Name: İnsan Nöral Progenitor Hücre Kaynaklı Nöronlar ile Bir Neurite Outgrowth Assa ve Nörotoksisite Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-08-06T15:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Öğrenin, insan nöral progenitor hücre kaynaklı nöronlarla nörit uzama analizi ve küçük molekül bileşiklerin nörotoksisite değerlendirmesi yöntemini. Bu protokol, ilaç keşfi taramaları için yüksek translasyonel potansiyel sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu araştırma MAF'ye verilen NIMAD araştırma hibesi (940714) tarafından finanse edilmiştir.

<ol><li>Sherman, S. P., Bang, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screen+for+compounds+that+modulate+neurite+growth+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">High-throughput screen for compounds that modulate neurite growth of human induced pluripotent stem cell-derived neurons.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), (2018).</li>
<li>Al-Ali, H., Beckerman, S. R., Bixby, J. L., Lemmon, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+of+axon+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">In vitro models of axon regeneration.</a> Experimental Neurology. 287, 423-434 (2017).</li>
<li>Kudo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+neurite+outgrowth+in+PC12+cells+treated+with+temperature-controlled+repeated+thermal+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Induction of neurite outgrowth in PC12 cells treated with temperature-controlled repeated thermal stimulation.</a> PloS One. 10 (4), 0124024(2015).</li>
<li>Higgins, S., Lee, J. S., Ha, L., Lim, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducing+neurite+outgrowth+by+mechanical+cell+stretch%5BTitle%5D)+AND+%22BioResearch+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Inducing neurite outgrowth by mechanical cell stretch.</a> BioResearch Open Access. 2 (3), 212-216 (2013).</li>
<li>Muramatsu, R., Ueno, M., Yamashita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+regenerative+mechanisms+of+central+nervous+system+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience+Trends%22%5BJournal%5D)">Intrinsic regenerative mechanisms of central nervous system neurons.</a> Bioscience Trends. 3 (5), (2009).</li>
<li>Read, D. E., Herbert, K. R., Gorman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+shock+enhances+NGF-induced+neurite+elongation+which+is+not+mediated+by+Hsp25+in+PC12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Heat shock enhances NGF-induced neurite elongation which is not mediated by Hsp25 in PC12 cells.</a> Brain Research. 1221, 14-23 (2008).</li>
<li>Finan, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioactive+Compound+Screen+for+Pharmacological+Enhancers+of+Apolipoprotein+E+in+Primary+Human+Astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Bioactive Compound Screen for Pharmacological Enhancers of Apolipoprotein E in Primary Human Astrocytes.</a> Cell Chemical Biology. 23 (12), 1526-1538 (2016).</li>
<li>Magistri, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+transcriptomic+analysis+of+astrocytes+differentiation+from+human+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A comparative transcriptomic analysis of astrocytes differentiation from human neural progenitor cells.</a> European Journal of Neuroscience. 44 (10), 2858-2870 (2016).</li>
<li>Bez, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurosphere+and+neurosphere-forming+cells%3A+morphological+and+ultrastructural+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Neurosphere and neurosphere-forming cells: morphological and ultrastructural characterization.</a> Brain Research. 993 (1-2), 18-29 (2003).</li>
<li>Grandjean, P., Landrigan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobehavioural+effects+of+developmental+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurobehavioural effects of developmental toxicity.</a> The Lancet Neurology. 13 (3), 330-338 (2014).</li>
<li>Finkbeiner, S., Frumkin, M., Kassner, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-based+screening%3A+extracting+meaning+from+complex+data%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cell-based screening: extracting meaning from complex data.</a> Neuron. 86 (1), 160-174 (2015).</li>
<li>An, W. F., Tolliday, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-based+assays+for+high-throughput+screening%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Cell-based assays for high-throughput screening.</a> Molecular Biotechnology. 45 (2), 180-186 (2010).</li>
<li>Astashkina, A., Mann, B., Grainger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+evaluation+of+in+vitro+cell+culture+models+for+high-throughput+drug+screening+and+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+%26+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">A critical evaluation of in vitro cell culture models for high-throughput drug screening and toxicity.</a> Pharmacology & Therapeutics. 134 (1), 82-106 (2012).</li>
<li>Swinney, D. C., Anthony, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+were+new+medicines+discovered%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">How were new medicines discovered.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 10 (7), 507(2011).</li>
<li>Ryan, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurite+outgrowth+in+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+neurons+as+a+high-throughput+screen+for+developmental+neurotoxicity+or+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Neurite outgrowth in human induced pluripotent stem cell-derived neurons as a high-throughput screen for developmental neurotoxicity or neurotoxicity.</a> Neurotoxicology. 53, 271-281 (2016).</li>
