Name: Laktik Asit Bakterilerinin Yetiştirilmesi, Büyümesi ve Yaşayabilirliği: Kalite Kontrol Perspektifi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-16T12:40:00.000+00:00
Duration: 4 min 40 s
Description: Öğrenin, laktik asit bakterilerinin kalite kontrol protokolleriyle yetiştirilmesini ve yaşayabilirliğinin artırılmasını. Optik yoğunluk ölçümü ve anaerobik inkübasyon kullanılarak fermantasyon verimliliği optimize edilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yayın NC hibe numarası ile mümkün olmuştur. X-267-5-12-170-1 Ulusal Gıda ve Tarım Enstitüsü'nden (NIFA) ve kısmen NIZO Food Research BV, Hollanda, Jarrow Formulas, ABD ve Aile ve Tüketici Bilimleri Bölümü ve Kuzey Carolina Tarım ve Teknik Devlet Üniversitesi Tarım Araştırma İstasyonu (Greensboro, NC, ABD 27411) tarafından. Bu çalışma kısmen 1890 Kapasite Geliştirme Programı hibe no. (2020-38821-31113/proje katılım no. 021765) tarafından da desteklenmiştir. Bu çalışma Bulgaristan Eğitim ve Bilim Bakanlığı tarafından DCM # 577 / 17.08.2018 tarafından onaylanan 'Güçlü Bir Biyo-Ekonomi ve Yaşam Kalitesi için Sağlıklı Gıdalar' Ulusal Araştırma Programı kapsamında kısmen desteklenmiştir.

