Name: Farelerde İn Vivo Periton Boşluğu Dokusunda Yerleşik Makrofajların Verimli Gen ve MikroRNA Modülasyonu için Lentiviral Vektör Hazırlığı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: Öğrenin, farelerde periton boşluğu makrofajlarında lentiviral vektörlerle gen ve mikroRNA modülasyonu için etkili bir hazırlama protokolü. Bu yöntem, immünometabolizma ve doku özgü işlevleri araştırmak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>In Vivo Gen Modülasyonu için Lentiviral Vektör Hazırlama

<ol><li>Wynn, T. A., Chawla, A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+biology+in+development%2C+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Macrophage biology in development, homeostasis and disease.</a> Nature. 496 (7446), 445-455 (2013).</li>
<li>Jantsch, J., Binger, K. J., Muller, D. N., Titze, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+homeostatic+immune+function%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in homeostatic immune function.</a> Front Physiol. 5, 146(2014).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+tissue+repair%2C+regeneration%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in tissue repair, regeneration, and fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Ginhoux, F., Guilliams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+ontogeny+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage ontogeny and homeostasis.</a> Immunity. 44 (3), 439-449 (2016).</li>
<li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Amit, I., Winter, D. R., Jung, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+local+environment+and+epigenetics+in+shaping+macrophage+identity+and+their+effect+on+tissue+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of the local environment and epigenetics in shaping macrophage identity and their effect on tissue homeostasis.</a> Nat Immunol. 17 (1), 18-25 (2016).</li>
<li>Gosselin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+drives+selection+and+function+of+enhancers+controlling+tissue-specific+macrophage+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Environment drives selection and function of enhancers controlling tissue-specific macrophage identities.</a> Cell. 159 (6), 1327-1340 (2014).</li>
<li>Lavin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophage+enhancer+landscapes+are+shaped+by+the+local+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophage enhancer landscapes are shaped by the local microenvironment.</a> Cell. 159 (6), 1312-1326 (2014).</li>
<li>Davies, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+tissue-resident+macrophages+are+metabolically+poised+to+engage+microbes+using+tissue-niche+fuels%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Peritoneal tissue-resident macrophages are metabolically poised to engage microbes using tissue-niche fuels.</a> Nat Commun. 8 (1), 2047(2017).</li>
<li>Shi, J., Hua, L., Harmer, D., Li, P., Ren, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre+driver+mice+targeting+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Cre driver mice targeting macrophages.</a> Methods Mol Biol. 1784, 263-275 (2018).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+lentiviral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Recent advances in lentiviral vectors for gene therapy.</a> Sci China Life Sci. 64 (11), 1842-1857 (2021).</li>
<li>Kosaka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus-based+gene+delivery+in+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Artif+Organs%22%5BJournal%5D)">Lentivirus-based gene delivery in mouse embryonic stem cells.</a> Artif Organs. 28 (3), 271-277 (2004).</li>
<li>Naldini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+gene+delivery+and+stable+transduction+of+nondividing+cells+by+a+lentiviral+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector.</a> Science. 272 (5259), 263-267 (1996).</li>
<li>Yamashita, M., Emerman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsid+is+a+dominant+determinant+of+retrovirus+infectivity+in+nondividing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Capsid is a dominant determinant of retrovirus infectivity in nondividing cells.</a> J Virol. 78 (11), 5670-5678 (2004).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentiviral+delivery+of+RNAi+for+in+vivo+lineage-specific+modulation+of+gene+expression+in+mouse+lung+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Lentiviral delivery of RNAi for in vivo lineage-specific modulation of gene expression in mouse lung macrophages.</a> Mol Ther. 21 (4), 825-833 (2013).</li>
<li>Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicular+stomatitis+virus+G+glycoprotein+pseudotyped+retroviral+vectors%3A+concentration+to+very+high+titer+and+efficient+gene+transfer+into+mammalian+and+nonmammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 90 (17), 8033-8037 (1993).</li>
<li>Finkelshtein, D., Werman, A., Novick, D., Barak, S., Rubinstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDL+receptor+and+its+family+members+serve+as+the+cellular+receptors+for+vesicular+stomatitis+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">LDL receptor and its family members serve as the cellular receptors for vesicular stomatitis virus.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (18), 7306-7311 (2013).</li>
