Name: Kanser Hücrelerinin İç Karotis Arter Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 1 s
Description: Öğrenin iç karotis arter enjeksiyonu yöntemiyle farelerde beyin metastazı modeli oluşturmayı. Bu teknik tutarlı intrakraniyal tümör gelişimi sağlar ve tedavi müdahalelerinin objektif analizini kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Avustralya Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC), hibe numarası APP1162560 tarafından finanse edilmiştir. ML, bir UQ lisansüstü araştırma bursu ile finanse edildi. Hayvancılığa ve hayvanların in vivo görüntülenmesine yardımcı olan herkese teşekkür ederiz. Royal Brisbane ve Kadın Hastanesi'ne bu çalışma için zirkonyum alikotları bağışladıkları için teşekkür ederiz.

Tüm çalışmalar, Queensland Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi (UQCCR / 186/19) ve Bilim Amaçlı Hayvanların Bakımı ve Kullanımı için Avustralya Yasası yönergeleri çerçevesinde yürütülmüştür.
1. Enjeksiyon için kanser hücrelerinin hazırlanması
NOT: Bu çalışmada insan meme kanseri hücre hattı BT-474 (BT474) kullanılmıştır. BT474, %10 fetal sığır serumu ve %1 insülin ile desteklenmiş RPMI 1640 ortamından oluşan tam büyüme ortamında kültürlendi. Hücreler, hava atmosferinde% 5 karbondioksit ile 37 ° C'de bir inkübatörde tutuldu. Uydu tandem ile hücre hattını doğrulayıntest 35 tekrarlar, varsa muhabir proteininin (örneğin, lusiferaz) ekspresyonunu onaylayın ve mikoplazma enfeksiyonunu kontrol edin.
<ol><li>Tohum BT474 kanser hücreleri, enjeksiyondan önce% 70 -% 80 akıcılığa kadar, 10 mL tam büyüme ortamı ve kültürü (% 5 CO 2 ile 37 ° C'de) kullanarak bir T75 şişesine2.0 x 106 hücrelik bir tohumlama yoğunluğunda.</li>
	<li>Enjeksiyon gününde, büyüme ortamını atın ve hücre tek katmanını fosfat tamponlu salin (PBS) ile iki kez yıkayın.</li>
	<li>5 mL önceden ısıtılmış hücre kültürü ayrışma reaktifi ekleyin ( bakınız Malzeme Tablosu) ve 37 ° C'de 5 dakika boyunca veya hücreler ayrılana kadar inkübe edin. 5 dakika sonra, hücre ayrılmasına yardımcı olmak için şişeye hafifçe dokunun.</li>
	<li>Dissosiyasyon reaktif aktivitesini söndürmek için% 10 fetal sığır serumu içeren 5 mL tam büyüme ortamı ekleyin.</li>
	<li>Hücre kümelerini azaltmak için pipetleme yaparak hücreleri nazikçe yeniden askıya alın.</li>
	<li>Hücre süspansiyonunu 50 mL'lik bir tüpe aktarın ve oda sıcaklığında 3 dakika boyunca 180 x g'de santrifüj yapın.</li>
	<li>Süpernatantı boşaltın ve hücre kümelenmesini en aza indirmek için hücre peletini kalsiyum ve magnezyum olmadan 10 mL Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) içinde yeniden askıya alın.</li>
	<li>Hücre süspansiyonunu oda sıcaklığında 3 dakika boyunca 180 x g'de santrifüj yapın.</li>
	<li>Artık serum/ayrışma reaktifini çıkarmak ve hücre peletini 3 mL HBSS'de yeniden askıya almak için süpernatantı boşaltın.</li>
	<li>Yeni bir 50 mL konik tüp üzerine 100 μm'lik bir hücre süzgeci yerleştirin ve hücre kümelerini çıkarmak için hücre süspansiyonunu geçirin. NOT: Kan damarı tıkanıklığını ve enjeksiyonda felç riskini en aza indirmek için tek hücreli bir süspansiyon gereklidir.</li>
	<li>Trypan Blue dışlamasını ve standart yöntemlerle bir hemositometreyi kullanarak canlı hücrelerin sayısını hesaplayın.</li>
	<li>Hücre süspansiyonunu HBSS ile 2.5 x 106 hücre / mL'lik bir hücre konsantrasyonuna seyreltin.</li>
	<li>Tüpü buz üzerinde yatay tutun ve kümelenmeyi en aza indirmek için tüpü periyodik olarak hafifçe sallayın. Hücre süspansiyonu maksimum 6 saat boyunca buz üzerinde saklanabilir. NOT: Sallama manuel olarak yapıldı, ancak bu düşük devirde bir çalkalayıcı kullanılarak da yapılabilir.</li>
</ol>2. Farenin prosedür için hazırlanması
NOT: Bu çalışmada 4-5 haftalık dişi NOD scid fareleri kullanıldı. İşlemden sonra beslenmeyi teşvik etmek için prosedürden 3 gün önce farelere yumuşak diyet kurtarma gıdaları (örneğin, diyet jeli, hidrojel, püresi fare chow) ekleyin.
<ol><li>Otoklav cerrahi aletleri. Cerrahi alanı ve ekipmanı yüzey dezenfektanı ile püskürtün ve silin, ardından% 70 etanol ile silin.</li>
	<li>Hipotermiyi önlemek için cerrahi tahtanın altına bir hayvan ısı paspası yerleştirin. Bunu ameliyattan 30 dakika önce açın. Cerrahi tahtayı yüzey dezenfektanı ve ardından% 70 etanol ile püskürtün ve silin.</li>
	<li>İyileşme için temiz bir hayvan barınağı kafesi ve sıcak bir ısıtma yastığı hazırlayın.</li>
	<li>Temiz kişisel koruyucu ekipman (önlük, maske, saç filesi ve eldivenler) giyin. Temiz muayene eldivenleri ve 'sadece alet uçları' tekniği kullanarak prosedür boyunca steriliteyi koruyun.</li>