1. Genel gereç ve yöntemler
<ol><li>Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus'un kaynağı
	<ol><li>L. bulgaricus suşlarını güvenilir kaynaklardan elde edin. NOT: Bu çalışmada kalite kontrol çalışmasında toplam beş (5) L. bulgaricus suşu kullanılmıştır (Tablo 1). Fermente süt ürünlerinin endüstriyel üretimi için iki dondurularak kurutulmuş L. bulgaricus suşu, Bulgaristan'ın Plovdiv kentindeki Gıda Teknolojileri Üniversitesi Biyoteknoloji Bölümü Dr. Albert Krastanov tarafından sağlanmıştır. ABD pazarında bulunan ticari yoğurt ürünlerinden izole edilen iki suş, Kuzey Carolina A &amp; T Eyalet Üniversitesi'ndeki Gıda Mikrobiyolojisi ve Biyoteknoloji laboratuvarının -80 ° C stoğundan elde edildi ve bir dondurularak kurutulmuş suş bir satıcı C tarafından tedarik edildi. Tüm LAB suşları daha fazla kullanıma kadar -80 ° C'de tutuldu. Kuzey Carolina A &amp; T Eyalet Üniversitesi'ndeki Gıda Mikrobiyolojisi ve Biyoteknoloji laboratuvarının -80 °C stokundan elde edilen başka bir bakteri suşu (Limosilactobacillus reuteri) da değerlendirildi.</li>
	</ol></li>
	<li>Standart L. MRS fermantasyon suyu ortamı<ol><li>55 g MRS ve 0.5 g L-Sistein 1 L deiyonize suda (DW) tamamen çözerek deMan, Rogosa Sharpe (MRS) ortamını hazırlayın.</li>
		<li>Hazırlanan MRS çözeltisinin sırasıyla 7 mL ve 2 mL'sini test tüplerine dağıtın, 15 dakika boyunca 121 ° C'de otoklav yapın ve ardından oda sıcaklığında (RT) soğutun.</li>
	</ol></li>
	<li>MRS agar ortamı<ol><li>1 L DW'de 55 g MRS ve 0.5 g L-Sistein tamamen çözerek MRS agar ortamını hazırlayın. Agar tozu (15 g) ekleyin, agar ortamını 15 dakika boyunca 121 ° C'de sterilize edin ve ardından bir su banyosunda soğutun.</li>
		<li>Taze hazırlanmış tüm ortamları steril Petri kaplarına dökün ve daha fazla ihtiyaç duyulana kadar 4 ° C'de saklayın.</li>
	</ol></li>
	<li>Modifiye güçlendirilmiş klostridiyal orta-piruvat (mRCM-PYR)<ol><li>Oyeniran ve ark.13 ve Nwamaioha ve İbrahim18'e göre, 10 g pepton #3, 10 g sığır eti özü, 5 g maya özü, 5 g sodyum klorür, 3 g sodyum asetat, 2 g potasyum fosfat dibazik çözerek L. bulgaricus'un seçiciliği ve doğru sayımı için güçlendirilmiş bir klostridiyal ortamı optimize edin, 0.1 g urasil, 0.25 g kalsiyum klorür, 5 g dekstroz, 5 g fruktoz, 10 g maltoz, 2 g sodyum piruvat,% 0.2 Ara 80 ve 1 L DW'de 0.5 g L- Sistein.</li>
		<li>% 0.008 anilin mavisi ve 15 g agar ilavesinden önce 6 N HCl kullanarak çözeltinin nihai pH'ını (6.0 ± 0.2) ayarlayın. Ortamı 15 dakika boyunca 121 ° C'de otoklav yapın, bir su banyosunda soğutun ve steril Petri kaplarına dökün. Taze hazırlanmış tüm ortamları steril Petri kaplarında 4 °C'de ihtiyaç duyulana kadar saklayın.</li>
	</ol></li>
	<li>LAB kültürlerinin gliserol stoğu<ol><li>Aynı DW hacminde% 100 gliserol seyrelterek gliserol stoklarını (% 50 gliserol) hazırlayın ve kuru bir sterilizasyon döngüsü kullanarak 30 dakika boyunca 100 ° C'de sterilize edin. Gliserol stoklarını RT'ye soğutun ve daha fazla kullanım için aseptik olarak saklayın.</li>
		<li>Gece kültürlerinden bakteri büyümesi (geliştirilen QC protokolü kullanılarak elde edilen tek bir L. bulgaricus kolonisi) kullanın.</li>
		<li>Pipet, gece kültürlerinin 500 μL'sini 2 mL'lik bir santrifüj tüpünde P gliserol haline getirin ve nazikçe karıştırın. LAB kültürlerini içeren gliserol stoğunu dondurun ve ihtiyaç duyulana kadar -80 ° C'lik ultra düşük bir sıcaklıkta saklayın. NOT: LAB kültürlerinin kalite kontrolü ve aktivasyonu için protokolün grafik şeması Şekil 1'de gösterilmiştir.</li>
	</ol></li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>Hayır</td>
			<td>Ürün Kodu</td>
			<td>Örnek</td>
			<td>Kaynak</td>
			<td>Bakteriyel Bileşim etiketli1</td>
		</tr><tr><td>1</td>
			<td>S9 Serisi</td>
			<td>Saf Endüstriyel Gerinim</td>
			<td>Bulgaristan</td>
			<td>Lb. bulgaricus</td>
		</tr><tr><td>2</td>
			<td>LB6 Serisi</td>
			<td>Saf Endüstriyel Gerinim</td>
			<td>Bulgaristan</td>
			<td>Lb. bulgaricus,</td>
		</tr><tr><td>3</td>
			<td>ATCC 11842 ·</td>
			<td>Saf Endüstriyel Gerinim</td>
			<td>cesaret</td>
			<td>Lb. bulgaricus</td>
		</tr><tr><td>4</td>
			<td>Küçük karga</td>
			<td>Yoğurt</td>
			<td>ABD</td>
			<td>Lb. bulgaricus, diğer canlı kültür</td>
		</tr><tr><td>5</td>
			<td>E22 Serisi</td>
			<td>Yoğurt</td>
			<td>ABD</td>
			<td>Lb. bulgaricus, diğer canlı kültür</td>
		</tr><tr><td>6</td>
			<td>Arjantin</td>
			<td>Yoğurt</td>
			<td>ABD</td>
			<td>Limosilactobacillus reuteri</td>
		</tr><tr><td colspan="5">1lb. = Lactobacillus</td>
		</tr></tbody></table>Tablo 1: Probiyotik suşlar. Tablo, bu çalışmada kullanılan probiyotik suşları listeler.
2. LAB kültürlerinin aktivasyonu ve kalite kontrolü için protokol
<ol><li>LAB suşlarının hazırlanmış gliserol stoğunu (2 mL santrifüj tüplerinde) -80 °C ultra düşük dondurucudan alın ve kullanmadan önce çözülmelerine izin vermeyin.</li>
	<li>Santrifüj tüplerinin açıklığını% 70 alkolle temizleyin ve dezenfekte edin ve kullanmadan önce hafifçe vorteks.</li>
	<li>Santrifüj tüplerinden taze 2 mL MRS test tüplerine stok LAB kültürünün yaklaşık 250 μL (0,25 mL) pipeti.</li>
	<li>Yavaşça vorteks, test tüplerini parafilm haline getirin ve 12-16 saat boyunca 42 ° C'de gece boyunca anaerobik olarak inkübe edin.</li>
	<li>2 mL MRS test tüplerinden bir gecede yetiştirilen kültürlerden taze 7 mL MRS test tüplerine, girdaplara yaklaşık 500 μL (0,5 mL) alın ve 12-16 saat boyunca 42 ° C'de gece boyunca anaerobik olarak inkübe edin.</li>
	<li>UV görünür spektrofotometre ile 610 nm'de kültürlerin optik yoğunluğunu (OD) veya büyümesini ölçerek mikrobiyal büyümeyi değerlendirin ve 0,7 ile 0,9 arasında kabul edilebilir sonuçlar kaydedin.</li>
	<li>Gece kültürlerini 7 mL MRS tüplerinden MRS ve MRCM-PYR agar plakalarına çizin ve 42 ° C'de 72 saat boyunca anaerobik olarak inkübe edin.</li>
	<li>Agar plakalarından izole edilmiş kolonileri toplayın, taze 7 mL MRS test tüplerine, hafifçe vortekse aktarın ve 12-16 saat boyunca 42 ° C'de gece boyunca anaerobik olarak inkübe edin.</li>
	<li>İzole edilmiş suşları içeren agar plakalarını buzdolabında bir hafta boyunca 4 ° C'de saklayın.</li>
	<li>610 nm'deki çizgili plakalardan izole edilen LAB kültürlerinin 7 mL MRS test tüplerinden OD'yi (0.7 ila 0.9 arasında) ölçün ve onaylayın ve bunları ilgili tüm deneyler için çalışma kültürleri olarak kullanın.</li>
	<li>1:10 oranını elde etmek için 9 mL pepton suyu (fizyolojik bir tampon) kullanarak son 7 mL MRS test tüplerinden yetiştirilen LAB kültürlerinin on kat seyreltilmesini (seri olarak seyreltilmiş) gerçekleştirin.</li>
	<li>Son olarak, tüm fermantasyon deneyleri için uygun seri seyreltmelerden yaklaşık 250 μL (0.25 mL) alın.</li>
	<li>2.12. adımdan itibaren suşlar (250 μL) içeren suyu taze 7 mL MRS suyuna aktararak ve 16 saat boyunca 42 ° C'de anaerobik olarak inkübe ederek aktive edin.</li>
	<li>LAB kültürlerinden canlı ve üstün hücre büyümesini sağlamak için 2.6-2.12 adımlarını tekrarlayarak devam edin. NOT: Tüm L. bulgaricus suşları taze hazırlanmış MRS suyunda aktive edildi ve daha sonra 0.7 ila 0.9 arasında bir optik bakteri büyümesi yoğunluğuna (OD610 nm) ulaşmak için 16 saat boyunca 42 ° C'de anaerobik olarak inkübe edildi. Bakteriyel büyüme, 610 nm'de UV tarafından görülebilen bir spektrofotometre ile ölçüldü. Gece kültürlerinin pH değerleri, LAB fermantasyonunun organik bir son ürünü olan laktik asit üretiminin bir sonucu olarak 3.5 ila 5.3 aralığındaydı. Biyogüvenlik başlığında uygun hava akımı sirkülasyonu ve bunsen brülörün kullanımı sırasında yanıkların önlenmesi gibi güvenlik prosedürlerine uyulmuş ve gözlemlenmiştir.</li>
</ol><img alt="LAB kültürü proses diyagramı; MRS et suyu hazırlama, inkübasyon, Optik Yoğunluk ölçümü." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63314/63314fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Şekil 1: Laktik asit bakteri (LAB) kültürlerinin aktivasyonu için protokolün grafiksel şeması. Şema, LAB kültür suşlarının taşınması ve etkinleştirilmesi için gerekli ayrıntıları ve temel araçları sağlar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63314/63314fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<ol><li>Karakas-Sen, A., Karakas, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+identification+and+technological+properties+of+lactic+acid+bacteria+from+raw+cow+milk%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience+Journal%22%5BJournal%5D)">Isolation, identification and technological properties of lactic acid bacteria from raw cow milk.</a> Bioscience Journal. 34 (2), 385-399 (2018).</li>