<li>Magistri, M., Velmeshev, D., Makhmutova, M., Faghihi, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomics+profiling+of+Alzheimer%27s+disease+reveal+neurovascular+defects%2C+altered+amyloid-%CE%B2+homeostasis%2C+and+deregulated+expression+of+long+noncoding+RNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Alzheimer%27s+Disease%22%5BJournal%5D)">Transcriptomics profiling of Alzheimer's disease reveal neurovascular defects, altered amyloid-β homeostasis, and deregulated expression of long noncoding RNAs.</a> Journal of Alzheimer's Disease. 48 (3), 647-665 (2015).</li>
<li>Darbinyan, A., Kaminski, R., White, M. K., Darbinian, N., Khalili, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+primary+human+and+rodent+embryonic+neural+progenitor+cells+and+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuronal+Cell+Culture%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of primary human and rodent embryonic neural progenitor cells and cortical neurons.</a> Neuronal Cell Culture. , 45-54 (2013).</li>
<li>Gil-Perotín, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+neural+stem+cells+from+the+subventricular+zone%3A+a+review+of+the+neurosphere+assay%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+Record%22%5BJournal%5D)">Adult neural stem cells from the subventricular zone: a review of the neurosphere assay.</a> The Anatomical Record. 296 (9), 1435-1452 (2013).</li>
<li>Ebert, A. D., McMillan, E. L., Svendsen, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating%2C+expanding%2C+and+infecting+human+and+rodent+fetal+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Stem+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Isolating, expanding, and infecting human and rodent fetal neural progenitor cells.</a> Current Protocols in Stem Cell Biology. 6 (1), 2(2008).</li>
<li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fiji%3A+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676(2012).</li>
<li>Collins, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ImageJ+for+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">ImageJ for microscopy.</a> Biotechniques. 43 (1), 25-30 (2007).</li>
<li>Bagheri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDAC+Inhibitors+Induce+BDNF+Expression+and+Promote+Neurite+Outgrowth+in+Human+Neural+Progenitor+Cells-Derived+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">HDAC Inhibitors Induce BDNF Expression and Promote Neurite Outgrowth in Human Neural Progenitor Cells-Derived Neurons.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (5), 1109(2019).</li>
<li>Sartor, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+BDNF+expression+and+memory+by+HDAC+inhibition+requires+BET+bromodomain+reader+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Enhancement of BDNF expression and memory by HDAC inhibition requires BET bromodomain reader proteins.</a> Journal of Neuroscience. 39 (4), 612-626 (2019).</li>
<li>Conde, C., Cáceres, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule+assembly%2C+organization+and+dynamics+in+axons+and+dendrites%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Microtubule assembly, organization and dynamics in axons and dendrites.</a> Nature Reviews Neuroscience. 10 (5), 319(2009).</li>
<li>Schmitz, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+analysis+of+neuronal+morphology%2C+synapse+number+and+synaptic+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Automated analysis of neuronal morphology, synapse number and synaptic recruitment.</a> Journal of Neuroscience Methods. 195 (2), 185-193 (2011).</li>
<li>Grandjean, P., Landrigan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+neurotoxicity+of+industrial+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Developmental neurotoxicity of industrial chemicals.</a> The Lancet. 368 (9553), 2167-2178 (2006).</li>
<li>Dragunow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+human+brain+in+preclinical+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">The adult human brain in preclinical drug development.</a> Nature reviews Drug Discovery. 7 (8), 659(2008).</li>
<li>Dolmetsch, R., Geschwind, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+brain+in+a+dish%3A+the+promise+of+iPSC-derived+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The human brain in a dish: the promise of iPSC-derived neurons.</a> Cell. 145 (6), 831-834 (2011).</li>
<li>Pan, C., Kumar, C., Bohl, S., Klingmueller, U., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+proteomic+phenotyping+of+cell+lines+and+primary+cells+to+assess+preservation+of+cell+type-specific+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Comparative proteomic phenotyping of cell lines and primary cells to assess preservation of cell type-specific functions.</a> Molecular & Cellular Proteomics. 8 (3), 443-450 (2009).</li>
<li>Alge, C. S., Hauck, S. M., Priglinger, S. G., Kampik, A., Ueffing, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+protein+profiling+of+primary+versus+immortalized+human+RPE+cells+identifies+expression+patterns+associated+with+cytoskeletal+remodeling+and+cell+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Proteome+Research%22%5BJournal%5D)">Differential protein profiling of primary versus immortalized human RPE cells identifies expression patterns associated with cytoskeletal remodeling and cell survival.</a> Journal of Proteome Research. 5 (4), 862-878 (2006).</li>
<li>Yeo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Neural+Lineages+as+In+Vitro+Models+for+Screening+the+Neuroprotective+Properties+of+Lignosus+rhinocerus+%28Cooke%29+Ryvarden%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Human Embryonic Stem Cell-Derived Neural Lineages as In Vitro Models for Screening the Neuroprotective Properties of Lignosus rhinocerus (Cooke) Ryvarden.</a> BioMed Research International. 2019, (2019).</li>
</ol>