	<li>Fare pedal refleksini kaybedene kadar 2 L/dak oksijen akışına sahip %5 izofluran kullanarak fareyi anestezik bir odacıkla uyuşturun.</li>
	<li>Hayvanı odadan çıkarın ve kalan cerrahi prosedür için 2 L / dak'lık bir oksijen akışında% 2 izofluran veren bir burun konisine yerleştirin.</li>
	<li>Tanımlama için kulak delme faresi ve kürkü boyun bölgesinden tıraş etmek için elektrikli makaslar kullanın. Fazla saçları bant kullanarak maruz kalan ciltten temizleyin.</li>
	<li>Gerekli anestezik ve analjezik ilaç dozlarını hesaplamak için fareyi tartın. Buprenorfin ve meloksikamı subkutan enjeksiyon yoluyla sırasıyla 50 μg / kg ve 1 mg / kg'da uygulayın.</li>
	<li>Fareyi sıcak bir ameliyat tahtasına aktarın ve burun konisini bantla sabitleyin.</li>
	<li>Kurumayı önlemek için gözlere oküler kayganlaştırıcı uygulayın.</li>
	<li>Önce ameliyat tahtasına bantlanmış iplik kullanarak üst kesici dişleri bağlayarak fareyi nazikçe sabitleyin, ardından ön ve arka bacakları bantlayın. Bu adım vücudu uzatır ve işlem sırasında boynu düz tutar.</li>
	<li>Ameliyat öncesi cilt hazırlığını aşağıda açıklandığı gibi gerçekleştirin.<ol><li>Cilt mikroflorası yükünü azaltmak ve gevşek saçları çıkarmak için boynu topikal antiseptik (povidon-iyot) ile silin. Cildin merkezinden temizleyin, kesi yerinin yeniden kirlenmesini önlemek için dışa doğru çalışın. İşlemi% 70 etanol kullanarak tekrarlayın. Dezenfeksiyon için üç alternatif iyot ve etanol turu gerçekleştirin.</li>
		<li>Hayvanın üzerine cerrahi bir örtü koyun. Bu, bir parça steril kağıt havlu veya otoklav torbasından kesilir ve şekillendirilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Cerrahi aletler için steril kağıt havlular veya otoklav torbalar yerleştirin.</li>
	<li>Prosedüre devam etmeden önce yeterli anesteziyi sağlamak için 'Çimdik testi' ile refleksi kontrol edin.</li>
</ol>3. Dahili karotis enjeksiyonu
NOT: Bu deneyde, enjeksiyon prosedürünü kolaylaştırmak için 31 G infüzyon kanülü ve ayakla aktive edilen şırınga sürücüsü kurulumu kullanılmıştır (Ek Şekil 1). Bu kurulum isteğe bağlıdır ve kullanıcı 31 G insülin şırıngası kullanabilir ve 3.11 ve 3.12 adımlarını atlayabilir. İnfüzyon kanülünü hazırlamak için, iğne kısmını iki çift dikiş kelepçesi kullanarak 31 G'lik bir iğnenin şırınga montaj kısmından çekin ve ayırın. Daha sonra, iğne kısmını yaklaşık 10 cm uzunluğunda ince bir infüzyon tüpünün bir ucuna takın.
<ol><li>Diseksiyon mikroskobunu farenin üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Makas kullanarak, çenenin 5 mm altından torasik girişe kadar boyun bölgesindeki orta hat boyunca dikey 15 mm'lik bir kesi yapın.</li>
	<li>İki çift açılı forseps kullanarak, cildi ve altta yatan tükürük bezlerini ayırın ve trakeayı açıkta tutmak için retraktörler uygulayın. Bir sonraki adım, trakeaya paralel uzanan karotis kılıfı ortaya çıkaracaktır.</li>
	<li>İki çift ince açılı forseps kullanarak, sağ karotis kılıfını ortaya çıkarmak için trakeaya bitişik kas ve yağ dokusunu açıkça diseke edin. Karotis kılıfı, ortak karotis arter, ven ve vagus sinirini kaplayan fibröz tabakadır ve bu demet parlak kırmızı ortak karotis arter tarafından görselleştirilebilir. Bu çalışmada enjeksiyon sağ karotis artere yapıldı.</li>
	<li>Ortak karotis arter kaudalinin bir segmentini, çevreleyen fasyanın karotis bifurkasyonuna temizleyin ve vagus siniri ve damarlarından ayırın.</li>
	<li>Karotis bifurkasyonunu (dış ve iç karotis arterleri birleştiren kavşak) çevreleyen sinirlerden ve fasyadan izole edin ve temizleyin. İnce forsepsleri dış karotis arterin altına yerleştirin ve arterin altına ipek bir sütür (5-0 kalınlıkta) geçirin. Dikişi düğümleyin ve sıkın ve fazla çizgiyi kesin. NOT: Bu ligatür (L1), enjekte edilen maddenin eksternal karotis arterden geçmesini önleyecektir.</li>
	<li>İnce forsepsleri ortak karotis arterin altına yerleştirin ve arterin altına ipek bir sütür (5-0 kalınlıkta) geçirin. Bir düğüm bağlayın ve sütürü önerilen enjeksiyon bölgesine yakın bir konumda sıkın. Fazla dikişi yaklaşık 10 mm çizgi bırakarak kesin. NOT: Bu ikinci ligatür (L2), enjeksiyondan sonra kan akışını ve kanamayı kısıtlayacaktır. Ayrıca enjeksiyon sırasında karotis arteri konumlandırmak ve tutmak için kullanılır.</li>
	<li>Yaklaşık 10 mm x 5 mm boyutlarında (otoklavlanmış) düşük tiftikli tek kullanımlık sileceklerden oluşan bir şeridi kesin ve nemlendirin (Malzeme Tablosuna bakınız). Şeridi 4 mm x 5 mm, 2-3 mm kalınlığında katlayın ve önerilen enjeksiyon bölgesinde karotis arterin altına yerleştirin. Bu, enjeksiyon sırasında damarı destekleyecektir.</li>