<li>Martin, R., Langella, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+health+concepts+in+the+probiotics+field%3A+Streamlining+the+definitions%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Emerging health concepts in the probiotics field: Streamlining the definitions.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 1047(2019).</li>
<li>Sadishkumar, V., Jeevaratnam, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+probiotic+evaluation+of+potential+antioxidant+lactic+acid+bacteria+isolated+from+idli+batter+fermented+with+Piper+betle+leaves%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Food+Science+%26+Technology%22%5BJournal%5D)">In vitro probiotic evaluation of potential antioxidant lactic acid bacteria isolated from idli batter fermented with Piper betle leaves.</a> International Journal of Food Science & Technology. 52 (2), 329-340 (2017).</li>
<li>Ayivi, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactic+acid+bacteria%3A+Food+safety+and+human+health+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Dairy%22%5BJournal%5D)">Lactic acid bacteria: Food safety and human health applications.</a> Dairy. 1 (3), 202-232 (2020).</li>
<li>Quinto, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+lactic+acid+bacteria%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Nutrition+Sciences%22%5BJournal%5D)">Probiotic lactic acid bacteria: A review.</a> Food and Nutrition Sciences. 5 (18), 1765-1775 (2014).</li>
<li>Hayek, S. A., Gyawali, R., Aljaloud, S. O., Krastanov, A., Ibrahim, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+media+for+lactic+acid+bacteria+used+in+dairy+products%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Research%22%5BJournal%5D)">Cultivation media for lactic acid bacteria used in dairy products.</a> Journal of Dairy Research. 86 (4), 490-502 (2019).</li>
<li>Bintsis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactic+acid+bacteria+as+starter+cultures%3A+An+update+in+their+metabolism+and+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Aims+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Lactic acid bacteria as starter cultures: An update in their metabolism and genetics.</a> Aims Microbiology. 4, 665-684 (2018).</li>
<li>Shao, Y., Gao, S., Guo, H., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+culture+conditions+and+preconditioning+on+survival+of+Lactobacillus+delbrueckii+subspecies+bulgaricus+ND02+during+lyophilization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">Influence of culture conditions and preconditioning on survival of Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus ND02 during lyophilization.</a> Journal of Dairy Science. 97 (3), 1270-1280 (2014).</li>
<li>Aryana, K. J., Olson, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+100-year+review%3A+Yogurt+and+other+cultured+dairy+products%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">A 100-year review: Yogurt and other cultured dairy products.</a> Journal of Dairy Science. 100 (12), 9987-10013 (2017).</li>
<li>Kandil, S., El Soda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+freezing+and+freeze-drying+on+intracellular+enzymatic+activity+and+autolytic+properties+of+some+lactic+acid+bacterial+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Influence of freezing and freeze-drying on intracellular enzymatic activity and autolytic properties of some lactic acid bacterial strains.</a> Advances in Microbiology. 5 (6), 371-382 (2015).</li>
<li>Malairuang, K., Krajang, M., Sukna, J., Rattanapradit, K., Chamsart, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+cell+density+cultivation+of+Saccharomyces+cerevisiae+with+intensive+multiple+sequential+batches+together+with+a+novel+technique+of+fed-batch+at+cell+level+%28FBC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Processes%22%5BJournal%5D)">High cell density cultivation of Saccharomyces cerevisiae with intensive multiple sequential batches together with a novel technique of fed-batch at cell level (FBC).</a> Processes. 8 (10), 1321(2020).</li>
<li>Jeanson, S., Floury, J., Gagnaire, V., Lortal, S., Thierry, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+colonies+in+solid+media+and+foods%3A+A+review+on+their+growth+and+interactions+with+the+micro-environment%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Bacterial colonies in solid media and foods: A review on their growth and interactions with the micro-environment.</a> Frontiers in Microbiology. 6, 1284(2015).</li>
<li>Oyeniran, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+reinforced+clostridial+medium+for+the+isolation+and+enumeration+of+Lactobacillus+delbrueckii+ssp.+bulgaricus+in+a+mixed+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">A modified reinforced clostridial medium for the isolation and enumeration of Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus in a mixed culture.</a> Journal of Dairy Science. 103, 5030-5042 (2020).</li>
<li>Iguchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+repeated+subculturing+and+prolonged+storage+at+room+temperature+of+Enterohemorrhagic+Escherichia+coli+O157%3A+H7+on+pulsed-field+gel+electrophoresis+profiles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Effects of repeated subculturing and prolonged storage at room temperature of Enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7 on pulsed-field gel electrophoresis profiles.</a> Journal of Clinical Microbiology. 40 (8), 3079-3081 (2002).</li>
<li>Hayek, S. A., Ibrahim, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+limitations+and+challenges+with+lactic+acid+bacteria%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Nutrition+Sciences%22%5BJournal%5D)">Current limitations and challenges with lactic acid bacteria: a review.</a> Food and Nutrition Sciences. 4 (11), 73-87 (2013).</li>
<li>Ahmed, S. A., Ibrahim, S. A., Kim, C., Shahbazi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+bile+salt+tolerant+Lactobacillus+reuteri%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+2007+National+Conference+on+Environmental+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Significance of bile salt tolerant Lactobacillus reuteri.</a> Proceedings of the 2007 National Conference on Environmental Science and Technology. , Springr, NY. 17-23 (2009).</li>
<li>Gyawali, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+of+extraction+techniques+for+maximum+recovery+of+%CE%B2-galactosidase+from+the+yogurt+bacterium+Lactobacillus+delbrueckii+ssp.+bulgaricus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Research%22%5BJournal%5D)">A comparative study of extraction techniques for maximum recovery of β-galactosidase from the yogurt bacterium Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus.</a> Journal of Dairy Research. 87 (1), 123-126 (2020).</li>
<li>Nwamaioha, N. O., Ibrahim, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+selective+medium+for+the+enumeration+and+differentiation+of+Lactobacillus+delbrueckii+ssp.+bulgaricus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dairy+Science%22%5BJournal%5D)">A selective medium for the enumeration and differentiation of Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus.</a> Journal of Dairy Science. 101 (6), 4953-4961 (2018).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Kalite kontrol protokolü ile ve protokol kullanılmadan değerlendirilen tüm suşların sonuçları aynıydı ve bu nedenle sadece suşlarla (S9 ve LB6) bağlantılı sonuçlar sunuldu. Aktif LAB suşları, yüksek yoğunluklu hücre biyokütlesi ile karakterize edilen üstün hücre büyümesine sahipti, bu nedenle test tüpü11'de MRS fermentatif suyunun bulanık bir görünümüne neden oldu. Kültür aktivasyonundan sonra gözlenen hücre büyümesi, 42 ° C'lik bir anaerobik fermentatif sıcaklıkta 12 saat ile 16 saat arasında bel...