Tüm yazarlar hiçbir çıkar çatışması olduğunu belirtmez.

Bu protokol, test bileşikleri ile tedavi üzerine neurite uzunluğu için test açıklayan birkaç yayınlanan makalelerden biridir. Ayrıca, bir neurite outgrowth tsay ve nörotoksisite değerlendirmesi için hNPCs nasıl kullanılacağını açıklar. HNCs kaynaklı nöronlar bu neurite outgrowth ve nörotoksisite değerlendirmesi kullanarak, epigenetik küçük molekül bileşikleri bir kategorinörojenik potansiyeli, HDAC inhibitörleri, neurite outgrowth indükleyen22gösterilmiştir . Ayrıca, Sartor ve ark. tarafından sunu...

Neurite büyüme nöronal ağ ve sinir rejenerasyon oluşumu için temel bir süreçtir1,2. Bir yaralanma sonrasında, neurite outgrowth sinir sisteminin yenilenmesinde önemli bir rol oynar. Neurite outgrowth da nörodejeneratif,bozukluklar ve nöronal yaralanma3,4,5,6sonuçlarını artırmak için nöronal rejeneratif faaliyetleri indükleyen ekstrasellüler sinyal önemli bir unsurdur .
Çeşitli nöral soy üreten kendi farklılaşma potansiyelini koruyarak, insan nöral progenitor hücreleri (hNPCs) merkezi sinir sistemi çalışmaları için bir model sistemi sağlayabilir (CNS) fonksiyonu ve gelişimi7,8,9. HNP'lerin birincil insan hücresi modeli olarak yüksek çeviri potansiyeli ve fizyolojik önemi, neurite büyümeye bağlı ilaç keşif taramalarında önemli bir avantaj sağlamaktadır. Ancak, bakım ve yüksek iş gücü tahlilleri için birincil hücre modelleri ölçekleme zaman alıcı ve emek yoğunolabilir 10,11,12,13.
Neurite outgrowth çalışmalarında sunulan yöntemin uygulanmasına ek olarak, nörotoksisite değerlendirmesi hNPC kaynaklı nöronlar kullanılarak başka bir uygulamadır. Ya incelenmemiş ya da kötü anlaşılmış nörotoksisite potansiyeline sahip binlerce ticari kimyasal bileşik vardır. Bu nedenle, daha güvenilir ve etkili tarama deneyleri değerlendirmek için, ayırt etmek ve gelişimsel nörotoksisite ortaya potansiyeline dayalı bileşiklersıralamak için yüksek talep14. Ortamda denenmemiş bileşiklerin bolluğu ile birlikte nörolojik hastalıkların yaygınlık ve insidansı artış nörotoksisite 15 oluşturabilecek tehlikeli çevresel bileşikleri belirlemek için daha güvenilir ve verimli deneylergeliştirilmesini gerektirir15.
Burada sunulan yöntem, bileşiklerin insan nöral progenitor hücre kaynaklı nöronlardan yararlanarak nötrat büyümesini ve nörotoksisiteyi tetikleme yeteneğini taramak için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>4 kuyulu Cam Oda Slaytları</td><td>Sigma</td><td>PEZGS0816</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A-11001</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594</td><td>Invitrogen</td><td>R37117</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-&beta;-Tubulin III</td><td>Termo</td><td>MA1-118X</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Termo</td><td></td><td></td>17504001</tr><tr><td>B27 - eksi A vitamini</td><td>Thermo</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>BDNF</td><td>PeproTech</td><td>450-02</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma</td><td>A8531</td><td></td></tr><tr><td>CellTiter-Glo</td><td>Promega</td><td>G7572</td><td></td></tr><tr><td>CoolCell</td><td>Corning</td><td>432000</td><td>Hücre dondurma kapları, standartlaştırılmış kontrollü oran -1 & # 176; -80&#176'da C/dakika hücre donması; C dondurucu</td></tr><tr><td>CryoStor CS10</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>7930</td><td>%10 DMSO</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>34869-100ML</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td></td></tr><tr><td>FGF</td><td>Gibco</td><td>PHG6015</td><td></td></tr> içeren kriyoprezervasyon ortamı<tr><td>Formaldehit</td><td>Termo</td><td>FB002</td><td></td></tr><tr><td>GDNF</td><td>PeproTech</td><td>450-10</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td>L-alanil-L-glutamin takviyesi</td></tr><tr><td>Keçi Serumu</td><td>Termo</td><td>50062Z</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Calbiochem</td><td>375095</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma</td><td>L2020-1MG</td><td></td></tr><tr><td>L-Askorbik Asit</td><td>Sigma</td><td>A92902-25G</td><td></td></tr><tr><td>L-lizin</td><td>Sigma</td><td>L5501</td><td></td></tr><tr><td>MEM esansiyel olmayan amino asitler</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>mFreSR</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>5854</td><td>İnsan embriyonik ve indüklenmiş pluripotent kök hücrelerin kriyoprezervasyonu için tasarlanmış serumsuz kriyoprezervasyon ortamı</td></tr><tr><td>N2</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>71376</td><td></td></tr><tr><td>Nörobazal Orta</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td></td></tr><tr><td>Nunc 384 Kuyulu Polistiren Beyaz Mikroplakalar</td><td>Termo</td><td>164610</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Termo</td><td>10010-049</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-lizin</td><td>Sigma</td><td>P5899-5MG</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Altın Antifade Mountant</td><td>Thermo</td><td>P10144</td><td></td></tr><tr><td>Retinoik Asit</td><td>Sigma</td><td>R2625</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Azide</td><td>Sigma</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase</td><td>Gibco</td><td>A1110501</td><td>Proteolitik ve kollajenolitik enzimler içeren hücre ayrışma reaktifi</td></tr><tr><td>Sinaptofizin</td><td>Thermo</td><td>MA5-14532</td><td></td></tr><tr><td>Tris Baz</td><td>Sigma</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100-100ML</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan nöral progenitor hücre kaynaklı nöronlar ile bir neurite outgrowth assa ve nörotoksisite değerlendirmesi

