Name: Nitrik Oksit ve Türevlerinin Otoksidasyon ve Nitroslu Bileşiklerden Tespiti için Kemilüminesans Bazlı Testler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Öğrenin, kemilüminesans dedektörü kullanarak nitrik oksit metabolitlerini hassas bir şekilde ölçme yöntemini. Bu protokol, biyolojik örneklerde minimal değişiklikleri tespit etmek için en duyarlı yaklaşımı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu makalede bildirilen protokoller, Dr. Warren Zapol'un Massachusetts Genel Hastanesi Anestezi Bölümü Kritik Bakımda Anestezi Araştırma Laboratuvarı'nın önceki bursiyerlerinin birikmiş katkılarıyla mümkün olmuştur. Dr. Akito Nakagawa, Francesco Zadek, Emanuele Vassena, Chong Lei, Yasuko Nagasaka, Ester Spagnolli ve Emanuele Rezoagli'nin katkılarını takdir ediyoruz.

L.B., hemoliz ve nitrik oksit üzerindeki çalışmaları için baş araştırmacı olarak K23 HL128882 / NHLBI NIH'den maaş desteği almaktadır. LB, George Mason Üniversitesi Mercatus Merkezi'ndeki "COVID-19 araştırması için Hızlı Hibeler" ve iNO Therapeutics LLC'den hibe aldı. B.Y., NHLBI/#R21HL130956 ve DOD/Cenevre Vakfı'ndan (W81XWH-19-S-CCC1, Log DM190244) gelen hibelerle desteklenmektedir. B.Y., MGH'de nitrik oksitin elektrik üretimi konusunda patent aldı.
L.B. ve B.Y., COVID-19 hastalığında NO teslimatı için patent başvurusunda bulundu PCT başvuru numarası: PCT / US2021 / 036269 7 Haziran 2021'de dosyalandı. RWC, düşük kaynak ortamlarında bulunan çocuklarda tüberkülozun merkezi olmayan teşhisini amaçlayan teknoloji geliştirme baş araştırmacısı olarak Unitaid'den maaş desteği almaktadır.

Yüksek hassasiyet nedeniyle, NO ve ilgili bileşiklerin belirlenmesi için kemilüminesans bazlı testler yüksekNO2 kontaminasyon riskine sahiptir. Deneyde kullanılan her reaktif (özellikle NO 2- bloke edici çözelti) ve seyreltici (ddH 2 O dahil), arka plan sinyalini düzeltmek için NO2- içeriği açısından test edilmelidir. Nitrit, tam kanda yaklaşık 10 dakika yarı ömürlü bir yarı ömür ile son derece reaktiftir ve hızlaNO3- üreti...