	<li>Önerilen enjeksiyon bölgesine ortak karotis arter rostralinde, gevşek bir düğüm ile üçüncü bir ligasyon (L3) yerleştirin. Bu sadece enjeksiyondan sonra sıkılır (adım 3.16'da).</li>
	<li>Hücre süspansiyonunu nazikçe çalkalayın ve 200 μL hücre süspansiyonunu bir insülin şırıngasına (31 G iğne ile) çekin.</li>
	<li>Şırıngayı, etkinleştirici bir ayak pedalına bağlı şırınga sürücüsüne yükleyin.</li>
	<li>Şırıngaya 31 G iğneli ince bir kanül takın ve hattı astarlayın.</li>
	<li>Karotis arterin iyi konumlandırılmış ve basınçlı olup olmadığını kontrol edin.</li>
	<li>Biri ilk ligatürün ucuna hafifçe gerilen ve diğeri 31 G iğnesini tutan iki ince açılı forseps kullanarak, iğneyi yavaşça delmemeye dikkat ederek kan damarının lümenine eğimli olarak yerleştirin.</li>
	<li>10 μL / s'de ortak karotis arterine yavaşça 100 μL hücre süspansiyonu (adım 1.13'ten itibaren) enjekte edin. Bu, kan damarına 2.5 x 105 hücre verecektir. Başarılı enjeksiyon, karotis kan damarından kanın temizlenmesiyle görselleştirilir.</li>
	<li>Geri akışı ve kanamayı önlemek için iğneyi geri çektikten hemen sonra gevşek bağı (L3) (adım 3.9'dan itibaren) yavaşça kaldırın ve sıkın. Fazla dikişi kesin. NOT: İğnenin çekilmesinden sonra az miktarda kan fışkırdığını gözlemlemek normaldir. Bununla birlikte, üçüncü ligatür sıkıldıktan sonra herhangi bir aktif kanama olmamalıdır.</li>
	<li>Nemlendirilmiş düşük tiftikli tek kullanımlık sileceklerin parçasını çıkarın.</li>
	<li>Bir P200 pipet kullanarak, cerrahi boşluğu 150-200 μL steril su veya salin ile iki kez durulayın.</li>
	<li>Kanama olup olmadığını tekrar kontrol edin ve ardından retraktörleri çıkarın.</li>
	<li>Yumuşak dokuyu, tükürük bezlerini ve cildi karotis arter ve trakea üzerinde yeniden konumlandırın.</li>
	<li>Kesinin cilt tabakasını bir dikiş iğnesi tutucusu, forseps ve emilebilir veya emilemeyen 6/0 monofilament sütür kullanarak sürekli bir düzende kapatın.</li>
	<li>Kanül iğnesi şırıngasını atın ve bir sonraki fare için yeni bir kurulum hazırlayın. Yeni bir şırınga kullanmak, her fareye enjekte edilen hücre sayısının tutarlı olmasını sağlayacaktır. NOT: Prosedürün temsili anlık görüntüleri Ek Şekil 2'de yer almaktadır. Damar iğne tarafından delinir veya yırtılırsa, enjekte veya kanama sızıntısı ile gösterilirse, prosedür başarısız sayılır. Bunu takiben, iğne geri çekilmeli ve daha fazla kanamayı önlemek için üçüncü ligatür derhal sıkılmalıdır. Dikişin sıkılmasından sonra kanama devam ederse, hayvan pentobarbital ile ötenazi yapılmalıdır.</li>
</ol>4. Enjeksiyon sonrası iyileşme
<ol><li>Cerrahi sonrası ağrı kesici olarak deri altı enjeksiyon yoluyla buprenorfin (50 μg / kg) ve meloksikam (1 mg / kg) enjekte edin.</li>
	<li>Anesteziden kurtulmak için hayvanı sıcak ve temiz bir kafese taşıyın. Bir hayvanın uyandıktan sonra bastırılmış aktiviteye (toplanmış ve aktif olmayan veya yavaşça hareket eden) sahip olması normaldir.</li>
	<li>30-45 dakika sonra, fareleri uzun süreli bir tutma tesisine aktarın.</li>
	<li>Farelere ameliyat sonrası en az bir hafta boyunca yumuşak bir diyet (diyet jeli, hidrojel, püre) sağlayın ve yara bölgesi çevresinde inme, enfeksiyon, kanama belirtileri için özel dikkat göstererek günlük fiziksel durumu kontrol edin.</li>
	<li>Ameliyattan iki gün sonra, hayvanın aktivitesinin azalması, hafif karıştırılmış kürkü ve ameliyat öncesi vücut ağırlığının% 15'ini kaybetmesi tipiktir. Ağrıyı yönetmek ve iyileşmeye yardımcı olmak için ameliyat sonrası 2-3 gün boyunca günlük analjezik (meloksikam) uygulayın.</li>
	<li>3. günden itibaren, hayvanlar aktivitelerini yeniden kazanmış, beslenme ve tımar sıklığında artmış ve kilo almış olmalıdır. Ameliyattan 4 gün sonra intraperitoneal enjeksiyon yoluyla 200 mg / kg'da sodyum pentobarbital enjekte ederek kalıcı fiziksel durum açıkları (ağrı, toplanmış, inaktif, kilo kaybı) olan hayvanları ötenazileştirin.</li>
	<li>Tümör engraftmanı ve progresyonu, biyolüminesan görüntüleme, MRG veya PET/MRG gibi anestezi ve tercih edilen görüntüleme yöntemleri kullanılarak izlenebilir. Bu tür bir görüntülemeyi üstlenme gerekliliği ve yeteneği, doğası gereği üstlenildiği bireysel proje amaçlarına ve tesisine bağlı olacaktır ve kullanılan hücre hatlarını etiketleyen muhabirin türüne bağlı olarak, ilgili radyokimya ve nükleer görüntüleme tesislerinin erişilebilirliği36,37 NOT: Bazı hayvanlar başarılı bir prosedüre rağmen iyi yanıt vermeyebilir ve felç geçirebilir. İşlemden sonra, herhangi bir nörolojik sıkıntı belirtisi gösteren hayvanlar (başını çevirmek ve bir tarafa çekmek, daire davranışı, yuvarlanma, çarpma, motor fonksiyon kaybı) derhal ötenazi yapılmalıdır.</li>
</ol>