A Neurite Outgrowth Assay and Neurotoxicity Assessment with Human Neural Progenitor Cell-Derived Neurons

Neurite outgrowth tsay ve nörotoksisite değerlendirmesi burada sunulan yöntem kullanılarak yapılabilir iki önemli çalışmalardır. Bu protokol, nöronal morfolojinin, küçük molekül bileşikleri ile tedavi üzerine nötrit uzunluğu ve sinaptik protein lokalizasyonu ve bolluğu üzerine yapılan değişikliklerin nicel ölçümleri ile birlikte güvenilir bir analiz sağlar. Neurite outgrowth çalışmalarında sunulan yöntemin uygulanmasına ek olarak, potansiyel gelişimsel nörotoksisite etkisine göre ticari kimyasal bileşikleri değerlendirmek, ayırt etmek ve sıralamak için nörotoksisite değerlendirmesi yapılabilir.
Hücre hatları günümüzde yaygın olarak nörolojik bileşik tarama tahlillerinde kullanılan olsa da, genellikle genetik ve fenotipik doku kökenlerinden farklıdır. Birincil hücreler ise in vivo gözlenen önemli belirteçleri ve işlevleri korurlar. Bu nedenle, çeviri potansiyeli ve fizyolojik alaka nedeniyle bu hücrelerin neurite outgrowth çıkış ve nörotoksisite değerlendirmesi sunabilir önemli ölçüde birincil insan hücre modeli olarak insan nöral progenitor hücreleri (hNPCs) kullanarak yararlanabilir.
Burada sunulan yöntem, bileşiklerin insan nöral progenitor hücre kaynaklı nöronlardan yararlanarak nötrat büyümesini ve nörotoksisiteyi tetikleme yeteneğini taramak için kullanılabilir."