Laktik asit bakterileri (LAB), endüstriyel potansiyele sahip benzersiz çeşitlilikte bir bakteri grubudur. Lactobacillus delbreuckii subsp. bulgaricus ve Streptococcus thermophilus'a ait suşlar çoğunlukla yoğurt1 gibi fermente süt ürünleri için süt başlangıç kültürleri olarak kullanılır. Seçilen LAB suşları, dozajlar yeterince uygulandığında insanlara sağlık yararları sağladıkları için probiyotikler olarak da sınıflandırılır2. Laktik asit bakterileri aynı zamanda gram-pozitif, spor oluşturmayan, solunum yapmayan ancak aerotoleranslı mikroorganizmalardır ve genellikle laktik asidin anahtar fermantasyon ürünü olarak üretilmesi ile karakterize edilir. LAB ayrıca esansiyel metabolitleri, örneğin organik asitleri, bakteriyosinleri ve gıda kaynaklı patojenlerin geniş bir spektrumunu inhibe edebilen diğer antimikrobiyal bileşikleri3 sentezler4. Karbonhidrat katabolizmasının önemli bir son ürünü ve LAB fermantasyonunun bir yan ürünü olan laktik asit, antimikrobiyal özelliklere sahip ve gıda biyopkoruma uygulamaları için potansiyel olarak yararlı olan organik bir metabolittir 3,5,6. Ayrıca, LAB tarafından üretilen organik asitler, gıdaların lezzetini, dokusunu ve aromasını verir, böylece sonuç olarak genel organoleptik özelliklerini arttırır 5,6. LAB'ın farklı beslenme gereksinimleri, her yerde bulunan doğaları ile birleştiğinde, sonuçta bakterilerin süt bazlı gıdalar, fermente gıdalar, sebzeler ve insan bağırsağında olduğu gibi farklı ortamlarda kolayca gelişmesini sağlar7.
Yoğurt üretimi ve çok çeşitli süt ürünleri uygulamaları için LAB'den başlangıç kültürlerine artan bir talep vardır8,9, bu nedenle LAB suşlarının yetiştirilmesinde ve hem liyofilize hem de izole suşların aktivasyonunda kritik dikkat ve yerleşik bilimsel tekniklere uyulmalıdır, çünkü bu aktivite gelişmiş fermantasyon performansı için hayati öneme sahiptir. Bu nedenle, Gıda Mikrobiyolojisi ve Biyoteknoloji laboratuvarı, fermente süt ürünlerinden ve yoğurt üretimi için kullanılan endüstriyel başlangıç kültürlerinden izole edilen LAB suşlarının aktivasyonu, üstün büyümesi ve fermantasyon karakteristiğine yönelik uygun teknoloji geliştirmede aktif olarak yer almaktadır. Ayrıca, endüstriyel olarak üretilen LAB kültür suşlarının dondurarak kurutma ve dondurulmuş depolama gibi koruyucu faaliyetlere maruz kalmaları, hücre stresine ve yaralanmasına neden olmaları, maruz kaldıkları soğuk şok işlemi sonucunda10. İzole gıda ürünlerinden veya dondurularak kurutulmuş ürünlerden elde edilen LAB suşlarının canlılık zorluklarını sınırlamak ve işlevselliğini geliştirmekte, fermentatif karakteristiklerini arttırmak için bu kültürleri bir kalite kontrol biçimi olarak uygun şekilde aktive etmek önemlidir8. Bu çalışmada amaç, L. delbrueckii subsp. bulgaricus kültür suşlarının aktivasyonu ve büyümesi için nihayetinde uygulanabilir LAB büyümesini teşvik eden ve aynı zamanda fermantasyon performansını ve LAB suşlarının metabolik işlevselliğini artıran bir kurum içi kalite kontrol protokolü geliştirmekti. Bu protokol nihayetinde fermantasyon araştırması için diğer LAB suşlarının yetiştirilmesinin yanı sıra endüstriyel amaçlar veya biyoişleme operasyonları için (optimum büyüme ortamı ve uygun kültürleme koşulları kullanılarak) uyarlanabilir. Bu nedenle, bu LAB aktivasyonu ve kalite kontrol protokolü, küresel süt ürünleri ve gıda endüstrisindeki çeşitli uygulamalar için üstün uygulanabilir süt ürünleri başlangıç kültürlerinin elde edilmesini ve potansiyel olarak işlevsel olmasını sağlayacaktır.