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler. Fon verenlerin çalışmanın tasarımında hiçbir rolü yoktu; verilerin toplanmasında, analizinde veya yorumlanmasında; Makalenin yazımında veya makalenin yayınlanması kararında.

Beyin metastazı, kanser hücrelerinin birincil bölgelerinden beyne yayılmasının karmaşık bir sürecidir. Bu çok adımlı sürecin belirli aşamalarını yansıtan farklı hayvan modelleri mevcuttur ve klinik öncesi metastaz çalışmalarının tasarlanmasında fizyolojik ve pratik hususlar vardır41,42. Beyin metastazı tedavisinde nanotıp kullanımını araştıran yayınlanmış çalışmaların çoğunda intrakardiyak 43,44 ve intrakraniyal 45,46,47,48,49<s...

Beyin metastazı çok kötü prognozile ilişkili yaygın bir malignitedir 1,2. Beyin metastazı hastalarında bakım standardı, hastaların genel sağlık durumuna, ekstrakraniyal hastalık yüküne, beyindeki tümörlerin sayısı ve konumuna bağlı olarak beyin cerrahisi, tüm beyin radyoterapisi ve/veya stereotaktik radyocerrahiden oluşan multimodaldir 3,4. Üç intrakraniyal lezyonu olan hastalar cerrahi rezeksiyon veya stereotaktik radyocerrahi için uygundur, oysa cerrahiye bağlı enfeksiyon ve ödem riskinden kaçınmak için çoklu lezyonları olan hastalar için tüm beyin radyasyon tedavisi önerilmektedir5. Bununla birlikte, tüm beyin radyoterapisi radyosensitif beyin yapılarına zarar verebilir ve düşük yaşam kalitesine katkıdabulunabilir 6.
Sistemik tedavi, multipl lezyonlu hastaların tedavisinde non-invaziv alternatif ve mantıklı bir yaklaşımdır7. Bununla birlikte, sistemik tedavilerin zayıf etkinliğe sahip olduğu uzun süredir devam eden fikir nedeniyle daha az düşünülmektedir, çünkü sitotoksik ilaçların kan dolaşımı yoluyla pasif olarak verilmesi, güvenli olmayan toksisite riski olmadan beyinde terapötik seviyelere ulaşamaz8. Bu paradigma, yakın zamanda ABD Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) onaylı sistemik tedavi (metastatik HER2 + meme kanseri beyin metastazı için endike trastuzumab ve kapesitabin içeren tucatinib) 9,10,11,12 ve beyin metastazı hastaları için sistemik tedavi seçeneklerinin dikkate alınmasını içerecek şekilde tedavi kılavuzlarındaki güncelleme 13,14 ile değişmeye başlamaktadır.
Bu bağlamda, moleküler hedefli tedavi, immünoterapi ve hedefli nano ilaç taşıyıcısı gibi alternatif ilaç dağıtım sistemleri alanındaki gelişmeler, beyin metastazı tedavisinin zorluklarının potansiyel olarak üstesinden gelebilir15,16,17,18. Ek olarak, beyin-tümör bariyerinin geçirgenleştirilmesi yoluyla ilaç dağıtımını iyileştirmeye yönelik kimyasal ve mekanik yaklaşımlar da araştırılmaktadır19,20. Bu tür yaklaşımları amaca uygun olacak şekilde incelemek ve optimize etmek için, sadece beyin metastazının karmaşık fizyolojisini yansıtmakla kalmayıp aynı zamanda intrakraniyal ilaç yanıtının objektif analizine de izin veren preklinik modellerin kullanılması çok önemlidir.
Genel olarak, in vivo beyin metastazını modellemeye yönelik mevcut yaklaşımlar, farelerde kanser hücrelerinin intrakardiyak (sol ventrikül), intravenöz (genellikle kuyruk damarı), intrakraniyal veya intrakarotis (ortak karotis arter) enjeksiyonunu içerir 21,22,23,24,25,26,27 . Tümör engraftman stratejilerinin yanı sıra, tümör baskılayıcı genlerin çıkarılması veya onkogenlerin aktivasyonu ile tümör oluşumunun tetiklendiği genetik olarak tasarlanmış fare modelleri, tümör modellemesi için yararlıdır. Bununla birlikte, sadece birkaç genetiği değiştirilmiş fare modelinin ikincil tümörler ürettiği ve hatta daha azının güvenilir bir şekilde beyin metastazı ürettiği bildirilmiştir28,29,30.
İntrakardiyak (sol ventrikül) ve intravenöz (genellikle kuyruk veni) enjeksiyon gibi engraftman yöntemleri kanserin sistemik yayılımını taklit eder. Bu modeller tipik olarak, dolaşımdaki "ilk geçişleri" sırasında çoğu tümör hücresini yakalayan kılcal yatağa bağlı olarak birden fazla organda (örneğin, beyin, akciğerler, karaciğer, böbrekler, dalak) lezyonlar üretir31. Bununla birlikte, tutarsız beyin aşılama oranları, istenen istatistiksel güç için örneklem büyüklüğüne ulaşmak için daha fazla hayvan gerektirecektir. Bu intrakardiyak ve intravenöz enjeksiyon yöntemleriyle sonunda beyinde yerleşen tümör hücrelerinin sayısı değişkendir. Bu nedenle, beyin metastazı tümör yükü hayvanlar arasında değişebilir ve ilerlemedeki fark, deneysel zaman çizelgesini standartlaştırmayı ve sonuçların yorumlanmasını zorlaştırabilir. Ekstrakraniyal tümör yükü, beyin dışı metastaz mortalitesine yol açabilir ve bu da bu modelleri intrakraniyal etkinliği değerlendirmek için uygun hale getirmez. Ekstrakraniyal oluşumu azaltmak için yapay klonal seleksiyon süreçleri kullanılarak beyin-tropik hücre hatları oluşturulmuştur, ancak alım oranları tutarsızdır ve klonal seçim süreci normalde insan tümörlerinde bulunan heterojenliği azaltabilir32.
İntrakraniyal ve intrakarotis enjeksiyonu gibi beyne özgü engraftasyon yöntemleri, daha tutarlı ve verimli beyin metastazı modellemesine izin verir. İntrakraniyal yöntem33'te, kanser hücreleri tipik olarak frontal serebral kortekse enjekte edilir, bu da düşük sistemik tutulum ile hızlı ve tekrarlanabilir tümör büyümesi üretir. Prosedür düşük mortalite33 ile iyi tolere edilirken, uyarılar, beyindeki hücrelerin (lokalize) bir bolusunu hızla tanıtan ve erken beyin metastazı patogenezini modellemeyen nispeten kaba bir yaklaşım olmasıdır. İğne beyin dokusu vaskülatürüne zarar verir ve bu da lokalize inflamasyona neden olur 5,34. Deneyimlere göre, iğnenin çıkarılması sırasında tümör hücresi enjekte edilmesinin reflüye eğilimi vardır ve bu da leptomeningeal tutuluma yol açmaktadır. Alternatif olarak, intrakarotis yöntemi, hücreleri karşılaşılacak ilk kılcal yatak olarak beyin mikrovaskülatürü ile ortak karotis artere teslim eder, dolaşımda sağkalımı modeller, ekstravazasyon ve kolonizasyon24. Diğerleri25 ile aynı fikirde, bu yöntemle ilgili deneyimlerimiz, kanser hücrelerinin dış karotis arter yoluyla bu dokulardaki kılcal yataklara kasıtsız olarak verilmesine bağlı olarak yüz tümörlerine neden olabileceğini