<li>Ipseiz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+in+vivo+gene+modification+in+mouse+tissue-resident+peritoneal+macrophages+by+intraperitoneal+delivery+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther+Methods+Clin+Dev%22%5BJournal%5D)">Effective in vivo gene modification in mouse tissue-resident peritoneal macrophages by intraperitoneal delivery of lentiviral vectors.</a> Mol Ther Methods Clin Dev. 16, 21-31 (2020).</li>
<li>Rosas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transcription+factor+Gata6+links+tissue+macrophage+phenotype+and+proliferative+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The transcription factor Gata6 links tissue macrophage phenotype and proliferative renewal.</a> Science. 344 (6184), 645-648 (2014).</li>
<li>BeckmanCoulter. , https://www.mybeckman.uk/resources/technologies/centrifugation/principles/rotor-balancing (2023).</li>
<li>JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Rodent+Handling+and+Restraint+Techniques%22">Rodent Handling and Restraint Techniques</a>. , JoVE, Cambridge, MA. (2023).</li>
<li>Zufferey, R., Nagy, D., Mandel, R. J., Naldini, L., Trono, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiply+attenuated+lentiviral+vector+achieves+efficient+gene+delivery+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo.</a> Nat Biotechnol. 15 (9), 871-875 (1997).</li>
<li>Nasri, M., Karimi, A., Allahbakhshian Farsani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production%2C+purification+and+titration+of+a+lentivirus-based+vector+for+gene+delivery+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Production, purification and titration of a lentivirus-based vector for gene delivery purposes.</a> Cytotechnology. 66 (6), 1031-1038 (2014).</li>
<li>Optimized production and concentration of lentiviral vectors containing large inserts. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22J+Gene+Med%22">J Gene Med</a>. al Yacoub, N., Romanowska, M., Haritonova, N., Foerster, J. 9 (7), 579-584 (2007).</li>
<li>Malim, M. H., Bieniasz, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+restriction+factors+and+mechanisms+of+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">HIV restriction factors and mechanisms of evasion.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (5), a006940(2012).</li>
<li>Sonza, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+of+human+monocytes+to+HIV+type+1+infection+in+vitro+is+not+dependent+on+their+level+of+CD4+expression%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS+Res+Hum+Retroviruses%22%5BJournal%5D)">Susceptibility of human monocytes to HIV type 1 infection in vitro is not dependent on their level of CD4 expression.</a> AIDS Res Hum Retroviruses. 11 (7), 769-776 (1995).</li>
<li>Kingston, R. E., Chen, C. A., Rose, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+phosphate+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Calcium phosphate transfection.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter 9, Unit 9.1(2003).</li>
<li>Brown, L. Y., Dong, W., Kantor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Improved+protocol+for+the+production+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">An Improved protocol for the production of lentiviral vectors.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100152(2020).</li>
<li>Moce-Llivina, L., Jofre, J., Muniesa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+polyvinylidene+fluoride+and+polyether+sulfone+membranes+in+filtering+viral+suspensions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Comparison of polyvinylidene fluoride and polyether sulfone membranes in filtering viral suspensions.</a> J Virol Methods. 109 (1), 99-101 (2003).</li>
<li>Jiang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+method+for+high-titer+lentivirus+preparations+without+ultracentrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">An optimized method for high-titer lentivirus preparations without ultracentrifugation.</a> Sci Rep. 5, 13875(2015).</li>
<li>Czubala, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TGFbeta+induces+a+SAMHD1-independent+post-entry+restriction+to+HIV-1+infection+of+human+epithelial+langerhans+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">TGFbeta induces a SAMHD1-independent post-entry restriction to HIV-1 infection of human epithelial langerhans cells.</a> J Invest Dermatol. 136 (10), 1981-1989 (2016).</li>
<li>Bouabe, H., Okkenhaug, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+targeting+in+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene targeting in mice: a review.</a> Methods Mol Biol. 1064, 315-336 (2013).</li>
<li>Kim, J. M., Rasmussen, J. P., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+prevent+catastrophic+autoimmunity+throughout+the+lifespan+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells prevent catastrophic autoimmunity throughout the lifespan of mice.</a> Nat Immunol. 8 (2), 191-197 (2007).</li>