<table><tbody><tr><td>Anilin Blue</td><td>Thermo Scientific</td><td>R21526</td><td>25 g</td></tr><tr><td>Sığır özü</td><td>Araştırma Ürünleri Uluslararası</td><td>50-197-7509</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1422-500</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür dihidrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>C79-500</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Dekstroz Susuz</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP350500</td><td>500 gr</td></tr><tr><td>D-Fruktoz</td><td>ACROS Organics</td><td>AC161355000</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Difco agar tozu</td><td>Difco</td><td>DF0812-07-1</td><td>2 kg</td></tr><tr><td>TPY agar</td><td>Difco</td><td>211921</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Eppendorf mikrosantrifüj tüpü (Snap-Cap Microsantrifüj Kasa-Kilit)</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-402-12</td><td>2 mL</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Thermo Scientific</td><td>PI17904</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Kızılötesi CO2 İnkübatörü</td><td>Forma Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus</td><td>Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu (ATCC)</td><td>ATCC 11842</td><td></td></tr><tr><td>Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus</td><td>Bulgaristan</td><td>S9</td><td></td></tr><tr><td>Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus</td><td>Bulgaristan</td><td>LB6</td><td></td></tr><tr><td>Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus</td><td>Gıda Mikrobiyolojisi ve Biyoteknoloji Laboratuvarı (NCATSU)</td><td>DAW</td><td></td></tr><tr><td>Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus</td><td>Gıda Mikrobiyolojisi ve Biyoteknolojisi Laboratuvarı (NCATSU)</td><td>E22</td><td></td></tr><tr><td>Limosilactobacillus reuteri</td><td>Biogai, Raleigh / Gıda Mikrobiyolojisi ve Biyoteknolojisi Laboratuvarı (NCATSU)</td><td>RD2</td><td></td></tr><tr><td>L-Sistein hidroklorür monohidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6852-25G</td><td>25 g</td></tr><tr><td>Maltoz monohidrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>M75-100</td><td>100 g</td></tr><tr><td>MRS et suyu</td><td>Neojen</td><td>50-201-5691</td><td>5 kg</td></tr><tr><td>Pepton No. 3</td><td>Hach</td><td>50-199-6719</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Potasyum fosfat dibazik (K2HPO4)</td><td>Uluslararası Araştırma Ürünleri</td><td>50-712-761</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Sodyum asetat trihidrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>S220-1</td><td>1 kg</td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-1</td><td>1 kg</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP356-100</td><td>100 g</td></tr><tr><td>Kauçuk Astarlı Vidalı Kapaklı Test Tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB70125150</td><td>25 x 150 mm</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Fisher Scientific</td><td>T164-500</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Ultra düşük dondurucu</td><td>So-Low</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Urasil</td><td>ACROS Organics</td><td>AC157301000</td><td>100 g</td></tr><tr><td>UV-görünür spektrofotometre</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Evolution 201</td><td></td></tr><tr><td>Vortex Genie 2</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Maya özü</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1422-500</td><td>500 g</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Fisher Scientific T08204K7</td><td></td><td>4 L</td></tr><tr><td>Hidroklorik Asit (6N (Sertifikalı), Fisher Chemical)</td><td>Fisher Scientific</td><td>&nbsp; SA56-500</td><td>500 mL</td></tr></tbody></table>

laktik asit bakterilerinin yetiştirilmesi, büyümesi ve yaşayabilirliği: kalite kontrol perspektifi

The Cultivation, Growth, and Viability of Lactic Acid Bacteria: A Quality Control Perspective

Laktik asit bakterileri (LAB), yoğurt ve peynir gibi fermente süt ürünlerinin üretiminde önemli ölçüde kullanılan temel süt başlangıç kültürleridir. LAB ağırlıklı olarak fermantasyonun önemli bir son ürünü olarak laktik asit üretir ve fermente gıda ürünlerinin organoleptik özelliklerini veren önemli metabolitleri sentezler. LAB, yeterli beslenme gereksinimleri yerine getirildiğinde birçok ortamda gelişen titiz bakterilerdir. Gıda ve süt ürünleri endüstrisindeki fermantasyon uygulamaları için üstün LAB süt ürünleri başlangıç kültürlerine olan talep, tüm biyo-işleme operasyonları için uygulanabilir ve aktif kültürler sağlama ihtiyacını doğurmuştur. Bu nedenle, LAB kültürlerinin laboratuvarda ve süt ürünleri işleme ortamlarında yaşayabilirliğini ve gelişmiş işlevselliğini sağlamak için standart bir protokolün geliştirilmesi çok önemlidir. Zayıf, stresli ve yaralı LAB kültür hücrelerinin canlandırılmasıyla ilgili endişelerin ele alınmasında, iyileşmek, hücre yenilenmesini arttırmak ve LAB suşlarının metabolik işlevselliğini iyileştirmek için göze çarpan adımları canlı bir şekilde özetleyen bir protokol çok önemlidir. LAB başlangıç kültürleri için kültür saflığının, işlevselliğinin ve uygulanabilirliğinin korunması da aynı şekilde kritik öneme sahiptir. Bu nedenle, benzersiz bir protokol kılavuzuna bağlılık, fermantasyon ve biyoteknoloji proseslerine adanmış birçok LAB suşu için fermantasyon performansının teşvik edilmesine neden olacaktır. Sonuç olarak, Kuzey Carolina Tarım ve Teknik Eyalet Üniversitesi'ndeki Gıda Mikrobiyolojisi ve Biyoteknoloji Laboratuvarı, fermantasyon araştırması için kullanılan son derece işlevsel ve uygulanabilir LAB kültür suşları ile sonuçlanan seçilmiş LAB suşlarının aktivasyonu ve kalite kontrolü için standart bir protokol geliştirmiştir. Bunun gibi bir protokolün süt ürünleri ve gıda endüstrisinde kullanılmak üzere uyarlanması ve önerilmesi, birçok uygulama için LAB'ın uygulanabilirliğini ve işlevselliğini sağlamaya yardımcı olacaktır.

Kalite kontrol protokolü ile yetiştirilen değerlendirilen LAB suşlarının hücre büyümesi, bu standart protokol olmadan yetiştirilen suşlardan anlamlı derecede farklıydı (P &lt; 0.05). Hem L. bulgaricus hem de L. reuteri için QC protokolü çok alt kültürleme yaklaşımı kullandı (agar plakalarına çizgi çizmeden önce üç kez alt kültürleme), kontrol prosedürü ise diğer tüm koşullar sabit tutularak sadece bir kez alt kültürleme yapıldı. Koloni büyümesi de daha yüksekti ve bu standart QC protokolü kullanılarak y...