bulmuştur (yayınlanmamış veriler). Fasiyal tümörleri, yaygın karotis arter enjeksiyonundan önce eksternal karotis arteri bağlayarak önlemek mümkündür (Şekil 1). Makalenin geri kalanında, bu yöntem 'internal karotis arter enjeksiyonu' olarak adlandırılmaktadır. Deneyimlere göre, internal karotis arter enjeksiyon yöntemi sürekli olarak çok az sistemik olayla beyin metastazı üretir ve farklı primer kanserlerin (örneğin, melanom, meme ve akciğer kanserleri) beyin metastaz modellerinin üretilmesinde başarılı olmuştur (Şekil 1). Dezavantajları, teknik olarak zorlu, zaman alıcı, invaziv olması ve hücre sayılarının dikkatli bir şekilde optimize edilmesini ve bir izleme zaman çizelgesini gerektirmesidir. Özetle, hem intrakraniyal hem de internal karotis arter enjeksiyon yöntemleri, beyin tümörü ile ilişkili sağkalım yararı üzerindeki terapötik etkiyi değerlendirmek için uygun fare modelleri üretmektedir.
Bu protokol, neredeyse hiç sistemik tutulumu olmayan ve bu nedenle ilaç dağılımının klinik öncesi değerlendirmesi ve deneysel terapötiklerin etkinliği için uygun olan beyin metastazının bir fare modelini üretmek için internal karotis arter enjeksiyon yöntemini tanımlamaktadır.
<img alt="Karotis arter enjeksiyon kurulumu ile fare beyin kanseri metastazı model diyagramı; histolojik sonuçlar." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64216/64216fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Şekil 1: Beyin metastazı için internal karotis arter enjeksiyon protokolünün şematik gösterimi. Eksternal karotis arter ligasyonu ile internal karotis arter enjeksiyonu, çeşitli primer kanserlerden güvenilir bir şekilde beyin metastazı modeli üretebilir. Bu protokolde, karotis arter üzerine üç ligatür yerleştirilir (şekilde L1-L3 olarak belirtilmiştir). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64216/64216fig01large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>100 mikro; m hücre süzgeci</td><td>Corning</td><td>CLS431752</td><td></td></tr><tr><td>30G Microlance iğne</td><td>BD</td><td>23748</td><td></td></tr><tr><td>31G Ultra-Fine II insülin şırıngası</td><td>BD</td><td>326103</td><td></td></tr><tr><td>Açılı forseps</td><td>Proscitech</td><td>T67A-SS</td><td>İnce sivri, tırtıksız açılı, 18 mm uç, uzunluk 128 mm</td></tr><tr><td>Hayvan ısı matı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik ve antimikotik</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Otoklav torbaları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BT-474 (HTB-20) meme kanseri hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>HTB-20</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin (TEMGESIC)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Kontes hücre sayacı</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C10227</td><td></td></tr><tr><td>Diyet-76A</td><td>ClearH2O</td><td>72-07-5022</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kulak zımbası</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elektrikli makaslar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnce açılı forseps</td><td>Proscitech</td><td>DEF11063-07</td><td>Açılı 45 derece, Uç pürüzsüz, Uç genişliği: 0,4 mm, Uç boyutu: 0,4 x 0,3 mm, uzunluk 9cm</td></tr><tr><td>Kanül için ince boru, Boru OD (inç) 1/32, Boru Kimliği (inç) 1/100 inç</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-06419-00</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Hank'in kalsiyum ve magnezyum içermeyen Dengeli Tuz Çözeltisi</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14170120</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojel</td><td>ClearH2O</td><td>70-01-5022</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes Düşük tiftikli tek kullanımlık silecekler</td><td>Kimberly Clark- Kimwipes</td><td>Z188964</td><td></td></tr><tr><td>Püre haline getirilmiş fare yemi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meloksikam (METACAM)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Burun konisi</td><td></td><td></td><td>Mikrofüj tüpünden yapılmış</td></tr><tr><td>PAA oküler kayganlaştırıcı (Karbomer 2mg/g)</td><td>&nbsp; Bausch ve lomb</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Povidon-iyot çözeltisi</td><td>Betadine</td><td>2505692</td><td></td></tr><tr><td>KKD (eldiven, maske, önlük, saç filesi)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ekartörler</td><td>Kent Scientific</td><td>SURGI-5001</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medya</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>İpek sütür 13mm 5-0, P3, 45cm</td><td>Ethicon</td><td>JJ-640G</td><td></td></tr><tr><td>Steril normal tuzlu su</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>TM4469</td><td></td></tr><tr><td>Yapışkan bant</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi tahta</td><td></td><td></td><td>Otoklavlanabilir torba ile sarılmış bir doğrama tahtası.</td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>Proscitech</td><td>T104</td><td>Uç Boyutları (LxD): 38x7mm, Uzunluk 115mm</td></tr><tr><td>Sütür forsepsi/ Kavisli Brophy forseps</td><td>Proscitech</td><td>T113C</td><td>Kavisli, Yuvarlatılmış dar 2 mm uç, tırtıklı, uzunluk 165 mm</td></tr><tr><td>Sütür iğnesi tutucusu (Olsen Hegar iğne tutucusu)</td><td>Proscitech</td><td>TC1322-180</td><td>uzunluk 190 mm, cırcırlı kelepçe</td></tr><tr><td>Ayak pedallı şırınga sürücüsü/ UMP3 Ultra mikro pompa</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>UMP3-3</td><td></td></tr><tr><td>T75 doku kültürü şişesi</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>156499</td><td></td></tr><tr><td>İplik</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trigene II yüzey dezenfektanı</td><td>Ceva</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi ve Hücre Sayma Odası Slaytları</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>C10228</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express ayrışma ortamı</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>12605010</td><td></td></tr></tbody></table>