<li>Decalf, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensing+of+HIV-1+entry+triggers+a+Type+I+Interferon+response+in+human+primary+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Sensing of HIV-1 entry triggers a Type I Interferon response in human primary macrophages.</a> J Virol. 91 (15), e00147-e00217 (2017).</li>
<li>Wilson, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amelioration+of+emphysema+in+mice+through+lentiviral+transduction+of+long-lived+pulmonary+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Amelioration of emphysema in mice through lentiviral transduction of long-lived pulmonary alveolar macrophages.</a> J Clin Invest. 120 (1), 379-389 (2010).</li>
<li>Markusic, D. M., van Til, N. P., Hiralall, J. K., Elferink, R. P., Seppen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+liver+macrophage+transduction+by+pseudotyping+lentiviral+vectors+with+a+fusion+envelope+from+Autographa+californica+GP64+and+Sendai+virus+F2+domain%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Reduction of liver macrophage transduction by pseudotyping lentiviral vectors with a fusion envelope from Autographa californica GP64 and Sendai virus F2 domain.</a> BMC Biotechnol. 9, 85(2009).</li>
<li>Burke, B., Sumner, S., Maitland, N., Lewis, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+gene+therapy%3A+cellular+delivery+vehicles+and+in+vivo+targets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in gene therapy: cellular delivery vehicles and in vivo targets.</a> J Leukoc Biol. 72 (3), 417-428 (2002).</li>
<li>Bain, C. C., Jenkins, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+serous+cavity+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">The biology of serous cavity macrophages.</a> Cell Immunol. 330, 126-135 (2018).</li>
<li>Milone, M. C., O'Doherty, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+use+of+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Clinical use of lentiviral vectors.</a> Leukemia. 32 (7), 1529-1541 (2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>% 0.05 Tripsin-EDTA (1x) (Tripsin 500 mg / L veya 0.02 mM)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>0.22 & mu; m steril millex GP filtresi</td><td>Merck</td><td>SLGS033SS</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &mu; m steril millex GP filtre</td><td>Merck</td><td>SLHP033RS</td><td></td></tr><tr><td>0,5 mL U-100 iğneli insülin şırıngası, 0,33 mm x 12,7 mm (29 G)</td><td>BD</td><td>324892</td><td></td></tr><tr><td>1 Litre Kesici-Delici Alet Kabı</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>2.4G2 antikoru (TruStain FcX anti-fare CD16/32)</td><td>Biolegend</td><td>101320</td><td></td></tr><tr><td>40 &mu; m süzgeç</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>AimV ortamı (araştırma sınıfı), AlbuMax Takviyesi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31035025</td><td></td></tr><tr><td>Evde</td><td></td><td></td>hazırlanan<td>engelleme tamponu</td></tr><tr><td>Brewer tiyoglikolat ortamı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2551</td><td>Suda hazırlanan, otoklavlanan ve donmuş halde tutulan% 4 stok çözeltisi.</td></tr><tr><td>CD11b</td><td>Biolegend</td><td>101222</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>CD11b</td><td>BD</td><td>550993</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo</td></tr><tr><td>1'e bakın CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117317</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117333</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon CD19 BD için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td></td><td></td><td>560375</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>CD19</td><td>Biolegend</td><td>152410</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>CD226</td><td>Biolegend</td><td>128808</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo</td></tr><tr><td>1'e bakın CD3e</td><td>BD</td><td>560527</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo</td></tr><tr><td>1'e bakın CD3e</td><td>Biolegend</td><td>152313</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>CD4</td><td>Biolegend</td><td>100412</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>CD73</td><td>eBioscience</td><td>16-0731-82</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>eBioscience</td><td>48-0081-82</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>Hücre kültürü şişesi (T175 fask, 175 cm2, 550 mL)</td><td>Greiner Bio One</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri, konik tabanlı tüpler 25 mm x 89 mm</td><td>Beckman Coulter</td><td>358126</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüjler</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td>Ultrasantrifüj ve TC santrifüj</td></tr><tr><td>Kollajenaz tip IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Konik santrifüj tüpleri (15 mL ve 50 mL)</td><td>Greiner Bio One</td><td>11512303 & 11849650</td><td></td></tr><tr><td>Kriyotüpler</td><td>Greiner Bio One</td><td>123277</td><td>veya kriyotüpler</td></tr><tr><td>DMEM ortamı (1x) + 4.5g / L D-glikoz, 400 ve mikro; ML-glutamin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>41965-062</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>Effectene transfeksiyon