Bir melanom hasta-türetilen xenograft model

PDX kanser deneysel ön klinik çalışmalar devrim vardır. Artık laboratuvarda hastalarda neler olup bittiğini taklit edebiliriz. Ve şimdi direnci niçin yenebileceğimiz ve uzun vadede hastaların sağkalımlarını nasıl artırabileceğimiz üzerinde çalışabiliriz.

Prosedürü gösteren Min Xiao olacaktır. Başlamak için, daha önce toplanan melanom dokusunu steril petri kabına aktarın. Cerrahi makas, neşter bıçak ve forceps ile çalışma, ilk mümkün olduğunca normal doku normal doku kaldırmak.

Ve sonra tümörün içinde merkezi olarak bulunan soluk beyaz-ish doku ile tanımlanan nekrotik doku kaldırın. Daha sonra cerrahi fare implantasyonu için yaklaşık eşit parçalara bir ilk tümör yığını bölmek için bir neşter kullanın. Tümör dokusu mekanik ayrışma için çok zor ise, bir bulamaç oluşturmak için mümkün olduğunca ince tümör parçaları kıyma için bir neşter kullanın.

Kalsiyum ve magnezyum iyonları olmadan soğuk Hank's Balanced Salt Solution ile 50 mililitrelik bir tüp içine bulamaç aktarın. Santrifüj 220 kez g dört dakika dört derece santigrat. Supernatant çıkardıktan sonra, tümör dokusunun bir gram başına ısıtılmış, taze sindirim medya 10 mililitre bulamaç yeniden askıya.

Tüpü 37 derece lik su banyosuna 20 dakika yerleştirin ve her beş dakikada bir tek kullanımlık pipetle şiddetle karıştırın. 50 mililitreye kadar HBSS kullanarak bulamacı yıkayın, 220 kez g'de dört dakika dört dakika boyunca santrifüj edin ve süpernatantı çıkarın. Tümör dokusunun bir gram ısınırken beş mililitre önceden ısıtılmış TEG tampon ekleyin, yavaşça yeniden askıya almak için sallayın ve tüpü karıştırmadan 37 derecede iki dakika yerleştirin.

Tripsini söndürmek için, en az bir eşit hacimde soğuk boyama ortamı ekleyin ve 220 kez g'de dört dakika dört derece santigrat dereceye kadar santrifüj ekleyin. Supernatant çıkardıktan sonra, tümör dokusunun bir gram başına 10 mililitre boyama medya ekleyin ve yukarı ve aşağı boru lama tarafından pelet yeniden askıya. Fare enjeksiyonu için tek bir hücre süspansiyonu almak için 40 mikrometrelik bir süzgeçten süzün.

Cerrahi eksizyon veya cerrahi biyopsi dokusu implant, ilk NSG altı ila sekiz haftalık anestezili farelerin alt arka saç tıraş, saç olmadan yaklaşık 1,5 santimetre üç santimetre alan bırakarak. Tümör parçaları hazırlamak ve cerrahi implantasyon için bireysel höyükler halinde bir Petri tümör bulamaç bölmek. Neşter bir bıçak kullanarak, farenin arka merkezinde yaklaşık beş milimetre uzunluğunda bir kesi yapmak.

Bir çift forceps ile, operatörün karşısındaki kesinin kenarındaki deride yaşam. Diğer taraftan makas ile, hafifçe küçük makas kesim ile fasyal membran keserek kas tabakasından cilt ayırmak, böylece tümör dokusu için bir cep oluşturma. Bir tümör chuck almak için bir neşter bıçak kullanın, yanı sıra tümör bulamaç doku bireysel bir höyük, ve yavaşça oluşturulan cebine doku yerleştirin.

Sonra cepte tümör doku höyük üzerinde yapay ekstrasellüler matris 100 mikrolitre ekleyin. İki çift forsep kullanarak, yara kenarları birbirine yaklaşacak şekilde her iki uçtaki kesiği yukarı çekin. Sonra yara kapatmak için bir veya iki yara klipleri uygulayın.