kanser hücrelerinin İç karotis arter enjeksiyonu ile beyin metastazının modellenmesi

Modeling Brain Metastasis by Internal Carotid Artery Injection of Cancer Cells

Beyin metastazı kanser hastalarında ciddi morbidite ve mortalite nedenidir. Karmaşık nöral mikroçevre ve stromal hücre etkileşimi gibi metastatik hastalıkların kritik yönleri, in vitro tahlillerle tamamen çoğaltılamaz; Bu nedenle, hayvan modelleri, terapötik müdahalenin etkilerini araştırmak ve anlamak için kritik öneme sahiptir. Bununla birlikte, çoğu beyin tümörü ksenografting yöntemi, zaman dilimi ve tümör yükü açısından tutarlı bir şekilde beyin metastazı üretmez. Kanser hücrelerinin intrakardiyak enjeksiyonu ile oluşturulan beyin metastazı modelleri, istenmeyen ekstrakraniyal tümör yüküne neden olabilir ve beyin dışı metastatik morbidite ve mortaliteye yol açabilir. Kanser hücrelerinin intrakraniyal enjeksiyonu ekstrakraniyal tümör oluşumunu sınırlayabilse de, enjekte edilen hücrelerin enjeksiyon bölgesinde sıklıkla tekil bir tümör kütlesi oluşturması, yüksek leptomeningeal tutulum ve iğne penetrasyonu sırasında beyin vaskülatüründe hasar görmesi gibi çeşitli uyarıları vardır. Bu protokol, internal karotis arter enjeksiyonu ile üretilen beyin metastazının bir fare modelini tanımlar. Bu yöntem, diğer organların tutulumu olmadan sürekli olarak intrakraniyal tümörler üreterek beyin metastazı için terapötik ajanların değerlendirilmesini sağlar.

Eksternal karotis arter ligasyonu ile veya eksternal karotis arter ligasyonu olmadan yaygın karotis arter enjeksiyonunun karşılaştırılması Kanser hücreleri, ilk önce eksternal karotis arter24'ü bağlamadan ortak karotis arter yoluyla enjekte edildiğinde, aşılanmış farelerin% 77.8'inde (n = 7/9 hayvanlar) yüz tümörleri bulundu. Fasiyal tümörün bir örneği Ek Şekil 3'te gösterilmiştir. Bu protokolde açıklanan yöntem, eksternal karotis arteri ortak...

Beyin metastazı kanser hastalarında ciddi morbidite ve mortalite nedenidir. Çoğu beyin metastazı fare modeli, mortalite ve terapötik müdahale sonuçlarının kafa karıştırıcı analizini karıştıran sistemik metastazlar ile karmaşıktır. Burada, minimal sistemik tümörlerle tutarlı intrakraniyal tümörler üreten kanser hücrelerinin internal karotis enjeksiyonu için bir protokol sunulmaktadır.

Kanser Hücrelerinin İç Karotis Arter Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Brain metastasis is a cause of severe morbidity and mortality in cancer patients. Critical aspects of metastatic diseases, such as the complex neural ...

Peki bu protokol neden önemli? Beyin metastazlarının tedavisi çok zordur ve bu protokol minimal ekstrakraniyal tümörlerle klinik olarak ilgili bir fare modeli üretir. Bu teknik, intrakraniyal tümörlerden ilaç dağılımının ve yanıtının objektif analizini sağlar.Bu tekniğin temel avantajı, modelin yüksek oranda tekrarlanabilir olması ve beyin metastazlarının enjeksiyondan sonra nispeten kısa bir sürede gelişmesidir. Hastalığın ilerlemesi hayvanlar arasında benzerdir ve araştırmacıların deneyleri, tedavi zaman çizelgelerini ve bitiş noktalarını standartlaştırmalarını kolaylaştırır. Yeni başlayanlar için tavsiyem, diseksiyon mikroskobundan bakarken forseps ve şırınga kullanmaları, boynun etrafındaki anatomik işaretlere aşina olmaları ve protokolü bir veteriner varlığında uygulamalarıdır.BT-474 kanser hücrelerini, altı hücreye iki kez 10 tohumlama yoğunluğunda, hücreler enjeksiyondan önce% 70 ila% 80'lik bir akıcılığa ulaşana kadar 10 mililitre tam büyüme ortamı ve kültürü kullanarak bir T-75 şişesine tohumlayarak başlayın. Enjeksiyon gününde, büyüme ortamını atın ve hücre tek katmanını PBS ile iki kez yıkayın ve beş mililitre önceden ısıtılmış hücre kültürü ayrışma reaktifi ekleyin. Beş dakika boyunca veya hücreler ayrılana kadar 37 santigrat derecede inkübe edin.Beş dakika sonra, şişeyi inkübatörden çıkarın ve hücre ayrılmasına yardımcı olmak için hafifçe dokunun. Ayrışma reaktif aktivitesini söndürmek için% 10FBS içeren beş mililitre tam büyüme ortamı ekleyin. Hücre kümelerini azaltmak için pipetleme yaparak çözeltideki hücreleri nazikçe yeniden askıya alın.Hücre süspansiyonunu 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve oda sıcaklığında üç dakika boyunca 180 G'de santrifüj yapın. Süpernatantı boşaltın ve hücre kümelenmesini en aza indirmek için hücre peletini kalsiyum ve magnezyum olmadan 10 mililitre HBSSS'de yeniden askıya alın. Hücre süspansiyonunu oda sıcaklığında üç dakika boyunca 180 G'de santrifüj edin Artık serum veya ayrışma reaktifini çıkarmak ve hücre peletini üç mililitre HBSS'de yeniden askıya almak için süpernatantı boşaltın.50 mililitrelik taze bir konik tüp üzerine 100 mikrometrelik bir hücre süzgeci yerleştirin ve hücre kümelerini çıkarmak için hücre süspansiyonunu geçirin. Tripan mavisi kullanarak canlı hücrelerin sayısını hesaplayın ve HBSS ile hücre süspansiyonunu, mililitre başına altı hücreye 2.5 çarpı 10'luk bir hücre konsantrasyonuna seyreltin. Tüpü buz üzerinde yatay tutun ve kümelenmeyi en aza indirmek için tüpü periyodik olarak hafifçe sallayın.Hücre süspansiyonu en fazla altı saat boyunca buz üzerinde saklanabilir. Tanımlama için kulak delme faresi ve kürkü boyun bölgesinden tıraş etmek için elektrikli makaslar kullanın. Fazla saçları bant kullanarak maruz kalan ciltten temizleyin.Kurumayı önlemek için gözlere oküler kayganlaştırıcı uygulayın. Cerrahi tahtaya bantlanmış ipliği kullanarak üst kesici dişleri bağlayarak fareyi nazikçe sabitleyin, ardından ön ve arka bacakları bantlayın. Bu adım vücudu uzatır ve işlem sırasında boynu düz tutar.Ameliyat öncesi cilt hazırlığı için, cilt mikroflorası yükünü azaltmak ve gevşek saçları çıkarmak için boynu povidon iyot gibi topikal bir antiseptik ile silin. Cildin merkezinden temizleyin, kesi yerinin yeniden kirlenmesini önlemek için dışa doğru çalışın. İşlemi% 70 etanol kullanarak tekrarlayın ve dezenfeksiyon için üç alternatif iyot ve etanol turu gerçekleştirin.Prosedüre devam etmeden önce anestezi ölümünü sağlamak için çimdik testi ile refleks kontrolü yapın. Hayvanın üzerine steril bir cerrahi örtü koyun. Diseksiyon mikroskobu altında, çenenin beş milimetre altından torasik girişe kadar makas kullanarak farenin boyun bölgesindeki orta hat boyunca dikey 15 milimetrelik bir kesi yapın.İki çift açılı forseps kullanarak, cildi ve altta yatan tükürük bezlerini ayırın ve trakeayı maruz tutmak için retraktörler uygulayın. İki çift ince açılı forseps kullanarak, sağ karotis kılıfını ortaya çıkarmak için trakeaya bitişik kas ve yağ dokusunu açıkça diseke edin. Karotis kılıfı, ortak karotis arter, ven ve vagus sinirini kaplayan fibröz tabakadır ve bu demet parlak kırmızı ortak karotis arter tarafından görselleştirilebilir.Ortak karotis arter kaudalinin bir segmentini, çevreleyen fasyanın karotis bifurkasyonuna temizleyin ve vagus siniri ve damarlarından ayırın. Karotis bifurkasyonunu çevreleyen sinirlerden ve fasyadan izole edin ve temizleyin. İnce forsepsleri eksternal karotis arterin altına yerleştirin ve arterin altına 5-0 ipek sütür geçirin.Dikişi düğümleyin ve sıkın ve fazla çizgiyi kesin. İnce forsepsleri ortak karotis arterin altına yerleştirin ve arterin altına 5-0 ipek sütür geçirin. Bir düğüm bağlayın ve sütürü önerilen enjeksiyon bölgesine yakın bir konumda sıkın.Fazla dikişi kesin, çizginin yaklaşık 10 milimetresini bırakın. Düşük tiftikli tek kullanımlık sileceklerden oluşan bir şeridi yaklaşık 10 x 5 milimetre kesin ve nemlendirin. Şeridi katlayın ve önerilen enjeksiyon bölgesinde karotis arterin altına yerleştirin.Bu, enjeksiyon sırasında damarı destekleyecektir. Önerilen enjeksiyon bölgesine ortak karotis arter rostralinde, gevşek bir düğüm ile üçüncü bir ligasyon yerleştirin. Bu sadece enjeksiyondan sonra sıkılır.Hücre süspansiyonunu nazikçe çalkalayın ve 200 mikrolitre hücre süspansiyonunu 31 gauge iğneli bir insülin şırıngasına çekin. Şırıngayı etkinleştirici bir ayak pedalına bağlı şırınga sürücüsüne yükleyin. Şırıngaya 31 gauge iğneli ince bir kanül takın ve hattı astarlayın.Karotis arterin iyi konumlandırılmış ve basınçlı olup olmadığını kontrol edin. Biri ilk ligatürün ucuna hafifçe gerilen ve diğeri 31 gauge iğneyi tutan iki ince açılı forseps kullanarak, iğneyi eğimli olarak yavaşça kan damarının lümenine yerleştirin ve delinmemeye dikkat edin. Daha önce hazırlanan 100 mikrolitre hücre süspansiyonunu, ortak karotis artere saniyede 10 mikrolitrede yavaşça enjekte edin.Bu, beşinci hücrelere kan damarına 2,5 kat 10 verecektir. Başarılı enjeksiyon, karotis kan damarından kanın temizlenmesiyle görselleştirilebilir. Geri akışı ve kanamayı önlemek için iğneyi çektikten hemen sonra gevşek bağı yavaşça kaldırın ve sıkın.Fazla dikişleri kesin ve nemlendirilmiş düşük tiftikli tek kullanımlık sileceklerin parçasını çıkarın. Bir P-200 pipet kullanarak, cerrahi boşluğu 150 ila 200 mikrolitre steril su veya salin ile iki kez durulayın. Kanamaları kontrol ettikten sonra, yumuşak dokuyu, tükürük bezlerini ve cildi karotis arter ve trakea üzerinde yeniden konumlandırın.Kesinin cilt tabakasını bir dikiş iğnesi tutucu, forseps ve emilebilir veya emilemeyen 6-0 monofilament sütür kullanarak sürekli bir düzende kapatın. Ameliyat sonrası ağrı kesici olarak deri altı enjeksiyonu yoluyla kilogram buprenorfin başına 50 mikrogram ve kilogram başına bir miligram meloksikam enjekte edin. Anesteziden kurtulmak için hayvanı sıcak ve temiz bir kafese taşıyın.Lektin, farelerin ortak karotis arterine, eksternal karotis arter ligasyonu ile veya eksternal karotis arter ligasyonu olmadan enjekte edildi. Dış karotis arter bağlandığında yanak dokularında lektinde bir azalma gözlendi. Sonuçlar, ligasyonun beyin doğumunu etkilemediğini gösterdi.Tümör progresyonu, lusiferaz eksprese eden, HER2 ile güçlendirilmiş meme kanseri hücre hattı kullanılarak izlendi. BT474 beyin metastazı modeli, internal karotis enjeksiyonu sonrası beşinci haftadan itibaren biyolüminesan sinyallerde bir artış gösterdi ve bundan sonra kademeli olarak büyüdü. Beş ila sekiz hafta arasında, heterojen sinyal yoğunluğu, kompleks sıvı perfüzyonu olan bir intrakraniyal tümöre işaret etti.Tümör bölgesindeki gadolinyum konsantrasyonu, kan dolaşımından tümör dokusuna sızdığı için artmıştır. Nanotıp ve beyin metastazlarının birikmesi, BT-474 farelerinde, tümör bölgesinde tespit edilen daha yüksek nanotıp seviyeleriyle, dahil olmayan beyin bölgelerine kıyasla doğrulanmıştır. BT-474 beyin metastazı modeli ilerledikçe, hayvanlar% 20'ye kadar vücut ağırlığını kaybetmeye başladı ve bu da enjeksiyondan dokuz hafta sonra medyan hayatta kalma süresini yaptı.Histoloji sonuçları, tümörlerin tek taraflı olarak yerleştirildiğini ve tümörlerin çoğunlukla katı, yalnız kitleler olarak göründüğü karotis enjeksiyon bölgesi ile eşleştiğini göstermiştir. Boş alanların cepleri sıklıkla gözlendi ve nekrotik hücrelerden oluşurken, bazı hayvanlarda daha küçük çıkıntılar da mevcuttu. Protokolü denerken hatırlanması gereken en önemli şey, iğneyi yerleştirmeden önce karotis arteri doğru bir şekilde hazırlamak ve konumlandırmak ve daha sonra iğnenin yerleştirilmesi sırasında uygun gerginliği uygulamaktır.Bu model, beyne ilaç dağıtımını ve beyin metastazının tedavisi için yeni terapötiklerin etkinliğini araştıran araştırmacılar için yararlıdır.