Laktik asit bakteri (LAB) kültürlerinin kalite kontrol değerlendirmesi, fermantasyon prosedürleri için LAB suşlarının yaşayabilirliğini ve işlevselliğini arttırmanın etkili bir yolu olarak doğrulanmıştır. Bu iddiayı desteklemek için, LAB kültürlerinin fermantasyon ve biyoişleme prosedürleri için nasıl aktive edildiğini ve yetiştirildiğini açıklayan bir protokol geliştirdik.

Laktik Asit Bakterilerinin Yetiştirilmesi, Büyümesi ve Yaşayabilirliği: Kalite Kontrol Perspektifi

Lactic acid bacteria (LAB) are essential dairy starter cultures that are significantly employed for the manufacture of fermented dairy products such as ...

Protokolümüz önemlidir çünkü kalite kontrol kontrolü olarak saflığı sağlar. Ayrıca laktik asit bakteri fermantasyonunda ciddi fermantasyon performansını ve verim tutarlılığını teşvik eder. Bu tekniğin temel avantajı, laktik asit bakterilerinin fermantasyon performansını hücre saflığı, canlılığı ve işlevselliği yoluyla artırabilmesidir.Bu teknik kullanıcı dostudur ve birçok teknik gereksinim olmadan sadece temel ekipmanların kullanılması nedeniyle herhangi bir kişi tarafından kolayca gerçekleştirilebilir. Philip Yeboah lisansüstü araştırma asistanımızdır ve prosedürü gösterecektir. Başlamak için, eksi 80 santigrat derece ultra düşük dondurucudan iki mililitre santrifüj tüplerinde laktik asit bakterilerinin veya LAB suşlarının hazırlanmış gliserol stokunu alın.Kullanmadan önce çözülmelerine izin vermeyin. Santrifüj tüplerinin açıklığını% 70 alkol ve kullanmadan önce hafifçe vorteks ile temizleyin ve dezenfekte edin. Santrifüj tüplerinden taze iki mililitrelik MRS test tüplerine kadar stok LAB kültürünün yaklaşık 250 mikrolitresini pipetleyin.Test tüplerini nazikçe vorteksleyin, parafilm haline getirin ve 12 ila 16 saat boyunca gece boyunca 42 santigrat derecede anaerobik olarak inkübe edin. Daha sonra, iki mililitrelik MRS test tüplerinden taze yedi mililitrelik MRS test tüplerine kadar bir gecede yetiştirilen kültürlerden yaklaşık 500 mikrolitre alın, vorteksin ve 12 ila 16 saat boyunca 42 santigrat derecede gece boyunca anaerobik olarak inkübe edin. UV görünür spektrofotometre ile 610 nanometrede kültürlerin optik yoğunluğunu veya büyümesini ölçerek mikrobiyal büyümeyi değerlendirin ve 0.7 ila 0.9 arasında kabul edilebilir sonuçlar kaydedin.Gece kültürlerini yedi mililitrelik MRS tüplerinden MRS ve MRCMPYR agar plakalarına çizin ve 42 santigrat derecede 72 saat boyunca anaerobik olarak inkübe edin. İzole edilmiş kolonileri agar plakalarından seçin, taze yedi mililitrelik MRS test tüplerine, hafifçe girdaba aktarın ve 12 ila 16 saat boyunca 42 santigrat derecede gece boyunca anaerobik olarak inkübe edin. İzole edilmiş suşları içeren agar plakalarını buzdolabında bir hafta boyunca buzdolabında dört santigrat derecede saklayın.Daha sonra, 610 nanometrede çizgili plakalardan izole edilen LAB kültürlerinin yedi mililitrelik MRS test tüplerinden optik yoğunluğu ölçün ve onaylayın ve bunları ilgili tüm deneyler için çalışma kültürleri olarak kullanın. 1 ila 10 oranı elde etmek için son yedi mililitrelik MRS test tüplerinden yetiştirilen LAB kültürlerinin on kat kirliliğini gerçekleştirmek için dokuz mililitre pepton suyu kullanın. Tüm fermantasyon deneyleri için uygun seri sanrılardan yaklaşık 250 mikrolitre alın ve suşları içeren suyu taze yedi mililitrelik MRS suyuna aktararak ve 16 saat boyunca 42 santigrat derecede anaerobik olarak inkübe ederek aktive edin.LAB kültürlerinden canlı ve üstün hücre büyümesini sağlamak için adımları tekrarlayın. Kalite kontrol protokolü ile yetiştirilen S9 ve LB6 lactobacillus bulgaricus suşlarının ve kalite kontrol protokolü olmadan yetiştirilen S9 lactobacillus bulgaricus suşlarının hücre morfolojisi büyümesi burada gösterilmiştir. Suşlar üçlü olarak çizgilendi ve 72 saat boyunca 42 santigrat derecede anaerobik olarak inkübe edildi.Bu prosedürü denerken, çapraz kontaminasyonu önlemek için stok kültür tüplerini dondurucudan% 70 alkol ile dezenfekte ettiğinizden emin olun. Büyüme kültürlerinin optik yoğunluk ölçümü her zaman 0.7 ile 0.9 arasında olmalıdır. Bu protokolü takiben, üstün kültür kullanımı ile verimli LAB fermantasyonları veya biyoişleme operasyonları elde edilebilir.