Subkutan analjezik kilogram başına bir ila beş miligram enjekte. Iyileşme tamamen olduğunda, yaklaşık yedi gün sonra, yara klipleri çıkarın. Elle tutulur tümörleri kontrol etmek için fareleri haftada bir kez izleyin.

Tümörler istenilen hacca ulaştıktan sonra, ötanazi yapılan farenin tümörüne bitişik olan deriyi kaldırmak için cerrahi forsepsler kullanın ve kavisli makas kullanarak yatay bir kesim yapın. Tümörün her iki tarafında ve tümörün üzerinde cildi harekete geçirmek için künt bir ayırma tekniği kullanın, tümör açığa. Fasya tümörü ayırmak için makas ve neşter bıçak kullanın.

Tümörü kesip steril petri kabına aktarın. Küçük parçalar halinde tümör kesin ve tümör nekrotik doku kaldırın. Gelecekteki implantasyon için tümör dokusu banka için, iki ila üç küçük tümör parçaları almak ve parçalar halinde bir milimetre den daha küçük onları kıyma.

Tüm kıymalı dokuyu iki mililitrelik kriyojenik bir aşağılık haline aktarın. Bir mililitre dondurucu ortam ekleyin ve iyice karıştırın. Şişeleri önceden soğutulmuş izopropanol bazlı hücre dondurma kabına kuru buz üzerine yerleştirin, kabı bir gecede eksi 80 derecelik bir dondurucuda saklayın ve şişeleri sıvı nitrojen depolamaya aktarın.

Downstream tahlilleri için dondurucu dokuyu tutturmak için tümör doku parçalarını kriyojenik bir şişeye yerleştirin, kriyojenik aşağılıkları hemen sıvı nitrojene yerleştirin ve şişeleri eksi 80 santigrat derecelik dondurucuda saklayın. Tümör dokusunun üç farklı yöntemi karşılaştırıldığında, enzimatik sindirim kullanımı ile tümör hücrelerinin tek hücreli süspansiyon u başarılı oldu. Daha hızlı tümör büyümesine izin vermenin yanı sıra, bir ilk tümörün 10 ila 20 fareye genişletilmesi de yeterliydi, oysa tümör kıkırdak ve bulamaç yöntemi sadece 5-10 fareye genişletilebilir.

Melanom hasta kaynaklı ksenogreft modelleri genellikle tedavi edilirken hastanın gösterdiği ilaç hassasiyetini yansıtır. Başlangıçta bir BRAF inhibitörüne yanıt veren melanom hastasından elde edilen bir ksenogreft, ama sonuçta nüksetti, ayrıca BRAF protein inhibisyonuna ilk duyarlılık gösterdi, artı MEK kinaz inhibitörü, ama tümörler sonuçta nüksetti. Bu gelecekteki PDX genişlemeleri, terapi denemeleri yanı sıra karakterizasyonu başarı sağlayacak gibi, bankacılık için PDX doku hazırlarken dikkat etmek önemlidir.

PDX malzeme ile, tek hücreli RNA sıralama, tüm ekzom sıralama, ve proteomik karakterizasyonu, bizim laboratuvar kaldıraçları tedavi direnci ni incelemek için birçok yöntem arasında yer alıyor. PDX tekniği araştırmacılar daha iyi plastik üzerinde yetiştirilen geleneksel kanser modellerine göre bir insan hastada tümör biyolojisi recapitulate tümör hücreleri kullanarak tedavi direnci araştırmak için izin verir. Bu avantaj daha öngörücü öngörüler sağlar.

Araştırmacılar her zaman dikkat etmeli ve bir insan hastadan elde edilen tümör dokusu nu işlerken biyogüvenlik düzeyi iki önlem kullanmalıdır.