modeling-brain-metastasis-internal-carotid-artery-injection-cancer

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu video, intrakraniyal enjeksiyon yapılarak fare beynine tümör hücrelerinin implantasyonunu göstermektedir.

İntrakraniyal Ortotopik Model: Fare Beynine Kanser Hücrelerini İmplante Etme Prosedürü

Bu video, floresan etiketli kanser hücrelerinin intrakarotis enjeksiyonu ile bir beyin metastazı fare modelinin oluşturulmasını göstermektedir. Fare modeli, yeni terapötiklerin etkilerini ve altta yatan fizyolojik mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.

Beyin Metastazı Fare Modeli: İntrakarotis Kanser Hücresi Enjeksiyonu ile Beyin Metastazı Fare Modeli Oluşturmak İçin Bir Yöntem

Kaynak: Lim, M.,  et al. Kanser hücrelerinin iç karotis arter enjeksiyonu ile beyin metastazının modellenmesi. J. Vis. Uzm.  (2022)Bu videoda, anestezi uygulanmış bir fare, beyne hedeflenen iletimi kolaylaştırmak için kanser hücrelerinin ortak karotis artere (CCA) enjekte edildiği cerrahi bir prosedürden geçiyor. Prosedür, enjekte edilen hücreleri iç karotis artere (ICA) yönlendirmek için karotis arterlerin hassas bir şekilde dikilmesini ve manipüle edilmesini içerir ve zamanla beyinde tümör...

Kanser Hücrelerinin İnternal Karotis Arter Enjeksiyonu ile Beyin Tümörü Metastazının Modellenmesi

Bir meme kanseri beyin metastazı fare modeli MDA-MB231/Br-GFP hücreleri ultrason görüntüleme kılavuzluğunda intrakardiyak enjeksiyonu ile kurulmuştur. Multifokal intrakranial metastaz gelişimi, yüksek çözünürlüklü 9.4 T MR kullanılarak uzunlamasına izlenir olmuştur.

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

tedavi seçenekleri palyatif kalmıştır ise görülme sıklığı artmıştır olarak beyin metastazı acil karşılanmamış tıbbi ihtiyaç haline gelmiştir. Kanser hücrelerinin intracarotid arteriyel enjeksiyon yoluyla beyin metastazı deneysel hayvan modelleri oluşturma yeni müdahale rejimlerinin hastalığın biyolojisi ve değerlendirilmesi mekanik çalışmaları kolaylaştırır.

Intracarotid Kanser Hücre Enjeksiyon Beyin metastaz Fare modelleri üretmek için

İntrakraniyal beyin metastazı modellemesi, tümör boyutunun izlenememe ve tedaviye tam ve zamanında yanıt verilememesi ile karmaşıktır. Sunulan metodoloji çiftler manyetik rezonans görüntüleme analizi ile intrakranial tümör enjeksiyonu, kombine edildiğinde, hassas ve tutarlı enjeksiyonlar, gelişmiş hayvan izleme ve doğru tümör hacmi ölçümleri yetiştirir.

İntrakraniyal Enjeksiyon ve Manyetik Rezonans Görüntüleme Ile Beyin Metastazlarının Modellenmesi

Endojen olarak HER2 ile amplifiye edilmiş inflamatuar meme kanseri hücre hattının kuyruk damarı enjeksiyonu yoluyla üretilen meme kanseri beyin metastazının bir ksenogreft fare modelini tanımladık.

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Bu el yazması, deneysel kemik metastazları oluşturmak için kanser hücrelerini özellikle kemikler de dahil olmak üzere arka bacak dokularına iletmek için bir teknik olan intra-iliak arter (IIA) enjeksiyonunun ayrıntılı prosedürünü sağlar. Başlangıçta meme tümörü modelleri ile oluşturulmuş olsa da, bu protokol diğer kanser türlerine de kolayca genişletilebilir.

Mikroskopik Kemik Metastazı Verimli ve Seçici Modelleme için intra-iliak arter Enjeksiyon

Meme tümör hücrelerinin portal ven enjeksiyonu yoluyla murin karaciğerine iletilmesi için cerrahi bir prosedür geliştirilmiştir. Bu model, tümör hücresi ekstravazasyonu, tohumlama, sağkalım ve karaciğerde metastatik büyüme dahil olmak üzere tamamen immün yetkin bir konakta karaciğer metastazının geç aşamalarının araştırılmasına izin verir.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Burada, sirkülasyon tümör hücrelerini (CTCs) karakterize eden fenotifik ve moleküler özellikleri tanımlamak için entegre bir iş akışı sunuyoruz. Tek ve kümelenmiş CTCs 'lerin canlı immünostasyon ve robotik mikromanipülasyonunu, alt analiz ve metasrin-tohumlama yeteneğinin değerlendirilmesi için tek hücre bazlı tekniklerle birleştiriyoruz.

Akım moleküler Analizi ve metastatik potansiyel değerlendirme için sirkülasyon tümör hücrelerinin mikromanipülasyon

Öğrenin iç karotis arter enjeksiyonu yöntemiyle farelerde beyin metastazı modeli oluşturmayı. Bu teknik tutarlı intrakraniyal tümör gelişimi sağlar ve tedavi müdahalelerinin objektif analizini kolaylaştırır.

Kanser Hücrelerinin İç Karotis Arter Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Daha fazla video keşfet