reaktifi</td><td>Qiagen</td><td>301425</td><td></td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123123</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123133</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>F4/80</td><td>Biolegend</td><td>123147</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>FceR1</td><td>eBioscience</td><td>48-5898-80</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>Fetal buzağı serumu (FCS)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10270-106</td><td>ısı, 56 ° C'de 30 dakika boyunca inaktive edilir; C ve steril 0.22 & ile filtrelenmiş; m filtre</td></tr><tr><td>Akış sitometresi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp; Evde hazırlanan Attune NxT</td><td></td></tr><tr><td>Akış sitometrisi (FACS) tamponu</td><td></td> Floresan doku kültürü mikroskobu Thermo Fisher Scientific EVOS FL Forseps N/A N/A Kullanıcı tercihi Hank'in dengeli tuz çözeltisi (HBSS)Gibco, Life Technologies 14175-053 HEK293T hücre hattı <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>Transfeksiyondan en az bir hafta önce yetiştirilir. Mikoplazma içermeyen</td></tr><tr><td>HIV-1 Çekirdek antijeni</td><td>Beckman Coulter</td><td>6604667</td><td></td></tr><tr><td>Hyaluronidaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td></td></tr><tr><td>Hydrex cerrahi ovma, klorheksiding glukonat %4 w/v cilt temizleyici</td><td>Ecolab</td><td>3037170</td><td></td></tr><tr><td>I-A/I-E</td><td>Biolegend</td><td>107625</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>ICAM1</td><td>Becton Dickinson</td><td>554970</td> Kullanımdan en az bir hafta önce yetiştirilen Jurkat T hücre hattının <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> seyreltilmesi ve konsantrasyonu için <td>Tablo 1'e bakın. Mikoplazma içermeyen</td></tr><tr><td>CANLI/ÖLÜ sabitlenebilir yakın IR ölü hücre leke kiti</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>L34975</td><td></td></tr><tr><td>Ly6G</td><td>Biolegend</td><td>127615</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>Buradaki fareler</td><td></td><td></td><td>, farklı şekilde belirtilmedikçe 8-12 haftalık C57BL/6 dişileri (Charles Rivers) kullandı</td></tr><tr><td>Mikrokılcal pipetler (hacim aralığı 0.5-1.000 &mu; L)</td> <td>Fisher Bilimsel & Starlab</td><td>11963466 & 11943466 & 11973466 & S1111-3700</td><td></td></tr><tr><td>NK1.1</td><td>Biyoefsane</td><td>108724</td> PBS pCMV-&Delta'da %2 w/v'ye hazırlanan Paraformaldehit Sigma-Aldrich P6148-500G'nin <td>seyreltilmesi ve konsantrasyonu için Tablo</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>1'e</td></tr> bakın<tr><td>; R8.91 ambalaj plazmidi</td><td></td><td>Zuffrey, R., et al. 1997,</td><td>sitomegalovirüs promotörü tarafından yönlendirilen Gag-Pol HIV proteinini kodlar. Ampisilin direnci.</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin (100x, 10.000 U / mL)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Greiner Bio One</td><td>664160</td><td></td></tr><tr><td>pHR'SIN-cPPT-SEW plazmid</td><td></td><td>Rosas, M. ve ark. 2014</td>, <td>shRNA ve miR ekspresyon çalışmaları için modifiye edilmiştir. Woodchuck hepatitiv virüs arttırıcısının aşağı akış SFFV promotörü ve yukarı akışında EGFP işaretleyicisini kodlar. Ampisilin direnci.</td></tr><tr><td>pMD2.G plazmid</td><td></td><td>Naldini, L. ve ark. 1996,</td><td>veziküler stomatis virüsü g-glikoprotein (VSV-G) zarfını kodlar. Ampisilin direnci.</td></tr><tr><td>Sıçan IgG1, &kappa; izotip kontrolü</td><td>Becton Dickinson</td><td>550617</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>Sıçan serumu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R9759-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Evde</td><td></td><td></td>hazırlanan<td>kırmızı kan ACK lizis tamponu</td></tr><tr><td>RPMI 1640 orta (1x) + 400 uM L-glutamin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>21875-091</td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4521</td><td></td></tr><tr><td>SiglecF</td><td>BD</td><td>562681</td> Sodyum hipoklorit Tabletlerin <td>seyreltilmesi ve konsantrasyonu için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>(çamaşır suyu, 2.000 ppm)</td><td>Guest Medical</td><td>H8818</td><td></td></tr><tr><td>Steril 24 oyuklu hücre kültürü plakası</td><td>Greiner Bio One</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>Steril Dulbecco'nun PBS'si (DPBS) (1x) Mg++ ve Ca2+ - ücretsiz</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Steril EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>Steril VWR tek kullanımlık transfer pipetleri (23,0 mL, 30 cm)</td><td>VWR</td><td>612-4515</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15503022</td><td></td></tr><tr><td>cerrahi makas</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Kullanıcı tercihi</td></tr><tr><td>Şırıngalar (50 mL ve 1 0mL)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10084450 & 768160</td><td></td></tr><tr><td>Tim4</td><td>Biolegend</td><td>130007</td><td>Seyreltme ve konsantrasyon için Tablo 1'e bakın</td></tr><tr><td>U-dipli 96 oyuklu hücre kültürü plakası</td><td>Greiner Bio One</td><td>650180</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde İn vivo periton boşluğu dokusunda yerleşik makrofajların verimli gen ve mikrorna modülasyonu için lentiviral vektör hazırlığı