<table><tbody><tr><td>Asetik Asit</td><td>Sigma</td><td>45754</td><td>500 mL - sıvı</td></tr><tr><td>Köpük Önleyici B Emülsiyonu</td><td>Sigma</td><td>A5757</td><td>250 mL - sıvı</td></tr><tr><td>DETA NONOate</td><td>Cayman</td><td>82120</td><td>10 mg</td></tr><tr><td>Gibco DPBS (1x) kalsiyum yok, magnezyum yok</td><td>ThermoFisher</td><td>14190144</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Hidrooklorik Asit %37 (1 M)</td><td>Sigma</td><td>258148</td><td>500 mL - sıvı</td></tr><tr><td>İyot</td><td>SAFC</td><td>207772</td><td>100 g - katı</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Cıva (II) Klorür ACS reaktifi> %99,5</td> <td>Sigma</td><td>215465</td><td>100 g - katı (suda çözünür)</td></tr><tr><td>Mili-Q Su Arıtma Sistemi</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Model 705 RN 50 & mu; L şırınga</td><td>Hamilton</td><td>80530</td><td>Mikrolitre şırınga</td></tr><tr><td>Model 802 N 25 & mu; L Şırınga</td><td>Hamilton</td><td>84854</td><td>Mikrolitre şırınga</td></tr><tr><td>N-etilmaleimid</td><td>Sigma</td><td>4260</td><td>25 g - kristalin</td></tr><tr><td>Nitrik Oksit Analizörü + Paket Yazılımı - Temizleme Kabı</td><td>Zysense</td><td>NOA 280i</td><td>Kemilüminesans Dedektörü</td></tr><tr><td>Nonidet p-40&nbsp; (NP-40)</td><td>ThermoFisher</td><td>85125</td><td>%10 - 500 mL</td></tr><tr><td>Potasyum hekzasiyanoferrat (III) ACS reaktifi; %99</td> <td>Sigma</td><td>244023</td><td>100 g - toz</td></tr><tr><td>Potasyum İyodür ACS reaktifi> %99</td> <td>Sigma</td><td>221945</td><td>100 g - katı</td></tr><tr><td>Potasyum Nitrit kristal. Analiz için EMSURE ACS</td><td>Supelco</td><td>105067</td><td>250 g - kristalin</td></tr><tr><td>PowerGen 125</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-359-251</td><td>Mekanik Homojenizatör</td></tr><tr><td>RV3 İki Kademeli Döner Kanatlı Pompa</td><td>Edwards</td><td>A65201906</td><td>Vakum Pompası - Analizör Sodyum Heparin ile birlikte verilir</td></tr><tr><td>- BD Hemogard Clo</td><td>BD Biosciences</td><td>BD367871</td><td>75 USP Birimi</td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit susuz ACS reaktifi &ge; %97</td> <td>Sigma</td><td>795429</td><td>1 kg - peletler</td></tr><tr><td>Sodyum Nitrat ACS reaktifi > %99</td> <td>Sigma</td><td>221341</td><td>500 g - toz</td></tr><tr><td>Sodyum nitrit & ge; %99</td> <td>Sigma</td><td>S2252</td><td>500 g - kristal</td></tr><tr><td>Sülfanilamid & ge; %98</td> <td>Sigma</td><td>S9251</td><td>100 g - katı</td></tr><tr><td>Vanadyum (III) Klorür</td><td>Sigma</td><td>112393</td><td>25 g - katı - Dikkat (ekzotermik)</td></tr><tr><td>Whatman 1 Filtre Kağıdı</td><td>Sigma</td><td>WHA10010155</td><td></td></tr></tbody></table>

nitrik oksit ve türevlerinin otoksidasyon ve nitroslu bileşiklerden tespiti için kemilüminesans bazlı testler

Chemiluminescence-based Assays for Detection of Nitric Oxide and its Derivatives from Autoxidation and Nitrosated Compounds

İn vivo nitrik oksit (NO) aktivitesi, doğrudan etkilerinin, NO otoksidasyonundan üretilen türevlerinin etkisinin ve nitroslu bileşiklerin etkilerinin birleşik sonuçlarıdır. NO metabolitlerinin ölçülmesi, hem vasküler seviyelerde hem de diğer dokularda, özellikle de eksojen NO'nun uygulandığı deneysel ortamlarda NO aktivitesini incelemek için gereklidir. Ozon bazlı kemilüminesans testleri, hem sıvılarda (plazma, doku homojenatları, hücre kültürleri dahil) hem de gaz karışımlarında (örneğin, ekshale edilen nefes) NO ve NO metabolitlerinin hassas ölçümlerine izin verir. NO, uyarılmış bir durumda azot dioksit üretmek için ozon ile reaksiyona girer. Sonuçta ortaya çıkan ışık emisyonu, fotoalgılamaya ve numunenin NO içeriğini yansıtan bir elektrik sinyalinin üretilmesine izin verir. Aynı numuneden elde edilen alikotlar, nitrat, nitrit, S-nitrosotioller ve demir-nitrosil kompleksleri gibi spesifik NO metabolitlerini ölçmek için kullanılabilir. Ek olarak, hücresiz hemoglobin tarafından tüketilen NO, kemilüminesans analizi ile de ölçülür. Tüm bu tekniklerin bir örneği verilmiştir.

