Tam Kalınlıkta Kutanöz Termal Yanık ve Enfeksiyonu İncelemek için Sıçan Yanık Modeli

Bu yanık yaralanması modeli, immün disregülasyon ve bakteriyel enfeksiyonlar gibi yanık yaralanmalarını takiben hastanede yatan yanık hastalarında gözlenen klinik durumları özetleyebilmektedir. Sıçanlarda yanığı indükleyen bu yöntemin öğrenilmesi kolaydır ve yanık yaraları ve enfeksiyonlar için yeni tropikal ilaçların geliştirilmesi ve değerlendirilmesi için kullanılabilir. Bu model, yanık bölgesinde bakteriyel enfeksiyonun ilerlemesinin yanı sıra yara iyileşmesini değerlendirmek için de kullanılabilir.

Bu yanık indüksiyon yöntemi, yanık indüksiyonu için fare ve diğer hayvan modellerinde ve yanık yaralarının bakteriyel enfeksiyonunu incelemek için de kullanılabilir. Anestezi uygulanan sıçanı, yüzüstü pozisyonda bir ısıtma yastığı üzerinde hareket ettirerek yanık yaralanması için hazırlamaya başlayın. Pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak, kornea kurumasını önlemek için her iki göze de göz yağlayıcısı uygulayın.

Sıçanın sırt bölgesini, omuz bıçaklarından kuyruğun tabanına kadar geniş bir dikdörtgen içinde elektrikli bir kesme makinesi ile tıraş edin. Tuzlu suya batırılmış dokuyu kullanarak tıraş edilen bölgedeki gevşek tüyleri silin. Epilasyon losyonunu pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak tıraş edilen bölgeye uygulayın.

Üç dakika sonra, losyonu çıkarmak ve cilt tahrişini önlemek için bölgeyi iki kez ıslak gazlı bezle silin. İzofluranı kapatın ve sıçanı kurtarma kafesine yerleştirmeden önce burun konisini çıkarın. Yanık yaralanması deneyinin yapıldığı gün, su banyosu sıcaklığını 97 santigrat dereceye ayarlayın ve deneyden bir saat önce, su banyosuna 420 gram dört bakır çubuk yerleştirin.

Sıçan tüm uzuvlarda ayak parmağını sıkıştırmaya tepki vermediğinde, onu eğilimli bir pozisyonda ısıtma yastığına yerleştirin ve ağrı yönetimi için intraperitoneal veya IP kökü yoluyla kilogram vücut ağırlığı başına 20 miligram morfin enjekte edin. Ardından, su banyosu sıcaklığını kontrol edin. Zamanlayıcıyı ayarlayın ve ısıya dayanıklı eldivenleri giyin.

Su banyosundan ısıtılmış bir bakır çubuk alın ve yedi saniye boyunca dorsum alanına dokunun. Hemen sonraki üç yanığı, yanık bölgesi başına bir çubuk kullanarak birbiri ardına uygulayın ve yaklaşık% 20'lik bir toplam vücut yüzey alanı tam temas yanığı üretin. Yanıktan sonra, emzirilmiş Ringer çözeltisinin gram vücut ağırlığı başına 0.1 mililitreyi IP yolu ile enjekte ederek hayvanı yeniden canlandırın.

İşiniz bittiğinde, izofluranı kapatın. Burun konisini çıkarın ve sıçanı ısı matının üzerine yerleştirin. Yanık ve enfeksiyon gününde, Pseudomonas aeruginosa veya Staphylococcus aureus kültürünü 5 dakika boyunca 4.000 kez g'de ayrı ayrı santrifüj edin.

Pelet'i 600 nanometrede 0.1 optik yoğunluğa kadar salin kullanarak seyreltmeden önce peleti normal salinle yıkayın. Bakteriyel süspansiyonun 200 mikrolitresini 800 mikrolitre salin ile seyreltin ve 7. koloni oluşturan birimlere veya mililitre başına CFU'ya 2 x 10 istenen bakteriyel inokulumu elde edin. Yanıktan 15 dakika sonra, 29 gauge iğne kullanarak yanık alanının yakınındaki bakterilerin 50 mikrolitre seyreltilmiş inokülumunu deri altından enjekte edin.

İyileşme için sıçanı ısıtma yastığına yerleştirin. 15 ila 20 dakika sonra, kurtarılan hayvanı temiz bir kafese aktarın. Yanık yaralanmasından hemen sonra cilt hasarını morfolojik olarak renk ve marj açısından değerlendirin.

Ötanizasyondan sonra, yanık indüksiyonunun konakçı bağışıklık sistemi üzerindeki etkisini belirlemek için tam kan sayımlarını analiz edin. Ötanize edilmiş sıçanın dokusunu 10 mililitrelik bir toplama tüpünde toplayın. Bir doku homojenizatörü kullanarak numuneleri homojenize edin ve doku homojenatlarını normal salinde seri olarak seyreltin.

Plaka 100 mikrolitre seyreltilmemiş homojenat ve her doku örneğinin tüm seyreltileri, setrimid agar plakaları üzerinde P.Aeruginosa ile enfekte sıçanlardan toplanır. Plakaları bir inkübatörde 37 santigrat derecede 16 ila 18 saat inkübe ettikten sonra, plakalardaki bakteri kolonilerini sayın. Mililitre başına CFU sayısını elde etmek için bunları seyreltme oranıyla çarpın ve CFU program dokusunu hesaplamak için dokunun ağırlığıyla normalleştirin.

Bu yüksek oranda tekrarlanabilir protokol, sıçanlarda üçüncü derece tam kalınlıkta yanık yaralanmasına neden oldu. Yanık yaralanmasının rengi 24 saat içinde beyazdan kahverengiye, yanıktan 72 saat sonra değişti. Histolojik analizde, yanmış hayvanlardan alınan deri örnekleri, yanık sonrası yaralanmadan 24, 48 ve 72 saat sonra tüm katmanlarda yaralanma gösterirken, yanık olmayan cilt epidermis, dermis ve deri altı doku katmanlarının açık bir ayrımını göstermiştir.

Yanmış deri örneklerinde epidermal tabakanın yıkımı ve deri altı yağ ve iskelet kası ile dermisin tam kalınlığında hasar gözlendi. Yanma sonrası 24 saat içinde, tam kalınlıkta bir yanık 2.61 milimetreden daha derindi. Bakteriyel klirens değerlendirmesinde, tüm yanık hasarlı sıçanlarda bakteriyel iyileşme gözlendi.

P.aeruginosa PAO1 enfeksiyonu sırasında, yanmış sıçanın derisinden enfeksiyondan 24 saat sonra iyileşen bakteri sayısı, 6. CFU'ya 1'e 10'luk ilk inokulumdan daha azdı. Bununla birlikte, enfeksiyondan 48 ve 72 saat sonra artmıştır. S.aureus, ATC25923 enfeksiyonunda, ilk inokuluma kıyasla cildin tüm zaman noktalarında 2 log 10 artış gözlenmiştir, bu da S.aureus enfeksiyonunun oluşumunun dokulardaki aktif replikasyona bağlı olarak sonuçlandığını düşündürmektedir.

Subkutan doku ve kaslar akciğer ve dalaktan daha yüksek bakteri yükü gösterdi. Veriler, yanmış sıçanların P.aeruginosa aşılamasından 24 saat sonra ve S.aureus aşılamasından 48 saat sonra sistemik bir enfeksiyon geliştirdiğini göstermiştir. Sıçan dorsumundaki tüyleri tamamen çıkarın ve protokolde belirtildiği gibi sıcaklığı koruyun ve indüksiyon süresini yakın.

Artık saçlar ve bakır çubukların farklı sıcaklıkları yanığın kalitesini etkileyebilir. Sıçan yanığı modeli, yanık yarası enfeksiyonlarının tedavisinde yeni topikal terapötikleri değerlendirmek ve farklı yara örtülerini değerlendirmek için araştırılabilir.