Lentiviral Vector Preparation for Efficient Gene and MicroRNA Modulation of Peritoneal Cavity Tissue&#45;Resident Macrophages In Vivo in Mice

Farelerde İn Vivo Periton Boşluğu Dokusunda Yerleşik Makrofajların Verimli Gen ve MikroRNA Modülasyonu için Lentiviral Vektör Hazırlığı

Peritoneal tissue-resident macrophages have broad functions in the maintenance of homeostasis and are involved in pathologies within local and neighboring ...

lentiviral-vector-preparation-for-efficient-gene-microrna-modulation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

MicroRNA beyin yapısı ve fonksiyonu önemli rolleri vardır. Burada aşırı ifadesi bir mühendislik miRNA-ifade lentivirüs stereotaktik enjeksiyonu kullanılarak hipokampal miRNA uygulamak için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, değerlendirmek için nispeten hızlı bir yöntem olarak hizmet...

Bir Stereotaktik Enjeksiyon MicroRNA-ifade Fare Hippocampus CA1 Bölgesi Lentiviruses ve Davranış Sonuç Değerlendirilmesi

Bu protokolde, Amaxa Nucleofector 96 kuyulu Mekik Sistemini kullanarak murin makrofaj hücre hatlarını siRNA'larla verimli bir şekilde transfekte etmek, makrofajları lipopolisakkarit ile uyarmak ve inflamatuar sitokin üretimi üzerindeki etkileri izlemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Makrofagların yılında Doğuştan Bağışıklık Tepkisi Soruşturma RNA girişimi kullanma

Burada murin peritoneal makrofajları izole etmek için basit bir protokolü açıklıyoruz. Bu prosedürü, Toll benzeri reseptörlerin uyarılması üzerine gen ekspresyon analizi yapmak için RNA ekstraksiyonu takip eder.

Fare Periton Makrofagların izolasyonu Toll-benzeri reseptörler Uyarım üzerine Gen İfadesi Analizi Yapacak

Hidrodinamik kuyruk ven enjeksiyon transposon dayalı Tümleştirme vektörlerin sağlar fare tetkikine istikrarlı transfection içinde vivo. Burada, tek bir transgene uzun vadeli kurucu ifade veya kombine kurucu ve Doksisiklin indüklenebilir ifade bir transgene veya miR-shRNA karaciğerde sağlayan pratik bir protokol transfection sistemler mevcut.

Hidrodinamik kuyruk ven enjeksiyon kullanarak fare tetkikine genetik Vivo içinde değişiklik kurucu ve indüklenebilir sistemleri

Burada, lentiviral bir vektör perivitelline alanda bir döllenmiş yumurta, basit bir iğne ile transgene entegrasyon ve kurucusu transgenik fareler ile yüksek etkinlik üretimini teşvik için bir protokol mevcut.

Lentiviral aracılı transgenik fareler üretimi: doğrudan eğitim kurucuları basit ve son derece etkili bir yöntem

Bu makalede, biz fare kemik iliğinde floresan füzyon proteinlerin ifade için detaylı bir protokol dendritik hücreleri ve makrofajlar elde sağlar. Bu yöntem dayanır kemik iliği iletim üzerinde ataları ile retroviral yapıları farklılaşma içine makrofajlar tarafından izlenen ve dendritik hücreleri vitro.

Kemik iliği türevi fare dendritik hücreleri ve makrofajlar floresan Fusion proteinlerin ifade

Biz polyethyleneimine (PEI) kullanarak bir yöntemi açıklamak-kaplı superparamagnetic demir oksit nano tanecikleri siRNA ile transfecting makrofajlar için. Bu nano tanecikleri siRNA makrofajlar vitro ve in vivo ve sessizlik hedef gen ekspresyonu için verimli bir şekilde teslim edebilirsiniz.

Polyethyleneimine kaplı demir oksit nano tanecikleri küçük müdahale RNA makrofajlar için teslim için bir araç olarak Vitro ve In Vivo

DNA epigenome temsil düzenleme güçlü bir tedavi yaklaşımı hedef. Bu iletişim kuralı üretim, arıtma ve toplama tüm-içinde-bir lentiviral vektörlerin İnsan İndüklenmiş pluripotent kök hücre (hiPSC)'epigenome düzenleme uygulamaları için CRISPR-dCas9-DNMT3A transgene yataklık açıklar-nöronlar türetilmiş.

Pluripotent kök hücre kaynaklı hastalık modelleri lentiviral vektör platformu için Epigenome düzenleme araçları verimli bir şekilde teslim insan içine indüklenen

Makrofajlar, özellikle birincil makrofajlar, kendi kendine kökenli olmayan molekülleri tespit etmede uzmanlaşdıkları için transfect yapmak zordur. Plazmidler gibi DNA şablonlarından oluşturulan mRNA ile birincil makrofajların yüksek verimli transfeksiyonuna olanak tanıyan bir protokolü tanımlıyoruz.

In Vitro Transcribed mRNA ile Primer Makrofajların Yüksek Verimli Transföytüsü

Bu protokol, gen tedavisi için mezenkimal kök hücre (MSC) türevli ekstraselülük vezikül biyomimetiklerinin üretilmesi ve saflaştırılması için bir yöntem tanıtmayı amaçlamaktadır. Nanovezikül, MSC'den türetilen lipid çift katmanlarla sınırlıdır ve lümende ilgi çekici geni taşıyan rekombinant AAV'leri kapsüller. Bu nanovezikül, in vivo gen taşıması için gelişmiş bir vektör sunar.

Gen Taşımayı Artırmak İçin Mezenkimal Kök Hücre Zarı Zarflı Nanoveziküllerin Geliştirilmesi

Öğrenin, farelerde periton boşluğu makrofajlarında lentiviral vektörlerle gen ve mikroRNA modülasyonu için etkili bir hazırlama protokolü. Bu yöntem, immünometabolizma ve doku özgü işlevleri araştırmak için kullanılır.

Farelerde İn Vivo Periton Boşluğu Dokusunda Yerleşik Makrofajların Verimli Gen ve MikroRNA Modülasyonu için Lentiviral Vektör Hazırlığı (Video) | JoVE Journal

Farelerde İn Vivo Periton Boşluğu Dokusunda Yerleşik Makrofajların Verimli Gen ve MikroRNA Modülasyonu için Lentiviral Vektör Hazırlığı

Daha fazla video keşfet