El yazmasısunulan protokol başarıyla iki yeni yayınlanan kağıtları22,23kullanılmıştır . Şekil 3, HDAC inhibitörlerinin epigenetik bileşikler olarak nötrit lerin uzantısı üzerindeki etkisini incelerken hNPC'lerden türetilmiş nöronların kullanımını göstermektedir.
Ayrıca, Şekil 4'te test edilen bileşiklerin nörotoksisitesi (HDAC inhibitörleri) aynı anda 384-iyi plakalarda hNPC'l...

Sunulan protokol, küçük molekül bileşiklerinin nörat dışı büyüme testini ve nörotoksisite değerlendirmesi için bir yöntem tanımlamaktadır.

İnsan Nöral Progenitor Hücre Kaynaklı Nöronlar ile Bir Neurite Outgrowth Assa ve Nörotoksisite Değerlendirmesi

Neurite outgrowth assay and neurotoxicity assessment are two major studies that can be performed using the presented method herein. This protocol provides ...

İnsan biyolojisi ve küçük molekül bileşiklerinin nörotoksisite değerlendirmesi ile son derece alakalı olan neurite outgrowth testini açıklayan sunulan protokol. Birincil insan hücre modeli olarak insan nöral progenitor hücrelerinin yüksek çeviri potansiyeli ve fizyolojik önemi, neurite büyümeile ilişkili ilaç keşif taraması ve nörotoksisite değerlendirmesinde önemli bir avantaj sağlamaktadır. Sunulan protokolden yararlanarak, insan kaynaklı pluripotent kök hücre ve insan embriyonik kök hücre kaynaklı nöronlar da nötrit outgrowth test ve nörotoksisite değerlendirmesi için alternatif hücre kaynakları olarak kullanılabilir.Yüzen nörosferler ile medya toplama ve 50 mililitrekonik tüp aktararak başlayın. Tüpü 300-400 kez g olarak üç dakika santrifüj edin. Sonra dikkatle supernatant aspire.ve çözülmüş hücre bölünmesi reaktifinin 500 mikrolitresindeki küreleri yeniden askıya alın. Küreleri 37 derecede 5-15 dakika kuluçkaya yatırın. Sonra önceden ısıtılmış kültür medya beş ila 10 mililitre ekleyin ve nörosferler tortu için beş dakika için 300 ila 400 kez g tüp santrifüj.Supernatant aspirate ve nörosferler tek bir hücre süspansiyon oluşturana kadar 1000 mikrolitre pipet ile yukarı ve aşağı

a-neurite-outgrowth-assay-neurotoxicity-assessment-with-human-neural

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu makale, bir roman protokol ve reaktif bileşikler ve tedavilerin yüksek içerik analizi kullanarak nöronlar ve astrositler ortak kültürleri üzerinde nörotoksik etkileri hassas ölçümü için tasarlanmıştır ayarlamak açıklamaktadır. Sonuçlar yüksek bir içerik analizi nörotoksisite değerlendirmesi için heyecan verici yeni bir teknoloji temsil ettiğini göstermektedir.

Nörotoksisite Yüksek İçerik Analizi Nöronal ve Astrosit Hücre Co-Kültür Testi

Biz insan nöronal atalarıdır ve sinir onarımı için gelişmekte olan MSS nöronal hücre tipleri büyük bir arz türetme sağlayan küçük moleküller ile tanımlanan koşullar altında tutulan pluripotent insan embriyonik kök hücreleri doğrudan neuroblasts indüksiyonu için bir protokol kurduk.

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Nöronal atalarıdır ve Nöronlar Verimli türetilmesi

Bu video protokolü akış sitometrisi teknolojisi kullanılarak fiziksel (boyutu ve iç boyu) ve floresan özelliklerine bağlı olarak kök sinir hücrelerini yenilenebilir bir kaynaktan (NSC'lerde) den nöronal progenitör hücre üretimi ve daha sonra saflaştırma için yeni bir yöntem gösterilmektedir.

Neuroblast Test: Akım Sitometri Kullanımı Farklılaşan Nöral Kök Hücre Döl nöronal Progenitör Hücrelerinin üretilmesi ve zenginleştirilmesi için bir Testi

Bu video, mikroskobik analiz yoluyla nöral öncü hücre nörosfer göç testini (nörosferden nöral öncü hücrelerin göç tepkisini incelemek için bir in vitro test) göstermektedir.