the-cultivation-growth-viability-lactic-acid-bacteria-quality-control

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kaynak: Ayivi, R. ve diğerleri, Laktik Asit Bakterilerinin Yetiştirilmesi, Büyümesi ve Yaşayabilirliği: Bir Kalite Kontrol Perspektifi. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, donmuş bir gliserol stoğundan soğuk stresli laktik asit bakterilerinin geri kazanılması, anaerobik inkübasyon yoluyla bakteri canlılığının geri kazanılması ve kültür genişlemesi için aktif kolonilerin izole edilmesi yöntemini göstermektedir.

Laktik Asit Bakterilerinin Canlanması ve Büyümesi

Yeni bir bakteri başlangıç kültürü yardımıyla probiyotik fermente süt içeceğinin küçük ölçekli üretimi için bir üretim protokolü tanımlanmıştır.

Probiyotik Fermente Gıdaların küçük ölçekli imalat için yeni Üretim Protokolü

Bakteriyel büyüme kantitatif değerlendirilmesi mikrobiyal Fizyoloji bir sistemleri-düzey olgu olarak anlamak için gerekli. Deneysel manipülasyon ve analitik bir yaklaşım için bir protokol bırakmak kesin, yüksek üretilen iş analizi anahtar sistemleri Biyoloji ilgi konusu bakterilerin büyüme için sunulmaktadır.

Bakteriyel büyüme kesin, yüksek üretilen iş analizi

Zorunlu anaerobik organizmalar oksijene maruz kaldıktan sonra büyüyemedikleri için anaerobik kültür tekniklerinin kullanımı vazgeçilmezdir. Burada, medya hazırlığından gaz ve uçucu yağ asidi nicelleştirmesine kadar bir biyogaz bitkisinden elde edilen karışık bir kültürü yetiştirmek için basit ve etkili bir yöntem gösteriyoruz.

Kesinlikle Anaerobik/Anoksik Koşullarda Mikroorganizmaların Yetiştirilmesi için Orta Hazırlık

Bu protokol, spreyle kurutulmuş bir probiyotik ürünün üretimi ve fizikokimyasal karakterizasyonunda yer alan adımları detaylandırır.

Probiyotik bakterilerin sprey kurutulması için proses geliştirme ve ürün kalitesinin değerlendirilmesi

Protokol, anaerobik bağırsak bakterilerinin izolasyonunu iyileştirmek için iki metodoloji sunar. Birincisi, farklı kültür ortamları kullanılarak çok çeşitli bakterilerin izolasyonuna odaklanır. İkincisi, ekolojik önemini tam olarak anlamak için muhtemelen miyo-inositol'ü asimile eden belirli bir mikrobiyal grubun yetiştirme adımlarına odaklanır.

Tavuğun Gastrointestinal Sisteminden Anaerobik Bakteri Yetiştiriciliğini Geliştirme Stratejileri

Bu protokol, endüstriyel mikroorganizmalar için standart yüksek verimli tarama iş akışı sunar. ARTP mutagenezi yoluyla mutant bir kütüphane oluşturmayı, otomatik mikrofluidiklerle pozitif damla taraması yapılmasını ve ardından sonuçların doğrulanmasını içerir. İş akışının güvenilirliği, yüksek verimli B. coagulans suşlarının taramasıyla doğrulandı.

L-laktik asit aşırı üreten Bacillus coagulans mutantlarının yüksek verimli taraması otomatik damla mikrofluidik platform kullanılarak

Kültür hücre sayısını belirleyen kültür koşullarının standardizasyonu ve doğru kantitatif deneyler önemlidir. Bu video, hücreleri bir hemasitometre kullanarak nasıl sayılır göstermektedir.

Doku ve Hücre Sayım ve Canlılık Belirlenmesi

Biz sinir sistemi ifade profil için DNA mikrodizilerinin kullanımını göstermektedir. Biz, RNA kalite kontrol, örnek etiketleme ve dizi hibridizasyon ve tarama açıklar.

DNA Mikroarray&#39;ler: Örnek Kalite Kontrol, Dizi Hibridizasyon ve Tarama

Bu protokol Tali Görüntü Tabanlı Sitometre kullanarak hücre canlılığı ve floresan ifade deneyleri nasıl gerçekleştirileceği açıklanır.

Tali Görüntü Tabanlı Sitometre kullanarak GFP İfade ve Canlılık Değerlendirilmesi

Öğrenin, laktik asit bakterilerinin kalite kontrol protokolleriyle yetiştirilmesini ve yaşayabilirliğinin artırılmasını. Optik yoğunluk ölçümü ve anaerobik inkübasyon kullanılarak fermantasyon verimliliği optimize edilir.

Laktik Asit Bakterilerinin Yetiştirilmesi, Büyümesi ve Yaşayabilirliği: Kalite Kontrol Perspektifi

Daha fazla video keşfet