Hücresiz Hb testi ile NO-tüketimi, bilinen hücresiz oksiHb konsantrasyonlarını içeren örneklerde kullanılmıştır (Şekil 4). Bir oksiHb hemi stokiyometrik olarak tahlilde bir NO molekülünü serbest bıraktığından, tahlil için kalibrasyon eğrisini oluşturmak için saflaştırılmış hücresiz oksiHb kullanılır (Ek Şekil 3).
Kalp cerrahisi sırasında kardiyopulmoner bypass'tan (KPB) çıkan hastalarda hücresiz Hb (kolorimetrik tahlil ile ölçülen) ile NO tüketimi...

Burada, nitrik oksit ve biyolojik olarak ilgili türevlerini, yüksek hassasiyete sahip kemilüminesans bazlı testler kullanarak tespit etmek için protokoller sunuyoruz.

Nitrik Oksit ve Türevlerinin Otoksidasyon ve Nitroslu Bileşiklerden Tespiti için Kemilüminesans Bazlı Testler

Nitric oxide (NO) activity in vivo is the combined results of its direct effects, the action of its derivatives generated from NO autoxidation, and the ...

Bu protokol, araştırmacıların nitrik oksit metabolitlerinin ölçümü için sahada özel personel istihdam etme rehberliği veya masrafı olmadan bir kemilüminesans dedektörünü yetkin bir şekilde kullanmalarını sağlar. Kemilüminesans bazlı tahlil, herhangi bir biyolojik numunedeki nitrik oksit ve metabolitlerindeki minimum değişiklikleri tespit etmek için en hassas yöntemdir. Solunan nitrik oksit, çok çeşitli hastalıklar için kullanılan terapötik bir gazdır.Hastalığın ilerlemesi ve iyileşmesinin nitrik oksit metabolit seviyeleri ile doğru bir şekilde ilişkili olması çok önemlidir. Bir antimikrobiyal olan inhale nitrik oksit, hava yolu bulaşıcı hastalıkları olan hastaların tedavisinde umut vaat etmektedir. Kemilüminesans yöntemi, nitrik oksit dozunun ve metabolitlerinin mikrobiyolojik ve patofizyolojik değişikliklerle ilişkilendirilmesi konusunda fikir vermektedir.DETA-NONOate çözeltisini hazırlamak için, 100 milimolar DETA-NONOate üretmek ve buz üzerinde tutmak için pH 7.4 PBS'de 610 mikrolitre 10 milimolar sodyum hidroksite 10 miligram DETA-NONOat ekleyin. Devam etmek için, oksijen hattını kemilüminesans dedektörüne bağlayın ve oksijen tankını, metinde verilen üreticinin talimatına göre

chemiluminescence-based-assays-for-detection-nitric-oxide-its

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Burada hücreler reaktif oksijen türlerinin varlığını test etmek ve değerlendirmek için basit yöntemler öneriyoruz.

Kanserler Üretim ve reaktif oksijen türlerinin (ROS Algılama)

Nitrik oksit (NO) endojen üretimi biyolojik fonksiyonları çok çeşitli düzenler. Bu NO dayalı sinyal bozulması veya düzensizliği birçok insan hastalıkları dahil olduğu giderek daha açık hale gelmektedir. Yöntem NO metabolitleri insan hastalığı için yeni tanısal veya prognostik biyolojik sağlayabilir ilgili ölçmek için.

Nitrik Oksit Biyoaktivite içlin Analitik Teknikler

NADPH oksidaz fagositler reaktif oksijen türlerinin ana kaynağı (ROS) 'dir. Çünkü ROS geçici doğası nedeniyle, canlı hayvanlarda ROS seviyelerini ölçmek ve izlemek zordur. Yaşayan farelerde ROS seri ölçümü için bir minimal invaziv bir yöntem tarif edilmiştir.

Farklı Hayvan Modelleri NADPH Oksidaz Aktivitesinin Biyoparlaklık Görüntüleme

Bu yazıda floresan boya tr yüz eşzamanlı algılama ve hücre içi nitrik oksit görselleştirme (NO) ve süperoksit anyon (O 2 diaminofluorescein-2 diasetat (DAF-2DA) ve dihydroethidium (DHE) kullanarak adapte nispeten kolay bir yöntem tarif .- ) sırasıyla, taze bir obezite fare modelinin sağlam aorta izole edilmiştir.

Bozulmamış Arterlerin endotel katmanı Nitrik Oksit ve Süperoksit En Yüz Algılama

Bu protokol, kemilüminesan ışık emisyonu kaynağı olarak bir rutenyum kompleksi kullanan ve böylece in vivo görüntüleme sırasında yüksek sinyal-gürültü oranları üreten yeni bir intraoperatif görüntüleme tekniğini tanımlar. İntraoperatif görüntüleme, cerrahi prosedürlerin gerçekleştirilme biçiminde devrim yaratabilecek genişleyen bir alandır.

Biyolojik ortamda oluşturuluyor ve Gözlem Kemilüminesans için Yeni Bir Teknik

Nitrik oksit (NO) vasküler homeostazda önemli bir sinyal molekülüdür. NO in vivo üretimi, doğrudan ölçüm için çok düşüktür. Kemilüminesans, öncüllerini ve oksidasyon ürünlerini, nitrit ve nitratı ölçerek NO döngüsü hakkında yararlı bilgiler sağlar. Vücut dokularında ve sıvılarında nitrit/nitrat tayini anlatılmaktadır.

Kemilüminesans Yöntemi kullanılarak biyolojik Malzemeleri, Nitrik Oksit Yolu&#39;ndaki nitrit ve nitrat, Metabolitler Ölçme

Bu el yazması, floresan mikroskobu kullanarak tek hücreli NO• dalgalanmalarını gerçek zamanlı olarak izlemek için genetik olarak kodlanmış yeni nitrik oksit (NO•) problarının (geNOps) uygulanması için protokoller sunar. Bireysel endotel hücreleri düzeyinde Ca2+ ile tetiklenen NO• oluşumu, geNOps'un kimyasal bir Ca2 + sensörü ile birleştirilmesiyle görselleştirildi.

Genetik Kodlanmış Floresan Nitrik Oksit Uygulama (• NO) Tek Hücrelerde YOK • Sinyallerin Gerçek zamanlı Görüntüleme için sondalar, geNOps,

Nitrat ve nitrit seviyelerini ölçmek ve karşılaştırmak için sıçan iskelet kası dokusunun dört farklı kas grubunun homojenizasyonu için üç farklı yöntem için protokoller sunuyoruz. Ayrıca, doku numune büyüklüğünün homojenizasyon sonuçlarını etkileyip etkilemediğini araştırmak için farklı numune ağırlıklarını karşılaştırıyoruz.

Nitrat ve Nitrit Ölçümleri için Sıçan İskelet Kas Homojenatlarının Hazırlanması

Enükleasyonlu kırmızı kan hücrelerinin protein aktivasyonundaki dinamik değişiklikleri yakalamak, daha sonra değerlendirilmek üzere akut uyaranlardaki dinamik değişikliklerin korunması gibi metodolojik zorluklar ortaya çıkarmaktadır. Sunulan protokol, ilgili protein değişikliklerinin korunmasını ve analizini ve müteakip tespitini sağlayan numune hazırlama ve boyama tekniklerini açıklar.

Kırmızı Kan Hücresi Proteinlerinde Dinamik Değişikliklerin İmmün Boyama Tabanlı Tespiti

Bu protokol, hava-sıvı arayüzünde (ALI) farklılaşan hava yolu epitel kültürlerinde nitrit üretimini triyodid bazlı kemimilüminesans testi kullanılarak apikal sekresiyalarda nitrit ölçümünü sağlayan bir yöntemi tanımlar.

Hava sıvı arayüzünde farklılaşmış fare trakeal epitel hücre kültürlerinde nitrik oksit üretiminin ölçümü

Öğrenin, kemilüminesans dedektörü kullanarak nitrik oksit metabolitlerini hassas bir şekilde ölçme yöntemini. Bu protokol, biyolojik örneklerde minimal değişiklikleri tespit etmek için en duyarlı yaklaşımı sunar.

Nitrik Oksit ve Türevlerinin Otoksidasyon ve Nitroslu Bileşiklerden Tespiti için Kemilüminesans Bazlı Testler

Daha fazla video keşfet