NPC Nörosfer Testi: Nörosferden Nöral Öncü Hücrelerin Göç Tepkisini Değerlendirmek İçin Bir İn Vitro Test

Bu videoda, nörit büyümesini teşvik eden küçük moleküllü bileşiklerin hNPC'den türetilmiş nöronların canlılığı üzerindeki nörotoksisitesini değerlendirmek için lüminesans tabanlı bir yöntemi açıklıyoruz. Test, test bileşiği tedavisini takiben nörotoksisiteyi değerlendirmek için hücre canlılığının bir göstergesi olan hücre içi ATP seviyesini ölçer.

Test Bileşiklerinin Nöronlar Üzerindeki Nörotoksisitesini Değerlendirmek için Lüminesans Tabanlı Test

Farklılaşmış insan nöral kök hücreleri (hNSC'ler) üzerindeki miRNA'lardaki değişiklikleri karakterize etmek amacıyla, üç boyutlu bir sistemde hNSC farklılaşmasını, miRNA PCR dizisi ile mikroRNA ekspresyonundaki değişikliklerin değerlendirilmesini ve miRNA hedef tahmini için hesaplamalı analizi ve ikili lusiferaz testi ile doğrulanmasını açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Kültürleri, mıkroRNA Analizi ve Putatif Hedef Genler üzerinde bir İnsan Sinir Kök Hücre Hattı Farklılaşma

Nörobiyoloji ve nörovirolojide, insan nöronlarında in vivo olarak meydana gelenler için translasyonel bir model olarak hizmet eden güvenilir, tekrarlanabilir bir in vitro sisteme sahip olmak kritik öneme sahiptir. Bu protokol, SH-SY5Y insan nöroblastom hücrelerinin in vitro uygulamalarda kullanılmak üzere canlı nöronlara nasıl kültürleneceğini ve ayırt edileceğini açıklar.

SH-SY5Y İnsan Nöroblastom Hücre Hattı Farklılaşma

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücreler (hiPSC), ilaç ve kimyasal tarama için ve nörotoksisiteyi de içeren toksisite testi için yeni in vitro modellerin geliştirilmesi için güçlü bir araç olarak düşünülür. Burada, hiPSC'lerin nöronlara ve glia'ya diferansiyelleştirilmesi için ayrıntılı bir protokol anlatılmıştır.

Nörotoksisite Testi İçin İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerin Nöronlar ve Glia Karışık Kültürlerine Ayrıştırılması Protokolü

Nükleer silahların yayılmasına karşı geçiş ve neurite çıkıntı kez nöropsikiyatrik hastalık tedirgin gibi nörogelişimsel işler. Böylece, biz hızla ve tekrarlanarak insan IPSC kaynaklı NPCs bu nörogelişimsel işlemlerde değerlendirmek için protokolleri mevcut. Bu iletişim kuralları da ilgili büyüme faktörleri ve tedavi etkileri NPC gelişimi üzerine bir değerlendirme sağlar.

Hızlı algılama nörogelişimsel fenotipleri insan sinir habercisi hücrelerdeki (NPCs)

Bu protokol, daha önce birden fazla hafta boyunca in vitro nöral atalardan farklılaşmış insan kök hücre türetilmiş nöronlar resucan ve kültür için ayrıntılı bir prosedür açıklar. Prosedür, ışık mikroskobu ve yüksek içerikli tarama ile uyumlu bir formatta nöritler, sinapslar ve geç ifade nöronal belirteçlerin görüntüleme tabanlı tahlilleri kolaylaştırır.

Neuritogenez ve Sinaps Matürasyonu yüksek içerikli Tarama için İnsan Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Nöronların Post-differentiation Rekaplamag

Bu yazıda, EGFP ve ilgi proteini ile birlikte transfekting tarafından embriyonik sıçan kortikal nöronlarda neurite büyüme incelenmesi için basit bir protokol açıklanmıştır.

Primer Nöronlarda Neurite Outgrowth Çalışma için Geliştirilmiş Yeşil Floresan Protein Tabanlı Test

Öğrenin, insan nöral progenitor hücre kaynaklı nöronlarla nörit uzama analizi ve küçük molekül bileşiklerin nörotoksisite değerlendirmesi yöntemini. Bu protokol, ilaç keşfi taramaları için yüksek translasyonel potansiyel sunar.

İnsan Nöral Progenitor Hücre Kaynaklı Nöronlar ile Bir Neurite Outgrowth Assa ve Nörotoksisite Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet