biyofarma SSS
Chapters in this video
0:04
Title
0:55
Days 1 & 2: Preparation and Transfection of Plat-E Retroviral Packaging Cell Line
2:11
Day 3: Preparation of Virus-Containing Supernatant for Transduction and Isolation and In Vitro Activation of Mouse Splenic T Cells
4:27
Day 4: Transduction of Mouse T Cells
6:43
Day 5: Round 2 of Transduction
8:33
In Vitro Validation of CAR T Cell Activity
9:53
Results: Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells
11:32
Conclusion
